BENEMERITA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE PUEBLA

UNIDAD ACADEMICA DE INGENIERIA AGROHIDRAULICA PROGRAMA DE

INGENIERIA AGRONOMICA ZOOTECNISTA

MICROBIOLOGIA

Aislamiento de cultivos

Alumnos: Jos Ricardo Castillo Tototzintle

Profesor: Benjamn Barrios Daz

INTRODUCCION Cultivo puro: Es aquel que contiene una sola especie o tipo de microorganismo y que presumiblemente se ha obtenido a partir de una sola clula. En un cultivo puro, no necesariamente todas las clulas que lo componen tienen que ser exactamente iguales, ya que es factible que algunas de ellas sufran mutaciones y se diferencien de las restantes. Cada uno de los cultivos puros que componen una especie se denominan cepas. En el estudio microbiolgico, el primer paso es la separacin de la poblacin mixta a un cultivo puro y luego su posterior identificacin (familia, gnero, especie). OBJETIVO Aprender a sembrar las bacterias como aislar los hongos REVISION DE LITERATURA 1. Aislamiento de bacterias Entre los mtodos ms utilizados en bacteriologa, para la obtencin de cultivos puros, tenemos: a) Siembra en estras en placas de Petri. b) Tcnica del vertido en placas de Petri (medio slido) y dilucin seriada en medios lquidos. c) Tcnica del micromanipulador. a) Siembra en estras en placas de Petri Mediante un asa con hilo de platino previamente esterilizada en la llama de un mechero y enfriada en el agar, se deposita en un medio slido, una pequea cantidad de la muestra y se distribuye extendindola sobre ella. De este modo, las bacterias se van distribuyendo sobre la superficie del agar y separndose unas de otras. Los microorganismos se adhieren a la superficie del medio y se multiplican formando colonias. Cada una de estas colonias se ha originado a partir de la multiplicacin de una sola clula. Al trasladar una de estas colonias aislada a una nueva placa (repique), se obtendr un cultivo puro en el que todas las colonias presentarn las mismas caractersticas. Este sistema de siembra en estras en placas de Petri con medios slidos es el procedimiento habitual para aislar bacterias en cultivos puros; existiendo varios mtodos, entre los cuales tenemos: Mtodo 1 - Se extiende el inculo sobre una pequea zona de la placa de Petri. - Se esteriliza el asa para trazar dos estras a partir del inculo depositado. Una de ellas se hace slo hasta el centro de la placa de Petri.

- Se vuelve a esterilizar el asa y se realizan una serie de estras paralelas a las dos primeras. - Luego de esterilizar el asa nuevamente, se hacen una serie de estras perpendiculares a las dos primeras, pero comenzando desde el lado opuesto al depsito y sin llegar a tocarlo (Fig. 9). Mtodo 2 El procedimiento es similar al anterior, realizando las estras en la direccin sealada en la Fig. 10. Mtodo 3 - Se deposita el inculo en cualquier zona de la placa (Fig. 11). - Se extiende el inculo en forma continua sobre la superficie del medio de cultivo. - Se debe evitar el no cubrir toda la superficie del medio de cultivo, ya que ello implicar una mala distribucin del inculo y debido a ello el crecimiento ser compacto. b) Tcnica del vertido en placas de Petri y dilucin seriada en medios lquidos El mtodo del vertido en placa consiste en que por medio de un asa con hilo de platino se transfiere una pequea cantidad de inculo a partir de una suspensin bacteriana, esporas de un hongo, o de un cultivo mixto, a un tubo de agar nutritivo fundido y enfriado a 45C (tubo a). El tubo se hace girar entre las manos para mezclar bien el material inoculado. Con una pipeta Pasteur se traslada una pequea cantidad de la suspensin desde el tubo a al b y desde el b al c, mezclando bien despus de cada traspaso. El contenido de los tubos a, b, y c, se vierte por separado en placas de Petri (Fig 12). Las placas de Petri se incuban a la temperatura deseada por un lapso de 24 a 48 horas, luego se examinan para buscar colonias aisladas. Para la obtencin de un cultivo puro, se repica una colonia aislada a otra placa de Petri con medio nutritivo y se incuba por 24 a 48 horas a la temperatura deseada. La tcnica de dilucin seriada en medios lquidos es similar a la anterior, slo que se utilizan medios de cultivos lquidos en tubos de ensayo. c) Tcnica del micromanipulador El micromanipulador se utiliza asociado al microscopio y permite tomar un solo microorganismo desde una preparacin en gota pendiente. A travs del micromanipulador, el operador puede dirigir el movimiento de una micropipeta dentro de una gota pendiente y tomar una sola clula bacteriana que se transfiere a un medio

apropiado para su desarrollo. Esta tcnica se utiliza en estudio especializados como en gentica y se requiere de mucha prctica y habilidad para trabajar con ella. 2. Aislamiento de hongos a) Aislamientos a partir de micelio o esporulacin. Con un asa previamente flameada en la llama del mechero y enfriada, se procede a extraer una pequea cantidad de micelio o esporas del hongo y se depositan en la placa de Petri con medio de cultivo. Si el hongo a aislar careciera de esporulacin o micelio, el sustrato se deja en una cmara hmeda durante 24-48 horas a 20C. b) Aislamientos a partir de cuerpos de resistencia o tejido - Se lavan los cuerpos de resistencia (o tejido) en agua corriente. - Se depositan en una placa de Petri estril que posea una solucin de hipoclorito de sodio al 10% durante 1 minuto. - El cuerpo de resistencia o tejido desinfectado se deposita en una placa de Petri estril que posea agua esterilizada y luego se pasa a otra placa con papel filtro tambin estril con el objeto de secar el material. - Cortar con la ayuda de un bistur y pinza en trozos pequeos que luego se depositan en la placa de Petri con el medio de cultivo adecuado. Es necesario sealar que en el caso de aislamiento a partir de tejido, ste se realiza a partir de la zona de avance del hongo. Con el objeto de inhibir el desarrollo bacteriano en el aislamiento de hongos, se utilizan compuestos como los antibiticos, o cido lctico al 25% (3-5 gotas por 100 ml de medio de cultivo estril) que se adicionan al medio de cultivo. DESARROLLO 1. 2. 3. 4. 5. licuado del medio vaciado en cajas siembra de bacterias y realizar suspensin bacteriana siembra de bacterias por estria cruzada aislamiento de hongos fitopatgenos.

- Se extiende el inculo sobre una pequea zona de la placa de Petri. - Se esteriliza el asa para trazar dos estras a partir del inculo depositado. Una de ellas se hace slo hasta el centro de la placa de Petri. - Se vuelve a esterilizar el asa y se realizan una serie de estras paralelas a las dos primeras. - Luego de esterilizar el asa nuevamente, se hacen una serie de estras perpendiculares a las dos primeras, pero comenzando desde el lado opuesto al depsito y sin llegar a tocarlo

Materiales Cajas petri Aza bacteriologica Tubos de ensayo

CONCLUSION Tener el conocimiento de aislamiento de hongos para crear un medio de cultivo y estudiarlos. LITERATURA CITADA