Anda di halaman 1dari 19

Farmakognosi

Hypericum perforatum

Oleh

Kelompok : 1. Aryadi Sukma 2. Sasmita Thaib

DIII Farmasi STIKES MUHAMMADIYAH 2012/2013

Pengantar
Dengan rahmat Tuhan Yang Maha Esa, dan dengan kuasanya kita bisa hidup dan menjadi seorang makhluk yang paling mulia dan senantiasa melaksanakan perintah perintahnya dan menjauhi segala larangannya. Tak lupa pula kita panjatkan puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, atas bimbinganNya kami bisa menyelesaikan tugas makalah ini, walau ada sedikit kendala yang kami hadapi. Alhamdulillah dengan bimbinganNya, kami berhasil menyelesaikan tugas makalah ini dengan sesederhana mungkin. Kami memohon saran dan kritiknya atas kesalahan yang dijumpai baik dalam penulisan maupun isinya. Akhir kata, selamat belajar. Keberhasilan suatu proses belajar dipengaruhi oleh banyak faktor dan ditentukan oleh satu faktor. Manado, 4 maret 2013

Daftar Isi
Kata Pengantar .............................................................................. i Daftar Isi ....................................................................................... ii Abstrak ............................................................................................. iii
A. Pendahuluan ......................................................................................... I B. Tinjuan pustaka .................................................................................... II C. Isolasi ............................................... .................................................... III D. Pembahasan .......................................................................................... IV E. Kesimpulan ........................................................................................... V

Daftar Pustaka.................................................................................... iv

ABSTRAK

The herb St John's wort (Hypericum perforatum) has been used for centuries to treat a variety of medical illnesses. In certain areas of Europe, St John's wort has been a commonly prescribed treatment for depression, but, in the United States, it is available for purchase over the counter as an herbal supplement. Some researchers believe that specific chemical constituents of St John's wort produce change in depression in a way similar to that of antidepressant medications, yet this hypothesis is problematic. In addition, studies that support the efficacy of St John's wort in patients with mild-to-moderate depression have limitations that may affect the accuracy of their conclusions. Studies measuring the effect of St John's wort in major depression have reported conflicting results and need to be reexamined. Because St John's wort is considered by some to be an alternative to conventional therapies, clinicians need to know whether it is an effective and safe treatment for different levels of severity of depression. Current evidence does not support its use, and, because of potential drug interactions, St John's wort is not a benign treatment.

I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Hypericum perforatum adalah tanaman yang berasal dari eropa, perforatum dalam bahasa latin berartiBerlubang. Daun Hypericum perforatum,ketika didekatkan ke cahaya, mengungkapkan titik tembus, memberikan kesan bahwa daun berlubang. Titik-titik di daun sebenarnya tidak lubang, tetapi itu lapisan berwarna minyak tumbuhan esensial dan resin. Bunganya cerah kuning-oranye. Kelopak yang dibumbui dengan titik-titik hitam. Ketika titik-titik hitam yang digosok antara jari-jari,maka menjadi merah. Banyak ahli mengatakan "perforasi" tembus dan hitam-merah bintik berisi kualitas obat yang paling aktif. Batang Hypericum perforatum sangat unik. Seperti Rudolf Fritz Weiss, MD, menjelaskan dalam buku Pengobatan Herbal nya.Tanaman ini memiliki dua baris dibesarkan di bawah batang. Ini adalah sesuatu yang sangat tidak biasa di dunia tanaman. Batang bulat atau empat persegi adalah aturan umum. Hanya H. perforatum yang memiliki garis-garis mengangkat dua.

Hypericum perforatum juga dikenal sebagai Wort St John. (seperti yang dinyatakan sebelumnya, wort berarti "tanaman.") Bagaimana Hypericum perforatum harus diberi nama setelah St John wort tidak diketahui. Seperti kebanyakan hal tidak diketahui, bagaimanapun, penamaan Wort St John memiliki sejumlah penjelasan yang masuk akal, bahkan mungkin benar.

II. Tinjauan Pustaka 2.1 Nama Tanaman : Hyperacum Perforatum ( St. John wort ) Anonym February 2 013 2.2 Sistematika Keluarga Asal Subfamili Genus spesies Habitat . : Hypericaceae : Berasal dari Eropa : Hypericoideae : Hypericum perforatum : tumbuh di daerah beriklim sedang dan tropis di Eropa,hutan dan pinggir jalan Gambar Hypericum perforatum :

Anonym. 2010

Anonym : 2009

2.3 Deskripsi / morfologi Ilmiah / Nama umum : Nama ilmiah tanaman ini adalah Hypericum perforatum. Nama umum Ini meliputi: St Johnswort, Amber, Goatweed, Johnswort, Klamathweed, Rosin Rose, dan gulma Tipton. Tanaman ini biasanya mekar penuh. Akar : Akar tanaman ini adalah sistem akar tunggang. Cabang akar dalam ke bumi, namun beberapa masih dangkal Batang / Daun : Tanaman ini memiliki batang tegak banyak, yang muncul berwarna hijau.dan tumbuh dimana saja diameternya sekitar 30-120 cm. Daun dari tanaman ini yang lonjong / elips, mengandung kelenjar transparan, yang menghasilkan minyak yang membuat hewan fotosensitif.Ini daun yang melekat langsung ke batang dan tepi daun mengandung titik hitam kecil. Bunga : Bunga-bunga ini ada di setiap ujung batangnya dengan diameter dari 1 sampai 2 cm, mereka kuning dan berkembang dalam kelompok. Bunga masing-masing terdiri dari lima kelopak, ada juga titik-titik hitam transparan di sekitar tepi kelopak masing-masing. Periode berbunga tanaman ini adalah Mei sampai September. Bunga ini juga mengandung benang sari banyak. Buah / Biji : kapsul Biji tanaman ini dibulatkan di akhir, dan semua biji-biji ini mempunyai panjang sekitar 5mm. Biji-biji tersebut hitam kekuningan dan setiap kapsul berisi biji banyak. Benih-benih berwarna coklat (hampir hitam) dalam warna dan apapun di mana 0,6-0,7 mm. Setiap benih mengandung inhibitor perkecambahan, tetapi perkecambahan meningkat dari waktu ke waktu selama periode hujan karena inhibitor dicuci .

Metode Reproduksi / Penyebaran : Reproduksi adalah melalui biji dan akar. Benih dapat dibubarkan oleh kehidupan, angin kencang, dan tentu saja oleh manusia.Benih dapat dibawa dalam saluran pencernaan hewan. Mereka hanya dilakukan jarak pendek oleh angin, tetapi dapat dilakukan jauh dengan air, hewan, dan mesin. Gaya Hidup / Kebiasaan / Hidup Durasi : St Johnswort tumbuh di ladang dan dapat mendorong keluar tanaman asli. Ini adalah perrenial, yang berarti datang kembali setiap tahun dari akar. Ini biasanya tumbuh di padang rumput, hutan, hutan terbuka, padang rumput, hutan, pinggir jalan, jalur kereta api, dan tepi sungai. Dampak : Gulma ini memiliki banyak dampak. Ini menghasilkan minyak dari kelenjar yang terbentuk pada daun, minyak ini dapat menyebabkan hewan melepuh, mengembangkan ruam, menurunkan berat badan, harus peka terhadap cahaya, dan jika hewan makan terlalu banyak bahkan bisa mati. Hal ini juga keluar bersaing dengan vegitation Utara asli Amerika mengurangi makanan yang tersedia untuk satwa liar dan peternakan. Asli Range : Rentang asli gulma ini adalah Eropa Barat, Afrika Utara, sebagian Asia, India, Cina, dan Jepang. Pengendalian kimia : Kimia kontrol untuk tanaman ini adalah: herbisida selektif. Kontrol budaya : Termasuk: diulang budidaya, yang menghancurkan itu, dan memotong itu berulang-ulang, sehingga benih tidak matang. Biological Control : Termasuk: Agrilus hyperici, Aplocera plagiata, Chrysolina hyperici, Chrysolina quadrigemina dan Zeuxidiplosis Giardi. Lainnya : St John Wort digunakan untuk tujuan pengobatan, termasuk: Depresi, Infeksi bakteri, Seasonal Affective Disorder, encephalitits Viral, dan infeksi telinga.

2.4 Kandungan kimia


Dalam senyawa tanaman ini. Ethereal minyak , hypericine, hyperforine, pseudohyperforine, tanin , kolin,saponiens, mucins, inuline.

Namun kandungan yang paling utama yang terdapat pada tanaman ini adalah hypericine Hypericin adalah naphthodianthrone , merah berwarna antrakuinon -derivatif, yang, bersamasama dengan hyperforin , merupakan salah satu unsur aktif utama Hypericum ( wort Saint John ).
[2] [3]

Hypericin diyakini bertindak sebagai antibiotik , antiviral dan non-spesifik kinase inhibitor

. Hypericin dapat menghambat aksi dari enzim -hidroksilase dopamin , yang mengarah ke peningkatan dopamin tingkat, meskipun demikian mungkin menurunkan norepinefrin dan epinefrin .

Pada awalnya diyakini bahwa aktivitas anti-depresan farmakologi dari hypericin disebabkan penghambatan enzim monoamine oxidase. Ekstrak kasar Hypericum adalah inhibitor lemah MAO-A dan MAO-B . Terisolasi hypericin tidak menampilkan kegiatan ini, tetapi tidak memiliki beberapa afinitas untuk reseptor NMDA . Hal ini menunjukkan ke arah yang konstituen lainnya bertanggung jawab atas MAOI efek. Kepercayaan saat ini adalah bahwa mekanisme aktivitas antidepresan adalah karena penghambatan reuptake dari neurotransmitter tertentu.

Besar kromofor sistem molekul berarti bahwa hal itu dapat menyebabkan photosensitivity ketika dicerna melampaui jumlah ambang batas. [ rujukan? ] Fotosensitifitas sering terlihat pada hewan yang telah diizinkan untuk merumput di Wort St John. Karena hypericin terakumulasi istimewa dalam kanker jaringan, juga digunakan sebagai indikator sel kanker. Selain itu, hypericin berada di bawah penelitian sebagai agen dalam terapi photodynamic , dimana biokimia diserap oleh

organisme yang kemudian akan diaktifkan dengan spektrum cahaya dari lampu spesifik khusus atau laser yang sumber, untuk tujuan terapeutik. Efek antibakteri dan antivirus dari hypericin juga diyakini muncul dari kemampuannya untuk foto-oksidasi sel dan partikel virus.

Hypericin berasal dari poliketida siklisasi.

Senyawa di Wort Saint John. Aglikon Quercetine, Cadinene (minyak ethereal), Kadmium 0,0001% -0,0003% (root), Kadmium 0,0001% -0,0005% (tanaman), Kadmium 0,0001% -0,0007% (daun), Karoten 0,0165% (biji), Karotenoid ( tanaman), caryophyllene (minyak ethereal), Klorofil (tanaman), Kolin (tanaman), cineole (minyak ethereal), minyak Ethereal 0,06% -0.35% (tanaman), minyak Ethereal 0,33% (biji), Lemak 32,8% - 32,8% (biji), flavon Hypericide, flavonoid 11,71% (bunga), Hypericide, Hypericine, Hyperine (tanaman), Hyperoside (tanaman), Myrcene (minyak ethereal), Asam miristat (tanaman), oktanol (minyak ethereal), Palmitine keras (tanaman), Pektin (tanaman), Fenol (tanaman), phloroglucinol (tanaman), pinene (minyak ethereal), Protein 18,1% -20,7% (biji), Pyrogallol (tanaman), Quercetine (tanaman), Quercetine - aglikon , Quercitrine (tanaman), Red Pigment, Resin, Rutin (tanaman), Saponin (biji), sitosterol (tanaman), Asam stearat (tanaman), Tanin 12,1% (biji).

10

2.5 Struktur kimia Hypericin

2.6 Kegunaan dan Khasiat hyrericin 1. antidepresi / antidepresan 2. mengobati HIV Secara tradisional, ekstrak dari Johns Wort St (yang mengandung hypericin) telah digunakan sebagai antidepresan, kemungkinan dengan bertindak sebagai inhibitor MAO. Efek psikotropika dikaitkan untuk hypericin dalam ekstrak Wort St Johns menunjukkan bahwa senyawa pigmen dapat menyeberangi penghalang darah otak (mungkin mengobati gejala neuropsikologi seperti demensia). Penelitian laboratorium menunjukkan bahwa hypericin mungkin bermanfaat sebagai terapi HIV. Namun, administrasi harus dipantau secara seksama oleh dokter. Tingkat hypericin ditemukan dalam ekstrak yang paling tersedia secara komersial dari Johns Wort St umumnya tidak cukup untuk menjadi terapi efektif melawan infeksi virus. Fungsi hati harus diuji secara periodik pada orang mengambil hypericin. Juga, ekstrim fotosensitifitas telah diamati dalam beberapa kasus orang yang memakai dosis tinggi ini (di lebih dari 10 mg per hari) dari senyawa ini. Akhirnya, ada kemungkinan sangat kecil bahwa reaksi yang merugikan bisa terjadi pada kesempatan antara makanan hypericin dan lainnya atau obat-obatan yang mengganggu inhibitor MAO.

11

III. Isolasi hypericum perforatum ( Hypericin)

Hypericin merupakan konstituen dari tanaman yang termasuk dalam genus Hypericum. Diisolasi dari sumber alam dalam keadaan murni kimiawi oleh H. Brockmann et al. (Ann. 1942, 553,1).Hypericin muncul di alam disertai dengan senyawa kimia terkait pseudohypericin. Isolasi hypericin dari tanaman Hypericum tidak praktis pada skala yang lebih besar, karena memerlukan prosedur panjang yang melibatkan ekstraksi dengan volume besar pelarut dan kromatografi perpisahan rumit pada kolom silika gel. Kesulitan utama dalam memperoleh hypericin dalam keadaan murni dari bahan tanaman berada di pemisahan dari pseudo hypericin menyertainya. Ini mengharuskan kromatografi tersebut dengan elusi sejumlah besar fraksi, hanya beberapa yang mengandung bahan yang diinginkan murni. Hasil dari hypericin dari tanaman sangat rendah, tidak lebih dari 0,3%,berdasarkan pada bahan tanaman kering.US Pat. No 5.120.412 ('412 paten) ke Mazur et al, yang digabungkan disini sebagai acuan. Mengungkapkan suatu proses untuk sintesis hypericin dari emodin. Proses ini melibatkan pertama mengkonversi ke emodin emodin antron yang kemudian terdimerisasi untuk membentuk protohypericin. Protohypericin tersebut kemudian dikonversi ke hypericin oleh radiasi cahaya tampak. Proses ini, bagaimanapun, menghasilkan hasil yang rendah dan kemurnian produk akhir.Oleh karena itu, tetap ada kebutuhan untuk hypericin proses sintesis yang mampu yield tinggi dan kemurnian tinggi.

12

Ringkasan Penemuan Sebuah benda dari penemuan ini berhubungan dengan proses untuk memproduksi hypericin pada hasil yang tinggi dan kemurnian tinggi. Proses ini melibatkan pertama mengkonversi ke emodin antron, yang kemudian terdimerisasi untuk dari protohypericin. Protohypericin tersebut kemudian diubah menjadi garam, seperti natrium atau garam kalium, dari protohypericin. Radiasi cahaya tampak, sebaiknya sekitar 400-700 nm, kemudian digunakan untuk mengkonversi garam protohypericin ke hypericin.Hypericin mentah yang diproduksi memiliki kemurnian setidaknya sekitar 95%.Tujuan lain dari penemuan ini berhubungan dengan suatu metode untuk memurnikan hypericin. Metode ini meliputi melarutkan hypericin mentah dalam pelarut, sebaiknya pelarut polar seperti metanol, dengan pemanasan, sebaiknya sekitar 50-55 C. Padatan tidak larut disaring dan dicuci dengan metanol. Ini produk padat disaring kemudian dikeringkan, sebaiknya dalam vakum pada sekitar 50-60 C, untuk mendapatkan hypericin lebih dari 98% murni. Filtrat juga didinginkan hingga hypericin endapan. Hypericin endapan kemudian disaring dan dicuci, sebaiknya dengan heksana 30-40% dalam etil asetat. Endapan juga dikeringkan, sebaiknya dalam vakum pada sekitar 50-60 C. untuk mendapatkan Hypericin lebih dari 98% murni. Dalam metode pemurnian, hypericin diperoleh dari fraksi tidak larut, serta rekristalisasi oleh dari pelarut.

13

Bagan Isolasi Hypericin

ekstraksi dengan volume besar pelarut

kromatografi perpisahan kolom silika gel

keadaan murni + pseudo hypericin

elusi sejumlah besar fraksi

sintesis hypericin dari emodin antron terdimerisasi protohypericin

Garam

dikonversi dengan radiasi cahaya tampak

dikonversi dengan radiasi cahaya tampak

hypericin mentah dalam pelarut dilarutkan methanol dikeringkan

hypericin mentah dalam pelarut


dilarutkan

etil asetat dikeringkan

Hypericin 98% Murni

14

IV. PEMBAHASAN
Ekstrak dari Hypericum perforatum L. (St jhon wort) sekarang berhasil bersaing untuk status sebagai terapi antidepresan standar. Karena itu, upaya besar telah dikhususkan untuk mengidentifikasi senyawa-senyawa antidepresan aktif dalam ekstrak. Dari sudut pandang fitokimia, St jhon wort adalah salah satu yang terbaik-diselidiki tanaman obat. Para peneliti di eropa telah mempelajari St John Wort selama beberapa dekade. Mereka menemukan kombinasi dari unsur-unsur di pabrik, terutama adalah'' hypericin", bereaksi dengan bahan kimia tertentu di otak untuk marah ketidaknyamanan emosional, angkat depresi, dan menenangkan saraf. Senyawa hypericin diisolasi dari St Johns Wort pada tahun 1942 dan telah digunakan sebagai anti depresan-bagi orang-orang emosional terganggu. Kualitas penenang dari jumlah hypericin aliran darah ke jaringan peningkatan kecil stres. Ada kerapuhan kapiler berkurang dan nada rahim ditingkatkan karena aliran darah meningkat hipotensi.Efek Samping Penggunaan St Johns Wort telah ditunjukkan untuk memproduksi sebuah fotosensitifitas. Hypericin diserap di usus dan konsentratnya dekat kulit. Suatu reaksi alergi terjadi ketika orang-orang dengan kulit yang terkena cahaya sinar matahari. Paparan yang menyebabkan kerusakan jaringan dan dalam beberapa kasus telah mengakibatkan kematian. Sementara mengambil St Johns Wort orang harus menghindari sinar matahari yang kuat apakah kulit gelap atau terang. Ada zat photosensitizing diproduksi di bawah kulit dengan paparan sinar matahari yang menyebabkan kulit terbakar.Manfaat mengurangi depresi ringan dan kecemasan, mempromosikan tidur nyenyak,meningkatkan sirkulasi kapiler,meningkatkan sirkulasi jantung,memudahkan gangguan pencernaan.mengurangi ketidaknyamanan yang berhubungan dengan sindrom pramenstruasi.

15

V. kesimpulan
Hypericum perforatum adalah tanaman yang berasal dari eropa, perforatum dalam bahasa latin berartiBerlubang. Daun Hypericum perforatum,ketika didekatkan ke cahaya, mengungkapkan titik tembus, memberikan kesan bahwa daun berlubang. Hypericum perforatum juga dikenal sebagai Wort St John. ( wort berarti "tanaman."), Klasifikasi dari tanaman ini sendiri adalah sebagai berikut ,Keluarga Hypericaceae,Berasal dari Eropa,Subfamili Hypericoideae,Genus spesies Hypericum perforatum,Habitat tumbuh di daerah beriklim sedang dan tropis di Eropa,hutan dan pinggir jalan. Kandungan kimia Dalam senyawa tanaman ini. adalah Ethereal minyak , hypericine, hyperforine, pseudohyperforine, tanin , kolin , pahit materi , saponiens, mucins, inuline. Terutama hypericin adalah kandungan yang di pakai untuk mengobati depresi atau sebagai anti depresan. Secara tradisional, ekstrak dari Johns Wort St (yang mengandung hypericin) telah digunakan sebagai antidepresan, kemungkinan dengan bertindak sebagai inhibitor MAO. Efek psikotropika dikaitkan untuk hypericin dalam ekstrak Wort St Johns menunjukkan bahwa senyawa pigmen dapat menyeberangi penghalang darah otak (mungkin mengobati gejala neuropsikologi seperti demensia).

16

Daftar pustaka
1. Rees, Nornan, et. al, Ed.., Biological Control of Gulma di Masyarakat, Barat Barat Ilmu gulma, bekerja sama dengan USDA ARS, MT Departemen Ag. dan MT State Univ, Printer Color Dunia, Bozeman, MT, Februari, 1995. Anonym February 22-2013

2. Bradfield, Patsy, Sekretaris Eksekutif. St Johnswort (Hypericum perforatum). http://www.pprl.usu.edu/stl.htm, 9-30-99. Anonym February 22-2013

3. Breitenfeldt, Todd, Wawancara Pribadi, Guru Biologi, Whitehall Sekolah, Box 1109, Whitehall, MT 59759. (406) 287-3862. 9-2-99. Anonym February 22-2013

4. Henry, Charlie, Sekretaris Eksekutif untuk CWMA. St Johnswort (Hypericum perforatum) [Online] Tersedia: 9-30-99 http://www.fortnet.org/CWMA/stjohn.htm. Anonym February 222013

5. Dibuat oleh: Jiasuey dan Allaire, Wellesley College, St Umum Johnswort, Hypericum perforatum, Keluarga Guttiferae [Online] Tersedia. Anonym February 222013http://www.wellesley.edu/Activities/homepage/web/Species/pstjohnswort.html 9-30 - 99.

6. UMMC. April 2002. University of Maryland Medical Center. 20 Februari 2007. http://www.umm.edu/altmed/ConsHerbs/StJohnsWortch.html. Anonym february 22-2013

7. DPI. Mei 2003. Departemen Industri Primer. Anonym february 22-2013

17

8. Bremness, Lesley, - Buku Lengkap Herbal: Sebuah Panduan Praktis untuk Tumbuh dan Menggunakan Herbal - Kelima edition; Studio (1994). ISBN 0140238026 . Anonym february 22-2013

9. Shaw, Non, - Herbalism: Sebuah Panduan Bergambar - Edisi pertama, Elemen Buku Ltd (2000). ISBN 1862042241. Anonym february 22-2013 10. Rdt, U., - tanaman beracun dan Terapi - Edisi Pertama, Zutphen: BVWJ Thieme & Cie (1973). ISBN 90-03 94630. Anonym february 22-2013

11. Pharmacognosy dari Wort St John. Anonym february 22-2013

12. "Hypericum perforatum lembar data di Masyarakat Hortikultura Royal" . Diakses 2011-0324. Anonym february 22-2013

13. "# 914: Hypericum frondosum - Floridata.com" . Diperoleh 2008/11/02.

14. "SPESIES: Hypericum perforatum" Api Efek Sistem . Anonym february 22-2013

15. Fegert JM, Klch M, Zito JM, Glaeske G, Janhsen K (2006). "Antidepresan digunakan pada anak-anak dan remaja di Jerman" J Anak Adolesc Psychopharmacol 16 (1-2):.. 197-206 doi : 10.1089/cap.2006.16.197 . PMID 16.553.540 . Anonym february 22-2013

16. Linde K, MM Berner, Kriston L (2008). Linde, Klaus. ed. "Wort St John untuk depresi besar" Cochrane database Syst Rev (4):.. CD000448 doi : 10.1002/14651858.CD000448.pub3 . PMID 18.843.608 . Anonym february 22-2013

18

17. Randlv C, Mehlsen J, Thomsen CF, Hedman C, von Fircks H, Winther K (Maret 2006). "Khasiat Wort St John pada pasien dengan gejala depresi ringan atau dysthymia-double blind placebo-controlled studi" Phytomedicine 13 (4):. 215-21. doi : 10.1016/j.phymed.2005.11.006 . PMID 16.423.519 . Anonym february 22-2013

18. Wort St John dan Depresi NCCAM , pada wort St John dan depresi]. Anonym february 222013

19. Bagaimana depresi terdeteksi dan diobati? NIMH pada depresi, termasuk bagian wort St John. Anonym february 22-2013

20. "Pengaruh Hypericum perforatum (wort St John) dalam gangguan depresi mayor: uji coba terkontrol secara acak" JAMA 287 (14):. 1807-1814. Anonym february 22-2013

21. Kupfer DJ, Frank E (April 2002) "Placebo dalam uji klinis untuk depresi: kompleksitas dan kebutuhan" JAMA 287 (14). Anonym february 22-2013

22. Spielmans GI (2002). "Wort St John dan depresi" JAMA 288 (4): 446-7, penulis balasan 4489. doi : 10.1001/jama.288.4.446 . PMID 12.132.963 . Anonym february 22-2013

19