Universidade Federal do Piau Campus de Parnaba

Gentica bacteriana

Prof. Kassianne de Almeida Chirol

Introduo
Gentica: cincia da hereditariedade, que inclue o estudo dos genes, como esses carregam informaes, so replicados e transmitidos para outras geraes de clulas ou entre organismos, e como a expresso dessas informaes determinam as caractersticas do organismo.

Gene: unidade da hereditariedade; sequncia de nucleotdeos do DNA que expresso em um produto funcional, ou seja, molcula de RNA e protena conhecida.
Genoma: informao gentica/sequncia completa de DNA; Sequncias no-codificadoras: ntrons (bactrias no possuem) Sequncias codificadoras: xons.

Genoma bacteriano: as informaes genticas esto contidas principalmente no cromossomo, plasmdios e transposons.

Introduo
Integrons: segmentos de DNA fita dupla, menores que os tranposons, mveis, relacionados a captura de genes de resistncia a drogas antimicrobianas; no possuem replicao autnoma.

Ilhas de patogenicidade: constituem segmentos de DNA inseridos no cromossomo bacteriano, que atribuem uma variedade de caractersticas de virulncia aos microrganismos que a possuem.

Cromossomo
Fita de DNA dupla hlice e circular, no associado a histonas, no forma nucleossomo; Condensado pela topoisomerase e girase; Organizado no nucleide; no delimitado por membrana nuclear; Informaco gentica essencial; Capaz de autoduplicao; Geralmente haplide; Replicao semiconservativa; No contm ntrons.

Cromossomo

Cromossomo
Funes: Replicao: o DNA cromossmico precisa duplicar-se antes do processo de diviso celular, para que todas as clulas da prognie bacteriana recebam uma cpia do cromossomo (transferncia vertical de genes); a partir de uma molcula de DNA, replicada nova molcula; semi-conservativa, simtrica e bidirecional;

Cromossomo
Transcrio: informao gentica do DNA transcrita em RNA fita simples com diferentes funes: mRNA (RNA mensageiro): sequncia de bases codifica a sequncia de aminocidos nas protenas; tRNA (RNA de transferncia): liga-se aos aminocidos presentes no citoplasma, levando-os ao local de sntese protica; rRNA (RNA ribossmico): forma os ribossomos responsveis pela traduo do RNA em protenas que sero transcritas em mRNA.

Cromossomo
Traduo: representa o conjunto de mecanismos que apresentam a finalidade de realizar a leitura da mensagem enviada pelo DNA, resultando na sntese protica; A sntese protica comea comea com a ligao da subunidade ribossomal 30S a um tRNA iniciador, para formar o complexo de iniciao (Sitio E-estrutural; Sitio Ppeptdico; Sitio A-aminoacil); A subunidade 50S se liga ao complexo para iniciar a sntese de protena; Ocorre o processo de transpeptidao e o ribossomo se move ao longo do mRNA, transferindo o tRNA ligado at que a protena seja liberada para o citoplasma e o complexo de traduo pode ser desmontado ou o ribossomo desliza para o prximo cdon de iniciao e inicia uma nova protena.

Cromossomo

Material gentico extra-cromossmico Plasmdios

Segmentos circulares e fechados de DNA de fita dupla; Replicao autnoma (rplicon); Tamanho e nmero de cpias variveis; Transferveis de uma bactria para outra; Os plasmdios podem ser integrados no cromossomo, sendo este processo mediado por pequenas sequncias de DNA denominadas IS (insertion sequences) (elementos transponveis); As clulas apresentando tais plasmdios integrados so denominadas Hfr (high frequency of recombination)/epissomos; Grupo de incompatibilidade (Inc): incompatibilidade de plasmdios, interferncia na replicao de outro tipo de plasmdio;

Plasmdios
Codificam informaes genticas adicionais, conferindo vantagens seletivas: Fatores sexuais, de fertilidade ou fator F/plasmdio F: clula macho F+ (doadora), clula fmea F- (receptora). Genes responsveis pela sntese de pili proticos especiais longos, finos e tubulares, que possuem receptores que ligam-se firmemente s paredes de clulas F-;

Plasmdios
Fatores de resistncia/ plasmdios R: resistncia a antibacterianos, metais pesados e toxinas. Diferentes fatores R quando presentes na mesma clula, podem recombinar e produzir fatores R com novas combinaes de genes;

Plasmdios
Fatores de virulncia: genes de virulncia (ex.: toxinas, enzimas e protenas de superficie); verotoxina de E. coli (Sndrome Urmico-hemoltica); toxina esfoliativa de S. aureus, neurotoxina de C. tetani e toxina de B. anthracis; alguns plasmdios contm genes para a sntese de bacteriocinas, ex.: fator col (produo de colicinas, letais para coliformes).

Transposons
So elementos genticos mveis que podem transferir DNA aleatoriamente dentro de uma clula, de uma posio para outra no genoma ou entre diferentes molculas de DNA (plasmdioplasmdio ou plasmdio-cromossomo); Contm sequncias de insero (IS) com informao para sua transposio com gene codificador da transposase; No se autoduplicam; So elementos que no existem independentemente, mas apenas integrados no DNA cromossomal ou plasmidial; Transposons complexos tambm carregam genes no relacionados transposio; seus genes codificam para protenas estruturais, toxinas e enzimas relacionadas resistncia de antimicrobianos;

Transposons
Podem ser transferidos entre um organismo (ou de espcies diferentes) para outro, ex.: a resistncia vancomicina transferida do E. faecalis a S. aureus via transposon Tn1546; Podem gerar mutaes quando um dos elementos transpe para sequncias de DNA codificadoras de genes, interrompendo a sequncia de bases do gene, ou quando eles se integram dentro de sequncias reguladoras.

Variaes fenotpicas em bactrias

Fentipo: propriedades estruturais e fisiolgicas; caractersticas observadas no nvel do organismo; poro expressa do gentipo; Variaes fenotpicas: resultam das adaptaes das bactrias ao ambiente. So reversveis, sem comprometimento gentico; Modificaes morfolgicas: Bacillus sphaericus, quando cultivado em meio com 2% de peptona apresenta apenas clulas vegetativas, em meio com 0,1% de peptona, todas esporulam; a apresentao de organelas como cpsulas, flagelos e fmbrias pode variar de acordo com o meio de cultura ou condies ambientais; Modificaes culturais: Serratia marcescens (37 C sem pigmentao; 25 C vermelhas) / Gram positivos (cultura nova clulas azuis; cultura velha clulas vermelhas); em meios com sacarose pode-se observar diferenas de colnias lisas e mucides de acordo com a produo de cpsula; gnero Proteus formam vu em meio slido, com fenol perdem flagelo e crescem em colnias isoladas;

Variaes fenotpicas em bactrias

Modificaes de caractersticas fisiolgicas e bioqumicas: maior ou menor sensibilidade a agentes qumicos de acordo com a fase de crescimento; produo de determinadas enzimas necessrias ao metabolismo de diferentes substratos do meio de cultura.

Variabilidade gentica
Gentipo: base para a variao fenotpica; a nvel de gene, do DNA; potencial total herdado; Variaes genotpicas: alteraes na sequncia de nucleotdeos. So irreversveis. As bactrias podem apresentar variaes que conduzem formao de clones com propriedades distintas do clone selvagem original. Ocorre atravs de mutao ou recombinao.

Mutao
Alterao irreversvel na sequncia de nucleotdeos da molcula do DNA cromossmico, geralmente resultante de deleo, insero ou substituio de um ou mais nucleotdeos, que pode modificar o produto (protena). As mutaes podem ser neutras, desvantajosas ou benficas. Processo vertical.

Variabilidade gentica

Recombinao
Processo de variabilidade gentica que envolve transferncia de material gentico entre duas clulas. Ocorre durante os processos de conjugao, transformao ou transduo. Os genes transferidos podem se integrar ao cromossomo da bactria ou persistir como um elemento citoplasmtico autnomo. Resulta das adaptaes das bactrias ao ambiente. Processo horizontal.

 Alterao na sequncia de nucleotdeos de um

gene; resultando na formao de uma protena alterada, mesmo que no tenha efeito detectvel no fentipo; Pode levar ao estabelecimento de uma subpopulao; Origem: Espontnea: aleatria, determinada por fatores endgenos, promovidas por modificaes qumicas das bases; erros na replicao do DNA; Induzida: desenvolvem-se aps exposio a um agente mutagnico, que aumenta a frequncia de mutao: Qumicos:ex.: anlogos de bases; Fsicos: ex.: radiaes ionizantes (raios X, , , ) e no-ionizantes (raios ultravioleta); Biolgicos : ex.: transposons.

Mutao

Mutao
Diferentes tipos: Substituio; deleo; insero/ protenas no funcionais; Supresso: corrigem mutaes; alterao compensatria; podem restabelecer o fentipo original; Sem sentido (nonsense): gera um dos cdons de parada da traduo; somente um fragmento sintetizado; Silenciosas: substituio de uma base do DNA por outra, mas que resulta num codon que codifica o mesmo aminocido; no expressa fenotipicamente;

Mutao
Algumas mutaes resultam em resistncia a antibiticos ou patogenicidade alterada. A mutao num gene codificador da membrana externa pode aumentar a patogenicidade, ex.: Salmonella spp. pode sobreviver em fagcitos; a mutao num gene codificador de cpsula pode diminuir a patogenicidade e permitir a destruio por fagcitos, ex.: S. pneumoniae, H. influenzae e N. meningitidis.

Mutao
Substituio de bases

Serratia marcescens: vermelho normal, cinza mutantes

Mecanismos de recombinao gentica bacteriana

Embora as mutaes sejam responsveis pela expresso de vrias novas caractersticas por uma clula, muitos fentipos procariticos so decorrentes da aquisio de novos fragmentos de DNA, por meio de processos de transferncia horizontal de genes.

Conjugao

Transduo Transformao

Conjugao
Processo de transferncia de DNA de uma bactria para outra, envolvendo o contato quase sexual entre as duas clulas; Apenas uma fita de DNA transferida; sntese da fita complementar pelo receptor; Associada presena de plasmdios F que contm genes que permitem a capacidade conjugativa; A capacidade conjugativa est associada presena de genes que conferem caractersticas envolvidas na conjugao como a sntese do pili F, responsvel pelo reconhecimento, contato entre as clulas e a transferncia do DNA plasmidial.

Conjugao
Ocorre geralmente em bactrias Gram negativas; nas Gram positivas, no ocorre por pili sexual, se d atravs de molculas de adeso, contato direto; Escherichia, Salmonella, Pseudomonas, Serratia, Shigella e

Streptococcus.

Conjugao
A conjugao pode ser de dois tipos: entre clulas F+ e F-, resultando em duas clulas F+, e entre clulas Hfr e F-, resultando em uma clula Hfr e outra F- (Alguns plasmdios F+ conseguem incorporar-se no DNA genmico da clula receptora transformando essa numa clula Hfr); No caso da clula Hfr, ocorre a transferncia de genes cromossomais. H passagem passagem de grandes blocos de DNA da clula Hfr para a receptora, promovendo extensas recombinaes; Nos dois processos, acredita-se que o mecanismo provvel de transferncia do DNA seja pelo crculo rolante, onde apenas uma das fitas transferida, sendo a fita complementar sintetizada pela clula receptora.

 A conjugao inicia pela fixao do pili sexual da bactria doadora receptores especficos na parede da bactria receptora. Assim so estabelecidas conexes citoplasmticas entre as bactrias conjugantes unidas por meio de uma ponte conjugativa que passa a permitir a continuidade do contedo citoplasmtico nessas duas clulas; Uma enzima especial cliva uma das fitas do DNA do doador F+ em um nico stio e uma recm-sintetizada fita de DNA passa atravs da ponte conjugativa para o interior da clula receptora F-; Essa fita convertida numa forma de fita dupla que esta apta a sofrer permuta com regies de homologia no DNA da clula F-, por recombinao; A bactria receptora passa a expressar as caractersticas codificadas no plasmdio recebido, o qual transferido pelas novas geraes de bactrias.

Conjugao

Conjugao

Transduo
Transferncia do material gentico do cromossomo ou do plasmdio de uma bactria para outra mediada por vrus: bacterifagos, ou fagos; Tipos de fagos: Virulentos (ciclo ltico): infeco, replicao e liberao das partculas virais aps lise celular; Temperados (ciclo lisognico): integrao do fago ao cromossomo da clula hospedeira (pr-fago).

Transduo
Bacterifago = comedor de bactrias; So parasitas intracelulares obrigatrios; Estruturalmente se assemelham aos demais vrus, sendo constitudos por: Cabea icosadrica ou filamentosa: Cerne de cido nuclico (DNA ou RNA); Capsdeo com capsmeros. Cauda: Tubo oco; Bainha contrtil; Placa basal com fibras proticas.

Transduo
Transduo generalizada: este tipo de processo requer a ocorrncia de um ciclo ltico, onde eventualmente pode haver o empacotamento de fragmentos de DNA da clula hospedeira, gerando partculas transdutoras, que correspondem ao capsdeo viral contendo em seu interior DNA bacteriano;

Transduo
Perodo de eclipse: o cido nuclico do fago se apossa da maquinria biossinttica do hospedeiro e RNAm e protenas especificadas pelo fago so produzidas. Os primeiros RNAm codificam para as primeiras protenas que so necessrias para a sntese de DNA do fago e para desligar o DNA, o RNA e a biossntese protica do hospedeiro. Depois que o DNA do fago feito, novos mRNA e novas protenas so feitas (estruturais e para lise bacteriana); Fase de acmulo intracelular: nesta fase o cido nuclico e protenas estruturais que foram feitas so montadas e partculas de fago infecciosas se acumulam dentro da clula; Lise e liberao do fago: aps certo tempo a bactria comea a lisar devido ao acmulo da protena de lise do fago e fagos intracelulares so liberados no meio.

Transduo
Transduo especializada: evento raro, embora bastante eficiente. A etapa inicial corresponde infeco e lisogenizao do fago, que ocorre em stios especficos do genoma; O cido nuclico do fago lisognico (ou temperado) incorpora-se num locus definido do cromossomo bacteriano, tornando-se um gene nesse cromossomo na forma de profago; A bactria metaboliza e se reproduz normalmente, transmitindo o material gentico viral; Pela ao de algum indutor (ex: UV) h a separao do fago do genoma (integrao reversa), que normalmente ocorre perfeitamente. Entretanto, em alguns casos, essa separao defeituosa, promovendo a remoo de genes bacterianos e deixando parte do genoma viral na clula.

Transduo
Certas propriedades da clula bacteriana so controladas unicamente pelo DNA fgico, ex.: Corynebacterium diphtheriae s produz toxina se estiver infectado por certa linhagem de fagos.

Transformao
Incorporao do DNA solvel liberado por uma clula doadora no meio ambiente espontaneamente, por morte e lise. O DNA livre no meio tomado por uma receptora, resultando em alteraes genotpicas nessa. O DNA adere-se face externa da membrana celular bacteriana, quando DNA binding proteins e endonucleases clivam esse DNA em fragmentos; Uma vez no citoplasma, o DNA aliengena ligado s DNA binding proteins (que evitam a digesto pelas DNAses) encontra o cromossomo da clula receptora ou um plasmdeo e ocorre a recombinao em stios de homologia;

Transformao
Quando uma clula receptora est em um
estado fisiolgico em que pode captar o DNA doador, descrita como competente; Apresenta stios de superfcie para a ligao do DNA da clula doadora e membrana em uma condio que permita a passagem deste DNA. Vrias bactrias so naturalmente transformveis, entretanto, dentro de um gnero, nem todas as espcies o so (Streptococcus, Neisseria, Haemophilus, Bacillus subtilis). O estabelecimento da competncia envolve a participao de diferentes protenas (ligao ao DNA, autolisinas, nucleases), e depende de fatores distintos como fase de crescimento, condies ambientais, temperatura e a concentrao de ctions.

Transformao
Experimento de Griffith - Frederick Griffith, 1928: evidncia da transformao bacteriana; As bactrias no-encapsuladas vivas absorveram material gentico das encapsuladas mortas pelo calor e passaram a produzir cpsula, o que lhes conferiu a capacidade de causar doena. Experimentos subsequentes comprovaram que o fator de transformao era DNA.