CROMATOGRAFA SOBRE CAPA FINA.

Autores: Gina Camilo Leonardo Resumen En la cromatografa en capa fina la fase estacionaria no se dispone en forma de columna, sino que est constituida, en el primer caso, por una hoja de papel de filtro, y en el segundo, por una capa de absorbente finamente dividido extendida sobre una placa de vidrio o de plstico. El sustrato a analizar se coloca cerca del borde del papel o de la superficie absorbente en forma de una pequea mancha circular, obtenida aplicando una frota de la solucin de la muestra y dejndola secar. Luego, se sumerge este borde de papel o de la placa en el disolvente revelador o de desarrollo que constituye la fase mvil. El disolvente asciende por el papel o la placa por capilaridad, arrastrando consigo el sustrato. Antes de que alcance el extremo superior del papel o la placa, se detiene el flujo de disolvente retirando el papel o la placa de la cmara de desarrollo y se marca un lpiz la posicin alcanzada por el frente del disolvente. Normalmente, el sustrato no se ha desplazado a la misma velocidad que el disolvente, sino que ha quedado retrasado, tanto ms cuanto ms fuertemente era retenido por el papel o el absorbente slido. Se seala tambin la posicin de la mancha de sustrato. Si esta mancha es coloreada su localizacin es inmediata; si es incolora, debe

hacerse visible tanto por mtodos fsicos, como la fluorescencia (emisin de radiacin visible al absorber rayos ultravioleta o UV) y la radiactividad (cuando se trabaja con compuestos marcados por isotopos radiactivos) o por mtodos qumicos, en el cual se utiliza un reactivo qumico (revelador) que reacciona con la sustancia dando productos coloreados o fluorescentes (visibles a la luz ordinaria o UV). Abstract In the paper chromatography and thin layer chromatography the stationary phase is not available as a column, but is constituted, in the first case, a sheet of filter paper, and second, by a layer of finely divided absorbent spread on a glass plate or plastic. The substrate to be analyzed is placed near the edge of the paper or absorbent surface in the form of a small circular spot, obtained by applying a rubbing of the sample solution and letting it dry. Then, dipping the edge of the paper or board in the developer or developing solvent constituting the mobile phase. The solvent travels up the paper or the plate by capillary action, carrying with it the substrate. Before it reaches the upper end of the paper or board, stops the flow of solvent by removing the paper or board the developing chamber and a pencil mark the position reached by the solvent front. Typically, the substrate was moved at the same speed as the solvent, but has been delayed, the more the more strongly was retained by the absorbent paper or solid. Also notes the position of the substrate stain. If this spot is its location is immediately colored, if it is colorless, it should be

visible both by physical methods such as fluorescence (emission of visible radiation by absorbing ultraviolet or UV rays) and radioactivity (when working with radioactive isotopelabeled compounds by ) or by chemical methods, in which a chemical reagent used (developer) which reacts with the substance giving colored or fluorescent products (visible in ordinary light or UV). Palabras claves Cromatografa, cromatografa en capa fina, fase mvil, fase estacionaria. Introduccin La cromatografa es la tcnica que separa una mezcla de solutos basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser arrastrados por una fase mvil (liquida o gaseosa) a travs de un lecho cromatogrfico que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser slida o lquida. Hay que indicar que el nombre de la tcnica es incorrecto, ya que no consiste en escribir con colores. Este nombre proviene de la primera experiencia cromatogrfica realizada, la cual se utilizo para separar pigmentos coloreados de plantas. La cromatografa fue descubierta por el botnico ruso de origen italiano MijailTswett en 1903. Tswett separo los pigmentos de las plantas (clorofila) vertiendo extracto de hojas verde en ter de petrleo sobre una columna de carbonato de calcio en polvo en el interior de una probeta. No obstante, no existen datos sobre la utilizacin de esta tcnica hasta 1930 cuando khun y Lederer

separaron tambin pigmentos de las plantas usando como adsorbentes almina y carbonato de calcio. Fue a partir de ah cuando se inicio el verdadero desarrollo de la cromatografa. Tcnicas cromatogrficas: Segn la forma de llevar a cabo la separacin cromatogrfica, es decir, segn el dispositivo utilizado para conseguir entre la fase mvil y la estacionaria, cabe distinguir dos tipos de tcnicas cromatografcas: en columna y plana. Cromatografa en columna: Se utiliza un tubo cilndrico, en cuyo interior se coloca la fase estacionaria y a su travs se hace pasar la fase mvil. El flujo de la fase mvil (liquido o gas) a travs de la estacionaria se consigue: 1)por presin, 2)por capilaridad, 3) por gravedad. Es de destacar que en la actualidad, aunque incorrectamente, el trmino de cromatografa en columna suele aplicarse a la cromatografa liquida para distinguirla de la cromatografa plana ya que, obviamente la cromatografa de gases solo puede realizarse en columna. Cromatografa plana: La fase estacionaria esta colocada en una superficie plana que en realidad es tridimensional, aunque una de sus dimensiones es muy reducida, por lo que puede considerarse bidimensional. Se divide en dos tipos generales: Cromatografa en papel: en la que el papel acta como soporte de la fase estacionaria (cromatografa de particin). Cromatografa en capa fina: en la que un slido acta como fase estacionaria (cromatografa de

particin), se extiende en una capa delgada sobre una placa, generalmente de vidrio. El flujo de la fase mvil puede conseguirse de dos formas: 1) por capilaridad (cromatografa horizontal y ascendente) y 2) por capilaridad y gravedad (cromatografa descendente). En la cromatografa plana queda excluido el uso de un gas como fase mvil, por lo que sta siempre es lquida. Relaciones de espacio: Cuando la zona del analito no abandona el sistema cromatografico, es preciso sustituir los tiempos o volmenes por distancias. Se emplean poco en cromatografa de columna, pero son fundamentales en cromatografa plana. El parmetro que define el comportamiento de un soluto antes de salir del lecho cromatografico es el denominado Rf, que se define como la relacin entre la velocidad de la zona del soluto y la de la fase mvil, que es la equivalencia a una relacin de longitudes: Rf= Velocidad de la zona del soluto
Velocidad de la fase mvil

mientras que en cromatografa en columna, en condiciones isocraticas, se supone una uniformidad a lo largo de la misma. En la practica, la relacin entre los dos parmetros es: R= Rf/q Siendo q un factor emprico que oscila entre 0.8 y 0.9; es decir, Rf <R Materiales y mtodo En un tubo con tapn cortar espinaca y agregarle etanol, hacer una mezcla de etanol + acido actico + agua destilada 6:2:2 ml, en una placa de slica gel colocar una muestra con un capilar una a tres gotas es suficiente. Dejarla en un vaso con el solvente y ver qu pasa. Despus de obtener el recorrido poner yodo solido en el vaso y observar.

Resultados resultados

discusin

de

Cuando agregamos el solvente en el vaso, en la parte donde utilizamos espinaca, la fase mvil solvente sirve, es decir, nos muestra resultado, en la fase estacionaria la placa silica gel es apolar. Nos muestra tres momentos que son referenciados asi: (Valores tericos para los Rf de los pigmentos: B-caroteno Rf= 0.95 Clorofila a Rf= 0.44 Clorofila b Rf= 0.32 Xantofila Rf= 0.16 Feofitina a Rf= 0.60 Feofitina b Rf= 0.49

=distancia recorrida por la zona del

soluto_________________________ Distancia recorrida por la fase mvil

El Rf es formalmente equivalente al factor de retraso, R, y por tanto, esta relacionado con el factor de retencin. No obstante, su significacin fsico-quimica es algo diferente ya que en cromatografa plana las propiedades de las fases mvil y estacionaria no son constantes a lo largo del lecho,

Rf: clorofilas + etanol= Rf= 1,3= 0,52 se obtiene feofitina b 2.5 RF= 1.8= 0,72 se obtiene feofitina a 2.5 RF= 2.2= 0,88 se obtiene B-caroteno 2.5 Gracias a la sublimacin del yodo se logra observar el desplazamiento en la placa de silica gel del pigmento de espinaca. Conclusiones La tcnica de cromatografa en capa fina (CCF) tiene numerosas ventajas, aparte de ser rpida, sencilla, barata, tiene tambin la ventaja de utilizar poca cantidad de muestra. Otro mtodo absorbente aparte del papel de celulosa es, gel de slice, no pueden prepararse en forma de tiras. Esta dificultad puede superarse fabricando capas finas de estas sustancias sobre placas de vidrio. Se usan dos tipos de capas: capa compacta que se adhiere a la placa de vidrio por medio un agente aglomerante incorporado al absorbente o por las cualidades adherentes del propio material, y capa suelta. y esto es mejorcito. ya no necesitas cloruro frrico.

Varcarcel case M. GomezHens A.1990. tcnicas analticas de separacin. Reverte. Anexos Etanol: se presenta en condiciones normales de presin y temperatura como un lquido incoloro e inflamable con un punto de ebullicin de 78 C. Mezclable con agua en cualquier proporcin; a la concentracin de 95% en peso se forma una mezcla azeotrpica. Su frmula qumica es CH3-CH2-OH (C2H6O), principal producto de las bebidas alcohlicas. Propiedades fsicas Estado de agregacin: Lquido Apariencia: Incoloro Densidad: 789 kg/m3; 0,789 g/cm3 Masa molar: 46,07 g/mol Punto de fusin: 158,9 K (-114 C) Punto de ebullicin: 351,6 K (78 C) Temperatura crtica: 514 K (241 C) Presin crtica: 63 atm Viscosidad: 1.074 mPas a 20 C. cido actico: Frmula HCH2COOH Frmula molecular C2H4O2 Propiedades fsicas Estado de agregacin: lquido Apariencia: incoloro o cristales (no inodoro) Densidad: 1049 kg/m3; 1,049 g/cm3 Masa molar: 60.05 g/mol Punto de fusin: 290 K (17 C) Punto de ebullicin: 391,2 K (118 C)

Bibliografa Frederic Walton Harnold, Harold F. Walton, J Reyes 1978. anlisis qumico e instrumental moderno. Donald Voet, Judith G. Voet 2006. Bioquimica.