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Sade & Ambiente em Revista, Duque de Caxias, v.2, n.2, p.

11-22, jul-dez 2007




DNA FORENSE
ARTIGO DE REVISO
Luciana Cresta Dolinsky', Lissiane Miranda Campelo Veras Pereira'
'Cincias Biologicas IBC, Universidade do Grande Rio-Unigranrio

RESUMO
Este trabalho tem a importncia de conceituar, por meio de diIerentes percepes, o DNA Iorense, bem
como caracterizar seu uso e aplicaes. As tecnicas Iorenses permitem identiIicar pessoas pela analise de suas
moleculas de DNA podendo, inclusive, auxiliar a justia na identiIicao de criminosos, utilizando analise de
STRs e VNTRs. Estas analises so Ieitas em laboratorios de analise de DNA, e utilizam qualquer tipo de
tecido ou Iluido biologicos que possam ser utilizados como Ionte de DNA, uma vez que so Iormados por
celulas.

Palavras-chave: DNA Forense, identiIicao, material biologico.


ABSTRACT
The main importance oI this work is to characterize use and applications oI Iorensic DNA. The Iorensic
techniques can identiIy people by DNA molecular analysis including criminal analysis, using STR`s and
VNTR`s, to help justice. These analysis are made in DNA`s laboratories and can use as DNA source any
samples oI tissue or biological Iluids, composed by cells.

Keywords: Forensic AND, identiIication, biological samples.














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INTRODUO

O primeiro caso de identiIicao criminal
atraves de exames de DNA ocorreu em 1985, na
Inglaterra. Num pequeno condado, rodeado de
montanhas e com uma unica estrada de acesso,
uma mulher Ioi estuprada e assassinada. "La havia
um geneticista, Alec JeIIreys, que colheu o
esperma encontrado na vitima e Iez o exame de
DNA. Mais tarde houve outro crime similar.
Novamente JeIIreys analisou o smen encontrado
na vitima. Era do mesmo homem que cometera o
primeiro crime", conta Jose Maria Marlet,
proIessor de medicina legal da USP. As
autoridades locais Iorjaram uma campanha de
doao de sangue cuja Iinalidade era identiIicar o
agressor. Todos os habitantes Ioram doar sangue,
mas nenhum deles possuia DNA igual ao do
estuprador. "A policia prosseguiu com as
investigaes e descobriu que havia um viajante
no condado. Quando o sujeito voltou, Ioi
convidado a doar sangue. Feito o teste de DNA no
sangue colhido, JeIIreys concluiu que o codigo
genetico do viajante era o mesmo do estuprador",
conta Marlet (AMABIS & MARTHO, 1995).
A identiIicao humana por DNA e uma
Ierramenta poderosa para casos de paternidade,
assim como investigao criminal pela tipagem de
evidncias biologicas coletadas em cenas de crime
como estupro, homicidio, rapto, troca ou
abandono de crianas e tambem na identiIicao
de restos mortais em desastres ou campos de
batalha. Contudo, devem-se utilizar os
conhecimentos cientiIicos, tecnologicos e
metodos de analise, para que essa associao seja
Ieita de maneira correta.
As evidencias biologicas (manchas de
sangue, smen, cabelos, etc.) so encontradas em
cenas de crimes e o DNA pode ser extraido dessas
evidncias e estudado por tecnicas moleculares no
laboratorio, permitindo a identiIicao do possivel
suspeito. Assim, para que a tecnica de
identiIicao pelo DNA seja plenamente
realizada, a amostra biologica a ser analisada deve
ser corretamente escolhida, transportada, coletada
e armazenada (SILVA & PASSOS, 2006).
O uso do DNA Forense na investigao
criminal, no pode por si so provar a
culpabilidade do criminoso, e tambem a inocncia
do mesmo, mas pode estabelecer uma ligao
entre esta pessoa e a cena do crime. Atualmente a
identiIicao humana por DNA Forense, ja e
aceita em processos judiciais em todo o mundo,
sendo possivel inclusive a identiIicao de
pessoas mortas, a dezenas, centenas de anos,
utilizando DNA obtido de ossos ou dentes.
O perIil de DNA ou PerIil genetico tem sido
considerado um metodo importante na
identiIicao individual, pois a inIormao
contida no DNA e determinada pela seqncia
como as letras do alIabeto genetico esto
dispostas nos cromossomos. No caso do homem,
existem trs bilhes dessas letras escritas nos
cromossomos de cada celula do corpo humano,
sempre na mesma ordem em todas as celulas do
individuo. E a ordem como essas letras esto
escritas nos cromossomos que Iaz com que cada
individuo seja diIerente dos demais. Quanto mais
diIerentes so os individuos, mais distinta e a
ordem das letras no genoma. Individuos
aparentados, irmos, pais e Iilhos, etc, apresentam
proporcionalmente maior similaridade na
seqncia gnica. Somente gmeos idnticos, que
so clones humanos naturais, apresentam a mesma
ordem ou seqncia gnica (BOREM et al.,
2001).
No perIil de DNA, somente algumas regies
do DNA so analisadas. As regies escolhidas so
aquelas que apresentam maior variao individual
e Iacilidade de estudo. Essas regies so
denominadas de marcadores geneticos ou
moleculares. Os marcadores moleculares podem
ser utilizados para caracterizar o DNA de um
individuo em um padro ou perIil de Iragmentos
que lhe e particular. Neste caso so utilizados
marcadores polimorIicos, ou seja, regies que
apresentam mais de um alelo por locus; em loci
Iorenses, o alelo mais comum tem a Ireqncia
menor que 0,6 (DUARTE et al., 2001).
O metodo de STR (Short Tanden Repeats) e
mais usado hoje em dia, e estuda regies
repetitivas de DNA chamadas de minissatelites
(VNTRs) e microssatelites (STRs). Na








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identiIicao humana utiliza-se quase que
exclusivamente marcadores microssatelites STR.
O estudo dos marcadores STR e Ieito utilizando a
tecnica de reao em cadeia de polimerase (PCR,
do ingls Polvmerase Chain Reaction). Com essa
tecnica e possivel Iazer a tipagem do DNA
utilizando quantidades minimas de amostras,
como Iio de cabelo, celulas coletadas na borda de
um copo usado pelo suspeito ou manchas de
sangue em uma arma. Esse processo se Iaz in
vitro (em vidro) para Iazer muitas copias de um
Iragmento de DNA.
A tipagem do DNA Forense se baseia nos
mesmos principios Iundamentais e usa as mesmas
tecnicas empregadas nas areas medica e genetica,
tais como o diagnostico e mapeamento genetico,
que analisam o proprio DNA.
O sucesso da tipagem de DNA depende
basicamente da qualidade e quantidade de DNA
extraido das diversas Iontes. Nos exames de
paternidade, o DNA e geralmente extraido de
amostras colhidas em condies ideais: sem
contaminao e com material genetico integro. Ja
na determinao de identidade, o material obtido
nem sempre esta em boas condies: as vezes ha
pouco DNA, ou este esta contaminado ou
degradado. Nesses casos, a extrao de DNA
adequado para a analise talvez seja a etapa mais
importante do processo.
So tambem analisados polimorIismos
presentes no DNA mitocondrial e no cromossomo
Y, que so usadas em algumas ocasies. Mais
recentemente, os abundantes polimorIismos de
nucleotideo unico (SNP, do ingls single
nucleotide polvmorphisms) e os polimorIismos de
insero/deleo (indels) tm emergido como
possiveis alternativas (LIMA, 2006).

USO FORENSE DO DNA

O DNA Forense e usado hoje na esIera
criminal, para a investigao criminal e na esIera
civil, para investigao de paternidade.
O DNA Forense e aplicado na identiIicao
de suspeito em casos de crimes sexuais (estupro,
atentado violento ao pudor, ato libidinoso diverso
da conjugao carnal); identiIicao de cadaveres
carbonizados, em decomposio, mutilados, etc.;
relao entre instrumento lesivo e vitima;
identiIicao de cadaveres abandonados; aborto
provocado; inIanticidio; Ialta de assistncia
durante o estado puerperal; investigao de
paternidade em caso de gravidez resultante de
estupro; estudo de vinculo genetico: raptos,
seqestros e traIico de menores; e anulao de
registro civil de nascimento (LEITE, et al., 2005).
Alem dos cuidados que devem ser tomados
com todas as evidncias criminais e civis, nos
casos que envolvem a analise de DNA, deve-se ter
ateno em relao a contaminao das evidncias
criminais que contenham material genetico. Por
isso e importante o uso de luvas descartaveis,
mascaras e gorros cirurgicos quando Ior Iazer a
coleta, manuseio e processamento das evidncias.

Amostras biolgicas de Interesse Forense
Qualquer tipo de tecido ou Iluido biologico
pode ser utilizado como Ionte de DNA, uma vez
que so Iormados por celulas. Nas celulas, o DNA
de interesse Iorense encontra-se tanto no nucleo
como nas mitocndrias (BEZERRA, 2004). Os
tipos de amostras mais comuns so sangue,
smen, cabelo, saliva, urina, pele, unha, ossos,
liquidos amnioticos, vilosidade corinica, Iigado,
musculo, suor, Iezes.

Podem ocorrer degradao e contaminao
de DNA nos laboratorios e nos locais de crime. A
degradao biologica do DNA e Ieita por enzimas
produzidas por Iungo e bacterias, por causa da
umidade e do calor. O DNA resiste bem ao calor
(temperatura de ate 100C no o destroi), mas
existe o problema da contaminao, que e a
deposio de material biologico de outra pessoa
na amostra. Por exemplo, num caso de estupro,
quando o material coletado com swab pode conter
smen (espermatozoide) do estuprador e Iluido
vaginal com celulas da vitima (SILVA &
PASSOS, 2006).
Para um eIetivo controle da integridade
Iisica do material biologico coletado, Iaz-se
necessario a documentao de sua cadeia de
custodia, que diz respeito a identiIicao de todas
as pessoas que Iicaram responsaveis pela guarda
da amostra, e das condies em que as mesmas se
encontravam a cada nova transmisso, desde a








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coleta ate sua analise em laboratorio. As amostras
biologicas merecem especial ateno devido a sua
susceptibilidade a degradao e contaminao.
Este controle e obtido mediante recibos assinados
a cada transmisso de posse da amostra (SILVA
& PASSOS, 2006).


INFORMAES SOBRE O DNA

Localizao do DNA
O DNA esta na Iorma de cromossomos
microscopicos, localizados no interior da celula,
no nucleo (DUARTE, 2001).
Fora do nucleo, no citoplasma da celula
tambem e encontrado DNA de interesse Iorense.
Este DNA esta localizado nas mitocndrias,
organelas especializadas na produo de energia.
Nos estudos rotineiros de identiIicao humana
somente se estuda DNA nuclear.
Nos casos em que no e possivel a tipagem
utilizando-se DNA nuclear, pode ser usado DNA
mitocondrial. Por exemplo, Iios de cabelos que
no possuem mais bulbos e ossos antigos podem
ser utilizados para extrao de DNA mitocondrial.
Qualquer tecido ou Iluido biologico pode ser
utilizado como Ionte de DNA, desde que possua
celulas proprias ou celulas de outros tecidos. Por
exemplo, na urina podemos encontrar celulas
oriundas da bexiga, mucosa do pnis e celulas
brancas do sangue, que podem ser utilizada em
estudos de identiIicao. Da mesma Iorma podem
ser encontradas celulas na saliva, lagrimas, suor, e
em outras substncias orgnicas (SILVA &
PASSOS, 2006).
Nos seres humanos, o DNA que carrega o
codigo genetico ocorre em todas as celulas que
possuem nucleo, inclusive os globulos brancos, os
espermatozoides, as celulas que envolvem as
raizes capilares e as celulas encontradas na saliva.
Estas so as celulas que oIerecem maior interesse
para os estudos Iorenses (DUARTE, 2001).
O DNA mitocondrial (mtDNA) e de origem
extranuclear, e seu genoma circular e encontrado
em grande quantidade no citoplasma das celulas.
Esse DNA Ioi completamente seqenciado, e a
regio que possui variaes de seqncia e
chamada de regio controle. Uma das
caracteristicas de interesse e o seu carater
monoclonal, sendo que todo o mtDNA de um
individuo apresenta a mesma seqncia.
Entretanto, uma condio chamada de
heteroplasmia pode existir, quando uma pessoa
apresenta mais de um tipo de mtDNA. Dessa
maneira, a analise de Iios de cabelo pode
demonstrar resultados diIerentes ou ambiguos
(JOBIM et al., 2006).
O mtDNA e um marcador genetico de
grande interesse na area Iorense, pois uma unica
celula possui mais de 5.000 copias de mtDNA,
associados a resistncia do mtDNA com
estruturas circular, a digesto enzimatica. Assim,
em grandes desastres (incndios, exploses, queda
de avies,), quando e mais diIicil identiIicar os
corpos, analisa-se o mtDNA e compara-se com
seqncias obtidas de possiveis irmos ou
ascendentes maternos (LIMA, 2006).
Utiliza-se mtDNA quando a amostra em
questo tem uma quantidade pequena ou no tem
DNA nuclear; como, por exemplo, quando a unica
amostra que temos do possivel criminoso e um
plo ou cabelo sem bulbo. A tecnica tambem pode
ser usada quando se quer Iazer um exame de
maternidade e no se tem o pai. O mtDNA e de
herana materna, sendo que recebemos esses
marcador de nossas mes e temos identidade com
nossos irmos e parentes proximos pela linhagem
materna (JOBIM, et al.,2006).
O cromossomo Y (crY) e transmitido pelo
pai somente para os Iilhos homens, e a analise
destas regies pode Iornecer importante
inIormao quanto a origem parental dos
individuos, embora no Iornea inIormao
individuo-especiIico.
Seus microssatelites so importantes na
analise Iorense do DNA. Devido a Ialta de um
cromossomo homologo, no existe recombinao
durante a meiose. So so identiIicados alelos de
origem masculina, herdados em bloco dos
antepassados masculinos. A herana em bloco de
alelos de diIerentes STR do mesmo cromossomo e
denominada herana haplotipa, e o conjunto dos
alelos chamam-se haplotipos (JOBIM, et al.,
2006). A analise de microssatelites existentes no
cromossomo Y (crY) tem sido utilizada para








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elucidar casos de estupro onde se tem mistura de
material biologico e, por isso, de DNA. Alem
disso, pode-se realizar teste de paternidade sem a
me (LIMA, 2006).
No cromossomo Y existem trs regies
distintas. Duas pequenas regies so homologas
ao cromossomo X e podem soIrer recombinao.
No entanto, ha uma parte do cromossomo Y que e
exclusiva e que no soIre recombinao com o
cromossomo X e por isso e passada de pai pra
Iilho sem soIrer qualquer alterao (LIMA, 2006).
Estudos apontam um baixo indice de mutao,
podendo os mesmos haplotipos serem encontrados
em varias geraes de homens, alcanando talvez
algumas centenas de anos (JOBIM, et al., 2006).
Enquanto que no estudo de microssatelite de
DNA de cromossomos somaticos um mesmo
individuo pode possuir dois alelos, diIerentes ou
no, para a mesma regio (o que signiIica homo
ou heterogozidade), no estudo de microssatelite de
cromossomo Y, cada homem possui apenas uma
alelo, uma vez que possui apenas um cromossomo
Y (LIMA, 2006).


REGIES HIPERVARIVEIS DA
MOLCULA DE DNA

A analise de DNA tem como objetivo
diIerenciar um individuo de outro, atraves de um
grande numero de caracteristicas, dando-lhe uma
identidade absoluta como pessoa, podendo assim
ser diIerenciado dentre bilhes de outras
(BONACCORSO, 2004). A variabilidade humana
em termos de DNA e enorme. Dois genomas
humanos escolhidos ao acaso diIerem
aproximadamente em um de cada 500 pares de
bases do DNA (nucleotideos). Como o genoma
humano tem cerca de 3.109 pares de bases, isto
implica em 6 milhes de diIerenas entre duas
pessoas (LEE & GAENSSLEN, 1990;
BONACCORSO, 2004).
Na especie humana existem cerca de 50 mil
genes que codiIicam, atraves de RNA, proteinas.
Estes genes codiIicadores de proteinas
representam, aproximadamente, 10 do genoma.
Todo o restante trata-se de seqncias repetitivas
que tm Iuno estrutural (PENA, 1997). E a
variabilidade deste restante, quais sejam as
regies hipervariaveis ou polimorIicas, de Iuno
estrutural, que se utiliza nos exames Iorenses de
DNA (BONACCORSO, 2004).


Tipos de polimorfismo
Os polimorIismos presentes nas regies
hipervariaveis do DNA podem ser agrupados em
dois tipos: polimorIismos de comprimento e
polimorIismos de seqncia.
O primeiro tipo inclui as regies STR
("short tandem repeat") e VNTR ("variable
number of tandem repeat"), e e caracterizado por
seqncias de nucleotideos que se repetem em
multiplas copias, variando o numero de repeties
entre os individuos para cada locus.
Os polimorIismos de seqncia so
compostos de diIerentes nucleotideos em uma
determinada localizao do genoma. Estas
variaes em seqncia podem ser maniIestadas
como regies de alelos alternativos ou
substituies, adies ou delees de bases. Em
geral, originam-se de mutaes pontuais
(PARADELA et al, 2006).
A grande diversidade nestas regies e que o
numero de repeties de uma dada seqncia de
bases, que pode ser de 1 a 4 bases nos STRs e de
10 a 100 pares de bases nos VNTRs, varia entre
individuos. Assim, em Iuno da quantidade de
repeties presentes, cada individuo tera um
tamanho diIerente para a regio do DNA que
contem um dado STR ou VNTR. Cada
possibilidade de tamanho (ou de numero de
repeties) que pode ser encontrada representa um
alelo (LIMA, 2006).
Os minissatelites so Iormados por
seqncias de varios nucleotideos, por exemplo,
(AATGCGGTACTGAGCC)n, repetidas em
numeros diIerentes em cada individuo, dando-lhe
uma caracteristica unica. Um locus de
minissatelites pode ter muitos alelos em Iuno do
numero de vezes (n) em que essa estrutura e
repetida ao longo do DNA, deixando a populao
polimorIica em relao ao locus. Os loci de
minissatelites so conhecidos tambem como
numero variavel de repeties em seqncia








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(VNTR, do ingls variable number of tandem
repeats) (JOBIM, et al., 2006).
-Os loci de microssatelites, ou repeties
curtas consecutivas (STR, do ingls short tandem
repeats), so parecidos com minissatelites, mas
com estrutura repetida menor (GATA)n (JOBIM
et al, 2006).
Para a identiIicao de individuos e
necessario a utilizao de regies polimorIicas de
DNA. Quanto mais loci so testados, maior a
probabilidade de acerto. Para testes de paternidade
e Iorense, ate 18 loci diIerentes so testados.
Normalmente so utilizados STR (short tandem
repeats), que so regies repetitivas de DNA (de 1
a 4 nucleotideos), altamente polimorIicos
(polimorIismo de tamanho) e Iacilmente tipados.
As bases para a utilizao dos testes de
identiIicao da individualidade humana, pelo
estudo, do DNA, encontram-se na diversidade ou
polimorIismo dos diversos loci de minissatelites,
microssatelites ou HLA (antigenos leucocitarios
humano). Cada um de nos apresenta um
cromossomo materno e um paterno, e as
segregaes destas estruturas repetitivas seguem a
lei de Mendel, em que um alelo e de origem
materna e outro, paterna, para cada locus (JOBIM,
et al., 2006).

Tcnicas de deteco do DNA
Apos a extrao do DNA presente no
material em questo, segue-se a analise dos
polimorIismos geneticos. Nos ultimos anos Ioram
desenvolvidas diversas tecnicas para estudo de
diIerentes tipos de polimorIismos de DNA, no
qual os cientistas e laboratorios podem escolher o
metodo mais adequado para solucionar o
problema. A expresso correta e 'teste em DNA
(LIMA, 2006).
O polimorIismo de tamanho para Iragmento
de restrio (RFLP, do ingls Restriction
Fragment Length Polvmorfism), e uma tecnica em
que os organismos podem ser diIerenciados pela
analise de padres derivados da clivagem do seu
DNA. Se dois organismos diIerirem na distncia
entre os sitios de clivagem de uma endonuclease
de restrio, o comprimento dos Iragmentos
produzidos vai diIerir quando o DNA Ior digerido
com uma enzima de restrio (CARRAPA, A et
al.,2005).
Para a deteco de RFLP`s, pode ser usada a
metodologia de 'Shouthern Blot, descrita em
1975 por Edmund Southern, que permite a
identiIicao de Iragmentos de DNA com
seqncias idnticas ou similares a sonda
utilizada, e pode tambem auxiliar no
posicionamento relativo de diIerentes Iragmentos
dentro de um Iragmento maior de DNA. Essa
tecnica pode ser utilizada tambem na identiIicao
de polimorIismos que determinam a alterao de
clivagem obtidos a partir de uma determinada
regio do DNA (RFLP) (ZAHA, 2003).
Apos restrio enzimatica os Iragmentos de
DNA genmico so sujeitos a eletroIorese em gel
e so transIeridos para um suporte solido de
nitrocelulose atraves do arrastamento por
capilaridade. Apos hibridizao com sondas
radioativas, este processo possibilita a
identiIicao, entre milhares de Iragmentos de
restrio obtidos, de seqncias bem
determinadas. (CARRAPA et al., 2005).
Os VNTR so seqncias curtas de bases
que ocorrem em numeros variaveis dentro dos
grupos de repeties em tandem (so encontrados
proximos uns aos outros). O numero de repeties
encontradas em um grupo pode variar de um local
para o seguinte dentro do genoma de um
determinado individuo, e ira variar entre
individuos, exceto em gmeos idnticos
(MALACINSKEI, 2005; ZAHA, 2003).
Existem dois tipos de repeties: repeties
de microssatelites ou STR, que so repeties
curtas em tandem de 2 a 5 nucleotideos ocorrendo
em muitos locais pelo genoma inteiro, e as
repeties minissatelites, que so unidades de
repeties maiores de 30 a 35 pares de bases
contendo uma seqncia-cerne comum mais curta.
Essas repeties tendem a ocorrer em menos
locais dentro do genoma do individuo
(MALACINSKEI, 2005).
Para detectar os padres de VNTR, o DNA e
cortado com uma enzima de restrio que no
corta o VNTR, mas corta para incluir todo o
trecho repetido. Os Iragmentos de restrio
produzidos so separados via eletroIorese em gel.
A transIerncia de Southern e Ieita, usando sonda








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radioativa que se hibridiza com a unidade basica
de repetio. Com a radiograIia, se revela a
presena de um grande numero de Iragmentos de
DNA de tamanhos diIerentes que se hibridiza com
a sonda. O numero de repeties em tandem
diIere de um individuo para o outro, e o que
ocorre e um padro altamente individual de
Iragmentos de DNA, chamado de fingerprint de
DNA, que e usado hoje na area Iorense
(MALACINSKEI, 2005).
Portanto, pequenas amostras de DNA,
presentes em uma gota de sangue, Iragmentos de
pele ou Ioliculo capilar podem ser ampliIicadas
via PCR e usadas para inocentar ou incriminar um
suspeito (MALACINSKEI, 2005). Apresentam
um padro que varia de pessoa para pessoa,
exceto em gmeos idnticos (ZAHA, 2003).
Os VNTR tm uma taxa de mutao muito
elevada, o que leva a alterao em seu
comprimento. Cada mutao altera o
comprimento em apenas uma ou poucas unidades
de repetio. O resultado e um numero muito
grande de alelos, nenhum deles sendo comum
(DUARTE, 2001).
As sondas de DNA so curtos seguimentos
de Iita simples, marcados quimica ou
radioativamente, que so usadas para detectar a
presena de uma seqncia particular de DNA
atraves de hibridizao a sua seqncia
complementar (DUARTE, 1999).
Existem sondas unilocais (SLP), que
estudam cada locus individualmente, e sonda
multilocais, que avaliam muitos loci ao mesmo
tempo, conhecidos como impresso digital do
DNA (JOBIM et al .,2006 a pud JEFFREYS,
1987).
As sondas unilocais (SLP) analisam cada
locus de minissatelites do DNA (VNTR)
individualmente pelo metodo de RFLP,
permitindo a observao de alelo de origem
materna e outro de origem paterna (JOBIM et al.,
2006 a pud Balazs,1993).
Os sistemas de SLP so adotados por serem
mais sensiveis, mais Iacilmente interpretados e
por possuirem uma genetica deIinida (JOBIM et
al., 1999).
As sondas multilocais estudam um grande
polimorIismo na mesma reao, com isso podem
conIundir o tecnico pela quantidade exagerada de
bandas de DNA existente. Esses testes tm sido
pouco utilizados. Atualmente os STR so mais
utilizados na area Iorense.
A PCR Ioi descrita em 1985, por Kary
Mullis que, em 1993, recebeu o prmio Nobel em
quimica por seu Ieito. Desde o inicio, a PCR Ioi
reconhecida como uma resposta em potencial para
quantidade de liquido biologico Ireqentemente
encontrado na area Iorense. Estas amostras so
diminutas para serem utilizadas com os metodos
de RFLP (JEFFREYS et alii, 1988).
A reao em Cadeia da Polimerase (PCR,
do ingls Polvmerase Chain Reaction), e uma
tecnica qualitativa simples, pelo qual moleculas
de DNA ou DNA complementar so ampliIicadas
milhares de vezes ou milhes de vezes de uma
Iorma bastante rapida. Todo o procedimento e
realizado in vitro, gerando DNA em quantidade
suIiciente para analises posteriores. A tecnica e
extremamente sensivel, possibilitando a
ampliIicao de DNA a partir de uma quantidade
minima de amostra (ZAHA, 2003).
O DNA e resistente a muitas condies que
destroem a maioria dos outros compostos
biologicos, como as proteinas, e somente
pequenas quantidades de DNA so necessarias.
A PCR tem um grande potencial na
medicina Iorense. Sua sensibilidade torna possivel
utilizar uma amostra bastante pequena (traos
minimos de sangue e tecido que poderiam conter
os restos de somente uma unica celula) e ainda se
obter uma 'impresso digital de DNA da pessoa
da qual a amostra Ioi coletada, podendo assim
Iazer comparaes com aqueles obtidos de vitimas
e suspeitos de casos de inIrao penal (SILVA &
PASSOS, 2006).
Os loci de microssatelites conhecidos como
STR (short tandem repeats ou repeties curtas
consecutivas) apresentam alelos ou Iragmentos de
DNA de 100 a 300 pares de bases, e so usados na
analise pericial de casos de identiIicao humana
em que a amostra e escassa ou parcialmente
degradada (JOBIM et al, 2006 a pud MULLIS,
1987; HOCHMEISTER,1998).
Nas regies polimorIicas, o genoma de cada
ser humano (exceto dos gmeos idnticos) e
diIerente, sendo possivel ampliIicar essas regies.








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Portanto usa-se a pesquisa de STRs (Small
Tandem Repeats) atraves da PCR, utilizando um
conjunto de iniciadores que cobrem estas partes
altamente variaveis do genoma humano, e podem
gerar uma impresso digital caracteristica de DNA
para cada individuo (BRUCE, 1999).
Segundo JOBIM et al (2006), com a tecnica,
por exemplo, de PCR, pode se Iazer a
identiIicao do sexo do individuo que deixou o
vestigio biologico. O locus da amelogenina
apresenta um alelo de 106 pares de bases nas
mulheres e um de 106 e outro de 112 pares de
bases nos homens.
PCR Multiplex e a ampliIicao de diversos
STR no mesmo tubo de ensaio. E uma tecnica de
PCR na sua Iorma mais simples, que ampliIica
regies especiIicas do DNA, e utiliza um conjunto
de iniciadores diIerentes. Quanto mais regies so
ampliIicadas, mais conIiavel e a tecnica e se tem o
conhecimento previo das seqncias (ou seja, do
gene/ regio de interesse).
Essa metodologia de ampliIicao multipla
depende de que a temperatura de anelamento dos
primers seja idntica e o tamanho dos alelos
diIerentes, para que possam ser analisados no
mesmo gel de poliacrilamida, corado com prata,
ou identiIicado pelo laser de um seqenciador
automatico. A possibilidade de marcao dos loci
de STR com diversos Iluorocromos permite a
identiIicao dos multiplex de tamanhos
semelhantes (JOBIM et al., 2006 a pud BRI
NKMAN, 1998).
Atualmente, so comercializados produtos
que ampliIicam ate 16 loci em uma unica reao
de PCR, analisando-se o produto ampliIicado pela
PCR em seqenciadores de DNA. Escalas alelicas
(ladders) possibilitam a identiIicao dos alelos
existentes nos loci analisados (JOBIM et al.,
2006).
Os marcadores bialelicos (SNP`s), tem sido
muito utilizado na genetica Iorense, mesmo com
seu pequeno poder de discriminao. Mais de um
milho de SNP esto dispersos no genoma
humano, sendo que em cada loco, existe a
possibilidade da existncia de somente um
(homozigose) ou dois nucleotideo (heterozigose).
A possibilidade de ampliIicao em Iorma de
multiplex Iacilita a utilizao dessa tecnologia
(JOBIM, et al., 2006).
Essa tecnica e recente e soIisticada. A
grande vantagem sobre os microssatelites e que
podem ser estudados em produtos de ampliIicao
muito curtos (50pb ou menos), sendo muito uteis
quando se tem DNA muito degradado (LIMA,
2006).


PERFIL DO DNA

O perIil de DNA e uma simples e rapida
maneira de se comparar seqncias de DNA de
dois ou mais individuos. O exame de perIil do
DNA tambem pode ser usado para casos de
disputa por propriedade de linhagens e variedades
melhoradas, paternidade, determinao de
sucesso de bens por herana, propriedade de
orgos construidos em laboratorio e identiIicao
de cadaveres, entre outros (BOREM et al., 2001).
As impresses digitais podem ser alteradas
por cirurgias, o DNA de uma pessoa no pode ser
alterado (BOREM et al., 2001).
Existem casos em que a mesma pessoa
nasce com dois perIis diIerentes de DNA, e no ha
como conIirmar. E raro, mas a cincia ja
diagnosticou a existncia de pessoas portadoras de
dois perIis de DNA, um diIerente do outro. O
Ienmeno causa diIiculdades na soluo de
crimes, pois a excluso ou a conIirmao do
envolvimento de um suspeito em casos de
homicidios, estupros, identiIicao de ossadas e
testes de paternidade Iica prejudicada, ja que o
sangue do individuo pode apresentar um DNA
diIerente da amostra coletada em um dos tecidos
do organismo do suspeito (MUG, 2006).
Durante a gestao, gmeos no idnticos
podem se Iundir no utero, Iormando um unico
embrio a partir de dois ovulos e dois
espermatozoides com carga genetica distinta, e
originar um individuo com dois tipos de celulas
diIerentes. O Ienmeno e chamado de
quimerismo, o termo quimera vem do grego e
designava uma criatura mitica, parte leo, parte
serpente e parte bode (MUG, 2006).









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Obteno do perfil do DNA.
O padro de Iragmento do DNA ou perIil de
DNA de uma pessoa pode ser obtido pela analise
do seu material genetico.
O procedimento inclui sete etapas: Coleta da
amostra; Isolamento do DNA; Corte do DNA;
Separao dos Fragmentos; TransIerncia do
DNA; Hibridizao de sondas; e PerIil do DNA.
* Coleta da amostra: sangue, saliva, smen,
plo, dente, ossos ou qualquer outro tecido ou
Iluido do individuo (BOREM et al., 2001).
Segundo BUDOWLE (1996), a qualidade,
exatido e conIiabilidade dos resultados obtidos
na analise de DNA, em vestigios coletados ou
relacionados a ocorrncias criminais, dependem
de procedimentos proprios, que devem ser
rigorosamente adotados nas etapas do isolamento
do local do delito e do levantamento das amostras
biologicas a serem encaminhadas para a unidade
orgnica responsavel pela genotipagem Iorense,
no mbito da respectiva Instituio.
As evidncias Iisicas soIrem com Iatores
ambientais (luz, elevadas temperaturas, reativos
quimicos, substncias corrosivas, ataque
enzimatico, contaminao/degradao por
microorganismos, com conseqentes quebras e
outras alteraes da cadeia de polinucleotideos)
que modiIicam a composio e a estrutura normal
de seu DNA. Essas evidncias esto ainda sujeitas
as mais diversas Iormas de contaminao por
material genetico exogeno, derivado de outros
seres humanos que no necessariamente esto
ligados a cadeia de eventos do ato delituoso em
questo (BONACCORSO, 2004).
* Isolamento do DNA: O DNA deve ser
extraido das celulas ou dos tecidos das amostras.
Dependendo do metodo de analise utilizado, uma
pequena quantidade da amostra pode ser
suIiciente, como, por exemplo, as celulas
descamadas da epiderme da testa do individuo,
depositadas em um bone por ele utilizado. Uma
goticula de saliva deixada em um teleIone ou no
selo de uma carta pode tambem conter DNA
suIiciente para as analises (BOREM et al.,2001).
* Corte do DNA: a etapa seguinte e a
digesto ou Iragmentao do DNA com uma
enzima de restrio. As enzimas Hind III, EcoR I,
entre outras, tm sido utilizadas para essa
Iinalidade. Apos o DNA ser tratado com a
enzima de restrio (Uma enzima que cliva a
molecula de DNA em uma determinada seqncia
curta de base), ira conter um grande numero de
Iragmentos de diIerentes tamanhos; (BOREM et
al., 2001).
* Separao dos Fragmentos: os Iragmentos
de DNA so ordenados por tamanhos, utilizando-
se a tecnica da eletroIorese (tecnica em que
diIerentes moleculas so separadas com base na
sua velocidade de migrao em um campo
eletrico). Esse procedimento consiste em
submeter os Iragmentos do DNA de um gel, a
uma corrente eletrica. O gel utilizado e Ieito com
agarose, substncia extraida de algas marinhas. O
gel de agarose possui uma consistncia similar a
da gelatina. O procedimento consiste em depositar
os Iragmentos de DNA em uma canaleta (um
pequeno sulco) moldada na extremidade do gel
proxima ao eletrodo negativo. Com a corrente
eletrica, o DNA migrara dentro do gel na direo
oposta, isto e, em direo ao eletrodo positivo. Os
Iragmentos menores de DNA migram mais
rapidamente que os maiores, permitindo, separa-
los por tamanho (BOREM et al., 2001).
* TransIerncia do DNA: apos a separao
dos Iragmentos no gel, eles so transIeridos do gel
para uma membrana de nailon, por capilaridade.
Uma vez Iixados nessa membrana, os Iragmentos
podem ser manipulados para sua visualizao
(BOREM et al., 2001).
* Hibridizao de sondas: a adio de
sondas coloridas ou radioativas a membrana de
nailon permite a visualizao dos Iragmentos, que
possuem seqncias gnicas complementar a
sonda. Cada sonda utilizada evidncia apenas
alguns dos Iragmentos presentes na membrana
(BOREM et al., 2001).
* PerIil do DNA: o perIil Iinal do DNA e
constituido, apos a hibridizao, de diIerentes
sondas a membrana. O resultado e um padro de
bandeamento de diIerentes tamanhos (BOREM et
al., 2001).

EXAME COMPARATIVO DO DNA









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O DNA pode ser extraido de uma pequena
amostra de qualquer material biologico, como
sangue, cabelo, unha, smen, saliva, urina, entre
outros. O exame de DNA da-se de Iorma
comparativa, ou seja, de cada uma das amostras
so selecionados trechos signiIicativos do DNA
(locus).
No minimo, 13 loci so analisados
veriIicando-se o comprimento das seqncias das
bases do DNA (alelos). A partir disso, so gerados
perIis de DNA que so comparados entre si. A
relao entre os alelos e que vai mostrar se existe
vinculo genetico Iamiliar ou no. Depois, so
realizados calculos estatisticos para estimar o
numero de vezes em que esse perIil ocorre na
populao. A possibilidade de que duas pessoas
tenham as mesmas seqncias dos trechos de
DNA e estimada em uma em seis bilhes
(GUERRA, 2007).

BANCO DE DADOS CRIMINAL

E usado para Iazer comparao dos perIis
geneticos obtidos de suspeitos com os cadastrados
no banco e identiIicao de criminosos a partir de
outros crimes. A tecnologia em questo pode ser
usada para provar a inocncia ou culpa de
suspeitos, identiIicar restos mortais e amostras
biologicas.
Usa-se o Sistema CODIS (Combined DNA
Index Svstem) do FBI / EUA (todo o pais), que
preconiza no minimo 13 regies de STR (SILVA
& PASSOS, 2006). As 13 regies so: D3S1358,
VWA, FGA, D8S1179, D21S11, D18S51,
D5S818, D13S317, D7S820, CSF1PO, TPOX,
THO1 e D16S539 (GRATTAPAGLIA et al.,
2001).


CONCLUSO E RECOMENDAES

Conclui-se, que houve nos ultimos anos, um
grande crescimento da area Iorense no Brasil e
novas tecnicas so empregadas nos laboratorios,
que ja se encontram com equipamentos de
primeiro mundo.
Apontada como a maior revoluo cientiIica
na esIera Iorense desde o reconhecimento das
impresses digitais como uma caracteristica
pessoal, as tecnicas de identiIicao Iundamentada
na analise do DNA, ostentam duas vantagens
sobre os metodos convencionais de identiIicao:
a estabilidade quimica do DNA, mesmo apos
longo periodo de tempo, e a sua ocorrncia em
todas as celulas nucleadas do organismo humano,
o que permite condenar ou absolver um suspeito
com uma unica gota de sangue ou atraves de um
unico Iio de cabelo encontrado na cena do crime.
O estudo do DNA e seu emprego na area
Iorense auxiliam muito na apurao de
paternidade, quando ja e Ialecido o suposto pai.
As amostras mais Ireqentes nos laboratorios,
para realizao de pericias, so, pela ordem, o
sangue (liquido ou sob a Iorma de mancha seca),
o smen (colhido no exsudato vaginal, peas
intimas ou manchas), os plos (no qual o DNA
esta concentrado na raiz) e os objetos com saliva
(a saliva no contem celulas, mas nela podem ser
encontradas celulas epiteliais da cavidade bucal,
as quais possuem DNA); restos cadavericos,
amostra de musculos, ossos e polpa dentaria.
Considerando que a analise de DNA e uma
tecnica poderosa de identiIicao, ela deve ser
utilizada de Iorma correta. O nivel de
sensibilidade de alguns dos procedimentos de
identiIicao por DNA e to alto que as celulas
das mos de quem manipulam as amostras ou
aqueles presentes em um espirro podem
contaminar as evidncias criminais que
contenham material genetico. Dessa Iorma, o
cuidado na coleta, custodia e manipulaes da
amostra so determinantes para a validade das
analises. Portanto e importante a utilizao de
luvas descartaveis, alem de mascaras e gorros
cirurgicos quando da coleta e processamento das
evidncias. Os procedimentos de coleta e as
analises iniciais devero ser padronizados, atraves
de manuais de coletas.
Os laboratorios que prestam esse tipo de
servio devem ser submetidos a testes, para
assegurar que eles estejam trabalhando com um
controle de qualidade aceitavel, uma vez que esta
em jogo a liberdade de um inocente e a sentena
para o autor do delito.








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As inIormaes de carater tecnico no so
completamente entendidas por uma parcela dos
proIissionais da lei. E muito diIicil estabelecer um
paralelo com outras Ierramentas cientiIicas
empregadas pela justia, ja que nenhuma se
compara a investigao genetica no tocante ao seu
alto poder de discriminao.

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Recebido em / Received: Agosto de 2007
Aceito em/ Accepted: Novembro de 2007