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ISSN 1982-5390 Dezembro, 2008

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Informaes bsicas sobre coleta de amostras e principais anlises qumicobromatolgicas de alimentos destinados produo de ruminantes

ISSN 1982-5390 Dezembro, 2008


Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria Centro de Pesquisa de Pecuria dos Campos Sulbrasileiros Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

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Informaes bsicas sobre coleta de amostras e principais anlises qumico-bromatolgicas de alimentos destinados produo de ruminantes
Teresa Cristina Moraes Genro Mariane Garcia Orqis

Embrapa Pecuria Sul Bag, RS 2008

Exemplares desta publicao podem ser adquiridos na: Embrapa Pecuria Sul BR 153, km 603 - Caixa Postal 242 CEP 96401-970 - Bag, RS Fone/Fax: (0XX53) 3242-8499 http://www.cppsul.embrapa.br sac@cppsul.embrapa.br Comit Local de Publicaes da Embrapa Pecuria Sul Presidente: Alexandre Varella Secretria-Executiva: Ana Maria Sastre Sacco Membros: Eduardo Salomoni, Eliara Freire Quincozes, Graciela Olivella Oliveira, Magda Vieira Benavides, Naylor Perez, Joo Batista Beltro Marques. Supervisor editorial: Ana Maria Sastre Sacco Revisor de texto: Ana Maria Sastre Sacco Normalizao bibliogrfica: Graciela Olivella Oliveira Tratamento de ilustraes: Kellen Pohlmann Editorao eletrnica: Kellen Pohlmann Foto da capa: Kke Barcellos e Teresa Cristina Moraes Genro 1 edio 1 impresso (2008): tiragem

Todos os direitos reservados. A reproduo no-autorizada desta publicao, no todo ou em parte, constitui violao dos direitos autorais (Lei n 9.610). Dados internacionais de Catalogao na Publicao (CIP) Embrapa Pecuria Sul Genro, Teresa Cristina Moraes Informaes bsicas sobre coleta de amostras e principais anlises qumico-bromatolgicas de alimentos destinados produo de ruminantes / Teresa Cristina Moraes Genro, Mariane Garcia Orqis._ Bag: Embrapa Pecuria Sul, 2008. (Documentos / Embrapa Pecuria Sul, ISSN 1982-5390 ; 81) Sistema requerido: Adobe Acrobat Reader Modo de acesso: <http://www.cppsul.embrapa.br/unidade/publicacoes:list/196> Ttulo da pgina Web (acesso em 20 dez. 2008) 1. Ruminante. 2. Nutrio animal. 3. Digestibilidade. I. Orqis, Mariane Garcia. II. Ttulo. III. Srie. CDD 636.20852
Embrapa, 2008

Autores

Teresa Cristina Moraes Genro Pesquisador A da Embrapa Pecuria Sul E-mail: cristina@cppsul.embrapa.br Mariane Garcia Orqis Bolsista Embrapa Pecuria Sul E-mail: mariane@cppsul.embrapa.br

Sumrio

Introduo....................................................................

Coleta de amostras........................................................... 9
1. Forrageiras (pastagens, campo nativo)................................. 10 2. Silagens.......................................................................... 11 3. Feno e palhas................................................................... 11 4. Amostras de produtos comerciais ou misturas feitas na propriedade (raes, farelos, gros, resduos, etc...)............. 12

Principais fraes do alimento determinadas em laboratrio... 13


1. Mtodo de Weende........................................................... 13
a) Matria seca......................................................................... 14 b) Matria mineral ou cinzas....................................................... 15 c) Protena bruta....................................................................... 16 d) Extrato etreo (gordura bruta)................................................. 17 e) Fibra bruta............................................................................ 17 f) Extrato no nitrogenado.......................................................... 18

2. Mtodo de Goering e Van Soest......................................... 18


a) Fibra em detergente neutro..................................................... 18 b) Fibra em detergente cido....................................................... 18

3. Avaliao da digestibilidade dos alimentos........................... 19


a) Digestibilidade in vitro da matria seca.................................. 19 b) Outros mtodos de determinao da digestibilidade................... 20

Referncias.................................................................. 22

Lista de Figura

Fig. 1. Fraes do alimento determinadas pelo mtodo de Weende.......14

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Teresa Cristina Moraes Genro Mariane Garcia Orqis

Introduo
O conhecimento do valor nutritivo de um determinado alimento utilizado na nutrio animal, alm de ser a forma mais eficiente de identificarmos o teor de nutrientes, tambm condio bsica para a adoo de prticas de manejo que visam aumentar a produo animal. O conhecimento do perfil nutricional de um determinado alimento ser til no fornecimento de informaes para se proceder ao ajuste quantidade de nutrientes (por exemplo: protena e energia), correspondentes s exigncias nutricionais dos animais, como tambm realizao dos clculos de dietas que buscam maximizar a resposta animal e utilizar eficientemente as fontes de alimento disponveis nos sistemas de produo. Todas as anlises realizadas com interesse prtico em alimentao animal tm como objetivo avaliar, com maior fidelidade possvel, os componentes determinantes do valor nutritivo dos alimentos simples ou formulados. Dessa forma, a amostra enviada ao laboratrio, dever ser perfeitamente representativa da mdia do material a ser analisado, uma vez que os erros cometidos durante a amostragem no podero ser retificados ou compensados, por mais cuidadosas que venham a ser as futuras anlises (SILVA, 1998). Se a amostra encaminhada ao laboratrio no for representativa do alimento, os resultados das anlises no sero reais

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e os clculos de rao ou da dieta a partir destes tambm no estaro corretos. Alimento considerado todo o ingrediente presente na dieta ou substncias que podem ser ingeridas pelos animais, parcialmente ou totalmente digeridas e assimiladas, constitudas por produtos de origem animal e vegetal, de subprodutos preparados a partir destes, como tambm de substncias sintticas usadas para suplementar os alimentos naturais, contribuindo para a manuteno e produo animal. No entanto, os alimentos no possuem a mesma composio, sendo alguns mais completos nutricionalmente que outros. Os nutrientes so os constituintes dos alimentos, de igual ou semelhante composio qumica que auxiliam na manuteno da vida e da produo. So compostos qumicos ou grupos de compostos que sendo ingeridos com os alimentos so aproveitados no organismo preenchendo alguma funo nutricional, isto , so utilizados na sntese de algum composto no organismo animal ou oxidados para a produo de energia. O conjunto de nutrientes, chamado valor nutritivo dos alimentos fornecidos aos animais pode ser conhecido atravs de anlises laboratoriais advindas de inmeras pesquisas e avanos do conhecimento humano, sendo um dos principais pontos a serem observados no setor de nutrio animal. Este trabalho tem como objetivo orientar tcnicos e produtores como devem ser feitas as coletas e a preparao das amostras dos principais alimentos usados na nutrio de animal para serem enviadas ao laboratrio onde sero analisadas. Alm disso, so apresentadas as principais fraes dos alimentos determinadas no laboratrio, teis para descrever e compor dietas para ruminantes.

Coleta de amostras
O mtodo de coleta varia de acordo com o tipo de alimento que ser analisado. Porm, em todos os casos, a amostra deve sempre estar muito bem identificada, com data de coleta, lote a que pertence estgio fenolgico em que foi coletada (no caso de plantas forrageiras), procedn-

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cia, contendo informaes sobre quais anlises devero ser feitas. Esses dados so muito importantes para posterior interpretao dos resultados.

1. Forrageiras (pastagens, campo nativo)


Na anlise de uma pastagem se deve levar em conta o propsito da amostra a ser analisada. Sempre bom lembrar que volumosos como as pastagens devem ser os principais componentes da dieta de ruminantes e que os mesmos so a fonte de alimento mais barata disponvel para estes animais. Como coletar:
- Demarcar a rea que ser amostrada. - Coletar de 15 a 20 sub-amostras abrangendo toda a rea amostrada. - Coletar na amostragem a parte da vegetao que ser consumida pelo animal, ou seja, a parte superior das plantas que corresponda a 50 % da altura do pasto. O corte pode ser feito com a mo ou, se necessrio, com um objeto cortante (tesoura, tesoura de esquilar, faca, bisturi, etc...). - Misturar as sub-mostras at tornar-se uma nica amostra homognea, e aps retirar aproximadamente 1 kg representativo dessa amostra. - Embalar a amostra em sacos plsticos bem fechados, preferencialmente sem ar, e enviar para o laboratrio. Se possvel, remeter a amostra em menos de 24 horas; Caso no seja possvel, a amostra dever ser congelada at o envio. - Na identificao da amostra deve constar o tipo de forragem que est sendo enviada, a sua fase fenolgica, se planta inteira ou somente folhas, data e local de coleta.

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2. Silagens
- A amostragem deve ser feita, preferencialmente, aps a abertura do silo. As amostras devem ser coletadas de vrios pontos da frente de corte quando a fermentao j estiver estabilizada, ou seja, quando o silo j estiver frio. - Coletar cerca de 10 subamostras, desprezando-se uma fatia de 15 cm no sentido vertical para evitar coleta de material exposto ao ar e luz. A quantidade a ser enviada para anlise deve ser em torno de 3 a 4 kg de silagem. - As amostras devem ser embaladas em sacos plsticos ou vidros e destes deve ser retirado totalmente o ar. Aps, conservar na geladeira ou congelador (-5 a -10C) e enviar o mais depressa possvel ao laboratrio, preferencialmente acondicionado dentro de uma caixa de isopor. - Depois de 30 a 40 dias de consumo dessa silagem, dever ser realizada uma nova amostragem, principalmente se o silo for feito com vrios cortes realizados em datas diferentes e levar mais uma semana para ser confeccionado. - Na identificao deve constar o tipo de material ensilado (espcie ou hbrido), se foi adicionado aditivo (tipo), se inoculado ou no, a data da coleta e a procedncia.

3. Feno e palhas
No caso de amostragem de fenos e palhas utilizado um instrumento semelhante uma pua adaptada um cano de ponta cortante. No caso de no possuir o equipamento, deve-se abrir o fardo ao meio e tirar uma fatia com a mo. O nmero de amostras varia com o nmero de fardos que o produtor possui: de 1 a 10: recomendvel retirar uma amostra de cada fardo. No caso do produtor possuir mais de 10 fardos a amostragem deve abranger no mnimo 10 fardos. Neste caso, deve-se observar a homogeneidade dos lotes a serem amostrados a fim de se obter uma amostra que represente o alimento que ser analisado. Procedimento:

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- Retirar as subamostras de acordo com o nmero de fardos, homogeneizar e fazer uma amostra composta com aproximadamente 1 kg; - Colocar as amostras em sacos de papel para enviar ao laboratrio; - Identificar o tipo de amostra, o tempo de armazenagem, a idade da planta ao corte (se houver esse registro), a espcie forrageira, a data da coleta e a procedncia.

4. Amostras de produtos comerciais ou misturas feitas na propriedade (raes, farelos, gros, resduos, etc...)
Estes tipos de produto podem ser armazenados a granel ou ensacados e a forma de armazenamento deve ser levada em conta na hora da amostragem para envio ao laboratrio de nutrio animal.
- Amostras a granel: recomenda-se que se tomem cerca de seis amostras de 100 g cada para cada tonelada de alimento (0,01%). - Amostras em sacos: considerar a possibilidade de segregao de partculas, por isto, deve-se amostrar os sacos no sentido diagonal, sendo que a quantidade amostrada a mesma usada para alimentos a granel. - Quando se tratar de grandes quantidades, coletar uma subamostra a cada tonelada do produto. - Caso o material tenha sido modo, no apropriado coletar amostras na sada do moinho. - Misturar as sub-amostras coletadas e retirar uma amostra nica, que deve ter aproximadamente 1 kg. - Embalar a amostra em sacos plsticos limpos e enviar ao laboratrio. - Na identificao do material a ser enviado dever constar o tipo de produto, a procedncia, o tempo e as condies de armazenagem.

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Principais fraes do alimento determinadas em laboratrio


No momento em que uma amostra de alimento enviada ao laboratrio torna-se imprescindvel saber que tipo de anlise vai ser solicitado para cada alimento, dependendo da finalidade desta. A anlise dos alimentos o ponto de partida para a formulao de raes. As principais fraes que compem os alimentos utilizados para ruminantes, so: protena bruta, extrato etreo, extrato no nitrogenado, fibra bruta, matria mineral ou cinzas, matria seca, fibra em detergente neutro, fibra em detergente cido e digestibilidade. Para determinao dessas fraes os mtodos mais utilizados so basicamente trs: a anlise aproximativa de Weende, o mtodo de Goering e Van Soest e a digestibilidade in vitro da matria seca e da matria orgnica de Tilley e Terry (1963).

1. Mtodo de Weende
O mtodo de Weende foi desenvolvido por Stohmann e Henneberg, entre 1860 e 1864, na estao experimental de Weende, na Alemanha. Este mtodo o mais utilizado e separa o alimento em fraes que contm substncias que apresentam alguma propriedade em comum, que permita anlises qumicas do grupo. Logo no uma anlise de nutrientes do alimento. O significado nutritivo de cada uma das fraes no muito claro exatamente porque cada frao uma combinao de substncias das quais algumas so nutrientes e outras no tm nenhum significado nutritivo. No mtodo de anlise aproximativa de Weende, so determinados seis grandes componentes qumicos dos alimentos forrageiros (Fig. 1): matria seca, matria mineral ou cinzas, protena bruta, extrato etreo, fibra bruta e extrato no nitrogenado

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ALIMENTO

Estufa a 105C

gua

Matria seca (MS)


Mufla a 600C

Matria orgnica (MO)

Matria mineral (MM)

Protena bruta (N x 6,25)

Extrato etreo (Gordura bruta)

Fibra bruta (CHO estrut urais)

Extrativo no nitrogenado ( CHO solveis)

Fig. 1. Fraes do alimento determinadas pelo mtodo de Weende

a) Matria seca A determinao da matria seca (MS) ponto de partida da anlise dos alimentos. de grande importncia, uma vez que a preservao do alimento pode depender do teor de umidade presente no material, e, alm

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disso, quando se compara o valor nutritivo de dois ou mais alimentos, temos que levar em considerao os respectivos teores de matria seca. Por outro lado, se desejarmos comparar o resultado de anlises realizadas em diferentes pocas, locais ou regies, sempre faremos essa comparao com base na matria seca, isto , como se o alimento contivesse 100% de matria seca. A concentrao de matria seca determinada por secagem da amostra da forragem em estufa a 105C, e a Matria Mineral se constitui no resduo da amostra obtido aps combusto em mufla a 600oC. importante o produtor conhecer o percentual de umidade dos alimentos que ele dispe para os ruminantes, pois alimentos com teor de umidade acima de 14 % podem ter seu armazenamento comprometido por de desenvolvimento de fungos e, at mesmo, pela combusto espontnea, alm de afetar o consumo e a sade dos animais. Alimentos ricos em gua (exemplo: leite, resduos alimentares que normalmente do origem ao que conhecemos por lavagem) provocam uma reduo no consumo de matria seca. Por outro lado, a restrio de gua reduz em 25 a 30% o consumo de matria seca. b) Matria mineral ou cinzas A porcentagem de matria mineral (MM) ou cinzas fornece uma indicao da riqueza em minerais da amostra, principalmente no caso de alimento de origem animal (ex: farinha de osso), pois permite uma estimativa do teor de cinzas e, por diferena de 100, a quantidade de matria orgnica (MO). Quando se trata de produtos vegetais (forrageiras, raes, cereais, etc.), a determinao da cinza tem relativamente pouco valor. Isto porque o teor da cinza oriunda de produtos de vegetais nos d pouca informao sobre sua composio, uma vez que seus componentes, em minerais, so muito variveis. Essa frao til, no entanto, no caso de plantas forrageiras onde um valor alto neste item pode indicar contaminao com matria mineral, em muitos casos terra (solos). Uma vez detectado que a amostra foi contaminada, todos os clculos das fraes do alimento devem ser feitas com base na matria orgnica do mesmo.

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Alguns alimentos de origem vegetal so, ainda, ricos em slica, o que resulta em teor elevado de cinza, todavia, esse teor no apresenta nenhum valor nutritivo para os animais (SILVA, 1998). c) Protena bruta O termo protena bruta (PB) envolve um grande grupo de substncias com estruturas semelhantes, porm com funes fisiolgicas muito diferentes. O percentual de protena bruta presente nos alimentos nos fornece uma idia do valor nutritivo destes. Baseado no fato de as protenas terem porcentagem de nitrognio quase constante, em torno de 16%, o que se faz determinar o nitrognio e, por meio de um fator de converso, transformar o resultado em protena bruta. No mtodo de Kjeldahl, o mais usado, determina-se o nitrognio contido na matria seca, incluindo o nitrognio protico propriamente dito e outros compostos nitrogenados no proticos (SILVA, 1998). As concentraes proticas nas gramneas forrageiras so maiores nos estgios vegetativos da planta e declinam na medida em que as mesmas atingem a maturidade. O contedo de protena na maturidade varia em funo de diferenas entre espcies, nvel inicial de protena na planta, e das propores de caule e folha da planta a esta idade. Algumas espcies mantm elevados valores proticos durante o desenvolvimento, mas invariavelmente declinam com o florescimento. A deficincia protica limita a produo animal, seja porque a forragem disponvel pode conter protena insuficiente ou a concentrao de protena bruta inferior ao nvel mnimo crtico (7%) para o bom funcionamento do rmen. importante conhecer o percentual de protena bruta dos alimentos, pois, alm de poder classificar os alimentos em funo do teor de protena bruta, o fornecimento de protena em excesso significa energia onerosa, pois os animais no armazenam protena, ento, usam a cadeia carbonada da protena excedente para formar carboidrato.

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Assim temos: Concentrados: - Proticos: alta PB - Energticos: baixa PB Volumosos: - Leguminosas: alta PB - Gramneas: mdia PB - Palhas: baixa PB

d) Extrato etreo (gordura bruta) O extrato etreo (EE) envolve principalmente as substncias de natureza lipdica, extrados dos alimentos pelo uso de solventes orgnicos como o ter. As gorduras so fontes de cidos graxos e energia para os animais, no entanto a presena de altas concentraes nos alimentos pode afetar sua conservao. A dieta total de ruminantes no pode conter mais de 5% de gordura (EE). Por isto, devemos tomar cuidado com fontes de suplementos com altos teores de EE, como, por exemplo, farelo de arroz integral. e) Fibra bruta A fibra bruta a poro da matria seca insolvel em cidos e lcali. Possui em sua constituio principalmente celulose, hemicelulose e lignina, todos considerados carboidratos de difcil digesto. Em animais monogstricos, a fibra bruta tem a funo de auxiliar nos movimentos peristlticos, pois retm gua ajudando a manter a consistncia branda e a umidade das fezes, facilitando sua progresso para o intestino grosso. Para ruminantes considerada fonte de energia tendo como produtos finais cidos graxos e gases.

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f) Extrato no nitrogenado O extrato no nitrogenado obtido por diferena, subtraindo-se de 100 os nveis percentuais dos demais componentes: matria seca, protena bruta, extrato etreo, fibra bruta e cinza ou matria mineral.

2. Mtodo de Goering e Van Soest


O mtodo de determinao da qualidade das forrageiras proposto por Goering e Van Soest (1970) baseado na separao das diversas fraes constituintes das forrageiras, por meio de reagentes especficos, denominados detergentes. A partir de uma amostra de alimento, a matria seca dividida em contedo celular (frao solvel da clula vegetal) e parede celular (frao insolvel). a) Fibra em detergente neutro A fibra em detergente neutro (FDN), tambm chamada de parede celular, corresponde parte da forragem que insolvel em detergente neutro. constituda, basicamente, de celulose, hemicelulose, lignina, slica e protena lignificada. Em ruminantes, uma dieta com altos teores de FDN afeta diretamente o consumo de matria seca, uma vez que a fibra causa uma rpida sensao de enchimento ruminal. Portanto, esse fato pode acarretar perdas no desempenho animal, pois o processo de saciedade ocorre antes que as demandas de energia sejam supridas. b) Fibra em detergente cido A fibra em detergente cido (FDA) a poro menos digervel da parede celular das forrageiras pelos microorganismos do rmen. constituda na sua quase totalidade por lignina e celulose. A determinao da lignina feita a partir da anlise de FDA. A maioria dos vegetais superiores contm, pelo menos, alguma frao de lignina. O contedo de lignina varia de 4 a 12%, podendo chegar, nas forragens

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mais fibrosas, a 20% da matria seca. a frao menos digervel da planta. Na nutrio animal, a importncia da lignina prende-se sua influncia negativa sobre a digestibilidade de outros nutrientes, podendo ser ocasionada pela indigestibilidade da lignina por si ou a barreira fsica que ela oferece digesto dos nutrientes no interior da clula (SILVA, 1998).

3. Avaliao da digestibilidade dos alimentos


A digestibilidade refere-se frao do alimento aparentemente aproveitada pelo animal, ou seja, a diferena entre a quantidade ingerida e a excretada nas fezes. Independente da quantidade de alimento ingerido, somente ser aproveitada pelo animal a poro efetivamente digerida. A determinao da digestibilidade indispensvel para o conhecimento do valor nutritivo de um alimento. At hoje, a digestibilidade vem sendo largamente utilizada na avaliao de forrageiras usadas na alimentao de ruminantes e de concentrados fornecidos para monogstricos. a) Digestibilidade in vitro da matria seca O mtodo de avaliao da digestibilidade in vitro da matria seca dos alimentos foi desenvolvida por Tilley e Terry (1963), com o objetivo de simular o processo de digesto dos ruminantes. O princpio deste mtodo consiste em deixar amostras de alimentos em contato com o contedo do rmen, no interior de um tubo de ensaio, onde se tenta reproduzir as condies predominantes no rmen dos animais (presena de microorganismos, anaerobiose, temperatura de 39C, soluo de saliva artificial e pH de 6,9) por 48 horas. Aps realizada a adio de pepsina e cido clordrico e as amostras so mantidas por mais 48 horas. Logo a seguir feita a filtrao, recuperando-se o material residual, ou seja, a frao que no sofreu digesto. Por diferena de 100 calcula-se a frao digervel da amostra.

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Para ruminantes, trabalhos de pesquisa mostraram que a digestibilidade da matria seca deveria ser, em mdia, de 68 %, ponto em que o animal consegue aliar o mximo consumo de matria seca produo de energia. Por outro lado, forragens de baixa digestibilidade (abaixo de 50%) so mal consumidas pelos ruminantes, pelo excessivo tempo de reteno no rmen, fato agravado quando a taxa protica estiver abaixo de 7%. b) Outros mtodos de determinao da digestibilidade Tcnica in vivo A princpio, ensaios in vivo envolvendo produo animal e digestibilidade so os mtodos mais adequados para determinar a digestibilidade dos alimentos utilizados na nutrio dos ruminantes. No entanto, a tcnica in vivo apresenta limitaes quanto avaliao simultnea de um grande nmero de alimentos, requer considervel uso de animais, mo-de obra, tempo e tem alto custo financeiro (MAURCIO et al., 2003). Tcnica in situ A tcnica in situ consiste em determinar o desaparecimento de componentes da amostra de alimentos acondicionados em sacos de nilon, ou outro material sinttico, e incubados no rmen por perodos variveis (TEIXEIRA, 1997). Apesar dos esforos para se uniformizar as condies experimentais na utilizao da tcnica, foram observadas variaes que superestimam a fermentao ruminal, produzindo diferenas nos resultados entre laboratrios, mesmo quando se utilizam condies de avaliao idnticas (NOCEK, 1985). Tcnica in vitro semi-automtica de produo de gases Nos ltimos anos, a tcnica de degradabilidade in situ vem sendo substituda pela tcnica in vitro de produo de gases.

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Essas tcnicas so capazes de simular o ambiente ruminal e a digesto enzimtica (THEODOROU et al., 1994), alm de descrever a cintica de fermentao ruminal e estimar o consumo. Dessa forma, elas tm se tornado uma opo para os estudos de forrageiras (MAURCIO et al., 2003).

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Referncias

GOERING, H. K.; VAN SOEST, P. J. Forage fiber analyses, apparatus, reagents, procedures and some applications. Washington, DC: USDA, 1970. 20 p. (USDA. Agricultural handbook, 379). MAURCIO, R. M.; PEREIRA, L. G. R.; GONALVES, L. C.; RODRIGUEZ, N. M. Relao entre presso e volume para implantao da tcnica in vitro semi-automtica de produo de gases na avaliao de forrageiras tropicais. Arquivos Brasileiros de Medicina Veterinria e Zootecnia, Belo Horizonte, v. 55, n. 2, p. 216-219, abr. 2003. NOCEK, J. E. Evaluation of specific variables affecting in situ estimates of ruminal dry matter and protein digestion. Journal of Animal Science, Champaign, v. 60, n. 5, p. 1347-1358, May 1985. SILVA, D. J. Anlise de alimentos: mtodos qumicos e biolgicos. Viosa: Ed. UFV, 1998. 166p. TEIXEIRA, J. C. Introduo aos mtodos de determinao de digestibilidade em ruminantes. In: TEIXEIRA, J. C. (Org.). Digestibilidade em ruminantes. Lavras: UFLA-FAEPE, 1997. p. 7-27.

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THEODOROU, M. K.; WILLIAMS, B. A.; DHANOA, M. S.; McALLAN, A. B.; FRANCE, J. A simple gas production method using a pressure transducer to determine the fermentation kinetics of ruminant feeds. Animal Feed Science and Technology, Amsterdam, v. 48, n. 3-4, p. 185-197, Aug. 1994. TILLEY, J. M. A.; TERRY, R. A. A two-stages technique for the in vitro digestion of forage crop. Journal of British Grassland Society, Aberystwyth, v. 18, n. 2, p. 104-111, 1963.