Artigo

Alteraes Hematolgicas em Amostras Armazenadas e Analisadas em Condies de Tempo e Temperatura Distintos

Gabriel Ferreira Baz Neto, Miguel Machado de Arajo 1 Biomdico pela Unigran Dourados, MS 2 Especialista em Anlises Clnicas pela Universidade Estadual de Londrina UEL, Bacharel em Biomedicina pelo Centro Universitrio da Grande Dourados-UNIGRAN, Dourados-MS

Resumo
Alteraes hematolgicas em amostras armazenadas e analisadas em condies de tempo e temperatura distintos As anlises hematolgicas provenientes de amostras estocadas so passveis de alteraes pelo acondicionamento do sangue. Na rotina laboratorial inexiste um consenso entre os profissionais da rea sobre as condies ideais para a estocagem de amostras sanguneas destinadas anlise hematolgica. O presente trabalho tem por objetivo evidenciar as alteraes do eritrograma geradas por estocagem das amostras de sangue e averiguar condies ideais para a estocagem dessas amostras. Para realizao do estudo foi efetuado o hemograma automatizado das amostras recmcolhidas e posteriormente estas foram submetidas 4C por 48 horas e, no decorrer destas horas, as amostras foram avaliadas de 12 em 12 horas, atravs das anlises do eritrograma. As amostras mostraram alteraes pouco significativas em alguns parmetros, porm os ndices hematimtricos revelaram alteraes significativas principalmente no decorrer das 12 primeiras horas de estocagem. Palavras-chave: Eritrograma, amostra de sangue, estocagem, hemograma

Summary
Hematological changes in stored and examined samples in terms of distinguished time and temperature The hematological analysis from stored samples can change due to the packaging of the blood. In the laboratory routine does not exist a consensus among professionals about the ideal conditions for the storage of blood samples for the hematological analysis. This paper aims to highlight the changes of erythrocyte generated by storage of blood samples and determine optimal conditions for the storage of these samples. To conduct the study was made of the automated blood samples freshly harvested and then subjected to 4C for forty-eight hours and, during these hours the samples were evaluated in twelve hours, by the erythrocyte analysis. The samples showed minor changes in some parameters, but the erythrocyte index showed significant changes especially during the first twelve hours of storage. Keywords: Erythrogram, blood sample storage, hemogram

Introduo

pois qualquer alterao patolgica tende a refletir nas sries analisadas neste exame de sangue (1). Como componentes do sangue esto includos os eritrcitos ou clulas vermelhas, leuccitos, tambm denominados de clulas brancas e as plaquetas. No exame de sangue a avaliao das clulas vermelhas denominada de eritrograma e enun-

ciada por trs valores quantitativos: o hematcrito (Ht), a hemoglobina (Hb) e a contagem global das hemcias (He). Trs ndices adicionais elaboram as caractersticas qualitativas do eritrograma: volume corpuscular mdio (VCM), hemoglobina corpuscular mdia (HCM) e a concentrao de hemoglobina corpuscular mdia (CHCM) (2, 3).

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hemograma completo um dos exames mais solicitados dentro da rotina de um labo-

ratrio de anlises clnicas. uma avaliao dos componentes sanguneos e sua realizao se torna importante para a monitorao do funcionamento do sistema orgnico de cada indivduo,

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O hemograma surgiu quando, em 1929, Wintrobe idealizou o hematcrito, e no ano de 1932 edificou as frmulas matemticas para o clculo dos ndices hematimtricos, que alm de se basearem no hematcrito, dependiam da dosagem de hemoglobina e da contagem global dos eritrcitos em hemocitmetro (aparelho outrora usado para a contagem dessas clulas). Dessa forma foi criado o eritrograma e, juntamente com ele, as classificaes das anemias. Posteriormente aliaramse ao eritrograma as determinaes dos leuccitos, concretizando o hemograma conhecido atualmente (4). No decorrer do sculo 20, houve um avano do mercado tecnolgico que possibilitou a incluso de novos aparatos eletrnicos e juntamente com este avano foram criados os equipamentos eletrnicos capazes de contar clulas sanguneas, que posteriormente chegaram rotina dos laboratrios de anlises clnicas, implantando a automao hematolgica aos laboratrios de diversos portes (5, 6). Alm dos parmetros comuns do hemograma manual, essa tecnologia adicionou ao exame de sangue outros parmetros de anlises como o PDW (Patelet Distribution Width), RDW (Red Cell Distribution Width) e histogramas de distribuio de volumes das clulas, e so capazes de realizar de 8 at 23 parmetros no hemograma. Possuem no mnimo dois canais, sendo um com diluente para as hemcias e outro com lisante, para os leuccitos e determinao da concentrao de hemoglobina. Outros canais so impreterveis para a contagem diferencial e utilizam princpios diversificados como impedncia, absorbncia ou desvio da luz polarizada (7). Mesmo contando com todo o aparato tecnolgico e os benefcios oferecidos por este durante a fase

analtica do hemograma, necessrio que se tenha conhecimento das alteraes que ocorrem depois da coleta do sangue e durante toda a fase pr-analtica. Entre as alteraes mais frequentes, encontramos aps a coleta um aumento do volume celular e da fragilidade osmtica das hemcias. Os neutrfilos e moncitos mostram-se degenerados, com vacolos no citoplasma e lobulao nuclear. E os fatores de coagulao do sangue diminuem suas atividades (3, 8). Depois da coleta, as amostras de sangue devem ser estocadas a baixas temperaturas para exames que no sero realizados imediatamente, pois no eritrograma, o VCM e o CHCM mostraram importantes alteraes quando as amostras de sangue foram estocadas em temperatura ambiente (25C) por 24 horas, indicando desta forma que ocorreu um aumento do valor mdio dos volumes dos eritrcitos, sem haver alteraes na quantidade interna de hemoglobina. De acordo com o anticoagulante utilizado, o prazo para a anlise do sangue pode variar (5, 9, 10). Pode ser realizado o acondicionamento de amostras, para a determinao laboratorial do eritrograma, com a condio de que aps a coleta as amostras devam ser estocadas a uma temperatura de 4 C e as determinaes devem ser realizadas no prazo mximo de 24 horas, para que no ocorram alteraes artefatuais significativas pela estocagem (11). Apesar de estudos j realizados, como o citado anteriormente, enfocando a estocagem de sangue para o hemograma, ainda ocorre uma discrepncia dentro da rotina laboratorial quanto estocagem das amostras destinadas hematologia, e leva-se em considerao o nmero limitado de publicaes sobre o assunto. Dessa forma, este estudo objetiva evidenciar

as alteraes do eritrograma geradas por estocagem das amostras de sangue e averiguar condies ideais para a estocagem dessas amostras.

Materiais e Mtodos
O trabalho foi conduzido no laboratrio de anlises clnicas da Unigran na cidade de Dourados, MS. O projeto foi aprovado pelo Conselho de tica e Pesquisa com Seres Humanos, e as anlises s foram iniciadas posteriormente aprovao. A coleta dos dados ocorreu entre agosto a setembro de 2009. O nmero total de amostras analisadas foi de 102 tubos de sangue com anticoagulante EDTA K3, contendo 5 ml de sangue em cada tubo, provenientes de pacientes com idade variante entre 15 a 40 anos, de ambos os sexos. Utilizou-se como critrio de excluso da pesquisa, as amostras de pacientes especiais, como os deficientes mentais, indgenas, pacientes considerados anmicos, e amostras com concentrao de hemoglobina menor que 11 g/dl. As amostras foram analisadas com a metodologia de automao hematolgica pelo aparelho KX-21N de 19 parmetros da marca Sysmex. Dentre os 19 parmetros, foram utilizados: RBC (quantidade total de hemcias), HGB (concentrao de hemoglobina), HCT (hematcrito), VCM (volume mdio dos eritrcitos da amostra), HCM (concentrao mdia de hemoglobina por hemcia), CHCM (concentrao mdia dos glbulos vermelhos da amostra), RDW-CV (amplitude de distribuio dos eritrcitos, coeficiente padro) (12). Logo aps a coleta das amostras foi realizado o eritrograma em (0h), e em seguida as mesmas foram estocadas a 4C por 12 horas. E realizado o eritro-

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grama, em seguida, foram realizadas quatro anlises do eritrograma com intervalos de 0h/12h/24h/48h. Para a tabulao dos dados obtidos foram utilizados mdia e porcentagem e estes foram apresentados por grficos e tabelas.

dos, podemos verificar a percentagem de alteraes encontradas durante o perodo de anlise (figura 1). Das 102 amostras em relao contagem de hemcias, no houve alterao significativa no decorrer das 48 horas de anlise (Tabela 1). Quanto ao parmetro Hemoglobina as alteraes foram irrelevantes, portanto no significativas (Tabela 2). Os valores do Hematcrito sofreram poucas alteraes no perodo das analises, observando-se que as alteraes foram maiores no perodo

de 0h e essas alteraes diminuram com o decorrer do tempo (Tabela 3). Dentre os ndices hematimtricos, o VCM sofreu alterao de quase cinco pontos percentuais entre as primeiras 12 horas, variando de 14,7% para 19,6%. O HCM no apresentou variao significativa. O CHCM demonstrou maior nvel de alterao entre as anlises, apresentando queda dos ndices percentuais a partir da 12 hora, mantendo os nveis baixos at o final da pesquisa (figura 2).

Resultados e Discusso
Os resultados obtidos demonstraram alteraes pouco significativas. Variando entre os parmetros analisa-

30,00% RDW 6% CHCM 30% HCM 18% He 6% 25,00% Ht 9% VCM 21% 20,00% 15,00% 10,00% 5,00% 0,00%

27,45%

Hb 10%

3,92% 1,96% 1
0h 12h 24h

3,92%

48h

Figura 1. Percentual de alteraes por parmetro do eritrograma

Figura 2. Valores percentuais alterados de CHCM

Tabela 1. Valores percentuais de glbulos vermelhos

Horas Normal (%) Alterados (%) 0h 94,12% 5,88% 12h 95,10% 4,90% 24h 97,06% 2,94% 48h 96,08% 3,92%

Tabela 2. Valores percentuais de hemoglobina

Horas Normal (%) Alterados (%) 0h 92,16% 7,84% 12h 92,16% 7,84% 24h 91,18% 8,82% 48h 92,16% 7,84%

Tabela 3. Valores percentuais de hematcrito

Horas Normal (%) Alterados (%) 0h 92,16% 7,84% 12h 94,12% 5,88% 24h 96,08% 3,92% 48h 95,10% 4,90%

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Pel o fat o d e ser um val or mdio, o VCM um parmetro que estaria menos propenso a alteraes. Em estudos anteriores foram encontrados resultados de mdia de variao em torno de 1% quando as amostras foram estocadas a 4C por 48 horas. Quando as amostras foram submetidas agitao mecnica e a temperaturas distintas por mais de uma hora, o VCM mostrou alteraes significativas (11, 13).

Concluso
Conclumos com a pesquisa, que a estocagem de amostra para o hemograma completo deve ser realizada no menor prazo possvel, at a execuo do exame, pois aferimos que em alguns parmetros houve pequenas alteraes que subjetivam e indicam novas pesquisas acerca do assunto para a identificao de alteraes mais significativas, comparando com um grupo ou tempo maior.

Observamos com os resultados alcanados, que os laboratrios e centros de pesquisas hematolgicas devem se beneficiar com resultados nesta esfera da pesquisa, pois a mesma indica que existem alteraes geradas nas amostras por motivos de estocagem e armazenamento.

Correspondncias para: Gabriel ferreira Baz Neto gabriel_baze@yahoo.com.br

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