MEMORIA PRACTICAS FISIOLOGA

Jorge Calpe Ruano

PRACTICA 1.- FENMENOS OSMTICOS EN LOS ORGANISMOS VIVOS

En esta prctica veremos cmo afecta la tonicidad de un medio a las clulas. Para ello analizaremos una muestra de sangre en tres disoluciones de NaCl a distinta concentracin: 0,9; 0,5; 0,2. Material.Tubos de ensayo Bascula Fotmetro Desarrollo practica.Preparamos las disoluciones de NaCl en sus distintas concentraciones, donde aadimos los eritrocitos. Se centrifugan las muestras y analizamos el nivel de hemoglobina disuelto con el fotmetro (a mayor concentracin mayor es la absorbancia). Comparamos los datos obtenidos con los valores de una curva patrn de absorbancia y concentracin de hemoglobina conocida, para averiguar la hemoglobina disuelta en nuestro experimento. Resultados y anlisis.Resultados curva patrn Concentraci n 0 10 20 40 80 Absorbancia 0 0,022 0,041 0,110 0,177 Gradilla Pipeta y propipeta Esptula Centrfuga Muestra sangre conejo NaCl 2%

Ahora sobre la grfica, hacemos una estimacin de la concentracin de hemoglobina disuelta en nuestras disoluciones. Concentracin NaCl 0,2 0,5 0,9 Absorbancia 0,183 0,081 0,002 Concentracion Hb 156 74 2

Con esta prctica hemos averiguado qu ocurre a las clulas cuando cambia la tonicidad del medio externo. Mediante fenmenos osmticos, se produce la difusin de disolvente desde la disolucin ms diluida a la ms concentrada, en este caso las concentraciones de NaCl llevadas a anlisis muestran este comportamiento. En el primer caso, NaCl 0,9%, debido a que la concentracin es similar a la de las clulas sanquneas (medio isotnico) no ocurre nada, de ah que el valor de hemoglobina disuelta tras el anlisis con el espectrofotmetro sea cercana a 0, si fuera hipertnico lo que ocurrira es que saldra agua del interior de la clula deshidratndose (plasmlisis). En de de de la muestra de NaCl 0,5% vemos tras el centrifugado la presencia precipitado rojo en el fondo del tubo, lo que nos indica la entrada agua al interior celular, hinchndolas, provocando rotura de parte los eritrocitos y la liberacin de hemoglobina (hemlisis).

En el medio ms hipotnico (NaCl 0,2%) se produce de forma ms brusca y en mayor cantidad, lo visto en el anterior caso, rotura de eritrocitos y precipitado de hemoglobina.

PRACTICA 2.- HEMATOLOGA

Esta prctica est dividida en varios apartados, en la primara parte haremos recuento de eritrocitos en una cmara cuentaglbulos, luego veremos el volumen de eritrocitos y plasma contenido en una muestra de sangre (hematocrito). Finalmete identificaremos con la ayuda de un microscopio los distintos leucocitos de una muestra se sangre, y hallaremos nuestro grupo sanguneo. Material.Cmara cuentaglbulos Tubo eppendorf Liquido de dilucin Bascula Tampn Dacie Portaobjetos Reactivos de tincin Desarrollo practica.Diluimos la muestra de sangre 1/200 con el tampn Dacie. Llenamos la cmara cuentaglbulos con parte de la disolucin y con la ayuda del microscopio hacemos un recuento de clulas. Para hallar el volumen de eritrocitos en sangre basta con llenar un capilar con la muestra de sangre, al que tapamos un extremo y centrifugamos. Tras unos minutos la muestra presentar dos fases bien diferenciadas, una sedimentada de eritrocitos y otra lquida de plasma, entre ellas una ligera capa de glbulos blancos y plaquetas. Con la ayuda de un lector o una regla hallaremos el volumen de eritrocitos de la muestra. Tras una serie de clculos hallaremos el nmero de eritrocitos por mm. Ahora identificaremos distintos tipos de leucocitos a microscopio, para ello sobre un porta con una gota de sangre se har una extensin con la ayuda de otro porta. Se tie la muestra para fijar el color de las clulas. Finalmente se analiza la muestra en el microscopio. En mi caso analiz una muestra de sangre dada de conejo y una muestra propia de sangre. Por ltimo hallaremos el grupo sanguneo mediante la presencia de antgenos y anticuerpos en la muestra de sangre. Dependiendo de la aglutinacin de las muestras conoceremos en grupo sanguneo. Resultados y anlisis.El recuento de 80 celdillas de la cmara nos da un total de 603, con una media de 7.54 clulas por celdilla. Ahora sabiendo el volumen de cada celdilla (2.5x105 ) y multiplicndolo por 200 (debido a la Microscopio Palillos de madera Plastilina Micropipeta Centrfuga de hematocrito Regla Sueros anti-

dilucin inicial de la muestra de sangre) obtenemos 6.03x 106 eritrocitos por mm. Si queremos saber el volumen de un eritrocito, habiendo hallado el hematocrito, con un valor de 45.16% de eritrocitos nos da un valor medio de 74.89 m (VCM) Estos datos nos muestran valores normales de nmero de eritrocitos, hematocrito y volumen corpuscular, y similares a los que dara en un barn adulto medio. En el apartado de la identificacin de leucocitos en microscopio se pudo observar de mayor a menor proporcin: neutrfilos> linfocitos> monocitos> eosinfilos. La ltima parte se pudo observar el grupo sanguneo analizando tres gotas de sangre con anti-A, anti-B y anti-Rh. Al mezclar las muestras se ven posibles aglutinaciones debido a que los anticuerpos actan contra los antgenos del grupo. Es decir la sangre A crea anticuerpos contra B, B contra A, y en antgeno D, presente en el Rh+ ser atacado por los anticuerpos que desarrolle el Rh-. En mi caso aglutin el anti A y anti Rh, obteniendo mi grupo: A+

PRACTICA 3.- PROCESOS DIGESTIVOS

En esta prctica se har una simulacin de la digestin de arroz, sobre la glucosa obtenida, comparndolo con la sacarosa. El fin es analizar la degradacin del almidn en distintos ambientes Material.Frascos de boca ancha Arroz crudo, cocido, y harina de arroz Enzima -amilasa Enzima Sacarasa Incubador Agitadores orbitales Espectrofotmetro Glucosa Tubos de vidrio Reactivo de glucosa Desarrollo practica.Preparamos las disoluciones de arroz con -amilasa (parte de estas muestras se separar para analizarlas con el fotmetro) poniendo los botes en distintas condiciones ambientales: harina a 4C, harina a 37C sin agitar, harina a 37C agitada, arroz crudo a 37C agitado, y arroz cocido a 37C agitado En las muestras extradas aadiremos maltasa y ms tarde reactivo de glucosa para analizar la glucosa disuelta, comparndola con las muestras de glucosa y sacarosa( una de ellas se le aadir sacarasa). Analizamos los valores de absorbancia obtenidos. Cada 40 minutos haremos extracciones de los botes a los que repetiremos el paso anterior de aadirle enzimas y analizar absorbancias, hasta un total de 4 anlisis. Resultados y anlisis.T= 0 Harina de arroz absorvanci a [glucosa]* Arroz crudo absorvanci a 0.053 Harina de arroz hielo picado - absorvancia T=40 0.082 T=80 0.075 T=120 0.086 Sacarosa Enzima Maltasa Balanza Gradilla

0.0455

- [glucosa]* Harina de arroz sin agitacion a 37C - absorvancia - [glucosa]*

0.0705

0.064

0.074

0.033

0.107

0.156

0.181

0.0284

0.092

0.134

0.156

[glucosa]* Arroz cocido absorvanci a [glucosa]* Sacarosa absorvanci a [glucosa]* Sacarosa control absorvanci a [glucosa]* Glucosa absorvanci a - [glucosa]

0.041

Harina de arroz agitado a 37C - absorvancia - [glucosa]* Arroz crudo agitado a 37C - absorvancia

0.225

0.345

0.368

0.0352

0.193

0.296

0.316

0.497

0.060

0.076

0.075

0.0352

- [glucosa]* Arroz cocido agitado a 37C - absorvancia

0.05

0.065

0.064

0.138

0.152

0.188

0.143

0.1187

- [glucosa]*

0.131

0.161

0.123

1.163

1
* valores calculados sobre la absorbancia obtenida de la muestra de glucosa patrn

De lo obtenido podemos concluir que el orden de degradacin del almidn de arroz es el siguiente: Harina arroz 4< arroz crudo agitado a 37< arroz cocido agitado a 37< harina arroz sin agitar 37< harina de arroz agitado a 37 Esto quiere decir que a temperatura corporal nuestra, muy masticado y mezclado, el intestino absorber mucho mejor el producto de degradacin del almidn, la glucosa.