COPROCULTIVO

El coprocultivo o cultivo de heces es el mtodo es el mtodo utilizado usualmente para la investigacin de la bacterias productoras de diarrea, aunque, en realidad, solamente es capaz de detectar el agente etiolgico en un 60-80% de los procesos, quedando solamente un 20% sin identificar englobados en el termino de sndrome diarreico inespecfico. Dentro del conjunto de la flora normal hay que buscar los microorganismos patgenos eventualmente presentes. En ciertos casos, estos patgenos son abundantes y pueden suplantar casi totalmente ala flora normal, siendo fcil su detencin, pero otras veces son poco numerosas y su bsqueda resulta muy, laboriosa, siendo indispensable utilizar tcnicas especiales de aislamiento selectivo. El coprocultivo rutinario va encaminada fundamentalmente ala investigacin del entero patgeno ms frecuente: Salmonella, shigella y campylobacter, aunque simultneamente pueden detectarse otros patgenos como Yersinia, Vibrio, Aerononas, Staphylococcus, Candida, Pseudomonas y otras bacterias, en los mismos medios de cultivo, conviene investigar separadamente, adems, otros patgenos frecuentes por otros mtodos. Un solo coprocultivo negativo no significa que ni haya enfermedad. Se recomienda realizar cuando menos tres de stos si el cuadro clnico del paciente siguiere infeccin bacteriana, no obstante la presencia de un cultivo negativo presometerse a la prueba lo contactos personales del paciente para prevenir que la infeccin se disemine.

MATERIAL NECESARIO no es necesario que est estril, solo es preciso que est limpio. No contendr restos de jabones, detergentes, desinfectantes o iones metlicos.

Recipiente estril de boca ancha y cierre hermtico para enviar la muestra. (ejemplo: frasco de urocultivos). La muestra de heces para colocar en el frasco se recoge con esptula o abatelenguas. Medios de transporte para heces. Se emplean solo si el envo de la muestra se demora y se solicita en laboratorio de Microbiologa. Existen sistemas comerciales para bacterias. ( Cary- Blair o solucin de glicerol tamponado) OBTENCIN DE LA MUESTRA Solo se procesan materias lquidas o a lo sumo pastosas. Si son pastosas se toma una porcin del recipiente donde hayan sido emitidas y se transfieren al sistema elegido para el envo al laboratorio. Se seleccionan las partes con mucus, pus o sangre. En caso de heces lquidas puede utilizarse jeringa para aspirado del material fecal del recipiente en donde ha sido emitido. No se procesarn las muestras de materias slidas ni contaminadas con orina. VOLUMEN MINIMO Heces pastosas: muestras del tamao de una nuez son muy adecuadas pues permiten realizar la mayora de los estudios. Heces lquidas entre 5 y 10 ml.

TRANSPORTE Si la muestra no se envia en forma inmediata se debe refrigerar. Si se va a procesar en el plazo de 1 o 2 horas despus de su emisin, no necesitan medio de transporte. En caso contrario se remiten las materias en un sistema de transporte para enteropatgenos. Mientras tanto mantener refrigerada las muestras, para evitar el sobrecrecimiento de la flora normal que puede enmascarar o destruir a los enteropatgenos. El fro puede afectar la viabilidad de Shigella

spp. Para el estudio de toxinas de Clostridium difficile la muestra se puede mantener hasta 48 horas refrigerada a 4 en la heladera. Es preferible enviar las muestras para estudio virolgico sin medio de cultivo, pues este diluye las partculas virales disminuyendo la sensibilidad. Si su envo se retrasa mucho utilizar medio de transporte y recipientes colocados en hielo. OBSERVACIONES Las muestras para coprocultivo, debern tomarse antes de la administracin de antimicrobianos y preferiblemente antes de tomar antidiarreicos. Indicar siempre el juicio diagnstico de presuncin y si el paciente es menor de un ao. Solicitar las investigaciones especiales explcitamente (C. difficile, C. perfringens, S. aureus,etc) En el caso de bsqueda de portadores de Salmonella , se deber fundamentar adecuadamente el pedido y se necesitan 3 muestras negativas para asegurar que el paciente no es portador.

Procedimiento Para realizar el examen se emplean heces que no tengan ms de media hora de obtenidas, o muestras tomadas directamente del recto con un hisopo de algodn. Cuando las siembras no se pueden efectuar de inmediato o la muestra demora en llegar al laboratorio, se aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1 ml de un lquido conservador, o bien,

depositar en ste el hisopo rectal. El lquido o solucin conservadora se prepara de la siguiente manera: NaCl 4.2 g K2HPO4 3.1 g KH2PO4 1.0 g Glicerol 300 ml H2O 700 ml Este lquido, al que se le aade rojo fenol, se distribuye en tubos, que se esterilizan en autoclave durante 20 minutos a 120 C. Las muestras tomadas mediante hisopado rectal pueden ser portadas en tubos que contengan medio de Cary-Blair, colocando el hisopo en su interior. Medios de cultivo Para facilitar el aislamiento de bacterias entricas patgenas se utilizan medios de enriquecimiento y medios selectivos. Los ms empleados son los siguientes: Medios de enriquecimiento Caldo con tetrationato (Mueller y Kauffmann). Este mtodo posee la propiedad de inhibir o destruir el crecimiento de Salmonella yShigella. Contiene, entre otros, tiosulfato de sodio, sales biliares y yodo, el cul acta sobre el medio para determinados gneros, en especial Salmonella; de aqu su uso como paso previo a la siembra en placas de medios selectivos. Caldo con selenito (Leifson). Posee selenito, cido de sodio que inhibe parcialmente al grupo coliforme durante las primeras horas de cultivo (12 a 24 horas), y permite el rpido desarrollo de salmonelas y shigellas. Selenito sdico 4 g Peptona 5 g Manitol 4 g Fosfato disdico anhidro (Na2HPO4 ) 10 g Agua destilada 1000 ml Medios selectivos Agar SS (salmonella-shigella). Este medio selectivo, empleado para aislar Salmonella y Shigella ejerce una buena inhibicin sobre agentes coliformes, sin limitar el desarrollo de los patgenos gramnegativos. Se utiliza especialmente junto al agar-sulfito de bismuto, para siembra de materiales provenientes de

medios enriquecedores, como caldo tetrationato y caldo con selenito. Contiene sales biliares, lactosa, citrato y tiosulfato sdico, citrato frrico, verde brillante y rojo neutro como indicador. Shigella y Salmonella, como tambin otros agentes que no fermentan la lactosa, aparecen como colonias lisas, transparentes a opacas; las pocas colonias fermentadoras de la lactosa que se pueden desarrollar tienen color rojo y un centro negro. Conviene sealar que la bilis o las sales biliares inhiben el crecimiento de microorganismos grampositivos y esporulados sin interferir en el crecimiento de los bacilos gramnegativos. Agar MacConkey. Es un medio selectivo-diferencial que contiene sales biliares, las cuales inhiben la flora grampositiva. Los agentes del grupo coliforme dan colonias de color rojo, debido a que fermentan la lactosa. En cambio, Salmonella y Shigella sp. forman colonias incoloras. Agar XLD (Xilosa-Lisina-Desoxicolato). Medio indefinido, mixto, slido y diferencial. En l crecern microorganismos quimiohetertrofos formadores de sulfhdrico a partir de sulfato. En la receta aparece rojo fenol, en el cual acta el indicador de pH. Se pueden presentar tres tipos de anomalas intestinales: Infeccin intestinal ! Debida a la produccin de cambios ecolgicos por la accin directa del microorganismo. Intoxicacin alimentaria ! Producida indirectamente por el microorganismo a travs de la produccin de toxinas, antes de la ingestin por la persona. Toxiinfecin alimentaria ! Producida por el microorganismo a travs de la produccin de toxinas, despus de su ingestin por la persona. Hay que tener en cuenta la biota presente en condiciones normales. As: Lactantes (alimentacin materna). Altos niveles de Bifidobacterium Bajos niveles de E.coli y Enterobacterias Lactantes (alimentacin artificial) Altos niveles de grampositivos Bajos niveles de Bifidobacterium Nios y adultos Predominancia de Anaerobios Anaerobios Facultativos y Aerobios: % E.coli " 80% % Enterococos " 14%

% Staphylococcus y Streptococcus " 4% % Otros " 2% " Dieta rica en protenas: predominancia de biota Grampositiva. " Dieta rica en hidratos de carbono: predominio de Gramnegativa.

TOMA Y OBSERVACIN DE MUESTRAS Una vez tomada la muestra como se mencion anteriormente procedemos a la observacin de la muestra. sta ha de hacerse a dos niveles: Macroscpicamente. Se comprueba su olor, consistencia, presencia de mucus, sangre, restos de alimentos sin digerir. Microscpicamente. Sometemos la muestra a una tincin simple con azul de metileno. Esto nos permite comprobar la presencia o ausencia de leucocitos. As: " presencia de leucocitos ! la infeccin ha cursado con inflamacin intestinal. Se trata por tanto de microorganismos invasivos como Salmonella, Shigella o ETEC. " ausencia de leucocitos ! significa que no ha habido inflamacin por lo que la infeccin puede ser debida a virus (Rotavirus) o a bacterias productoras de toxinas (Vibrio cholerae). RESULTADOS Examen macroscpico color marrn claro olor normal consistencia intermedia

 pocos restos de alimentos ausencia de sangre ausencia de mucus

Tcnica
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Una tcnica (del griego, [tkne] 'arte, tcnica, oficio') es un procedimiento o conjunto de reglas, normas o protocolos, que tienen como objetivo obtener un resultado determinado, ya sea en

el campo de la ciencia, de la tecnologa, del arte, del deporte, de la educacin o en cualquier otra actividad.

Mtodo es una palabra que proviene del trmino griego methodos (camino o va) y que se refiere al medio utilizado para llegar a un fin. Su significado original seala el camino que conduce a un lugar.

mtodo s. m.
1 Modo ordenado y sistemtico de proceder para llegar a un resultado o fin determinado: las investigaciones cientficas se rigen por el llamado mtodo cientfico, basado en la observacin y experimentacin, recopilacin de datos y comprobacin de las hiptesis de partida. 2 Modo de obrar que una persona tiene habitualmente. 3 Conjunto de reglas y ejercicios destinados a ensear una actividad, un arte o una ciencia: el mtodo de ingls que utilizamos es muy bueno.