(Neisseria y Moraxella)
Lic. Liliana Gmez Gamboa (M.Sc.)
OBJETIVO ESPECFICO
Describir la taxonoma, determinantes de patogenicidad, hallazgos clnicos, diagnstico de laboratorio y epidemiologa de los principales cocos Gram negativo aerobios de importancia clnica
Gnero Neisseria
31 gneros
28 especies 03 subespecies
Familia Neisseriaceae
N. gonorrhoeae N. meningitidis
Morfologa e Identificacin
Diplococos no mtiles Gram negativo, de aproximadamente 0,8 m de dimetro. Los cocos individuales tienen forma arrionada, pero cuando aparecen en pares los lados adyacentes se aplanan para adoptar una morfologa semejante a la de un grano de caf. No forman endosporas. Todas las especies son oxidasa-positivas y casi todas sintetizan catalasa; propiedades que, junto a la morfologa en la tincin de Gram, hacen posible la identificacin rpida de sospecha de una cepa clnica.
Morfologa e Identificacin
Las especies no patgenas de Neisseria crecen en agar nutritivo incubado a una temperatura de 35 C a 37 C. Por el contrario, N. meningitidis muestra una variable capacidad de desarrollo en este agar y N. gonorrhoeae es un microorganismo exigente desde el punto de vista nutricional que necesita medios de cultivo complejos para crecer. Se pueden ver afectados de manera adversa por la desecacin, la presencia de cidos grasos, luz del sol, calor hmedo y muchos desinfectantes. Producen enzimas autolticas que ocasionan su lisis in vitro a 25C y en pH alcalino.
Morfologa e Identificacin
La temperatura ptima de crecimiento oscila entre 35 C y 37 C, y la supervivencia de los microorganismos es escasa a temperaturas inferiores.
El C02 es necesario para su crecimiento o favorece el mismo. Aunque la naturaleza exigente de N. gonorrhoeae hace difcil su recuperacin de las muestras clnicas, su transmisin por va sexual de una persona a otra es sencilla.
Neisseria gonorrhoeae
N. gonorrhoeae es antignicamente heterognea y capaz de cambiar su estructura de superficie para evitar las defensas del hospedador.
PILI (FIMBRIAS)
PROTENA POR
PROTENAS OPA
LIPOOLIGOSACRIDO
OTRAS PROTENAS
PILI (FIMBRIAS)
Son apndices como pelos que se extienden varios micrmetros fuera de la superficie gonococcica. Estn compuestas por subunidades proteicas repetidas, cuya expresin est controlada por el complejo de genes pil. Su expresin se asocia a virulencia debido a que intervienen en la adhesin a las clulas epiteliales no ciliadas, a la vez que proporcionan un mecanismo de resistencia ante la destruccin mediada por los neutrfllos. La ausencia de inmunidad ante la reinfeccin por N. gonorrhoeae es resultado de la variacin antignica entre las pilinas y de la variacin de fase en la expresin de las pilinas: ambos factores complican los intentos de desarrollar una vacuna eficaz frente a la gonorrea.
PROTENA POR
Representan un grupo de protenas integrales de la membrana externa que forman poros o canales para permitir el paso de nutrientes al interior de la clula y la salida de los productos de desecho.
N. gonorrhoeae y N. meningitidis poseen dos genes de porinas, porA y porB. Sus productos gnicos, las protenas PorA y PorB, se expresan en N. meningitidis, pero el gen porA est silenciado en N. gonorrhoeae. En consecuencia, PorB constituye la principal protena de la membrana externa de N. gonorrhoeae y debe funcionar correctamente para permitir la supervivencia de este patgeno.
Las protenas Rmp (protenas de reduccin modificable). estimulan a los anticuerpos que inhiben la actividad bactericida srica frente a las neiserias patgenas.
Neisserias patgenas
UNIN DE LA TRANSFERRINA DE LA CLULA ANFITRIONA A RECEPTORES DE LA SUPERFICIE BACTERIANA compiten con el anfitrin humano por el hierro. La presencia de este receptor las diferencia de las restantes bacterias, las cuales sintetizan siderforos para quelar tomos de hierro. Igualmente, los gonococos poseen receptores superficiales especficos para otros complejos frricos del organismo anfitrin, como lactoferrina y hemoglobina.
Lipooligosacrido
Lipooligosacrido
Se compone de lpido A y una regin central de oligosacrido, pero carece del antgeno polisacardico O presente en el lipopolisacrido (LPS) de la mayora de los bacilos gramnegativos. El grupo del lpido A posee actividad de endotoxina. Tanto N. gonorrhoeae como N. meningitidis liberan de manera espontnea porciones de la membrana externa durante su crecimiento rpido. Estas porciones contienen LOS y protenas de superficie, y pueden favorecer la toxicidad mediada por la endotoxina y proteger a las bacterias en fase de replicacin mediante la captacin de anticuerpos frente a protenas.
N. gonorrhoeae y N. meningitidis sintetizan una Proteasa de IgA. Algunas cepas de N. gonorrhoeae son tambin capaces de fabricar -lactamasas que degradan la penicilina.
EFECTO BIOLGICO Protena que interviene en la adhesin inicial a las clulas humanas no ciliadas (p. ej., epitelio vaginal, trompa de Falopio y cavidad oral); interfiere en la muerte producida por los neutrfilos. Porina que facilita la supervivencia intracelular al evitar la fusin de los fagolisosomas en los neutrfilos. Protena de opacidad que interviene en la adhesin firme a las clulas eucariotas Protena de reduccin modificable que protege a otros antgenos de superficie (protena Por, LOS) de los anticuerpos bactericidas
FACTOR DE VIRULENCIA
EFECTO BIOLGICO
Protenas que se unen a Intervienen en la adquisicin de hierro para transferrina el metabolismo bacteriano Protenas que se unen a Intervienen en la adquisicin de hierro para lactoferrina el metabolismo bacteriano Protenas que se unen a Intervienen en la adquisicin de hierro para hemoglobina el metabolismo bacteriano LOS Proteasa de IgA -lactamasas Lipooligosacrido que tiene actividad de endotoxina Destruye la inmunoglobulina A (su papel en la virulencia es desconocido) Hidroliza anillo -lactmico de la penicilina
Los gonococos se adhieren a las clulas mucosas, penetran en las clulas y se multiplican, y posteriormente pasan a travs de ellas al espacio subepitelial, donde se produce la infeccin. Los pili, las protenas PorB y Opa intervienen en la fijacin y la penetracin en las clulas anfitrionas. El LOS gonoccico estimula la respuesta inflamatoria y la liberacin del factor de necrosis tumoral, que es el responsable de la mayora de los sntomas que se asocian a la enfermedad gonoccica.
La gonorrea afecta exclusivametne al ser humano; no existe ningn otro reservorio conocido. Es la segunda enfermedad de transmisin sexual ms frecuente en EE.UU. (las infecciones por Chlamydia ocupan el primer lugar). Las tasas de infeccin son iguales en hombres y en mujeres, son desproporcionadamente ms altas en los sujetos de raza negra que en los hispanos y los caucasianos, y son ms elevadas en el sudeste estadounidense. La incidencia mxima de la enfermedad se registra en el grupo de edades comprendidas entre 15 y 24 aos. Sin embargo, incluso esta cifra tan elevada es una estimacin demasiado baja de la verdadera incidencia de la enfermedad debido a que el diagnstico y la forma de comunicar las infecciones gonoccicas son incompletos. Los estadsticos del sistema sanitario creen que no se comunica, al menos, la mitad de las nuevas infecciones.
Neisseria gonorrhoeae se transmite fundamentalmente por contacto sexual. Las mujeres tienen una probabilidad del 50% de adquirir la infeccin despus de un nico contacto con un hombre infectado, mientras que los hombres presentan un riesgo de alrededor del 20% tras un nico contacto con una mujer infectada. El riesgo de infeccin aumenta cuando la persona mantiene ms relaciones sexuales con parejas infectadas.
El principal reservorio de gonococos son las personas con una infeccin asintomtica. El estado de portador asintomtico es ms frecuente en la mujer que en el hombre. Hasta un 50% de las mujeres infectadas tienen infecciones leves o asintomticas, mientras que la mayora de los hombres estn inicialmente sintomticos. Los sntomas ceden generalmente en unas semanas en ausencia de tratamiento, y se establece entonces el estado de portador asintomtico. La localizacin de la infeccin condiciona, igualmente, la creacin del estado de portador, siendo las infecciones rectales y farngeas ms frecuentemente asintomticas que las infecciones genitales.
Gonorrea
Tomado de Morse S et al: Atlas of sexually transmitted diseases and AIDS, ed 3, St Louis, 2003, Mosby
Otros sndromes
Gonococcemia
Perihepatitis (sndrome de Fitz-Hugh-Curtis) Conjuntivitis purulenta (Oftalma gonococcica neonatal) Gonorrea anorrectal en homosexuales y la faringitis.
Tomado de Morse S et al: Atlas of sexually transmitted diseases and AIDS, ed 3, St Louis, 2003, Mosby
Lesiones cutneas de la infeccin gonoccica diseminada, de gran tamao con una lesin central necrtica de color grisceo sobre una base eritematosa
CULTIVO
PRUEBAS SEROLGICAS
DIAGNSTICO PRESUNTIVO: Exudado uretral Sensibilidad 90% Especificidad 99% Exudado endocervical Sensibilidad 50% Especificidad 95% Exudados conjuntivales Puede ser diagnstico. Muestras faringeas o recto No son generalmente tiles.
LOS CULTIVOS DE EXUDADO URETRAL NO SON NECESARIOS CUANDO LA COLORACIN DE GRAM EST POSITIVA, PERO EN MUJERES DEBE REALIZARSE EL CULTIVO.
Las muestras deben ser recolectadas con hisopos de Dacron o rayon. El alginato de calcio puede ser txico para los gonococos y algunas marcas de hisopos de algodn pueden contener cidos grasos inhibidores. Algunos medios de transporte contienen carbn vegetal que inactiva materiales txicos en el hisopo o en la muestra misma.
Instrumentos utilizados para facilitar la recoleccin de ciertas muestras (ej: espculo vaginal) deben ser lubricados con agua o ssf, debido a que algunos lubricantes pueden tambin inhibir el crecimiento de los microorganismos.
MUESTRAS
N. gonorrhoeae
SNDROME
No complicado
GNERO
Femenino Masculino hetero. Masculino, homo, bisexual
MEDIO
Selectivo Selectivo Selectivo Selectivo, no selectivo Selectivo, no selectivo No selectivo, selectivo No selectivo No selectivo No selectivo No selectivo Selectivo, no selectivo
Femenino Femenino/Mas
Sangre
Oftalmia N. meningitidis Meningitis Femenino/Mas Femenino/Mas Conjuntiva LCR, lesiones de piel Sangre Nasofaringe
CULTIVO
SIEMBRA DE MUESTRAS CLNICAS EN MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS ENRIQUECIDOS INCUBACIN EN MICROAEROFILIA A 35-37C durante 24 -48 horas
VCN, Thayer martin modificado Medios selectivos que contienen vancomicina, colistin, anfotericina B y trimetoprim.
IDENTIFICACIN: Morfologa colonial Morfologa celular Pruebas bioqumicas. Susceptibilidad a los antimicrobianos
CULTIVO
CULTIVO
Crecimiento en: Especies TMM, MT, NYC (35C) GC (22C) AN (35C) GLU
NO3
+ + + V
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0 V + +
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0 + + 0
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0 0 0 0
N. polysaccharea
N. subflava N. sicca N. mucosa N. flavescens N. elongata
V
V 0 0 0 0
+
+ + + + +
+
+ + + + +
+
+ + + 0 0
+
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0
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V
V + + 0 0
0
V + + 0 0
0
0 0 + 0 0
CONDICIONES DE PRUEBA:
MEDIO: GC agar INOCULO: Suspensin directa de colonias equivalentes al estandar 0.5 de McFarland INCUBACIN: 36 1C; 5% CO2, 20-24 horas
GRUPO O
Cefepime Cefmetazole Cefotetan Ceftazidima Ceftizoxime Enoxacin Gatifloxacin Grepafloxacin Lomefloxacin Trovafloxacin
Deteccin directa de las bacterias en las muestras clnicas. Las pruebas que usan esta tecnologa son sensibles, especficas y rpidas (se dispone de los resultados en 4 horas). Tambin se han comercializado ensayos combinados para N. gonorrhoeae y Chlamydia. El principal problema de este enfoque es que no se puede emplear para vigilar la resistencia a antibiticos de los patgenos identificados. Menor sensibilidad que la asociada a la tincin de Gram y a la posibilidad de obtener reacciones falsas positivas, en especial en las muestras de orina.
PRUEBAS SEROLGICAS
SUERO Y SECRECIN GENITAL anticuerpos IgG e IgA frente a los pilis, protenas de la membrana externa y LOS gonocccico.
ESTOS ENSAYOS NO SON TILES PARA EL DIAGNSTICO, DEBIDO A : Heterogeneicidad antignica gonocccica El retraso en el desarrollo de Ac en infeccin aguda Alto nivel de Ac en la poblacin sexualmente activa
Antibitico de eleccin en el tto de gonorrea Penicilina. Sin embargo, NO se utiliza en la actualidad (CIM y resistencia derivada de -lactamasas plasmdicas o modificaciones cromosmicas de las protenas de unin a penicilina y la permeabilidad de la pared celular) Resistencia a otros antibiticos aminoglucsidos, fluoroquinolonas). (tetraciclina, eritromicina,
Tratamiento de eleccin ceftriaxona como tratamiento emprico inicial. Si no se ha excluido la infeccin por Chlamydia trachomatis, el tratamiento se combinar con una dosis nica de azitromicina o una pauta de 1 semana de doxiciclina.
No se dispone de ninguna vacuna en la actualidad. No se conoce adecuadamente la inmunidad frente a la infeccin por N. gonorrhoeae. Se pueden detectar anticuerpos frente a los antgenos de los pili, as como frente a las protenas Por y frente a LOS. Sin embargo, personas con promiscuidad sexual suelen padecer mltiples reinfecciones. Esta falta de inmunidad protectora se explica en parte por la diversidad antignica de las cepas gonoccicas. Los mayores esfuerzos para frenar la epidemia de gonorrea se centran en la educacin, la deteccin precoz y el control y seguimiento de los contactos sexuales.
Neisseria meningitidis
Los receptores especficos para los pili meningoccicos permiten la colonizacin de la nasofaringe .
Las bacterias pueden sobrevivir a la muerte intracelular en ausencia de inmunidad humoral. La endotoxina (LPS) media la mayor parte de las manifestaciones clnicas.
Se han identificado al menos 13 serogrupos de N. meningitidis de acuerdo a la especificidad inmunolgica del polisacrido capsular (A, B, C, Y y W-135). Los Ag meningocccicos se encuentran en sangre y LCR de pacientes con enfermedad activa.
LAS PROTENAS DE LA MEMBRANA EXTERNA SE HAN DIVIDIDO EN CLASES DE ACUERDO AL PESO MOLECULAR Anlogos de las Protenas Por de N. gonorrhoeae (Clase I, II o III).
SON RESPONSABLES DE LA ESPECIFICIDAD DE SEROTIPO DEL MENINGOCOCO (20 serotipos: 2 y 15 enfermedad epidmica)
DESCONOCIDO
Puede prevenirse por Ac sricos bactericidas frente al serotipo infectante. La bacteriemia es favorecida por: ausencia de IgM IgG bactericidas, inhibicin de la accin bactericida del suero por bloqueo de IgA o deficiencia de componentes del complemento.
Meningitis
Meningococcemia
Otros sndromes
Por lo general, N. meningitidis abunda en el LCR, la sangre y el esputo, aunque el microorganismo se inhibe por los factores txicos presentes en el medio y el anticoagulante de los hemocultivos. Se deben procesar de forma cuidadosa las muestras de LCR y sangre, ya que las cepas bacterianas causantes de la enfermedad diseminada son ms virulentas y suponen un riesgo de seguridad para los microbilogos.
CULTIVO
SIEMBRA DE MUESTRAS CLNICAS EN MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS ENRIQUECIDOS INCUBACIN EN MICROAEROFILIA A 35-37C durante 24 -48 horas
VCN, Thayer martin modificado Medios selectivos que contienen vancomicina, colistin, anfotericina B y trimetoprim.
IDENTIFICACIN: Morfologa colonial Morfologa celular Pruebas bioqumicas. Susceptibilidad a los antimicrobianos
N. meningitidis se observa con facilidad en el LCR de pacientes con meningitis, excepto cuando el paciente haya recibido previamente tto antimicrobiano. Los pacientes con enfermedad meningoccica devastadora suelen presentar un gran nmero de microorganismos en sangre (Hemocultivo + Gram de sangre perifrica).
En las ltimas dcadas se han empleado con frecuencia pruebas comerciales de deteccin de antgenos capsulares de N. meningitidis en el LCR, la sangre y la orina (donde se excretan los antgenos), pero han dejado de utilizarse recientemente debido a que su sensibilidad es menor que la asociada a la tincin de Gram y a la posibilidad de obtener reacciones falsas positivas, en especial en las muestras de orina (gonococo).
Medicin de anticuerpos frente a polisacridos meningocccicos o antgenos especficos a travs de Aglutinacin en ltex o Hemaglutinacin.
Anticuerpos ligados a estafilococos Microorganismo con antgenos correspondientes
Coaglutinacin
Est destinado a la deteccin directa de antgenos capsulares de los siguientes microorganismos: S. pneumoniae, H. influenzae tipo B, N. meningitidis (A, B, C, Y, W135) y S. agalactiae en LCR. Tambin es posible la identificacin de alguno de estos antgenos en muestras serolgicas y de orina.
PENICILINA (resistencia de bajo nivel) CLORANFENICOL O CEFALOSPORINA DE TERCERA GENERACIN (CRO, CTX) EN PERSONAS ALRGICAS A PENICILINA.
Es improbable que se consiga la erradicacin del grupo de portadores sanos de N. meningitidis. Por este motivo, la investigacin se ha centrado en el tratamiento profilctico de las personas expuestas a los pacientes con la enfermedad, y en aumentar la inmunidad ante los serogrupos que se asocian con mayor frecuencia con la enfermedad. Las sulfonamidas y la penicilina carecen de eficacia en la eliminacin del estado de portador. Actualmente se recomienda un tratamiento profilctico basado en rifampicina, ciprofloxacina o ceftriaxona.
CONDICIONES DE PRUEBA:
MEDIO: MH agar + 5% sangre de carnero INOCULO: Suspensin directa de colonias equivalentes al estandar 0.5 de McFarland INCUBACIN: 35 1C; 5% CO2, 20-24 horas
Desarrollar los ensayos de susceptibilidad de N. meningitidis en una campana de seguridad biolgica. La manipulacin fuera de dicha campana est asociada con alto riesgo de adquisicin de enfermedad meningocccica. La enf. meningocccica adquirida en el laboratorio est asociada con una tasa de mortalidad de 50%. La exposicin a gotas o aerosoles de N. meningitidis es la forma de mayor riesgo de adquisicin en el laboratorio.
GRUPO O
Se han desarrollado vacunas dirigidas contra los polisacridos capsulares especficos. Vacuna polivalente eficaz frente a los serogrupos A, C, Y y W135, la cual se puede administrar a los nios mayores de 2 aos. El polisacrido del serogrupo B es un inmungeno dbil y no puede inducir una respuesta de anticuerpos protectores. Por tanto, la inmunidad al serogrupo B de N. meningtidis se debe desarrollar de forma natural despus de la exposicin a antgenos de reactividad cruzada.
La vacunacin con una suspensin que contenga el serogrupo A se puede utilizar para controlar un brote de la enfermedad, en viajeros a zonas hiperendmicas, o en personas con un mayor riesgo de padecer la enfermedad (pacientes con alteraciones del complemento).
VACUNA TETRAVALENTE (A, C, Y, W-135) Pobremente inmunognica en nios menores de 18 meses no confiere inmunidad a largo plazo ni causa reduccin significativa del transporte nasofarngeo. VACUNA CONJUGADA TETRAVALENTE (2005) utilizada en personas de 11 a 55 aos de edad. Contiene el polisacrido capsular conjugado a toxoide diftrico. Incrementa la respuesta inmunitaria en nios y reduce sustancialmente el transporte asintomtico.
Gnero Moraxella
M. catarrhalis
22 especies
Familia Moraxellaceae
Es miembro de la flora normal del 40-50% de los nios en edad escolar. Ocasiona infecciones en pacientes inmunosuprimidos.
Bronquitis Neumona
Conjuntivitis
CULTIVO
IDENTIFICACIN: Morfologa colonial Morfologa celular Pruebas bioqumicas. Susceptibilidad a los antimicrobianos
Crecimiento en:
Especies N. gonorrhoeae
TMM, MT, NYC (35C) GC (22C) AN (35C)
NO3 0
N. meningitidis
N. lactamica N. cinerea N. polysaccharea N. subflava N. sicca N. mucosa N. flavescens N. elongata
+
+ V V V 0 0 0 0
0
V 0 + + + + + +
V
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+
+ 0 + + + + 0 0
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0
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0
0 0 V V + + 0 0
0
0 0 0 V + + 0 0
0
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M. catarrhalis
+/-