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INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA.

DISCIPLNA: MICRIBIOLOGIA SANITARIA E AMBIENTAL TURMA: UNICA PROFESSOR: HERALDO ANTUNES

CURSO: TECNOLOGIA EM SANEAMENTO AMBIENTAL - SII

DETERMINAO DE CT, CTT, E-COLI

Acadmicos: Francisco Clio Maiane Estevam Luana Maia Sidney Sillas Anglica Valcicleide Rafael Castelo

Limoeiro do Norte CE

Coliformes Totais (CT)

Coliformes totais so grupos de bactrias gram-negativas, que podem ou no necessitar de Oxignio - Aerbias ou Anaerbias, que no formam esporos, e so associadas decomposio de matria orgnica em geral. Coliformes termotolerantes (CTT):

Os coliformes termotolerantes pertencem a um subgrupo de microrganismos e so exclusivamente do trato intestinal. A presena de coliformes termotolerantes determina a origem fecal da contaminao, indicando risco da presena de outros microrganismos patognicos. A contagem dos coliformes termotolerantes indica a quantidade dos microrganismos oriundos de excretas humanos.

Escherichia Coli (E-COLI):

uma bactria bacilar Gram-negativa que, juntamente com o Staphylococcus aureus a mais comum e uma das mais antigas bactrias simbiontes do homem. A E. Coli assume a forma de um bacilo e pertence famlia das Enterobacteriaceae. So aerbias e anaerbias facultativas. O seu habitat natural o lmen intestinal dos seres humanos e de outros animais de sangue quente. Possui mltiplos flagelos dispostos em volta da clula. A E. Coli um dos poucos seres vivos capazes de produzir todos os componentes de que so feitos, a partir de compostos bsicos e fontes de energia suficientes.

OBJETIVO Determinar presena ou ausncia de coliformes totais, coliformes termotolerantes e tambm a presena da bactria Escherichia coli realizando procedimentos diferentes, e especficos para cada teste.

MATERIAIS Pipeta graduada Basto de vidro Agitador magntico Estantes de tubos de ensaio Termmetro Estufa Autoclave Incubadora Tampo Tubos de ensaio Becker lcool 70% Lamparina Algodo Balana analtica Frasco para coleta de amostra

Tubos de Duham Placas de petri Membranas filtrantes Sistema de filtrao manifold Meio agar Meio A1 Pina metlica

Vortex Identificador de amostra( fita adesiva ou adesivos efetivos) Agua destilada Caldo lactozado

PROCEDIMENTO Determinao de coliformes totais

- Fez-se a semeadura de volumes determinados da amostra em sries de tubos de caldo lactosado (CL) e ento incubados a 35 0,5C, durante 24 horas. -Produziu-se o caldo lactosado (10 frascos), que se utilizaria na determinao de CT; 13g X -> -> 1L 3 ml

X=3,9g/300 ml - Pesou-se caldo lactosado no valor de 3,9g - Coloca-se o caldo lactosado em 150 ml, diluindo e transferindo para o microondas, ate atingir a temperatura ideal de 94C; - Transferiu-se ento 10mL do caldo para cada frasco contendo agua de abastecimento(cada frasco com 10 ml de agua), cada um contendo um tubo de Durham; - Dilui-se com 10mL de gua em cada frasco ( produziu-se mais 5 frasco de soluo por precauo) - Homogeneza a amostra no Vortex; -Incuba-se a 35C na estufa durante 24 horas; - Realizou-se no procedimento um ensaio presuntivo com CL com 1x10 tubos com diluies seriadas para gua de abastecimento.

Determinao de Coliformes termotolerantes

- Colocou-se o meio A-1 ( previamente confeccionado, de acordo com as especificaes necessrias) 10mL em uma serie de 5 tubos, 1mL em outra serie e mais 0,1mL em outra serie, nos tubos contendo a amostra de gua; - Homogeneizou- se as amostras; - Incubou-as 3h a 35C e 21h a 44,5C. - Ao final, pde-se fazer a leitura.

Amostra

Leitura

Volumes decimais adequados

Incubao 3h-35C 21h-44,5C

Meio A-1

Figura 1

Determinao de Escherichia Coli (E. Coli)

- Primeiramente um volume da amostra (10 ml) foi filtrado na membrana filtrante. - Desinfetou-se a bancada com lcool 70% e ligou-se o bico de Bunsen, em seguida colocou-se em cada placa de Petri plstica uma almofada absorvente e acrescentou-se, com uma pipeta, o meio de cultura liquido m- endo gar LES de modo a deixar a almofada totalmente molhada. - Colocam-se as placas na estufa a 35C 24 horas. - Retiram-se as placas aps o termino do tempo e contam-se as colnias azuis tpicas.

RESULTADOS E DISCURSES Caldo lactosado para CT

Figura 2 De acordo com a figura 2 podemos ver que o experimento com a agua de torneira do IFCE para coliformes totais-CT (a amostra mudou de colorao, mas no criou gs no tubo de Durham) foi positivo para apenas uma amostra (tubo de ensaio). A mesma de acordo com os parmetros da tabela 2 do ndice de pesquisa que o professor disps sobre a qualidade de agua, com apenas 1 tubo apresentando CT, podemos constatar que em 100 ml o ndice de NMP 1,1, com confiabilidade variando de 0,03 a 5,9 do total de 95%, como descrito na mesma.

Tubos mltiplos para determinar CTT

Figura 3

Como podemos ver na figura 3 o resultado para coliformes termotolerantes (CTT), no apresentaram resultados positivos, portanto esta dentro do padro sem ser preciso maiores analise.

Membrana filtrante para E-COLI (meio EC/ EC-MUG)

Figura 4

Depois de passado o tempo necessrio para o desenvolvimento das bactrias do tipo E-coli, foi realizado a leitura das placas inoculadoras, observando a produo de gs e a fluorescncia das mesmas, chegou-se a concluso que no havia a presena de bactria do tipo E-coli. Como disposto na figura 4. Foram feitos trs mtodos de determinao de coliformes, para cada mtodo se usou uma amostra diferente, pois no se houve tempo para poder trabalhar com a mesma amostra como seria o preferencial. Esses mtodos tiveram como objetivo o aprendizado. Podemos ver que a E-coli esta dentro do grupo do CTT e o mesmo dentro do grupo do CT, dependendo do que se queira buscar com as analises, podemos escolher um mtodo mais eficiente. Por exemplo, quer se saber se determinada amostra tem CT e CTT, pode-se apenas fazer a analise do CTT, pois se der positivo, obviamente dar tambm para CT, se der negativo, e ainda sim, quiser saber se positivo CT de outros tipos, pode-se ento fazer a analises do CT. Os mtodos e as analises so de certa maneira precisa e confivel, mas no 100%, ento aconselhvel, repetir os teste (se possvel), para obter maior preciso e confiabilidade dos resultados.

CONCLUSO

Apos realizado o experimento para determinao de CT, CTT e E-Coli na anlise da gua da torneira do IFCE obteve-se confirmao para a presena de CT em uma das amostras, o que motivo de preocupao, pois em uma gua de torneira espera-se que no haja presena de coliformes, independente da classificao, e principalmente coliformes totais, visto que, o teste para esse grupo obrigatrio nos sistemas de abastecimento de gua, obviamente uma gua de abastecimento que utilizado para consumo humano requerido 100% de inexistncia de coliformes, com o teste positivo j se pode considerar que a agua est inapta para esse uso especifico. Mas vale ressaltar, que o teste foi feito no final do abastecimento, podendo a amostra sofrer algum tipo de alterao no percurso. Mesmo ela sendo inapropriada para consumo humano, deve-se aps esse teste, averiguar o sistema de transporte do meio hdrico, caso o mesmo teste tenha sido feito na base de distribuio e tenha dado resultados negativos para todas as amostras. No teste para CTT e E-Coli obteve-se resultados negativos, como esperado no tipo de gua analisado, ou seja, no h indcios de bactrias desse tipo na amostra de agua da torneira do IFCE, valendo salientar que para cada teste foram usadas amostras diferentes, mas vindo do mesmo local. Mas isso s pde ser confirmado apos realizado os trs testes, e mesmo o teste de CT tendo uma amostra positiva, considera-se os testes subsequentes de CTT e E-Coli mais eficientes na determinao de possvel contaminante termotolerantes, e como estes apresentaram resultados negativos confirma-se a ausncia do contaminante no contedo amostral. BIBLIOGRAFIA
http://lect.futuro.usp.br/site/ecologia/quadroteorico/c_coliformes.htm Acessado em: 09/02/13 as 9h http://pt.wikipedia.org/wiki/Coliforme Acessado em: 09/02/13 as 9:30h http://www.brasilescola.com/biologia/escherichia-coli.htm Acessado em: 09/02/13 as 9:40h www.copacabanarunners.net/escherichia-coli.html Acessado em: 09/02/13 as 10h