FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS DEPARTAMENTO DE QUIMICA Perodo Acadmico febrero-junio 2013
PROGRAMA DE: CODIGO: DIRIGIDO A: INTENSIDAD HORARIA: CREDITOS PRERREQUISITOS: VALIDABLE-HABILITABLE: INTRODUCCION: La qumica analtica es una rama de la qumica que estudia las tcnicas y mtodos que sirven para determinar los componentes de la materia en una forma cualitativa y cuantitativa, siendo por lo tanto una herramienta indispensable para el avance de los conocimientos de los diferentes campos de la ciencia. Cada investigacin experimental depende en alguna extensin de los resultados de mediciones analticas. Los investigadores en todas las ciencias fsicas y biolgicas deben recurrir al empleo de datos analticos, de ah la necesidad que esta materia sea conocida por estudiantes de las reas como la biologa, bioqumica, ingeniera qumica y bacteriologa. OBJETIVOS: Familiarizar al estudiante con las tcnicas analticas mas comunes e iniciarlo en el uso de instrumentos como un medio de obtener datos analticos cualitativos y cuantitativos. En esta forma se da una visin de conjunto de la qumica analtica. Se pretende que al finalizar el curso el estudiante pueda hacer uso de su capacidad investigativa en la seleccin del mtodo adecuado para la realizacin de un anlisis. QUIMICA ANALITICA GENERAL 116007M BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO (3647) 3 Horas/semana 3 116002M Qumica Fundamental (A) SI
CONTENIDO: UNIDAD 1 (DURACION 4 HORAS) Introduccin y conceptos bsicos Evaluacin de datos analticos UNIDAD 2 (DURACION 8 HORAS) Conceptos generales de equilibrio qumico Equilibrios cido-base Volumetra cido-base UNIDAD 3 (DURACION 8 HORAS) Anlisis gravimtrico Volumetra de precipitacin Volumetra de formacin de complejos UNIDAD 4 (DURACION 8 HORAS) Celdas electroqumicas y potenciales de electrodo Potenciometra Titulaciones redox y potenciomtricas Voltametra y sensores electroqumicos UNIDAD 5 (DURACION 9 HORAS) Interaccin de la energa radiante con la materia Espectrometra UV-Vis Espectrometra de absorcin atmica UNIDAD 6 (DURACION 8 HORAS) Mtodos de separacin Cromatografa de gases Cromatografa liquida Electrofresis UNIDAD 7 (DURACION 3 HORAS) Qumica clnica Anlisis ambiental
EVALUACION: Dos exmenes parciales, dos opcionales y un trabajo. 1 examen: Unidades 1-3 2 examen: Unidades 4-6 Trabajo: Unidad 7
BIBLIOGRAFIA: 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) Christian G. Qumica Analtica. Mc Graw Hill. Sexta Edicin, 2009. Skoog, D.; West, F.: Holler, S.; Crouch, D. Fundamentos de Qumica Analtica, Ed. Thompson, 8 Edicin, 2005. S. Higson. Qumica Analtica. Ed. McGraw Hill, 2007. J. Rubinson, K. Rubinson, Qumica Analtica Contempornea, Prentice Hall, 2000. Harris D. C. Anlisis cuantitativo. 2 Edicin. Editorial Revert. 2001. G. Christian, Analytical Chemistry, 5 Ed. John Wiley & Sons, Inc. 1994. Ayres, G. Anlisis Qumica Cuantitativo. Sexta Edicin. Editorial Harla, 1987. R. Day, A. Underwood, Qumica Analtica Cuantitativa, Prentice Hall, 5 Edicin, 1989. L. Hamilton, S. Simpson, Clculos de Qumica Analtica, McGraw-Hill Co, 7 Edicin, 1988.
Biologa Botnica Gentica Microbiologa Biologa molecular Zoologa Geologa Geofsica Geoqumica Paleontologa
Qumica Analtica
Ciencias ambientales Ecologa Meteorologa Oceanografa
Se basa en que es posible separar en grupos a los cationes existentes en una muestra lquida (mediante la adicin de determinados reactivos denominados de grupo) y, posteriormente, identificar los cationes de cada grupo con la ayuda de reactivos especficos. Fresenius desarroll un esquema cualitativo para el anlisis de cationes que ha tenido una amplia aceptacin (frecuentemente se hace referencia a l como el esquema clsico de anlisis cualitativo de cationes). En este esquema los cationes se dividen en cinco grupos (los 4 que aparecen como precipitados y el que queda en la disolucin final).
Muestra + HCl
Precipitado + disolucin
Grupo II: Bi, Cd, Cu, Hg, Pd, Os, Pd, Rh, Ru (Precipitado: CdS, CuS, HgS, PdS, etc.)
Disolucin + (NH4)2S Grupo III: Co, Ni, Tl, Fe, Cr, Mn, Zn, Al, Be, Ti, Zr, U, Ce, In, Th, Nb, Sc, Ta (Precipitado: CoS, NiS, FeS, etc.) Disolucin + (NH4)2CO3 + NH4Cl) Grupo IV: Ca, Sr, Ba (Precipitado: CaCO3, SrCO3, BaCO3) Disolucin Mg+2, Na+, K+, Li+, Cs+, Rb+, + NH4+
Si
Electroforesis en placa:
Fragmentos de ADN teidos en bromuro de Protenas teidas con Coomassie tras una etidio tras una electroforesis en un gel de electroforesis desnaturalizante en geles de agarosa. poliacrilamida. Gel electrophoresis: 6 "DNA-tracks". In the first row (left), DNA with known fragment sizes was used as a reference. Different bands indicate different fragment sizes (the smaller, the faster it travels, the lower it is in the image); different intensities indicate different concentrations (the brighter, the more DNA).
http://www.youtube.com/watch?feature=player_ embedded&v=sbCusDyYoi0
En el capilar se encuentran la disolucin que contiene las molculas a separar y el tampn o medio electroltico encargado de conducir la corriente. El interior se encuentra formado por grupos silanol (Si-OH), que al ser desprotonados (Si-O-), elevan el pH y favorecen la presencia de analitos especficos. La separacin depende de la relacin masa/carga de las distintas molculas. Adems, existe dentro del capilar otro fenmeno denominado flujo electroosmotico (EOF) debido a que la superficie interna del capilar est cargada. El EOF es el mismo en todo el capilar y afecta de igual forma a todas las molculas arrastrndolas hacia uno de los extremos. La separacin depende del EOF y de la movilidad electrofortica de cada una de las molculas.
CZE: Capacidad de analizar nL (10-9 L) de muestra y sensibilidad de deteccin de los componentes inyectados en concentraciones de attomoles (10-18 mol).
H2O + CO2
H2CO3
H+ + HCO3 -
pH: concentracin de H+
Electrodo de vidrio y un electrodo de referencia
97 >80 <80
Cada del gasto cardaco (volumen de sangre expulsada por un ventrculo en un minuto)
Alcalosis respiratoria
PCO2 arterial menor que el rango normal Causada por: Aumento de la ventilacin alveolar
Acidosis respiratoria PCO2 arterial mayor que el rango normal Causada por: Hipoventilacin resultante de: Paro cardaco Enfermedad pulmonar obstructiva crnica Sobredosis de drogas
pH:
Sangre arterial
7,35 7,45
Evaluacin del estado cido-base del paciente Balance entre los sistemas buffer sanguneo, renal y respiratorio. Dficit primario de bicarbonato Exceso primario de bicarbonato Hipoventilacin primaria Hiperventilacin primaria Acidosis metablica Alcalosis metablica Acidosis respiratoria Alcalosis respiratoria
Alcalemia: Aumento de pH en sangre, suero o plasma: Aumento de bicarbonato plasmtico Alcalosis respiratoria por hiperventilacin Acidemia: Disminucin del valor de pH en sangre: Desrdenes renales Envenenamiento por salicilatos Prdida de fluidos corporales alcalinos Valores anormales indicaran:
Neumotrax, Fibrosis intersticial de pulmn, Anemia severa, Disminucin del volumen sanguneo Disminucin de la capacidad de transporte de oxgeno, Asfixia, Diarrea, Exceso de ingestin de anticidos, Hiperventilacin, Enfermedad renal o heptica, Vmitos, Drogas estimulantes de la respiracin, Infecciones severas, Shock.
Indicadores Porttiles Multifuncin y DATA LOGGERS de gran precisin. Modelos para Presin, Temperatura, Humedad, pH y Redox, Conductividad, concentracin de compuestos en qumica clnica.
Qumica clnica
i-STAT 1 Blood Analyzer StatStrip Glusose Lactate Plus Analyzer Urometer
1)
Generalmente hay varios procedimientos estndar disponibles en la literatura qumica para la determinacin de un analito en una muestra determinada.
Fuentes bibliogrficas: 1) Manuales de agencias oficiales: EPA (Environmental Protection Agency), AOAC (association of official Analitycal Chemistry), ACS (American Chemical Society). 2) Revistas especializadas: Analytical Chemistry, Analyst, Analytical Letters, Talanta, Applied Spectroscopy, Clinical Chimica Acta, Journal of Chromatography, Journal of the Electrochemical Society, Spectrochimica Acta, Electroanalytical Chemistry, etc. 3) Internet: Bases de datos, Science Direct, Google (10100).
2) Obtencin de una muestra representativa: Generalmente se requiere solo una pequea cantidad del material a analizar (mg). Tipo de muestra: slido, liquido, gas.
Composicin:
Homognea (solucin, aleacin) muestra tomada al azar. Varias muestras individuales.
1)
Anlisis del contenido proteico de un cargamento de harina: Se toman pequeas muestras de cada bulto y se combinan para obtener una muestra promedio (muestra bruta) (kg).
b) Cantidad de muestra: Anlisis de los constituyentes principales (> 1%): 100-500 mg. Anlisis de trazas (< 1%): 1-5 g.
c) Muestras slidas: * Anlisis sobre base seca: secado a 110 C por 1-2 horas, enfriar y pesar. * Disolucin de la muestra slida seca. d) Muestras inorgnicas (slido): disolucin con cidos fuertes, agentes acomplejantes, agentes oxidantes. e) Muestras Orgnicas: * Anlisis de los componentes inorgnicos (e.g trazas de metales): * Anlisis de las cenizas (combustin a 500-700 C), disolucin con cidos fuertes. * Digestin con agentes oxidantes (destruccin del material orgnico). * Precipitacin de protenas. * Anlisis de los componentes orgnicos: extraccin del componente orgnico con solventes, dilisis, precipitacin, destilacin, etc.
f) Acondicionamiento de la muestra para el anlisis: * Ajuste del pH. * Adicin de reactivos para eliminar interferencias. * Conversin del analito en una forma adecuada para el anlisis: * Anlisis espectrofotomtrico (formacin de un complejo coloreado): Fe Fe+3 + Fenantrolina Fe(fen)2 (compuesto rojo) * Anlisis gravimtrico (conversin a un precipitado adecuado): Fe Fe+3 Fe2O3 (compuesto insoluble)
* Analizas volumtrico (utilizacin de una reaccin cuantitativa): Fe Fe+2 + Cr207-2 Fe+3 (reaccin de oxidacin)
Anlisis Clnico
Anlisis de los constituyentes clnicamente significativos de la sangre y orina: (electrolitos, protenas y sustancias orgnicas)
Composicin de la sangre
1) Elementos celulares: Eritrocitos, leucocitos, plaquetas 2) Plasma (parte liquida): Suero y fibringeno
Anlisis de sangre
Sangre
Centrifugacin o Adicin de acido tricloacetico
- Clulas - Plasma
Coagulacin: eliminacin del fibringeno
Anlisis del plasma: Albmina, amilasa, bilirrubina, Ca+2, Mg+2, colesterol, Fe, lpidos,
protenas , acido rico, etc.
Anlisis de suero: Na+, K+, Ca+2, Mg+2, Cl-, HCO3 Separacin de las clulas evitando la hemlisis (contaminacin del suero con materiales intracelulares como K+, Fe+3, Mg+2, Zn+2, urea , protenas, etc.). Las muestras de sangre deben ser centrifugadas inmediatamente para separar el suero o plasma de las clulas.
Composicin elemental del cuerpo humano en suero, orina y tejidos (elementos a niveles de trazas)
Agua 61.6%
Minerales 6.1%
17%
1.5%
13.8%
Inmunoensayos
Conjunto de tcnicas inmunoqumicas analticas de laboratorio que tienen en comn el usar complejos inmunes, es decir los resultantes de la conjugacin de anticuerpos y antigenos, como referencias de cuantificacin de un analito (sustancia objeto de anlisis) determinado, que puede ser el anticuerpo (Ac) o un antgeno (Ag), usando para la medicin una molecula como marcador que hace parte de la reaccin con el complejo inmune en la prueba o ensayo quimico. La tcnica se basan en la gran especificidad y afinidad de los anticuerpos por sus antgenos especficos. Su gran sensibilidad y especificidad permite la cuantificacin de compuestos presentes en lquidos orgnicos en concentracin reducida, del orden de ng/mL o de pg/mL. El desarrollo del inmunoensayo ha tenido gran impacto en el campo del diagnostico mdico mediante pruebas de laboratorio o qumica clnica.
Medicin de metabolitos en suero cuya cantidad o presencia son indicios de dao celular: Por ejemplo la medicin de marcadores biolgicos miocrdicos como las troponinas.
Deteccin de virus: por ejemplo de los causantes de hepatitis y su individualizacin. Deteccin del cncer o de clulas tumorales: a travs de sus protenas o marcadores tumorales, liberados en el suero de los pacientes. Detectar exposicin a agentes infecciosos: por ejemplo de rubeola o toxoplasmosis en mujeres embarazadas o en personas inmunosuprimidas. Deteccin de metabolitos indicadores de problemas fisiolgicos, por su presencia o cantidad excesiva, en la sangre : por ejemplo en caso de anemia se mide niveles de ferririna. Medir niveles de medicamentos, drogas objeto de abuso y toxinas en sangre.
La aparicin de hCG en orina y/o suero, luego de la concepcin y su subsecuente incremento rpido en concentracin durante el crecimiento gestacional incipiente, lo hace un excelente indicador para la deteccin temprana del embarazo. La prueba de embarazo hCG TEST (orina/suero), es una prueba cualitativa rpida, que detecta la presencia de hCG en una muestra de orina o suero, con una sensibilidad de 20 mUI/ml. La prueba hCG TEST (orina/suero) utiliza una combinacin de anticuerpos monoclonales y policlonales para detectar selectivamente niveles elevados de hCG en la orina o el suero. Su especificidad inmunolgica elimina reaccin cruzada o interferencia de hormonas glicoprotecas de naturaleza semejante como FSH, LH y TSH en niveles fisiolgicos altos.
La prueba es conducida por la migracin de la orina o suero, observando la formacin de lneas de coloracin. La muestra migra por accin capilar a travs de la membrana para reaccionar con el conjugado de color. Las muestras positivas reaccionan con el conjugado especfico de anticuerpos hCG-coloreados, para formar una lnea en la regin de la prueba de la membrana. La ausencia de esta lnea de color sugiere un resultado negativo. Para efectos de control del procedimiento, siempre aparecer una lnea de color en la regin de control si la prueba fue realizada correctamente y se ha agregado un volumen adecuado de muestra y el empape de la membrana a ocurrido. Catt, K.J./ Dfan, M.L., and Vaitukaitis, J.l., J. Clin. Endocrinal. Metab., 40, 537 (1975). Lenton, E.A., Neal, L.M., Sulaiman,R., Fertility & Sterility 37, 773 (1982).
5) Proceso de medicin
Criterios para la seleccin del mtodo: Cantidad de analito, precisin, exactitud, selectividad, sensibilidad, costo y rapidez.
Tipos de anlisis:
1) Mtodos Clsicos: * Anlisis Gravimtrico: a) separacin selectiva del analito mediante precipitacin o volatilizacin; b) medicin no selectiva del peso del precipitado. * Anlisis Volumtrico: el analito reacciona con un volumen medido de un reactivo de concentracin conocida. 2) Mtodos Instrumentales: medicin de alguna propiedad fsica del analito.
Sensibilidad (mol/L)
10-1-10-2 10-1-10-4 10-1-10-10 10-3-10-9 10-3-10-9
Precisin (%)
0.1 0.1-1 1-5 2-5 2-5
Selectividad Velocidad
pobre moderada buena buena buena lento lento moderada rpida rpida
Costo
bajo bajo moderado alto alto
En general los mtodos clsicos son mas precisos (< 1%), pero los mtodos instrumentales son mas sensibles, selectivos, rpidos y pueden ser automatizados para analizar varios analitos a la vez. Los mtodos instrumentales son relativos, puesto que requieren de la comparacin contra soluciones de concentracin conocidas (soluciones estndar): requiere de curvas de calibracin.
(sin unidades)
(mol/L o mmol/mL)
f a z y
1 femtometer (fm) = 1 x 10-15 m 1 attometer (am) = 1 x 10-18 m 1 zeptometer (zm) = 1 x 10-21 m 1 yoctometer (ym) = 1x 10-24 m
2)
3)
Distribucin normal de una serie de resultados obtenidos de idntica forma (calibracin de una pipeta)
Precisin y Exactitud
Preciso y exacto
Ni preciso ni exacto
o desviacin estndar:
Exactitud: Error absoluto E= X-R o % de error %E=(X-R/R)x100 Xi = valor medido, X = valor promedio, R = valor real o aceptado
incertidumbre
NO se pueden predecir ni corregir, se manifiestan por las pequeas diferencias que se obtienen en mediciones sucesivas de la misma cantidad con los mismos instrumentos en condiciones idnticas y por el mismo analista. Siguen una distribucin aleatoria y por lo tanto se pueden aplicar las leyes de la probabilidad: El mejor valor es el valor promedio de varias mediciones idnticas. Existe igual probabilidad de que un resultado individual se encuentre por encima o por debajo del valor promedio. Errores pequeos son mas probables que los errores grandes.
Siguen una distribucin normal o gaussiana (curva normal de error o campana de Gauss).
y = frecuencia de la desviacin, x = valor medido
Y=
La campana de Gauss:
Propiedades de la distribucin normal 1. Es simtrica respecto de su promedio, 2. El promedio y la mediana son iguales 3. Los puntos de inflexin de la curva se dan para x = y x = + . 4. Distribucin de probabilidad en un entorno del promedio: En el intervalo [ - , + ] se encuentra aproximadamente el 68,26% de los datos. En el intervalo [ - 2, + 2] se encuentra aproximadamente el 95,44%. En el intervalo [ -3, + 3] se encuentra aproximadamente, el 99,74%. Estas propiedades son de gran utilidad para el establecimiento de intervalos de confianza.
S s cuando n Xm
Ejemplo: Mediciones idnticas (Xi), anlisis por triplicado: 15.67, 15,69, 16.03. Promedio: X= (15.67 + 15,69 + 16.03)/3=15.80
Resultado: X + S
15.80 + 0.20
d=0.16
Ss
n: si
y Xm
La precisin del promedio para n medidas es inversamente proporcional a Desviacin estndar del promedio: Sm= S/ n Sm= 0.2/ 3=0.12
,S
La precisin de un anlisis se puede mejorar incrementando el numero de observaciones (n): Sm=0.2/ 10= 0.06
Para disminuir S en 10 veces se necesitan 100 veces mas observaciones: 100 = 10. Desviacin estndar relativa (RSD o %RSD) o coeficiente de variacin (CV): RSD= S/X = 0.20/15.80 = 0.013
%RSD= 1.3%
El anlisis implica mediciones, c/u con una incertidumbre determinada: x=f(p,q,r) dx=f(dp, dq, dr)
(dx)2=[(dx/dp)dp + (dx/dq)dq + (dx/dr)dr]2 sx2 = sp2 + sq2 + sr2 o Sx2 =Sp2 + Sq2 + Sr2
La propagacin de la incertidumbre depende del tipo de operacin matemtica: Suma y resta: la incertidumbre se representa por la sumatoria de las incertidumbre absolutas. Para el calculo con los datos: a = b + c d Sa2 = Sb2 + Sc2 + Sd2
Ejemplo: R = (65.06 + 0.07) + (16.13 + 0.01) - (22.68 + 0.02) = 58.51 SR2= (0.07)2 + (0.01)2 + (0.02)2 SR=(0.0049 + 0.0001 + 0.0004)1/2 = 0.07
Multiplicacin y divisin: La incertidumbre se representa por la sumatoria de las incertidumbres relativas, (Sa)rel= Sa/X
(Sb)rel = 0.02/13.67 = 0.0015 (Sc)rel = 0.2/120.4 = 0.0017 (Sd)rel = 0.006/4.623 = 0.0013 (SR)rel = (0.0015 + 0.0017 + 0.013)1/2 = 0.0026 SR = (SR)relR = (0.0026)356.0 = 0.93
Calcular la incertidumbre en los moles de Cl- contenidos en 25.00 mL de solucin Vi 36.78 36.82 36.75 - = 36.78 mL V Vi V 0.00 0.04 0.03
(Vi-V)2
0.00 0.0016 0.0009 0.0025
(0.0025)1/2/3-1= 0.035
VAg+ = 36.78 + 0.035 Moles de Cl- = VAg+MAg+ = (36.78 + 0.035)(0.1167 + 0.0002) = 4.292 mmol Cl-
Smol Cl- = (Smol Cl-)rel (mol Cl-) = (0.019)(4.292 mmol) = 0.0082 mmol
Resultado: 4.292 mmol Cl- + 0.008
LC = X + tS/ n
Xi
t = Factor estadstico que depende del numero de mediciones y el grado de confianza deseado S = Desviacin estndar n = # de mediciones
Valores de t
Grados de libertad (N-1) 1 2 3 4 5 10 Nivel de confianza (%) 90 95 99 6.314 12.706 63.657 2.920 4.303 9.925 2.353 3.182 5.841 2.132 2.776 4.604 2.015 2.571 4.032 1.812 2.228 3.169
25
1.708
1.645
2.090
1.960
2.787
2.570
Ejemplo: una muestra de soda (Na2CO3 comercial) se analizo por voltametra acido-base y se titulo con HCl.
Resultados experimentales: 93.50, 93.58 y 93.43 % de Na2CO3. Cual es el intervalo de confianza en el que existe una probabilidad del 95% de encontrar el valor verdadero. Promedio: X= 93.50 %, S= 0.075 3 medidas (N-1= 2 grados de libertad)
t=4.303 (tabla)
[
93.31
]
93.50
93.69
Para N
LC = X + tS/
=X+0
X=m
Si N aumenta
t y S/ n disminuyen
A mayor numero de medidas realizadas hay mayor confianza de que el valor verdadero caiga dentro del intervalo de confianza.
t disminuye exponencialmente a medida que N aumenta se alcanza un punto donde la disminucin del LC no justifica el gran incremento en el numero de medidas necesarias
La prueba t de student: Sirve para determinar si existe una diferencia estadstica entre los
resultados obtenidos usando 2 procedimientos o mtodos diferentes para un mismo anlisis. Comparacin de un nuevo mtodo con un mtodo aceptado: Se calcula el valor de t y se compara con el valor tabulado para un nivel de confianza deseado. Criterio: Si tcalculado < ttabulado los mtodos son equivalentes.
m = X + tS/ n
+t = (X m) N/S
m se obtiene analizando muestras patrn por el mtodo aceptado Muestras patrn: NIST. Ejemplo: Un nuevo mtodo para analizar Cu en material vegetal: A) Digestin acida B) Anlisis de muestra patrn (NIST): m = 11.7 ppm. C) Nuevo mtodo: X = 10.8 + 0.7 ppm (anlisis de 5 muestras). Es el nuevo mtodo estadsticamente correcto con probabilidad del 95%?
Los mtodos no son equivalentes con un 95% de probabilidad de que exista un error en el nuevo mtodo.
N 3 4 5 10
Ejemplo: Resultados de anlisis de Cl- en suero del mismo paciente: 103, 104, 107 y 114 meq/L. Dato dudoso: 114
Qcalculado = (114 107)/(114-103) = 0.64 Qtabulado (N=4 y 95%) = 0.829 Qcalculado < Qtabulado
El dato se conserva a con un 95% de que sea correcto.
Si el ensayo Q indica que hay que retener el resultado, utilizar la Mediana en lugar del promedio para reportar el resultado del anlisis.
Mediana es el valor central en una serie de medidas ordenadas en orden creciente o decreciente.
Resultado: 4.38
y = mx + b
Estadsticamente la mejor recta posible es la lnea para la cual la sumatoria de los cuadrados de las desviaciones (varianza) de los puntos con la lnea de regresin es mnima. Ecuacin de la lnea de regresin: yl= mXi + b Suma de cuadrados de las desviaciones: S=S(yi-yl)2 = S[(yi (mxi + b)] Mejor recta ocurre cuando S es mnima: S=F(m, b) Solucin matemtica: 2 Ecuaciones con dos incgnitas. dS/dm = 0 y dS/db = 0
b= y - mx
Ejemplo: Determinacin de riboflavina (vitamina B2) en una muestra de cereal por espectroscopia
de fluorescencia. Datos para la Curva de calibracin: Xi = [riboflavina] (mg/mL) 0.0 0.100 0.200 0.400 0.800 X i2 0 0.01 0.04 0.16 0.64 Yi = Intensidad fluorescencia (UA) 0.0 5.8 12.2 22.3 43.3 XiYi 0.0 0.58 2.44 8.92 34.6
Sxi = 1.500
(Sxi)2 = 2.250
Syi = 83.6
x = 0.300
Sxi2 = 1.500
y = 16.7
Sxiyi = 46.5
m = 46.5 [(1.500)(83.6)/5]/0.850 2.250/5 = 53.7 b = 16.7 - (53.7)(0.300) = 0.6 Ecuacin de la mejor recta: y
= 53.7x + 0.6
15.4 = 53.7x + 0.6
x = 0.275 mg/mL