Artigo 5 RNG Alimentos Probioticos

___________________________________________________________ ALIMENTOS PROBITICOS: APLICAES COMO PROMOTORES DA SADE HUMANA PARTE 1 PROBIOTICS FOODS: APPLICATION AS THE PROMOTERS OF THE
E HUMAN HEALTH PART 1 ANDRA CTIA LEAL BADAR Docente dos cursos de Nutrio e Farmcia do Centro Universitrio do Leste de Minas Gerais Unileste-MG E-mail: andreabadaro@uol.com.br ANA PAULA MUNIZ GUTTIERRES Doutoranda em Cincia e Tecnologia de Alimentos pela Universidade Federal de Viosa UFV E-mail: paulagutti@yahoo.com.br ANA CAROLINA VALENTE REZENDE Mestranda em Cincia e Tecnologia de Alimentos pela Universidade Federal de Viosa UFV E-mail: carolvrezende@yahoo.com.br PAULO CSAR STRINGHETA Doutor em Cincias dos Alimentos pela Universidade de Campinas Unicamp E-mail: pstringheta@yahoo.com.br RESUMO O papel de uma alimentao saudvel na manuteno da sade tem despertado interesse dos consumidores e da comunidade cientfica, o que vem estimulando inmeros estudos com o intuito de comprovar a atuao de componentes bioativos na reduo de riscos de certas doenas. Os alimentos funcionais devem produzir benefcios especficos sade, reduzindo o risco de diversas doenas, conduzindo ao bem estar fsico e mental. Assim sendo, tem ocorrido um grande avano no desenvolvimento dos chamados produtos probiticos, prebiticos e simbiticos. Entre os papis potencialmente benficos dos probiticos, so citadas a ativao do sistema imune, atividade anticarcinognica, sntese de vitaminas do complexo B, melhora na digesto da lactose por indivduos lactase no persistentes e a modulao dos nveis de colesterol srico. Este trabalho apresenta uma reviso sobre os conceitos, principais microrganismos, alegaes de funo e sade dos probiticos em alimentos destinados para humanos. Palavras-chave: probiticos, alimentos funcionais, microbiota intestinal. ABSTRACT
_________________________________________________________________________________ NUTRIR GERAIS Revista Digital de Nutrio Ipatinga: Unileste-MG, V. 2 N. 3 Ago./Dez. 2008.
2 ___________________________________________________________ The role of the healthy feed on health maintenance have increase the interest or consumers and scientists, stimulating many studies aiming to give evidence the performance of bioactives ingredients on decreased of diseases hazards. The functional foods should to enhance specific benefits to the health, reducing the risk of several diseases and promoting physicals and mental health. The main roles of probiotics are to stimulate the immune system, the antimutagenic and the anticarcinogenic properties, complex B vitamins syntesis, alleviation of lactose intolerance and modulation on serum cholesterol. This work shows the review about the concepts, main microorganisms, functional and health claim of the probiotics used in foods to human. Key words: probiotics, functional foods, intestinal microorganisms. INTRODUO Desde os tempos remotos, o alimento considerado essencial e indispensvel vida humana. Ele prov todos os elementos necessrios para homem, no s para o desenvolvimento fsico, mas tambm para todas as atividades intelectuais e sociais. Vrios estudos mostram que qualidade de vida intimamente associada com o tipo de dieta diria e o estilo de vida de cada indivduo (MOURA, 2005; CRUZ et al., 2007). O papel da alimentao equilibrada na manuteno da sade tem despertado interesse pela comunidade cientfica que tem produzido inmeros estudos com o intuito de comprovar a atuao de alguns alimentos na reduo de riscos de certas doenas, alm do considervel interesse em incentivar as pesquisas de novos componentes naturais e o desenvolvimento de novos ingredientes, possibilitando a inovao em produtos alimentcios e a criao de novos nichos de mercado para estes ingredientes (THAMER e PENNA, 2006; ARAJO, 2007). A evoluo dos conhecimentos sobre o papel dos componentes fisiologicamente ativos dos alimentos, de fontes vegetais e animais tem mudado o entendimento do papel da dieta sobre a sade (ADA, 2004). Este fato tem aumentado o interesse mundial para melhorar a qualidade da nutrio e reduzir os gastos com sade por meio da preveno de doenas crnicas, da melhoria da qualidade e da expectativa de vida ativa (STRINGHETA et al., 2007a). Segundo Moraes e Colla (2006), inmeros fatores influenciam a qualidade da vida moderna, levando a populao a conscientizar-se da importncia de alimentos contendo substncias que auxiliam a promoo da sade, melhorando o estado nutricional. A incidncia de morte provocada por cncer, acidente vascular cerebral, aterosclerose, enfermidade heptica, dentre outros, pode ser minimizada por meio de bons hbitos alimentares.
3 ___________________________________________________________ Em meados dos anos 80, surgiu no Japo o termo alimentos funcionais, como resultado de esforos para desenvolver alimentos que possibilitassem a reduo dos gastos com sade pblica, considerando a elevada expectativa de vida naquele pas (ARAYA e LUTZ, 2003). At aquela data, o Japo era o nico pas que tinha formulado uma regulao especfica para os alimentos funcionais, conhecidos como Alimentos para Uso Especfico de Sade (FOSHU) (ROBERFROID, 2002). O termo funcional implica que o alimento tem algum valor principal identificado para o benefcio da sade, incluindo a reduo do risco de doena para a pessoa que o esteja consumindo (STRINGHETA et al., 2007b). Os alimentos funcionais podem ser considerados como parte importante do bem-estar, no qual tambm se incluem uma dieta equilibrada e atividade fsica. O guia alimentar para a populao brasileira recomenda o estmulo prtica de atividade fsica e a adoo de uma dieta variada e alerta para no se mistificar os componentes funcionais dos alimentos (MORAES & COLLA, 2006; STRINGHETA et al., 2007b). Alimentos funcionais tambm so conhecidos por outros nomes, como nutracuticos, alimentos teraputicos e alimentos medicinais. Tais alimentos podem conter um ou at mesmo uma combinao de componentes que do desejveis efeitos fisiolgicos no corpo humano (CRUZ et al., 2007). No Brasil, estima-se que as vendas de alimentos funcionais chegam a US$ 500 milhes por ano, representando aproximadamente 1% do total do comrcio brasileiro de alimentos processados industrializados, segundo dados da Associao Brasileira de Indstrias de Alimentos (ABIA). Esta associao representa os interesses da indstria de alimentos brasileiros e adicionalmente dos produtos lcteos funcionais, nutracuticos e produtos base de soja que j ocupam um significativo e promissor mercado (ALIMENTO SEGURO, 2005). Neste contexto, tem ocorrido um grande avano no desenvolvimento dos chamados produtos probiticos, prebiticos e simbiticos (LOURENS-HATTING, 2002). O interesse pelos efeitos benficos sade humana proporcionado especialmente por bactrias ou leveduras viveis tem provocado um aumento mundial na comercializao de produtos que contenham estes microrganismos (ARAJO, 2007). Este trabalho apresenta uma reviso sobre os conceitos, principais microrganismos e fontes, alegaes de funo e de benefcios para sade. CONCEITOS DE PROBITICOS, PREBITICOS E SIMBITICOS
4 ___________________________________________________________ Uma classe importante de alimentos funcionais so os probiticos, prebiticos e simbiticos. A palavra Probitico, que significa para a vida, um termo derivado da lngua grega (NEVES, 2005). A terminologia conceitual foi inicialmente proposta por Fuller, aps os primeiros ensaios clnicos. Probiticos podem ser definidos como suplementos alimentares que contm microrganismos vivos, ou componentes microbianos que, quando ingeridos em determinado nmero, apresentam efeito benfico sobre a sade e bem-estar do hospedeiro. So capazes de melhorar o equilbrio microbiano intestinal produzindo efeitos positivos sade do indivduo (SALMINEN et al., 1999; DUPONT, 2001; FAO/WHO, 2001; ISOULARI, 2001; REID et al., 2001; BRASIL, 2002; SANDERS, 2003). O conceito de probitico pode ser tambm definido como o uso de excluso competitiva para melhorar uma ecologia especfica. A terapia ou preveno com probiticos introduz um tipo de bactria benfica em detrimento diminuio de outra espcie de bactria (MOMBELLI e GISMONDO, 2000). As clulas probiticas depois de ingeridas devem ser capazes de sobreviverem s condies de estresse presentes no trato gastrointestinal, como suco gstrico, presena de sais biliares e enzimas digestivas e manter sua viabilidade e atividade metablica no intestino para exercerem os efeitos benficos aos hospedeiros. Quanto aos desafios tecnolgicos para a produo industrial de clulas, estas devem manter-se estveis e viveis em nveis satisfatrios durante todo o prazo de validade do produto (SAAD, 2006; ARAJO, 2007). Segundo Santos et al. (2003) e Brizuela et al. (2001), so sete os critrios para um microrganismo ser empregado como probitico: i) no apresentar patogenicidade; ii) ser Grampositivo; iii) ser produtor de cido e ser cido resistente; iv) apresentar especificidade ao hospedeiro; v) apresentar excreo de fator anti-E. coli; vi) ser resistente bile, e vii) ser vivel/estvel. Os Prebiticos so definidos como oligossacardeos que no so digerveis no intestino delgado e atingem o intestino grosso onde atuam estimulando seletivamente o crescimento de bactrias desejveis no clon, alterando a microbiota em favor de uma composio mais saudvel (MANNING et al., 2004). Os oligossacardeos, como os frutooligossacardeos (FOS) e inulina atendem as condies dos prebiticos. Adicionalmente, os prebiticos podem inibir a multiplicao de patgenos, garantindo benefcios adicionais sade do hospedeiro. Esses componentes atuam mais freqentemente
5 ___________________________________________________________ no intestino grosso, embora eles possam ter tambm algum impacto sobre os microrganismos do intestino delgado (GIBSON e ROBERFROID, 1995; ROBERFROID, 2001; SAAD, 2006). Eles agem estimulando o crescimento dos grupos endgenos de populao microbiana benfica para a sade humana, como as bifidobactrias e os lactobacilos (ROBERFROID, 2002). De acordo com Lorente e Serra (2001), as substncias mais estudadas por seu efeito prebitico so os oligossacardeos, os glicoconjugados do leite humano e os frutooligossacardeos encontrados em frutas e hortalias. Os oligossacardeos protegem especificamente os recm-nascidos frente patgenos causadores de diarria, favorecendo a colonizao por Bifidobacterium bifidum e interferem na ao patgena de Escherichia coli e Campylobacter jejuni. Os Simbiticos referem-se combinao de bactrias probiticas e de substncias prebiticas que afetam beneficamente o hospedeiro por melhorar a sobrevivncia e implantao de microrganismos vivos no trato gastrodigestrio e por favorecer seletivamente o crescimento ou atividade metablica de bactrias promotoras de sade no clon (OSULLIVAN, 2001; ARAJO, 2007). Os alimentos simbiticos esto representados principalmente pelos produtos lcteos fermentados (ROWLAND et al., 1997; DIPLOCK et al., 1999). A interao entre o probitico e o prebitico in vivo pode ser favorecida por uma adaptao do probitico ao substrato prebitico anterior ao consumo, podendo resultar em uma vantagem competitiva para o probitico, se ele for consumido juntamente com o prebitico. Alternativamente, esse efeito simbitico pode ser direcionado s diferentes regies do trato gastrintestinal. O consumo de probiticos e de prebiticos apropriadamente selecionados pode aumentar os efeitos benficos de cada um deles, uma vez que o estmulo de cepas probiticas conhecidas leva escolha dos pares simbiticos substrato-microrganismo ideais (BIELECKA et al., 2002; HOLZAPFEL e SCHILLINGER, 2002; MATTILASANDHOLM et al., 2002; PUUPPONEN-PIMI et al., 2002; SAAD, 2006). Em virtude dos efeitos benficos produzidos pelos probiticos e prebiticos, tem havido um considervel interesse por parte das indstrias em desenvolver produtos alimentcios que contenham estes microrganismos e ingredientes funcionais (STANTON et al., 1998). A MICROBIOTA INTESTINAL
6 ___________________________________________________________ O trato gastrintestinal humano um microecossistema cintico que possibilita o desempenho normal das funes fisiolgicas do hospedeiro, a menos que microrganismos prejudiciais e potencialmente patognicos dominem a microbiota (SAAD, 2006). A microbiota normal do intestino ainda um rgo de defesa inexplorado do organismo. Embora sejam distribudas bactrias ao longo do intestino, a maior concentrao de microrganismos e atividade metablica encontrada no intestino grosso (BERG, 1996; SALMINEN et al., 1998; GUARNER e MALAGELADA, 2003). A cavidade oral possui uma microbiota complexa, que consiste em anaerbios facultativos e estritos, incluindo estreptococos, Bacteroides, lactobacilos e leveduras. O intestino delgado escassamente povoado, e a partir do leo as concentraes bacterianas aumentam gradualmente, alcanando 1011 a 1012 Unidades Formadoras de Colnia (UFC)/g no clon. At 500 espcies de bactrias podem estar presentes no intestino grosso de um humano adulto, levando em conta que os microrganismos correspondam por 35-50% do volume do contedo do clon humano (ISOLAURI et al., 2004). A microbiota gastrointestinal humana exerce um papel fundamental na nutrio e sade. Pelo processo de fermentao, as bactrias do intestino metabolizam vrios substratos (principalmente componentes dietticos) formando produtos finais como cidos graxos de cadeia curta e gases. Este metabolismo contribui positivamente para atendimento das necessidades energticas dirias do hospedeiro. O intestino grosso humano um rgo metabolicamente bastante ativo, fato atribudo para a microbiota residente e suas atividades. Normalmente, o organismo hospedeiro vive em harmonia com a microbiota complexa do intestino (RASTAL et al., 2000). Quando em equilbrio, a microbiota intestinal impede que microrganismos potencialmente patognicos nela presentes exeram seus efeitos. Por outro lado, o desequilbrio desta microbiota pode resultar na proliferao de patgenos, com conseqente infeco bacteriana (ZIEMER e GIBSON, 1998; ISOLAURI et al., 2004). A influncia benfica dos probiticos sobre a microbiota intestinal humana inclui fatores como os efeitos antagnicos e a competio contra microrganismos indesejveis e os efeitos imunolgicos (PUUPPONEN-PIMI et al., 2002). Porm, sob certas circunstncias como a ingesto de antimicrobianos, dieta pobre em determinados nutrientes e condies de vida, o equilbrio da microbiota pode sofrer alteraes
7 ___________________________________________________________ e transtornos. Alm disso, o processo fermentativo normal pode produzir metablitos indesejveis como amnia, compostos fenlicos e toxinas (RASTAL et al., 2000). A microbiota do intestino tambm est susceptvel contaminao por patgenos passageiros, que altera a estrutura da colonizao normal, podendo levar a desordens intestinais agudas e/ou crnicas. Sendo assim, o intestino grosso o foco principal para os alimentos funcionais que so utilizados no fortalecimento das funes normais do intestino, e ajudando a prevenir deficincias orgnicas. A colonizao da microbiota determinada pela suscetvel ao de certos grupos e mecanismos dietticos (SALMINEN et al., 1998). A hidrlise e o metabolismo de carboidratos no intestino grosso so influenciados por uma variedade de fatores fsicos, qumicos, biolgicos e ambientais. Destes, provavelmente seja a natureza e quantidade de substrato disponvel que tenha maior significado, fazendo da dieta o principal e mais fcil mecanismo pelo qual se pode influenciar o perfil de fermentao. Outros fatores que afetam a colonizao e crescimento de bactrias no intestino so o pH do intestino, a produo de metablitos inibidores (cidos e perxidos) e de substncias inibitrias especficas (bacteriocinas), sais biliares e eventos imunolgicos (RASTAL et al., 2000). O conhecimento da microbiota intestinal e suas interaes levou ao desenvolvimento de estratgias alimentares objetivando a manuteno e o estmulo das bactrias normais ali presentes (GIBSON e FULLER, 2000). possvel aumentar o nmero de microrganismos promotores da sade no trato gastrintestinal atravs da introduo de probiticos pela alimentao ou com o consumo de suplemento alimentar prebitico, o qual ir modificar seletivamente a composio da microbiota, fornecendo ao probitico vantagem competitiva sobre outras bactrias do ecossistema (CRITTENDEN, 1999). A ligao de bactrias probiticas aos receptores da superfcie celular dos entercitos tambm d incio s reaes em cascata que resultam na sntese de citocinas (KAUR et al., 2002). Dados experimentais indicam que diversos probiticos so capazes de modular algumas caractersticas da fisiologia digestiva, como a imunidade da mucosa e a permeabilidade intestinal (FIORAMONTI et al., 2003). OS PROBITICOS As bactrias do cido ltico so as principais representantes dos probiticos em alimentos e produtos farmacuticos. Dentre essas podemos incluir muitas espcies de
8 ___________________________________________________________ Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus e ainda algumas cepas no patognicas de Escherichia coli (CABR e GASSULL, 2007). A reintroduo destes grupos microbianos no hospedeiro feita por meio da administrao de probiticos que afetam beneficamente o hospedeiro pela melhora do balano da microbiota intestinal (BOTELHO, 2005). As bactrias lcticas so Gram-positivas, quase sempre catalase negativas, no formadoras de esporos e acumulam cido ltico no ambiente em que crescem como produto do metabolismo primrio. Todos os componentes do grupo ltico so fastidiosos e esto presentes em ambientes nutricionalmente ricos como vegetais, leite, carne e trato intestinal. So anaerbios, anaerbios facultativos ou microaerfilos (SAAD, 2006). Para garantir um efeito contnuo, os probiticos devem ser ingeridos diariamente. Alteraes favorveis na composio da microbiota intestinal foram observadas com doses de 100 g de produto alimentcio contendo 108-109 UFC de microrganismos probiticos (107 a 106 UFC/g de produto), geralmente com a administrao durante o perodo de 15 dias (BLANCHETTE et al., 1996; JELEN e LUTZ, 1998). Bactrias pertencentes aos gneros Lactobacillus e Bifidobacterium e, em menor escala, Enterococcus faecium, so mais freqentemente empregadas como suplementos probiticos para alimentos, uma vez que elas tm sido isoladas de todas as pores do trato gastrintestinal do humano saudvel (SAAD, 2006). O leo terminal e o clon parecem ser os locais de preferncia para colonizao intestinal dos lactobacilos e bifidobactrias (CHARTERIS et al., 1998; BIELECKA et al., 2002). Entretanto, deve ser salientado que o efeito de uma bactria especfico para cada cepa, no podendo ser extrapolado, inclusive para outras cepas da mesma espcie (GUARNER e MALAGELADA, 2003). Bactrias pertencentes aos gneros Lactobacillus e Bifidobacterium so mais freqentemente empregadas como suplementos probiticos para alimentos (CHARTERIS et al., 1998). O uso mais comum de microrganismos probiticos tem sido em produtos lcteos - leites fermentados, sorvetes e queijos. E sua viabilidade neste tipo de produto pode ser afetada por vrios fatores como a produo de cido ltico e perxido de hidrognio por fermentos tradicionais, presena de oxignio, assim como interaes entre cepas presentes e a concentrao de acar (BARRETO et al., 2003; SHAH et al., 2007). Microrganismos probiticos so freqentemente usados em alimentos fermentados e a fermentao age para reter e otimizar a viabilidade microbiana e produtividade, enquanto, simultaneamente, preserva as propriedades probiticas. Durante a fermentao, vrios
9 ___________________________________________________________ produtos metablicos aparecem no alimento, incluindo cido lctico, cido actico, bacteriocinas, e o pH do produto diminui. Estas mudanas podem afetar a estabilidade de bactrias probiticas, alterando suas propriedades funcionais. Na aplicao em produtos fermentados devem tambm contribuir na melhoria da qualidade sensorial do produto (ISOULARI et al., 2004). Gnero Bifidobacterium Segundo Gomes e Malcata (2002), as bifidobactrias foram isoladas pela primeira vez no final do sculo 19 por Tissier, sendo, em geral, caracterizadas por serem microrganismos gram-positivos, no formadores de esporos, desprovidos de flagelos, catalase-negativos e anaerbios. No que diz respeito sua morfologia, podem ter vrias formas que incluem bacilos curtos, curvados ou bifurcados. Atualmente, o gnero Bifidobacterium inclui 30 espcies, 10 das quais so de origem humana (cries dentrias, fezes e vagina), 17 de origem animal, 2 de guas residuais e 1 de leite fermentado. Esta ltima tem a particularidade de apresentar uma boa tolerncia ao oxignio, ao contrrio da maior parte das outras do mesmo gnero. Dentre as bactrias pertencentes ao gnero Bifidobacterium, destacam-se B. bifidum, B. breve, B. infantis, B. lactis, B. animalis, B. longum e B. thermophilum (LEE et al., 1999; SANDERS e KLAENHAMMER, 2001). Somente cinco espcies de Bifidobacterium de origem humana (B. longum, B. bifidum, B. breve, B. infantis e B. adolescentis) tm atrado a ateno da indstria para a produo de produtos lcteos fermentados com fins teraputicos (BOTELHO, 2005). Bifidobactrias so habitantes naturais do trato gastrintestinal humano. Atualmente, estudos cientficos in vivo usando animais ou voluntrios humanos tm demonstrado que o consumo de clulas vivas destes microrganismos tem efeito sobre a microbiota do trato digestivo. Estirpes selecionadas sobrevivem ao estmago e ao trnsito intestinal e atingem o clon em nmero elevado. Recm-nascidos so colonizados por bactrias bfidas durante os dias aps o nascimento e a populao parece se manter relativamente estvel at idade avanada, quando ocorre um declnio. Entretanto, dieta, antibiticos e estresse so apontados como capazes de influenciar a populao de bifidobactrias no intestino (SHAH, 2007). Para resistir s condies do trato gastrointestinal culturas probiticas devem apresentar tolerncia bile e atividade de hidrlise de sais biliares, alm de resistir a condies cidas e ricas de proteases. Adicionalmente, devem ser capazes de competir com a
10 ___________________________________________________________ microbiota normal e resistir aos metablitos produzidos por membros dessa microbiota, incluindo bacteriocinas, cidos orgnicos e outros agentes antimicrobianos (KLAENHAMMER e KULLEN, 1999). Quanto ao aspecto taxonmico, as culturas probiticas devem ser identificadas e classificadas, com base em suas caractersticas fenotpicas e, principalmente, genotpicas. Na caracterizao gentica importante incluir anlises filogenticas em diferentes graus de sofisticao, objetivando no s a correta classificao, mas tambm a gerao de fingerprints ou impresso digital da bactria, que permitam a inequvoca recuperao e identificao em alimentos e tambm quando introduzidas no sistema gastrointestinal em estudos de sobrevivncia, colonizao e atividade funcional in vivo (KLAENHAMMER e KULLEN, 1999). Gnero Lactobacillus Outro gnero que integra o hall dos agentes probiticos o Lactobacillus, isolado pela primeira vez por Moro, em 1900, a partir das fezes de lactentes amamentados com leite materno. Este investigador atribuiu-lhes o nome de Bacillus acidophilus, designao genrica dos lactobacilos intestinais. O gnero Lactobacillus conta hoje com 56 espcies reconhecidas, das quais 5 contm subespcies (delbrueckii, aviarius, salivarius, coryniformis e paracasei). Dezoito delas, presentes na microbiota intestinal de humanos, so consideradas de interesse como probiticos. Dentre as bactrias lticas deste gnero, destacam-se Lb. acidophilus, Lb. helveticus, Lb. casei - subsp. paracasei e subsp. tolerans, Lb. paracasei, Lb. fermentum, Lb. reuteri, Lb. johnsonii, Lb. plantarum, Lb. rhamnosus e Lb. salivarius (KLAENHAMMER e KULLEN, 1999). De acordo com o Bergeys Manual of Determinate Bacteriology, o gnero Lactobacillus composto por bacilos Gram positivos, regulares e no esporulados. Possuem morfologia celular variando de bacilos longos e finos at, algumas vezes, como bacilos curvados e pequenos (BOTELHO, 2005). Este gnero compreende, neste momento, 56 espcies oficialmente reconhecidas (GOMES e MALCATA, 2002). A dificuldade na classificao discutida por diversos autores, j que o gnero comporta muitas espcies, sendo algumas, muito distantes geneticamente umas das outras e outras altamente relacionadas, variando somente na extenso da fermentao de alguns carboidratos (BOTELHO, 2005).
11 ___________________________________________________________ Os Lactobacillus so microaerfilos e, quando cultivados em meios slidos, geralmente o desenvolvimento melhor em anaerobiose ou presso de oxignio reduzido e 5% a 10% de CO2; alguns so anaerbios em isolamento. Nos meios usuais de crescimento, os lactobacilos raramente produzem pigmentos que, quando presentes, so amarelados, laranja-ferrugem ou vermelho-tijolo. Crescem em temperaturas que variam de 2C a 53C, com valores timos, geralmente, de 30C a 40C. So acidricos, com pH timo entre 5,5 e 6,2; o crescimento ocorre a pH 5,0 ou menos. A taxa de crescimento freqentemente reduzida em meios neutros ou alcalinos. Nas diversas espcies, a reduo do nitrato no usual, podendo acontecer, porm, quando o pH terminal estabilizado acima de 6,0 (BOTELHO, 2005). As caractersticas fenotpicas mais utilizadas na identificao de Lactobacillus so: forma, colorao de Gram, arranjo, motilidade, catalase, temperatura mxima e mnima de crescimento e fermentao de 33 diferentes tipos carboidratos (BOTELHO, 2005). MECANISMOS DE AO Trs possveis mecanismos de atuao so atribudos aos probiticos, sendo o primeiro deles a supresso do nmero de clulas viveis atravs da produo de compostos com atividade antimicrobiana, a competio por nutrientes e a competio por stios de adeso. O segundo desses mecanismos seria a alterao do metabolismo microbiano, atravs do aumento ou da diminuio da atividade enzimtica. O terceiro seria o estmulo da imunidade do hospedeiro, atravs do aumento dos nveis de anticorpos e o aumento da atividade dos macrfagos. O espectro de atividade dos probiticos pode ser dividido em efeitos nutricionais, fisiolgicos e antimicrobianos (SAAD, 2006). Os probiticos exercem aes diversas sobre a sade mediante distintos mecanismos de ao. Atuam acidificando a luz intestinal, se agregando s substncias que inibem o crescimento de microrganismos patognicos, consumindo nutrientes especficos, competitividade a receptores intestinais de forma que mantm a microbiota intestinal evitando a ao de patgenos. Tm atividades imunomoduladoras, principalmente por modificarem a resposta a antgenos; aumentarem a secreo de IgA especifica frente a rotavirus; facilitarem a captao de antgenos na placa de Peyer; produzirem enzimas hidrolticas, e diminuirem a inflamao intestinal (LORENTE e SERRA, 2001).
12 ___________________________________________________________ Os prebiticos exercem um efeito osmtico no trato gastrintestinal, enquanto no so fermentados. Quando fermentados pela microbiota endgena, eles aumentam a produo de gs. Portanto, os prebiticos apresentam o risco terico de aumentar a diarria em alguns casos (devido ao efeito osmtico) e de serem pouco tolerados por pacientes com sndrome do intestino irritvel. Os probiticos, por outro lado, no apresentam esse inconveniente terico e tm sido efetivos na preveno e no alvio de diversos episdios clnicos, envolvendo diarria (MARTEAU e BOUTRON-RUAULT, 2002). A modulao da microbiota intestinal por esses prebiticos conseqente alterao da composio desta microbiota por uma fermentao especfica, a qual resulta em uma comunidade em que h predomnio de bifidobactrias (KAUR e GUPTA, 2002). Vem crescendo as evidncias que sugerem que probiticos possam ser efetivos na preveno de infeco no trato urinrio. O mecanismo de ao proposto inclui inibio do crescimento e adeso de patognicos na mucosa vaginal e uretral antes do acesso destes patgenos dentro da bexiga (GERASIMOV, 2004). ALEGAES DE FUNO E BENEFCIOS PARA SADE No incio do sculo passado, Metchnikoff introduziu a hiptese do efeito benfico das bactrias por meio da teoria da longevidade dos caucasianos, cuja dieta era baseada na ingesto de leites fermentados. Segundo ele, os lactobacilos presentes nestes produtos criariam no intestino humano condies desfavorveis a outros microrganismos que poderiam produzir um efeito txico ao hospedeiro (HOLZAPFEL e SCHILLINGUER, 2002). Muitos estudos clnicos tm investigado o uso de probiticos como suplementos na alimentao em casos de infeces do trato gastrodigestrio e condies inflamatrias. Evidncias demonstram que estirpes especficas selecionadas da microbiota intestinal saudvel exibem poderosas capacidades antipatognicas e antiinflamatrias e so conseqentemente envolvidas na modulao da microbiota intestinal (ISOLAURI et al., 2004). Segundo Saad (2006), os principais benefcios sade do hospedeiro atribudos ingesto de culturas probiticas podem ser resumidos em: Controle da microbiota intestinal; Estabilizao da microbiota intestinal aps o uso de antibiticos;
13 ___________________________________________________________ Promoo da resistncia gastrintestinal colonizao por patgenos; Diminuio da populao de patgenos atravs da produo de cidos actico e ltico, de bacteriocinas e de outros compostos antimicrobianos; Promoo da digesto da lactose em indivduos intolerantes lactose; Estimulao do sistema imune; Alvio da constipao; Aumento da absoro de minerais e produo de vitaminas. Os probiticos auxiliam a recompor a microbiota intestinal, atravs da adeso e colonizao da mucosa intestinal, ao esta que impede a adeso e subseqente produo de toxinas ou invaso das clulas epiteliais (dependendo do mecanismo de patogenicidade) por bactrias patognicas. Adicionalmente, os probiticos competem com as bactrias indesejveis pelos nutrientes disponveis no nicho ecolgico. O hospedeiro fornece as quantidades de nutrientes que as bactrias intestinais necessitam e estas indicam ativamente as suas necessidades. Essa relao simbitica impede uma produo excessiva de nutrientes, a qual favoreceria o estabelecimento de competidores microbianos com potencial patognico ao hospedeiro. Alm disso, os probiticos podem impedir a multiplicao de seus competidores, atravs de compostos antimicrobianos, principalmente bacteriocinas, cidos orgnicos volteis e perxido de hidrognio (KOPP-HOOLIHAN, 2001; CALDER e KEW, 2002; GUARNER e MALAGELADA, 2003). O efeito dos probiticos no sistema imune tem tambm sido objeto de numerosos estudos h mais de 20 anos. Certas linhagens de Bactrias do cido Ltico so capazes de estimular, bem como regular, vrios aspectos das respostas imune natural e adquirida. Estas incluem, por exemplo, aumento da atividade fagoctica de leuccitos, estimulao de resposta no-especfica (IgA) e especfica (anticorpos) e aumento da produo de citocinas in vivo. Grande parte das evidncias de sistemas in vitro e de modelos animais e humanos sugere que os probiticos podem estimular tanto a resposta imune no-especfica quanto especfica. Acredita-se que esses efeitos sejam mediados por uma ativao dos macrfagos, por um aumento nos nveis de citocinas, por um aumento da atividade das clulas destruidoras naturais (NK = natural killer) e/ou dos nveis de imunoglobulinas (GILLILAND, 2001; SAAD, 2006). Quanto aos critrios dietticos e teraputicos, culturas probiticas destinadas ao consumo humano devem ser originrias do trato intestinal humano, porque so altamente
14 ___________________________________________________________ compatveis com o ambiente intestinal e toleradas pelo sistema imunolgico do hospedeiro, uma vez que persistem nesse ecossistema ao longo do tempo (KLAENHAMMER e KULLEN, 1999). Strauss e Caly (2003) citam que h possibilidade de opcionalmente se prevenir com probiticos a recorrncia de peritonite bacteriana espontnea causada por cirrose ou insuficincia heptica, por diminuir o nmero de bactrias patognicas e por aumentar a imunidade do intestino, juntamente com antibiticos de uso contnuo como a norfloxacina que j so utilizados no tratamento clssico. A alterao do metabolismo microbiano pelos probiticos ocorre por meio do aumento ou diminuio da atividade enzimtica. Uma funo vital das bactrias lticas na microbiota intestinal produzir a enzima -D-galactosidade (galactosidase), auxiliando a quebra da lactose no intestino. Essa ao fundamental, particularmente no caso de indivduos com intolerncia lactose, os quais so incapazes de digeri-la adequadamente, o que resulta em desconforto abdominal em grau varivel (LOURENS-HATTINGH e VILJOEN, 2002). Diversas evidncias tm demonstrado que o consumo de quantidades adequadas, de cepas apropriadas de bactrias lticas (incluindo bactrias lticas no-probiticas como Lactobacillus bulgaricus e Streptococcus thermophilus) capaz de aliviar os sintomas de intolerncia lactose. Desta maneira, consegue-se incorporar produtos lcteos e os nutrientes importantes que fazem parte desses produtos de volta dieta de indivduos intolerantes lactose, que normalmente se vem obrigados a restringir a ingesto desses produtos. Outro efeito descrito foi a reduo ou supresso da atividade de enzimas fecais, como a glicuronidase, a nitrorredutase, a azorredutase (LEE et al., 1999; KOPP-HOOLIHAN, 2001). Lactobacilos e bifidobactrias esto relacionados com a reduo do risco de alergias de origem alimentar. Estas bactrias so capazes de induzir a quebra de protenas com potencial alergnico no trato gastrintestinal, processo que pode contribuir para a reduo da alergenicidade de protenas (MORAIS e JACOB, 2006). At ento, o nico tratamento para alergias de origem alimentar era a eliminao do alimento envolvido da dieta. Entretanto, existem evidncias cientficas para a aplicao de probiticos no controle destas alergias. Os resultados de ensaios conduzidos em crianas confirmam que probiticos podem ser aplicados para atenuar sintomas de doenas alrgicas em humanos e pode levar a uma nova forma de tratamento de alergias de origem alimentar, particularmente em crianas que possuem microbiota em desenvolvimento (MATTILASANDHOLM et al., 1999).
15 ___________________________________________________________ Majamaa e Isolauri (1997) demonstraram que crianas com dermatite atpica e com alergia ao leite de vaca ao serem alimentadas com uma frmula de hidrolisado de soro fortificado com probitico (Lactobacillus GG.) durante o perodo de um ms de tratamento apresentaram uma melhoria clnica, com reduo de mais de 50% do ndice de dermatite atpica (SCORAD-Clinical score of atopic dermatitis) quando comparadas ao grupo placebo. As bactrias lcticas so fatores que garantem a preservao e as caractersticas sensoriais de vrios produtos, contribuindo para textura, paladar, percepo do gosto e estabilidade de produtos fermentados pela sntese de exopolissacardeos (SOUZA et al., 2007). A contribuio das bactrias do iogurte na melhora da microbiota intestinal tem sido vastamente reconhecida. A incorporao de L. acidophilus e B. bifidum nos iogurtes geram produtos de excelente valor teraputico. Um consumo regular de iogurte (400 500g/semana) contm 1,0 x 106 UFC/g de Bifidobacterium sp. e L. acidophilus, estes por sua vez devero sobreviver passagem pelo trato intestinal para que possam oferecer seus efeitos teraputicos benficos (BOTELHO, 2005). Embora ainda no comprovados, outros efeitos atribudos a essas culturas so a diminuio do risco de certos tipos cncer (como o de clon) e de doenas cardiovasculares. So sugeridos, tambm, a diminuio das concentraes plasmticas de colesterol, efeitos anti-hipertensivos, reduo da atividade ulcerativa de Helicobacter pylori, controle da colite induzida por rotavirus e por Clostridium difficile, preveno de infeces urogenitais, alm de efeitos inibitrios sobre a mutagenicidade (KAUR et al., 2002; TUOHY et al., 2003). Quanto aos seus efeitos anticarcinognicos, estes podem ser atribudos inibio de enzimas prcarcinognicas ou estimulao do sistema imune do hospedeiro (ISOLAURI et al., 2004). Cabr e Gassull (2007) relatam que, em contraste com a colite ulcerativa e a inflamao aguda da mucosa intestinal, os benefcios da terapia com probiticos na preveno da reincidncia/reapario da doena de Crohn esto longe de serem provados. Ainda os prebiticos, como os frutooligossacardios, produzem efeitos benficos sade humana, reduzindo o colesterol e prevenindo alguns tipos de cncer (PASSOS e PARK, 2003). VALOR NUTRITIVO
16 ___________________________________________________________ Os alvos de estudo mais comuns na avaliao do valor nutritivo de estirpes probiticas so os produtos lcteos fermentados por lactobacilos e bifidobactrias. Tais produtos contm um elevado teor de nutrientes, que variam com o tipo de leite utilizado, o tipo de microrganismo adicionado e o processo de fabricao escolhido. De uma forma geral, o aumento da digestibilidade das protenas e gorduras, a reduo do contedo em lactose (de particular importncia para os indivduos com intolerncia lactose), a absoro aumentada de clcio e ferro, o equilbrio de contedo em vrias vitaminas e a presena de alguns metablitos secundrios, acoplados presena de clulas probiticas viveis, fazem dos leites fermentados um dos alimentos naturais mais valiosos recomendados para o consumo humano (GOMES e MALCATA, 2002). Barrenetxe et al. (2006) estudaram o efeito de dietas suplementadas com probiticos sobre a funcionalidade intestinal de ratos. Para tal, animais jovens (28 dias) da raa Swiss foram distribudos em trs grupos experimentais (controle, Lactobacillus casei e Bifidobacterium bifidum), os quais receberam dieta comercial durante 4 semanas acrescido dos respectivos probiticos diludos em leite, com concentrao de 108 UFC/mL. De acordo com os resultados, ambas as cepas bacterianas aumentaram a atividade imune, enzimtica e de captao de nutrientes do intestino delgado sem prejudicarem o desenvolvimento normal dos animais. VALOR TERAPUTICO Inibio de infeces intestinais, um dos valores teraputicos atribudos s bactrias probiticas, est alicerado em mecanismos de ao bem estabelecidos e reconhecidos pela comunidade cientfica. O epitlio intestinal desempenha um papel de barreira imunolgica, estabelecendo a interface entre o contedo luminal e as clulas imunolgicas subepiteliais. Qualquer perturbao a esta barreira, desencadeada por antgenos dietticos, microrganismos patognicos, agentes qumicos ou radiaes, conduz a um aumento da permeabilidade intestinal e a alteraes estruturais no epitlio, as quais podem ocasionar aumento do fluxo de antgenos e provocar diversos tipos de inflamao (GOMES e MALCATA, 2002). Existem comprovaes de que a administrao conjunta de glutamina e probiticos na alimentao enteral de pacientes vtimas de traumatismo crnio-enceflico reduz significativamente a ocorrncia de infeco (LOPES et al., 2007).
17 ___________________________________________________________ Arvola et al. (1999) realizaram um teste duplo cego controlado em 119 crianas (idade mdia de 4,5 anos) que receberam antibiticos para infeces respiratrias, juntamente com cpsulas de L. rhamnosus GG ou de placebo. Observou-se manifestao de diarria em 5% das crianas que receberam o probitico e em 16% das que receberam o placebo (p = 0,05). J no estudo de Thomas e colaboradores (2001) no se pode observar a diminuio do risco de diarria no teste controlado contra placebo em 267 adultos hospitalizados (29,3% versus 29,9%). Desta forma, possvel que os efeitos variem em funo da regio ou tambm da idade. Timmerman et al. (2007) demonstraram que o tratamento de ratos com peritonite bacteriana utilizando a associao da glutamina e probiticos confere um maior trofismo na mucosa, diminuindo o estresse infeccioso. McFarland et al. (1995, apud Marteau e Seksik, 2004) observaram que adultos que tiveram diarria devido ao Clostridium difficilis pela primeira vez, o tratamento com 1g/dia de probitico S. boulardii durante quatro semanas no foi significativo. Entretanto em indivduos que tinham uma reincidncia da infeco, foi observada uma reduo de metade do risco de reincidncia de tal diarria (34,6 % vs 64,7 %, p = 0,04). Para obteno destes resultados foram utilizados tambm testes com placebo. Surawicz et al. (2000) trataram adultos com reincidncia de diarria devido ao C. difficile com forte dose de vancomicina e posteriormente com S. boulardii (1 g/dia, n=18) ou placebo (n=14) durante 28 dias. Observaram que o risco de reincidncia de C. boulardii foi de 16,7% para o grupo que recebeu o probitico e de 50% para o grupo com placebo. Rembacken et al. (1999) realizaram um estudo controlado com 116 pacientes que tinham colite ulcerativa, a fim de avaliar a eficincia de uma estirpe de E. coli no patognica (Nissle 1917) versus Mesalazine (considerado um eficiente anti-inflamatrio) na preveno de tal doena. Os autores observaram que o probitico E. coli no patognico teve a mesma eficincia que a droga farmacolgica na reduo da colite ulcerativa. Em relao s crianas assistidas por centros de tratamento especializados, Weizman et al. (2005) investigaram o efeito de duas diferentes espcies de probiticos na preveno de infeces gastrointestinais e respiratrias. Por meio de estudo duplo-cego, placebo-controlado e randomizado, 201 crianas nascidas a termo, entre 4 e 10 meses de idade foram, aleatoriamente, divididas em 3 grupos, que receberam diferentes tratamentos, durante 12 semanas: as alimentadas com frmulas contendo Bifidobacterium lactis (n=73, teste 1) ou Lactobacillus reuteri (n=68, teste2) e placebo (n=60). As crianas que receberam
18 ___________________________________________________________ suplementao (teste 1 ou 2) quando comparadas ao placebo, mostraram menos episdios de febre e diarria, sendo estes episdios com menor durao. Tais efeitos foram mais proeminentes para o teste 2. Em relao infeco respiratria no foi observada nenhuma modificao entre os tratamentos. Em um estudo desenvolvido por Gotteland et al. (2006) objetivou-se avaliar o efeito do consumo de um produto contendo Lactobacillus johnsonii La1, em diferentes concentraes, sobre a homeostase da microbiota intestinal. Foram avaliados 8 indivduos saudveis assintomticos, os quais consumiram na primeira semana de teste 100 mL de um produto contendo 108 UFC/mL, na segunda 200 mL e 500 mL na terceira semana. A excreo fecal de La1 aumentou durante o perodo experimental at o 14 dia. Entretanto, observou-se aumento das populaes de Lactobacillus (p=0,056) e Bifidobacterium (p=0,067) e reduo de F. prausnitzii, um microrganismo potencialmente patognico. Os resultados demonstraram que o consumo regular de La1 capaz de modular favoravelmente a microbiota intestinal. Semelhante a esse estudo, Obregn e colaboradores (2003) avaliaram o consumo regular de um produto contendo Lactobacillus johnsonii La1 e os efeitos sobre a colonizao por Helicobacter pylori (Hp) de indivduos Hp positivo. Os resultados indicaram que a ingesto regular do probitico pode modular a colonizao por H. pylori, sendo benfica a microbiota intestinal de indivduos Hp positivo. Interessantes resultados foram obtidos por Olivares et al. (2006), que avaliaram os efeitos de duas cepas de probiticos sobre o sistema imune de indivduos adultos. Trata-se de um estudo randomizado, duplo-cego, ensaio clnico placebo controle que avaliou a atividade das cepas Lactobacillus gasseri (CECT 5715) e Lactobacillus coryuniformis (CECT 5711), as quais foram comparadas com um iogurte padro. Foram recrutados 30 voluntrios saudveis (15 mulheres) com idade entre 23 a 43 anos. Foram coletadas amostras sanguneas antes e aps o perodo experimental e amostras de fezes foram coletadas semanalmente. O consumo dos produtos contendo as cepas e de iogurte promoveu o aumento das concentraes e da atividade de clulas fagocticas, como moncitos e neutrfilos. Entretanto, quando combinados, as duas cepas promoveram o aumento das concentraes de clulas natural killer e IgA. Assim, as cepas testadas apresentaram melhores efeitos sobre o sistema imune, em relao ao padro, sendo os efeitos maiores aps duas semanas de tratamento. Liong e Shah (2005) investigaram as habilidades de remoo do colesterol de 11 cepas (Lactobacillus acidophilus e L. casei) para entender os possveis mecanismos de ao. E concluram que todas as 11 cepas apresentaram capacidades variadas para remover colesterol
19 ___________________________________________________________ in vitro, e propuseram como possveis mecanismos de ao a assimilao do colesterol durante o crescimento, a incorporao do colesterol na membrana da clula e a ligao do colesterol na superfcie da clula. As cepas L. casei ASCC 292 e L. acidophilus 4962 foram as que mais removeram o colesterol, indicando que estas cepas podem ser candidatas promissoras usadas como um suplemento diettico para abaixar o colesterol srico in vivo. Greany et al. (2004) avaliaram o efeito dos probiticos Lactobacillus acidophilys e Bifidobacterium longum na melhora do efeito das isoflavonas de soja em reduzir os nveis sricos de lipdios sanguneos. Participaram do estudo 37 mulheres que receberam tratamentos distintos: isolado de protena de soja (com isoflavona), isolado de protena do leite (sem isoflavona) e isolado de protena de soja adicionado dos probiticos estudados (isoflavona + probiticos). Comparando-se o isolado de protena de soja ao do leite, o feito das isoflavonas foi evidente, observando-se reduo de 2,2% (p=0,02) e 3,5% (p=0,005) nos nveis de colesterol total e LDL, respectivamente e aumento de 4,2% (p=0,006) no nvel de HDL. No entanto, o isolado de protena de soja adicionado de probiticos no desempenhou nenhum efeito adicional sobre os nveis de colesterol total e fraes LDL e HDL. O leite materno essencial ao aleitamento de neonatos por favorecer o desenvolvimento intestinal de bifidobactrias que participam da preveno de infeces e da modulao imune do indivduo. Entretanto, o desenvolvimento de novas formulaes infantis contendo agentes probiticos se faz necessrio em virtude do aleitamento materno nem sempre ser possvel (HUET et al., 2006). Entre os benefcios creditados aos produtos de laticnio probiticos incluem-se: promoo do crescimento, em estudos com ratos e aves; produo de vitaminas (riboflavina, niacina, tiamina, vitamina B6, vitamina B12, cido flico); aumento na absoro de minerais; aumento da resposta imune, pela elevao na produo de imunoglobulina A; diminuio da populao de patgenos, atravs da produo de cido actico e cido lctico e de bacteriocinas; reduo da intolerncia lactose; supresso de enzimas microbianas potencialmente prejudiciais, associadas com o cncer de clon, em animais; estabilizao da microbiota intestinal, especialmente aps severos estresses intestinais ou uso de antibiticos; alvio da constipao; reduo do colesterol sangneo; e efeito antimutagnico (SGARBIERI e PACHECO, 1999). De uma forma geral, Urgell et al. (2005) salientam que os principais usos e indicaes dos probiticos em clnica e alimentao infantil so para a preveno e tratamento de diarrias infecciosas; para a modulao do sistema imune; para o tratamento de intolerncia
20 ___________________________________________________________ lactose; para a sntese ou produo de subprodutos metablicos com ao protetora intestinal, e para a promoo endgena de mecanismos protetores para dermatite atpica e alergia de alimentos. Tendo em vista tantos benefcios, a divulgao dos efeitos positivos dos probiticos crucial. Segundo Reid e Hammond (2005), o conhecimento mdico das provas clnicas do uso de probiticos vai ajud-los a sentirem-se confortveis a recomendar o uso de suplementos contendo probiticos. CONSIDERAES FINAIS A dieta o foco para manter uma vida saudvel diminuindo os riscos de desenvolvimento de doenas crnicas, como doenas gastrointestinais, cardiovasculares, cncer, osteoporose, bem como a promoo de uma velhice saudvel. Atualmente, existe um forte apelo por alimentos saudveis e a indstria alimentcia a grande responsvel para o desenvolvimento desses produtos. A maior conscientizao dos consumidores faz com que a indstria voltada para o desenvolvimento de produtos com alegaes de funcional cresa por todo o mundo. A definio de probiticos sugere que a segurana e a eficcia destes produtos devem ser demonstradas para cada cepa e cada produto. Cepas selecionadas, principalmente pertencentes aos gneros Lactobacillus e Bifidobacterium, so cada vez mais utilizadas como probiticos. Estudos recentes contriburam para o conhecimento do mecanismo e do efeito dos probiticos na sade. Estudos com humanos demonstram que cepas probiticas especficas, trazem benefcios na sade da populao humana. No entanto, os atuais probiticos no so selecionados para fins especficos, sendo necessrios novos mtodos para selecionar e caracterizar as cepas probiticas com alvos determinados. REFERNCIAS AMERICAN DIETETIC ASSOCIATION (ADA). Position of the American Dietetic Association: Functional Foods. Journal or American Dietetic Association, v. 104, n. 5, p. 814-826, 2004.
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