MANEJO DE BALANAS Para a medida de massa de slidos e lquidos no volteis com grande preciso.

A balana analtica um dos instrumentos de medida mais usados no laboratrio e dela dependem basicamente todos os resultados analticos. As balanas analticas modernas, que podem cobrir faixas de preciso de leitura da ordem de 0,1 g a 0,1 mg, j esto bastante aperfeioadas a ponto de dispensarem o uso de salas especiais para a pesagem. Mesmo assim, o simples emprego de circuitos eletrnicos no elimina as interaes do sistema com o ambiente. Destes, os efeitos fsicos so os mais importantes, pois no podem ser suprimidos. As informaes contidas neste texto visam indicar os pontos mais importantes a serem considerados nas operaes de pesagem. Localizao da Balana A preciso e a confiabilidade das pesagens esto diretamente relacionadas com a localizao da balana analtica. Os principais itens a serem considerados para o seu correto posicionamento so: Caractersticas da sala de pesagem Ter apenas uma entrada. Ter o mnimo de janelas possvel, para evitar a luz direta do sol e correntes de ar. Ser pouco susceptvel a choques e vibraes. As condies da bancada Ficar firmemente apoiada no solo ou fixada na parede, de modo a transmitir o mnimo de vibraes possvel. Ser rgida, no podendo ceder ou vergar durante a operao de pesagem. Pode-se usar uma bancada de laboratrio bem estvel ou uma bancada de pedra. Ficar localizada nas posies mais rgidas da construo, geralmente nos cantos da sala. Ser antimagntica (no usar metais ou ao) e protegida das cargas eletrostticas (no usar plsticos ou vidros). As condies ambientais Manter a temperatura da sala constante. Manter a umidade entre 45% e 60% (deve ser monitorada sempre que possvel). No permitir a incidncia de luz solar direta. No pesar prximo a irradiadores de calor. Colocar as luminrias distantes da bancada, para evitar distrbios devido radiao trmica. O uso de lmpadas fluorescentes menos crtico. Evitar pesar perto de equipamentos que usam ventiladores (ex.: ar condicionado, computadores, etc.) ou perto da porta. CUIDADOS OPERACIONAIS Cuidados bsicos

 Verificar sempre o nivelamento da balana. Deixar sempre a balana conectada tomada e ligada para manter o equilbrio trmico dos circuitos eletrnicos. Deixar sempre a balana no modo stand by, evitando a necessidade de novo tempo de aquecimento (warm up). O frasco de pesagem Usar sempre o menor frasco de pesagem possvel. No usar frascos plsticos, quando a umidade estiver abaixo de 30-40%. A temperatura do frasco de pesagem e seu contedo devem estar mesma temperatura que a do ambiente da cmara de pesagem. Nunca tocar os frascos diretamente com os dedos ao coloc-los ou retir-los da cmara de pesagem. O prato de pesagem Colocar o frasco de pesagem sempre no centro do prato de pesagem. Remover o frasco de pesagem do prato de pesagem to logo termine a operao de pesagem. A leitura Verificar se o mostrador indica exatamente zero ao iniciar a operao. Tare a balana, se for preciso. Ler o resultado da operao to logo o detector automtico de estabilidade desaparea do mostrador. Calibrao Calibrar a balana regularmente, principalmente se ela estiver sendo operada pela primeira vez, se tiver sido mudada de local, aps qualquer nivelamento e aps grandes variaes de temperatura ou de presso atmosfrica. Manuteno Manter sempre a cmara de pesagem e o prato de pesagem limpos. Usar somente frascos de pesagem limpos e secos. Influncias Fsicas sobre as Pesagens Quando o mostrador da balana ficar instvel, seja por variao contnua da leitura para mais ou para menos ou simplesmente se a leitura estiver errada ATENO: Voc estar observando influncias fsicas indesejveis sobre a operao. As mais comuns so: Temperatura Efeito Observado: O mostrador varia constantemente em uma direo. Motivo: A existncia de uma diferena de temperatura entre a amostra e o ambiente da cmara de pesagem provoca correntes de ar. Estas correntes de ar geram foras sobre o prato de pesagem fazendo a amostra parecer mais leve (chamada flutuao dinmica). Este efeito s desaparece quando o equilbrio trmico for estabelecido. Alm disso, o filme de umidade que cobre qualquer amostra, e que varia com a temperatura, encoberto pela flutuao

dinmica. Isto faz com que um objeto frio parea mais pesado ou um objeto mais quente mais leve. Medidas corretivas: o Nunca pesar amostras retiradas diretamente de estufas, muflas, ou refrigeradores. o Deixar sempre a amostra atingir a temperatura do laboratrio ou da cmara de pesagem. o Procurar sempre manusear os frascos de pesagens ou as amostras com pinas. Se no for possvel, usar uma tira de papel. o No tocar a cmara de pesagem com as mos. o Usar frascos de pesagem com a menor rea possvel. Variao de massa Efeito Observado: O mostrador indica leituras que aumentam ou diminuem, continua e lentamente. Motivo: Ganho de massa devido a uma amostra higroscpica (ganho de umidade atmosfrica) ou perda de massa por evaporao de gua ou de substncias volteis. Medidas corretivas: o Usar frascos de pesagem limpos e secos e manter o prato de pesagem sempre livre de poeira, contaminantes ou gotas de lquidos. o Usar frascos de pesagem com gargalo estreito. o Usar tampas ou rolhas nos frascos de pesagem. Eletrosttica Efeito Observado: O mostrador da balana fica instvel e indica massas diferentes a cada pesagem da mesma amostra. A reprodutibilidade dos resultados fica comprometida. Motivo: O seu frasco de pesagem est carregado eletrostaticamente. Estas cargas formam-se por reao ou durante o transporte dos materiais, especialmente os ps e grnulos. Se o ar estiver seco (umidade relativa menor que 40%) estas cargas eletrostticas ficam retidas ou so dispersadas lentamente. Os erros de pesagem acontecem por foras de atrao eletrostticas que atuam entre a amostra e o ambiente. Se a amostra e o ambiente estiverem sob o efeito de cargas eltricas de mesmo sinal [+ ou -] ocorrem repulses, enquanto que sob o efeito de cargas opostas [+ e -], observam-se atraes. Medidas corretivas: o Aumentar a umidade atmosfrica com o uso de um umidificador ou por ajustes apropriados no sistema de ar condicionado (umidade relativa ideal: 4560%). o Descarregar as foras eletrostticas, colocando o frasco de pesagem em um recipiente de metal, antes da pesagem . o Conectar a balana a um "terra" eficiente. Magnetismo

 Efeito Observado: Baixa reprodutibilidade. O resultado da pesagem de uma amostra metlica depende da sua posio sobre o prato da balana. Motivo: Se o material for magntico (ex.: ferro, ao, nquel, etc.) pode estar ocorrendo atrao mtua com o prato da balana, criando foras que levam a uma medida errnea. Medidas corretivas: o Se possvel, desmagnetize as amostras ferromagnticas. o Como as foras magnticas diminuem com a distncia, separar a amostra do prato usando um suporte no-magntico (ex.: um bquer invertido ou um suporte de alumnio). o Usar o gancho superior do prato da balana, se existir. Gravitao Efeito Observado: As pesagens variam de acordo com a latitude. Quanto mais prximo do equador maior a fora centrfuga devido rotao da Terra, que se contrape fora gravitacional. Desta forma, a fora atuando sobre uma massa maior nos plos que no equador. As pesagens dependem tambm da altitude em relao ao nvel do mar (mais exatamente, em relao ao centro da Terra). Quanto mais alto, menor a atrao gravitacional, que decresce com o quadrado da distncia. Medidas corretivas: o Pesagens diferenciais ou comparativas ou de preciso, efetuadas em diferentes latitudes ou altitudes (ex.: no trreo e em outros andares de mesmo prdio) devem ser corrigidas. Empuxo Efeito Observado: O resultado de uma pesagem feita em ar no o mesmo que no vcuo. Motivo: Este fenmeno explicado pelo princpio de Arquimedes, segundo o qual "um corpo experimenta uma perda de peso igual ao peso da massa do meio por este deslocado". Quando materiais muito densos (ex.: Hg) ou pouco densos (ex.: gua) so pesados, correes devem ser feitas, em favor da preciso. Medidas corretivas: o Pesagens diferenciais ou comparativas ou de muita preciso, efetuadas em dias diferentes, devem sempre ser corrigidas com relao ao empuxo, levandose em conta a temperatura, a presso e a umidade atmosfricas. Os trabalhos comuns de laboratrio geralmente dispensam estas medidas.

AUTOCLAVES Autoclave um aparelho utilizado para esterilizar artigos atravs do calor hmido sob presso, inventado pelo auxiliar de Louis Pasteur e inventor Charles Chamberland.

Existem vrios modelos de autoclaves, mas podemos dividi-los em duas classes principais:

Autoclave de paredes simples Autoclave de paredes duplas

Autoclave de paredes simples Este tipo de autoclave pode existir em variadssimos tamanhos, sendo geralmente formado por um cilindro metlico resistente, vertical ou horizontal e com uma tampa que permite fechar hermeticamente o autoclave. Essa tampa apresenta parafusos de orelhas e uma anilha de amianto que impedem a existncia de fugas de presso. Os autoclaves de paredes simples tm geralmente um manmetro, uma torneira para descarga e uma vlvula de segurana. No interior do autoclave na parte inferior coloca-se gua e logo acima um cesto ou tabuleiro com o material a esterilizar, e aquece-se a parte inferior externa do autoclave com chama ou resistncias eltricas. Os autoclaves no necessitam de termmetro para indicar a que temperatura se encontra o vapor de gua no seu interior visto que existe uma relao directa entre a presso do vapor de gua saturado e a temperatura desse mesmo vapor . Para que a esterilizao seja bem feita, necessrio ter em ateno que no incio do aquecimento existe ar no interior do autoclave alm do vapor de gua, sendo por isso necessrio abrir a vlvula para deixar sair o ar (no recomendado colocar a mangueira dentro da gua para verificar a formao de bolas, pois esta ao pode causar interferncia no funcionamento do equipamento, pois pode gerar uma presso no interior da autoclave). Quando termina o tempo calculado para uma correcta esterilizao, deve-se retirar a chama e deixar arrefecer lentamente, s abrindo a torneira de descarga e lentamente, aps o manmetro indicar zero. Deve-se ter o mximo de cuidado ao abrir devido presso interna, abrindo-se a vlvula de escape de presso somente pelo lado contrrio da tampa autoclave. A temperatura do processo a vapor varia conforme os materiais a serem esterilizados situando-se entre 121 e 134 C. A presso para esterilizao situa-se entre 1,2 kgf/cm (121 C) e 2,2 kgf/cm (134 C). Um ciclo completo de esterilizao constitui-se basicamente de trs etapas: Aquecimento, Esterilizao e Secagem, podendo aps a realizao das trs etapas completas, dizer que a esterilizao foi completa. Autoclave de paredes duplas

Este tipo de autoclave possui duas cmaras sendo uma interna e outra externa. O espao entre a cmara interna de presso e a externa utilizado para manuteno e controle da temperatura durante o processo. Tambm conhecido como autoclave horizontal, o modelo possui bomba de vcuo para a retirada do ar antes da entrada do vapor e para secagem dos materiais no final do processo. A retirada do ar e entrada do vapor feita em pulsos de forma a uniformizar a temperatura e ao do vapor esterilizante em toda a cmara de processo (interna). Neste modelo, o vapor gerado em caldeira separada, abastecida de gua destilada ou purificada com filtros de osmose reversa. Normalmente, devido maior complexidade do processo e da tubulao hidrulica, este autoclave possui sistema automatizado por um controle computadorizado (CLP) que controla as vlvulas automticas durante todo o ciclo. As etapas do ciclo so gravadas digitalmente e impressas , garantindo a segurana e certificando a operao. Cada pas possui um conjunto de normas exigindo estas certificaes de qualidade no processo de esterilizao para hospitais, laboratrios ou indstrias. Modelos chamados "de barreira", possuem 2 portas;~,pool que impedem contaminao da rea limpa, com entrada do material contaminado por uma porta e sada do material estril por outra, s abrindo uma porta de cada vez. Vrios sistemas de segurana esto incorporados, impedindo a abertura das portas quando ainda h presso na cmara ou a temperatura de contacto do material ainda no segura. Vlvulas mecnicas de alvio e controlo electrnico rigoroso da presso evitam acidentes com a cmara de esterilizao. Alguns modelos permitem esterilizao mista de vapor com agentes qumicos para processar materiais sensveis ao calor. O processo feito ento a temperaturas entre 45 e 70 C. Os agentes qumicos podem ser os gases Formaldedo ou xido de Etileno. Existe ainda outro moderno processo qumico atravs de perxido de hidrognio, que injectado vaporizado numa cmara de alto vcuo e sob a forma de plasma (gerado por campo elctrico ou magntico), efectuando assim o processo de esterilizao. Este sistema permite esterilizar uma vasta gama de produtos e aparelhos a baixa temperatura (~35 C) de maneira rpida, segura e sem humidade. Usa altovcuo de modo a permitir a gerao do plasma e consequentemente a eficiente penetrao do esterilizante em todos os materiais. Autoclave gravitacional Neste tipo de autoclaves, o vapor injetado o que fora a sada do ar. Porm, a fase de secagem limitada, pois no possui capacidade para remover completamente o vapor. Pode apresentar umidade ao final do processo devido a dificuldade de remoo do ar. Autoclave de alto vcuo Considerada mais segura que a gravitacional, esta autoclave possui uma bomba de vcuo com alta capacidade de suco do ar. A autoclave de alto

vcuo introduz vapor na cmara interna sob alta presso com ambiente em vcuo. Autoclave de vcuo nico Este aparelho remove o ar de uma nica vez em curto espao de tempo. Devido a isso, pode apresentar formao de bolsas de ar. Autoclaves de vcuo fracionado Esta autoclave remove o ar em intervalos, com injeo simultnea de vapor. Neste tipo de autoclave a formao de bolsas de ar menos provvel.

ESTUFAS

Estufas so estruturas com o objetivo de acumular e conter o calor no seu interior, mantendo assim uma temperatura maior no seu interior que ao seu redor. Normalmente composta de uma caixa e uma fonte de calor. Numa estufa eltrica a fonte do calor se da pela transformao da energia eltrica em energia trmica que se acumula dentro de um ambiente fechado. Uma variedade da muito utilizada em laboratrios a mufla que alcana altas temperaturas.

BANHO-MARIA Banho-maria um mtodo utilizado tanto na cozinha como em laboratrios qumicos e na indstria (farmacutica, cosmtica, conservas, etc.) para aquecer lenta e uniformemente qualquer substncia lquida ou slida num recipiente, submergindo-o noutro, onde existe gua a ferver ou quase. O processo recebe o seu nome em honra famosa alquimista, Maria, a Judia, a quem atribui-se a inveno do processo. As substncias nunca so submetidas a uma temperatura superior a 100 C, no caso de utilizao de gua, pois sua temperatura de ebulio em condies normais de temperatura e presso exatamente 100 C. Temperaturas elevadas podem ser atingidas usando azeite.

FORNO DE PASTEUR O forno Pasteur consiste de uma cmara dotada de um aquecedor eltrico (resistncia) que aquece a cmara e o seu contedo; alm disso, existe

um termostato que regula a temperatura desejada e um orifcio na parte superior que permite a colocao de um termmetro. A ao bsica do calor seco a oxidao dos microrganismos. Por este mtodo podem ser esterilizados materiais que no podem ser molhados como algodo, compressas de gaze, leos, gorduras, ceras e ps, desde que no se alterem pelo aquecimento. Para instrumentos metlicos e equipamentos de vidro considerado mtodo de esterilizao eficaz. Na estufa, deve-se utilizar a seguinte tcnica: a) colocar o material devidamente acondicionado sem sobrecarregar o forno; b) ligar o aparelho, regulando a temperatura de 160 ou 170 oC por meio do termostato; c) esperar que o aparelho atinja a temperatura desejada, controlando sempre por um termmetro colocado no orifcio que se encontra na parte superior do aparelho. O termostato serve apenas para uma regulagem grosseira da temperatura, pois no apresenta sensibilidade; d) a partir desse momento iniciar a contagem de tempo. Aps o perodo de esterilizao, no abrir a porta do aparelho imediatamente, pois o calor interno muito superior ao externo, podendo danificar os materiais, principalmente os vidros, como tambm, pode levar combusto de papel ou tecidos. No preparo prvio do material a ser esterilizado deve-se: a) lavar meticulosamente o material com escovas, pois qualquer resduo deixado no instrumento ir tornar-se duro e aderente a ele, ficando muito difcil a sua remoo posterior; b) depois de limpos, os materiais devem ser submetidos a secagem, que pode ser feita com jatos de ar e com toalhas de papel; c) papel alumnio o mais recomendado para o acondicionamento, entretanto, papel manilha ou kraft tambm podem ser utilizados. Para empacotar instrumentos individualmente (forceps, alavancas, descoladores etc.), pode-se usar envelopes de papel.

PIPETAS

Uma pipeta um instrumento de medio e transferncia rigorosa de volumes lquidos. H dois tipos clssicos de pipetas:

pipetas graduadas: possuem uma escala para medir volumes variveis; pipetas volumtricas: possuem apenas um trao final, para indicar o volume fixo e final indicado por ela, sendo estas mais rigorosas que as graduadas.

Para utilizar uma destas pipetas tambm necessria uma pr-pipeta ou pompete, um pipet-aid ou um macro-filler. Estes podem ser colocados na ponta superior da pipeta, produzindo um abaixamento da presso de seu interior e provocando a aspirao do lquido de tal forma a preencher a pipeta no volume desejado.

Um outro tipo de pipetas, usado especialmente em laboratrios de anlises clnicas que engloba laboratrios de biologia, bioqumica ou quando h a necessidade de se transferir volumes muito reduzidos, a micropipeta (imagem direita). Esta permite medir pequenos volumes, da ordem de microlitros, porm, com preciso e exactido geralmente inferiores s obtidas pelas pipetas graduadas e volumtricas de maior volume. Este tipo de pipeta utiliza pontas (no Brasil so chamadas ponteiras) descartveis, feitas de polipropileno. O lquido aspirado por elas no entra ou no deve entrar no corpo principal da micropipeta, sob risco de adulter-la e descalibr-la. Para biologia molecular, so utilizadas pontas com um filtro de polipropileno para no haver uma contaminao da micropipeta. A micropipeta pode ser digital e electrnica. A maioria das micropipetas so monocanais mas tambm existem micropipetas multicanais 8 e 12 canais. A micropipeta mais precisa do mundo uma pipeta que mede zeptolitros e foi inventada pelo Brookhaven National Laboratory. Tipos de pipetas Manuais

Volumetrica - utilizada para medir e transferir volume de lquidos, no podendo ser aquecida, pois possui grande preciso de medida. Medem um nico volume, o que caracteriza sua preciso. Pipeta Mohr -Dispensa de volume varivel; Sorolgica - Dispensa de volume varivel; Ostwald-Folin - Dispensa de volume fixo; Lambda - Dispensa de volume fixo; Pipeta graduada

Eletrnicas

Micropipeta digital monocanal - Dispensa de volume fixo ou varivel; Micropipeta digital multicanal - Dispensa de volume varivel; Micropipeta electrnica - Dispensa de volume fixo ou varivel; Micropipeta electrnica multicanal - Dispensa de volume varivel.

Limites de erro em pipetas (ml) Capacidade (at) 2 5 10 30 50 100 200 Limite de erro 0,006 0,01 0,02 0,03 0,05 0,08 0,10

Micropipeta manual.