GENÉTICA MOLECULAR
(RESUMEN)
EL ADN COMO PORTADOR DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
- ARN-pol. III: transcribe los ARNt , el ARNr 5s y los genes que codifican las histonas.
Los ARNt además de unirse a un aa específico, reconocen los codones del ARNm, gracias
al anticodón.
Una vez activados los aa se inicia la síntesis, en la que se pueden distinguir varias etapas:
Inicio, elongación y terminación.
- Inicio: El ARNm se une a los ribosomas; en primer lugar el ARNm se une por su extremo
5’ a la subunidad menor del ribosoma gracias a un factor proteico de iniciación (IF3).
Se fija el primer aminoacil-ARNt al unirse su anticodón al primer codón de iniciación del
ARNm, que siempre es 5’ AUG 3’ (por lo tanto el anticodón será UAC) y que codifica al
aa metionina (formilmetionina); en la fijación interviene otro factor proteico (IF2).
Posteriormente este primer aa se elimina.
A continuación se acopla la subunidad mayor del ribosoma, interviniendo otro factor
proteico (IF1) e iones Mg+2. Queda así formado el complejo de iniciación. El lugar
ocupado (AUG) por el aminoacil- ARNt metionina, se denomina sitio P (lugar que ocupa
el ARNt que lleva unida la cadena polipeptídica) y el siguiente lugar ocupado por el 2º
codón se llama sitio A (será el que se acople cada nuevo aminoacil - ARNt). Para que se
realice todo este proceso de iniciación se necesita energía proporcionada por la hidrólisis
del GTP.
- Elongación: Unión de los sucesivos aa que van formando la cadena polipeptídica. En
primer lugar se acopla al sitio A un nuevo aminoacil-ARNt cuyo anticodón es
complementario del codón del ARNm que se encuentra allí. Una vez situados los 2
aminoacil-ARNt (uno en el sitio P y otro en el sitio A) se produce la unión de los 2 aa
gracias a un enzima (peptidiltransferasa); al producirse la unión entre los 2 aa, el primer
ARNt se libera, quedando los aa unidos al 2º ARNt. Se produce el desplazamiento del
ribosoma sobre el ARNm en el sentido 5’ → 3’ con lo que el ARNt (que lleva unido los 2
aa) pasa a ocupar el sitio P, dejando libre el sitio A, que es ocupado por un tercer
aminoacil-ARNt, ; se vuelve a formar un nuevo enlace peptídico entre este aa y el
dipéptido situado en el sitio P…… y así sucesivamente… se repite el mismo proceso.
- Terminación. Cuando el ribosoma llaga hasta uno de los codones de terminación (UAA
– UAG – UGA) no existen anticodones complementarios, por lo tanto ningún aminoacil-
ARNt se situará en ellos; la cadena polipeptídica se acaba. Con la intervención de factores
proteicos de liberación y la energía proporcionada por la hidrólisis del GTP, se liberan:
- La cadena polipeptídica que ha adquirido su estructura secundaria y terciaria
Característica.
- Las 2 subunidades del ribosoma
- El ARNm , que puede volver a ser utilizado, pero por lo general se destruye.
La velocidad de la síntesis es alta: se pueden unir hasta 1400 aa/min y las cadenas de
ARNm pueden ser “leídas” por varios ribosomas a la vez (polisomas o polirribosomas), lo
que permite la síntesis de varias copias de la misma cadena.
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA
La síntesis proteica no tiene lugar continuamente ya que depende de las necesidades
celulares; la producción excesiva de proteínas resulta innecesaria y puede ocasionar
alteraciones importantes. Para evitar el despilfarro de materia y energía los genes solo se
expresan cuando es necesario sintetizar proteínas adecuadas a cada momento de la vida
celular, por lo tanto es necesario controlar la expresión de los genes; esta regulación se
realiza fundamentalmente en el proceso de transcripción, ya que si se controla la
formación del ARNm, se controla la síntesis de proteínas.
REGULACIÓN EN PROCARIOTAS
Jacob y Monod (en 1960) propusieron un modelo para regular la transcripción en
bacterias (Escherichia coli); este modelo se llama OPERÓN. Se distinguen 4 tipos de
genes:
- Genes estructurales: contienen la información para la síntesis de las enzimas que
intervienen en una ruta metabólica
- Gen promotor: Secuencia de ADN a la que se une la ARN-polimerasa para iniciar la
transcripción
- Gen operador: lugar del ADN al que puede unirse una proteína reguladora e impedir la
transcripción de los genes estructurales
- Gen regulador: sintetiza la proteína reguladora
La proteína reguladora activa sintetizada por el gen regulador, al unirse al gen operador,
impide la acción de la ARN-polimerasa sobre los genes estructurales, por lo tanto no se
formarán los enzimas de la ruta metabólica y esta no se podrá realizar. Cuando existe o
aparece el sustrato inicial de la ruta metabólica, la proteína represora (reguladora) se
vuelve inactiva (esto se consigue gracias a la unión del represor a una molécula inductora
que puede ser el mismo sustrato o un derivado de este) y deja de actuar sobre el gen
operador, los genes estructurales se transcriben y se sintetizan los enzimas
correspondientes. Este sistema es característico en las rutas catabólicas, como en el caso
del catabolismo de la lactosa (operón lac).
En las rutas anabólicas el proceso es similar con la diferencia de que la proteína
reguladora sintetizada por el gen regulador es inactiva y solo se vuelve activa cuando se
une al producto final de la ruta, con lo que se evita así una síntesis excesiva del producto.
REGULACIÓN EN EUCARIOTAS
La regulación en eucariotas es mucho más compleja y se puede realizar tanto en el
proceso de transcripción como en la maduración del ARNm transcrito o en la traducción.
La forma más efectiva se realiza en el inicio de la transcripción y los mecanismos
utilizados actúan sobre la actividad de la ARN-polimerasa, cuya capacidad para iniciar la
transcripción depende de varios factores como son la acción de las hormonas. El
mecanismo de acción depende del tipo de hormona. En el caso de las hormonas lipídicas
que entran en la célula, se une a ciertas proteínas citoplasmáticas, pasan al núcleo y se
fijan a determinadas secuencias del ADN permitiendo la transcripción. En el caso de las
hormonas peptídicas, no atraviesan la membrana plasmática sino que se unen a
determinadas receptores específicos de esta lo que provoca la activación de un enzima, la
adenilato ciclasa que cataliza la síntesis del AMPc (AMP cíclico) que actúa como un
mensajero activo que posibilita la activación génica.
MUTACIONES
Son cambios o alteraciones del material genético. Pueden clasificarse en:
Criterio Tipo de mutación
Células afectadas Somáticas: no se transmiten a la descendencia
Germinales: se transmiten a la descendencia
Causa Naturales o espontáneas
Inducidas por agentes mutágenos
Efectos Neutras
Beneficiosas
Perjudiciales: Letales (producen la muerte de hasta el 90% de los
individuos que las poseen); subletales (producen la muerte de
menos del 10% de los individuos que las poseen); patológicas:
producen enfermedades
Tipo de expresión Dominantes (respecto al alelo normal)
genética
Recesivas (respecto al alelo normal no mutado)
Alteración genética Génicas: afectan a la secuencia de nucleótidos de un gen.
provocada
Cromosómicas: afectan a la estructura de los cromosomas
Genómicas: afectan al número de cromosomas
Mutaciones génicas: consisten en alteraciones en la secuencia de los genes y pueden
aparecer fundamentalmente por 2 causas:
- Errores no corregidos en la replicación del ADN
- Acción de agentes como las radiaciones o determinadas sustancias químicas, que alteran
el ADN
Las mutaciones pueden ser:
- Sustitución de una base por otra distinta
- Pérdida o inserción de una base
- Cambio de posición de algunos segmentos de ADN
Una enfermedad producida por una mutación génica es la anemia falciforme
Mutaciones cromosómicas: afectan a la estructura de los cromosomas por lo que la
secuencia de bases del ADN no está alterada pero si existen cambios en el número de
genes o en la disposición de estos en los cromosomas. Las principales alteraciones son:
- Pérdida (delección) de un fragmento de cromosoma y como consecuencia pérdida de
algunos genes.
- Duplicación de un segmento de cromosoma; como consecuencia hay un exceso de
genes
- Inversión de un fragmento; la disposición de los genes en ese fragmento está invertida
- Traslocación de un fragmento: En este caso se produce un cambio de posición, bien a
otro lugar del mismo cromosoma o de un cromosoma a otro.
Algunos ejemplos de mutaciones cromosómicas humanas son:
Alteración Síndrome Cuadro clínico
Delección en el brazo corto Cri-du-chat Cráneo pequeño
del cromosoma 5
Oligofrenia
Retraso psicomotor
Llanto característico
Delección en el brazo corto Wolff-Hirschorn Defectos craneales, faciales y
del cromosoma 4 cardíacos
Delección en el brazo largo Boca de carpa Anomalías esqueléticas y
del cromosoma 18 oculares, retraso mental,
cráneo pequeño,
malformaciones diversas
Mutaciones genómicas: Consisten en la alteración del número de cromosomas de una
especie. Se distinguen 2 tipos:
- Euploidias: Alteración en el número de juegos cromosómicos (se denomina juego
cromosómico al conjunto formado por un cromosoma de cada tipo, por lo que los
organismos diploides tienen dos de ellos, 2n. Las euploidias pueden ser: un solo juego
cromosómico, n (monoploidias), tres juegos cromosómicos, 3n (triploidias), tetraploidias,
4n, etc.
- Aneuploidias: Cuando falta o sobra algún cromosoma. Pueden ser: 2n-1, 2n-2, 2n+1
(trisomías), 2n+2 (tetrasomías),… Entre las aneuploidias más conocidas en la especie
humana están las siguientes:
Alteración Síndrome Frecuencia Cuadro clínico
Trisomía 21 Down 1,5/1000 nacidos Retraso mental, braquicefalia,
rasgos faciales mongoloides,
alteraciones diversas (oculares,
cardiacas..)
Trisomía 18 Edwards 1/6700 Deficiencia mental profunda,
malformaciones renales y cardiacas
Trisomía 13 Patau 1/4600 Deficiencia mental profunda,
malformaciones genitales,
cerebrales, cardíacas,…
XXX (mujeres) Triple X 1/1000 Retraso mental moderado,
alteraciones neuropsíquicas
X0 (mujeres) Turner 0,3/1000 Genitales infantiles, esterilidad,
estatura baja
XXY (varones) Klinefelter 1,4/1000 Genitales pequeños, retraso mental
moderado, falta de espermatogénesis
XYY (varones) Duplo Y 1/2000 Trastornos de conducta
(agresividad), estatura elevada.
AGENTES MUTÁGENOS:
a) Físicos: radiaciones ionizantes (rayos X, rayos γ, partículas α y β, neutrones emitidos
en los procesos radiactivos); radiaciones no ionizantes: radiaciones ultravioleta.
b) Químicos: hidrocarburos policíclicos, aminas aromáticas, agentes alquilantes,
colorantes industriales, pesticidas, etc.
MUTACIONES Y EVOLUCIÓN
Las mutaciones son unos de los agentes de la variabilidad genética de las poblaciones.
Las mutaciones cromosómicas (duplicación) parecen ser las responsables de la aparición
de las cadenas de la hemoglobina y la mioglobina humana y de los primates, a partir de
una globina ancestral. Las mutaciones genómicas son responsables de las plantas
poliploides que tiene órganos más desarrollados que las diploides, razón por la cual
muchas de las especies utilizadas por los humanos son de ese tipo. También la unión de
cromosomas es importante desde el punto de vista evolutivo, el cromosoma 2 de los
humanos parece que procede de la unión de 2 cromosomas de una especie ancestral.
MUTACIONES Y CÁNCER
El cáncer es causado por un proceso de división sin control que provoca una
multiplicación rápida y desorganizada de las células, que conduce a la destrucción del
tejido afectado e, incluso, a la invasión de otros órganos (metástasis). En un proceso
cancerígeno intervienen muchos factores, pero existe una relación entre determinados
cambios en el material genético y la aparición de células cancerígenas, ya que con
frecuencia en estas células, se observan alteraciones cromosómicas. No se conoce cómo
las células se transforman en cancerosas pero básicamente se producen defectos en
determinados genes que participan en la división celular. Algunos de estos genes son:
- Oncogenes: provocan un aumento de las señales que estimulan la división celular, sin
que estén presentes los estímulos normales para ello. Hasta la fecha se han descubierto
más de 50 oncogenes en varias especies, entre ellas la humana.
- Genes supresores de tumores: La mutación de estos genes estimula un aumento del
ritmo reproductor de las células.
- Genes correctores de errores en el ADN
BIOTECNOLOGÍA:
Conjunto de procedimientos en los que se utilizan seres vivos. Dentro de estos procesos
tenemos:
- Fermentaciones: Se utilizan hongos (levaduras) y bacterias para la elaboración de
diversos
alimentos (pan, yogurt, queso, cerveza, vino,…) y medicamentos (penicilina…)
- Ingeniería genética: Consiste en la alteración artificial y deliberada del genoma de un
ser vivo, modificando directamente su material genético (ADN).
En la ingeniería genética se aplican una serie de técnicas que, en su conjunto, reciben el
nombre de tecnología del ADN recombinante.
Estas técnicas son:
a.- Secuenciación del ADN: Permite conocer la secuencia de bases de los genes, con lo
que se pueden identificar las secuencias codificadoras de proteínas, y las secuencias
reguladoras de la expresión de los genes. Hoy en día se conocen la secuencia completa de
miles de genes y el genoma completo de bastantes seres vivos (bacterias, insectos y el
GENOMA HUMANO)
.b.- Formación de ADN recombinante: El ADN recombinante es el resultado de la unión
de un gen y un vector adecuado a su transporte; para lograrlo se realizan las siguientes
etapas:
- Fragmentación del ADN: Se fragmenta en lugares específicos gracias a la acción de los
enzimas de restricción (endonucleasas de restricción). Algunas endonucleasas cortan las
cadenas de ADN en el mismo lugar (originando extremos romos) y otras en lugares
diferentes (originando extremos cohesivos).
- Separación de los fragmentos de ADN: Los fragmentos obtenidos por la acción de los
enzimas de restricción son de diferentes tamaños; para separarlos se utiliza una técnica:
electroforesis en gel, que consiste básicamente en aplicar un campo eléctrico a los
diferentes fragmentos que se desplazan por el gel (de azarosa o poliacrilamida)
- Unión al vector: Una vez obtenidos los fragmentos de ADN se unen a otras moléculas
de ADN transportadoras que se llaman vectores. Los más frecuentes son los vectores
bacterianos o plásmidos (pequeñas moléculas circulares de ADN) o genomas víricos e
incluso moléculas de ADN obtenidas artificialmente. La unión del fragmento y el vector
se hace gracias a unos enzimas, las ligasas (recordad unión fragmentos de Okazaki). El
resultado de la unión del fragmento de ADN y el vector es una molécula de ADN
recombinante.
c.- Síntesis de ADN complementario (ADNc): Es una secuencia de ADN sintetizada
artificialmente utilizando como molde un ARNm mediante la acción de la enzima
transcriptasa inversa (reversotranscriptasa).
d.- Obtención de ADN sintético: Consiste en la obtención de fragmentos de ADN
(oligonucleótidos) de secuencia conocida. Se realiza automáticamente en máquinas
sintetizadoras de ADN, que producen cadenas de unos 100 nucleótidos y en la que se van
añadiendo nucleótidos al extremo de la cadena en crecimiento. Si se conoce la secuencia
de aa de una proteína, se puede sintetizar el ADN del gen correspondiente.
e.- Hibridación de ácidos nucleicos. Para poder obtener varias copias de un gen, es
necesario conocer en qué lugar del cromosoma está y también en que células se expresa
dicho gen. Para ello se emplean las técnicas de hibridación en las que se necesita una
molécula de ADN monocatenario o de ARN (se llama sonda) que permite buscar
secuencias complementarias. Pueden hacerse hibridación ADN-ADN (técnica de
transferencia tipo Southern) o ADN-ARN (técnica Northern).
f.- Genotecas de ADN (librerías de ADN): Son conjuntos de genes, obtenidos por
fragmentación del ADN de un organismo, aislados, identificados e introducidos
individualmente en bacterias para “guardarlos” y estar disponibles para cuando se
necesiten.
g.- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR): Técnica que permite obtener muchas
copias de un fragmento de ADN. Se basa en la acción de las ADN-polimerasas (recordad
replicación del ADN). Consiste en lo siguiente: Se separan las dos cadenas de ADN (por
acción de altas temperaturas), cada una de las cadenas sirve de molde para la síntesis de
la cadena complementaria por lo que se necesita una mezcla de desoxirribonucleótidos
trifosfato y un cebador (pequeño fragmento de ADN monocatenario) y se obtendrían 2
moléculas bicatenarias de ADN. En el siguiente ciclo de replicación se partiría de 4
cadenas molde y se obtendrían 4 moléculas bicatenarias, en el siguiente 8 cadenas molde
y 8 moléculas bicatenarias, en el siguiente de 16 cadenas molde,……es un proceso
exponencial, en el que se realizan los ciclos necesarios para obtener el número de copias
que se desee. Una vez obtenido el número de copias necesario, se pueden unir a cualquier
vector e utilizarlo. . Actualmente, la PCR es un proceso totalmente automatizado que se
utiliza en arqueología, paleontología, medicina forense,…etc.
h.- Clonación: Clonar significa obtener copias idénticas. Se puede clonar un gen
utilizando las técnicas que se describieron con anterioridad: Aislamiento y obtención del
gen; selección del vector de clonación; formación de una molécula de ADN
recombinante; introducción del ADN recombinante en una célula hospedadora (suelen ser
bacterias no patógenas y también células eucariotas). Se pueden clonar también
organismos; el primer mamífero clonado fue la famosa oveja Dolly.
APLICACIONES DE LA INGENIERÍA GENÉTICA
a) Investigación: