UNIVERSIDAD DE

CARTAGENA FACULTAD DE INGENIERIA PROGRAMA DE INGENIERIA DE ALIMENTOS PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS

Z. AMEZQUITA 1, S.X. MENDOZA2, K.J. TORRES2, J.D. MARTINEZ2, L.A. BELTRN2 CARTAGENA 14 DE MARZO DE 2013
1. Docente Universidad de Cartagena 2. Estudiante Ingeniera Alimentos

RESUMEN En esta laboratorio se prepararon tres medios de cultivos diferente, uno solido (agar), uno liquido (caldo nutritivo) y uno semislido (SIM). Estos medios son diferentes porque cada bacteria crece en condiciones ya que estas tienen necesidades diferentes como Ph, nitrgeno, aire, entre otros. Los medios se prepararon de una forma prcticamente igual en lo que se diferencian es q el agar se llevo antes de verter en las cajas de petri a la autoclave por 15 minutos a 121C y los otros se vertieron directamente a los tubos de ensayo. Palabras claves: agar, medio, cultivos, caldo, bacteria. ABSTRACT In this laboratory were prepared three different culture media, one solid (agar), one liquid (nutrient broth) and one semisolid (SIM). These means are different because each bacterium grows in conditions since these have different needs as Ph, nitrogen, air, and others. The media are prepared in a manner substantially equal as they differ is q agar took before pouring the Petri dishes in the autoclave for 15 minutes at 121 C and poured directly to other test tubes. Keywords: agar, medium, cultures, broth, bacteria.

INTRODUCCIN Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado (es decir, se le aaden organismos) y a continuacin incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. El crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Un cultivo axnico o puro contiene un nico tipo de microorganismos. Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante. Los medios de cultivo contienen como mnimo: carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras. El agar es el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriolgicos. Se disuelve completamente a 100C y se solidifica al enfriarse a 40C. De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en: Lquidos se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulacin.

Semislidos contienen 0.5% de agar en su formulacin. Se utilizan para estudiar la movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo). Slidos contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulacin. Estos medios inmovilizan a las clulas, permitindoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias permiten al microbilogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan ms de un tipo de colonia no provienen de un cultivo puro. Las placas de agar tambin se utilizan para la determinacin de clulas viables (recuento en placas). De acuerdo a su composicin, los medios de cultivo pueden clasificarse en: Definidos es aqul medio de cultivo del cual se conoce su composicin exacta. Son muy utilizados en estudios fisiolgicos. Los medios mnimos son medios definidos que nicamente le proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pero no para desarrollarse ptimamente. Complejos es aqul del cual no se conoce la composicin exacta del medio. A menudo, los medios complejos emplean sangre, leche, extracto de levaduras, extracto de carne u otras sustancias muy nutritivas pero de las cuales se desconoce la composicin qumica exacta. Estos medios son muy utilizados para cultivar bacterias desconocidas o bacterias de requerimientos nutricionales muy complejos De acuerdo a su funcin, los medios de cultivo se clasifican como:

Medios selectivos son aqullos que poseen uno o ms componentes aadidos, los cuales inhibirn o prevendrn el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias y/o promovern el crecimiento de las especies deseadas. Uno puede ajustar las condiciones fsicas de un medio de cultivo tales como el pH, la temperatura, para hacerlo selectivo para los organismos de inters. Medios diferenciales permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias con base en alguna caracterstica observable en su patrn de crecimiento en el medio, ya sea por produccin de algn pigmento o por cambios de color en el medio debido a indicadores de pH, o por halos de degradacin de algn componente en el medio de cultivo. Medios de enriquecimiento contienen algn componente que permite el crecimiento de cierto tipo especfico de bacteria, pero no contienen sustancias inhibidoras. Medios enriquecidos se emplean para cultivar microorganismos que requieren un gran nmero de factores de crecimiento. Generalmente contienen extractos biolgicos poco usuales como sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res, yema de huevo, etc. MATERIALES Agar papa dextrosa (PDA). Cilindro de vidrio o madera de aproximadamente 1.5 cm de dimetro. Estufa o plancha con agitador magntico Balanza Agua destilada

Medios deshidratados: Agar nutritivo (AN), Agar Sabouraud (S), caldo nutritivo Cajas de petri estriles Tubos de ensayo 10 x 170 mm (o similar) o tubos para cultivos Erlenmeyer Probetas Pipetas Beaker Filas Papel kraft o de reciclar Vidrios de reloj Esptula Autoclave Estufa Guantes de cuero Gasa PROCEDIMIENTO

Se pesan los gramos de muestra (de acuerdo a las indicaciones del recipiente). Se hidrata con agua destilada dependiendo de cuanta cantidad de muestra se quiere. La solucin que resulta al hidratar se vierte en un Erlenmeyer y se pone en una estufa hasta que est lista. Esterilizar en la autoclave durante 15 minutos y 121 C (solo para el agar) Preparacin del agar plate count Se pesaron 5,6 gramos del agar en polvo A los gramos de agar se le adicionaron 250 ml de agua destilada todo esto en un Erlenmeyer luego esta solucin se calienta en una estufa agitando para que no se formen grumos. Despus que esta comience a hervir se retira de la estufa

Se tapa y se lleva esto a la autoclave por 15 minutos y 121 C

principalmente, de las algas rojas o Rodoficeas, de las especies aragophytas. Es una sustancia amorfa, que en el comercio se encuentra en forma de polvo, escamas, bloques rectangulares y haces de tiras delgadas.

3 Que es un medio cultivo natural y sinttico? RTA: medio de cultivo natural es aquel que se preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Medio de cultivo sinttico son aquellos que contienen en su composicin exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de composicin perfectamente definida

Luego se tomaron 10 cajas de petri y a las cuales se le agregaron 25 ml de agar.

RESULTADOS Los resultados que obtuvimos en este laboratorio fue que al someter la mezcla de agar plate count y agua destilada al calentamiento se pone de un color pardo. CONCLUSIN Se reconocieron los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de microorganismos aplicando conceptos bsicos de nutricin PREGUNTAS 1 Qu es un medio de cultivo y para que se utiliza? RTA: es un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos, clulas, tejid os vegetales o incluso pequeas plantas. 2 Qu es el agar y cul es su procedencia? RTA:
El ficocoloide Agar-Agar es un extrado

4. Escriba el nombre y formula de sustancias que son utilizadas en los medios de cultivo como fuentes de; carbono, nitrgeno, fosforo y azufre RTA:

Fuente de energa: Por oxidacin de compuestos qumicos o usar energa radiante. Fuentes de Carbono: Como carbohidratos (Azucares y otros hidratos de Carbonos). Fuentes de Nitrgeno: Como protenas y sus productos de degradacin. Sustancias qumicas: En pequeas concentraciones tales como sodio, potasio, magnesio, calcio, hierro, zinc y manganeso. 5. Qu factores fsicos y qumicos pueden afectar la estabilidad de los medios de cultivo?

RTA: disponibilidad de nutrientes adecuados, condiciones adecuadas de humedad, Luz ambiental, pH, Temperatura.

10. Que significa termorresistencia en microbiologa? RTA: es la cualidad que tiene un organismo para resistir temperaturas extremas. 11. Usualmente, como se esterilizan las cajas de Petri y las pipetas?

6. Esquematice una autoclave e indique sus partes

12. Cmo se verificara que un medio de cultivo procesado en la autoclave quedo realmente esterilizado? 13. Por qu un caldo no se hierve despus de ser preparado? RTA: porque perdera las condiciones optima que necesita el microorganismo para creer. 14. Explique cules son las diferencias entre esterilizacin, desinfeccin y asepsia. BIBLIOGRAFIA

7. Cul es el mecanismo por el cual el vapor saturado a presin mata los microorganismos? RTA: esterilizacin por vapor hmedo y alta presin en la autoclave 8. Cuales son los mtodos ms corrientes utilizados para esterilizar? RTA: mtodos qumicos (alcoholes, fenoles, aldehdos) y mtodos fsicos (calor hmedo, calor seco, pasteurizacin, radiacin, vapor, ebullicin, evaporacin) 9. Ciertos organismos poseen la estructura biolgica ms termoresistentes, para supervivencia. Cual es y en que microorganismos se encuentra?

[1] http://www.mcd.com.mx [2]http://www.ucv.ve/fileadmin/

user_upload/facultad_farmacia/ catedraMicro/leifson.pdf
[3]http://www.scribd.com/doc/6

2583918/7/Agar-Hierro-TresAzucares-TSI-y-Agar-Kligler