1. Tema: Identificacin de Streptococcus y Staphylococcus a partir de cepas puras. 2.

Objetivos

2.1. General: Identificar Streptococcus y Staphylococcus a partir de cepas puras. 2.2. Especficos
2.2.1. Determinar a qu pruebas son sensibles de manera general los Staphylococcus para de esta manera poder diferenciar cualitativamente este gnero de otros. 2.2.2.Plantear el fundamento de la prueba bioqumica catalasa para Staphylococus. 2.2.3.Establecer la patogenicidad de Staphylococcus aureus en humanos 2.2.4. Determinar la naturaleza y el grupo del Streptococcus analizado mediante las pruebas de sensibilidad a la bacitracina.

3. Marco terico

Streptococcus
En los esquemas taxonmicos tradicionales la familia Streptococcaceae incluye cocos Gram - positivos, catalasa-negativos que tienden a crecer en pares o en cadenas, los cuales se diferencian de la familia Micrococcaceae (Staphylococcus y Micrococcus ) por cuantos estos ltimos son catalasa- positivos. Sin embargo, estudios filogenticos recientes cuestionan la posicin taxonmica real de la familia Streptococcaceae y han aumentado considerablemente los gneros y las especies relacionadas a Streptococcus. La mayora de los gneros relacionados a Streptococcus tienen un metabolismo anaerbico facultativo en donde los gneros Streptococcus y Enterococcus son importantes patgeno para el ser humano y animal. Algunos otros gneros muestran un metabolismo anaerbico estricto, de los cuales, nicamente los gneros Peptococcus y Peptostreptococcus se encuentran en infecciones en el ser humano. El gnero Streptococcus incluye un grupo filogentica y fenotpicamente heterogneo de bacterias que pueden ser frecuentemente encontrados parasitando a humanos y animales. Algunas especies pueden ser patgenas y otras comensales avirulentos que forman parte de la flora normal del tracto respiratorio y tracto genital, colonizando adems piel y membranas mucosas. Las especies del gnero Streptococcus son bacterias anaerobias facultativas esfricas u ovales que miden menos de 2 m de dimetro. Mediante tincin de Gram se pueden observar como cocos Gram- positivos que se encuentran frecuentemente formando parejas o cadenas.

Caractersticas del gnero Streptococcus.

El gnero Streptococcus incluye un grupo filogentica y fenotpicamente heterogneo de bacterias que pueden ser frecuentemente encontrados parasitando a humanos y animales. Algunas especies pueden ser patgenas y otras comensales avirulentos que forman parte de la flora normal del tracto respiratorio y tracto genital, colonizando adems piel y membranas mucosas. Las especies del gnero Streptococcus son bacterias anaerobias facultativas esfricas u ovales que miden menos de 2 m de dimetro. Mediante tincin de Gram se pueden observar como cocos Gram- positivos que se encuentran frecuentemente formando parejas o cadenas. Entre otras caractersticas importantes destacan su no-movilidad, carecen de flagelos y no forman esporas, adems de que todas las especies reaccionan negativamente a la catalasa. Las especies del gnero Streptococcus son bacterias relativamente fastidiosas con requerimientos nutricionales que varan segn la especie. La mayora de las especies crecen adecuadamente en medios nutritivos enriquecidos con sangre o suero. Algunas cepas requieren de atmsferas elevadas en CO2 (5-10%), lo cual incrementa el crecimiento y la actividad hemoltica.

Pruebas bioqumicas de identificacin de Streptococcus y Enterococcus Actividad hemoltica.

La hemlisis observada en los aislamientos de Streptococcus y Enterococcus en diferentes muestras clnicas es una de las primeras caractersticas sugestivas de posibles especies. Algunas especies muestran una hemlisis completa (hemlisis ) alrededor de las colonias en agar sangre, como S. pyogenes, S. agalactiae (aunque algunos aislamientos

aparecen como no-hemolticos), Streptococcus de los grupos C, F y G, as como algunas cepas de Enterococcus, aunque, como se indic anteriormente, el fenotipo hemoltico en Enterococcus es muy variable. Otras especies pueden mostrar una hemlisis incompleta (hemlisis alfa) alrededor de las colonias en agar sangre, incluyendo S. pneumoniae, Streptococcus del grupo D y del grupo viridans. Al realizar la determinacin de los patrones hemolticos de los aislamientos de Streptococcus y Enterococcus es importante considerar que muchas de sus citolisinas (hemolisinas) son lbiles al O2, por lo que las bacterias deben ser inoculadas dentro del agar para proporcionar un ambiente relativamente anaerbico. Asimismo, los patrones hemolticos varan grandemente dependiendo del tipo de eritrocito que se ha utilizado en la preparacin del agar sangre. Particularmente, los patrones hemolticos utilizados en la identificacin de especies de Streptococcus y Enterococcus se han determinado usando eritrocitos ovinos o bovinos, los cuales pueden variar si se utilizan eritrocitos humanos, equinos o de conejo. La prueba de CAMP se utiliza para la identificacin presuntiva de S. agalactiae (grupo B de Lancefield). En esta prueba se observa un efecto sinrgico que se produce al interactuar el factor CAMP producido por cepas de S. agalactiae con la hemolisina de Staphylococcus aureus. Ambos son productos extracelulares que difunden en el medio de cultivo para producir dicho efecto en forma de flecha cuando se utilizan placas de agar sangre preparada con eritrocitos ovinos o bovinos. Una vez inoculados, los medios de cultivo deben ser incubados a 35-37C por 18-24 horas. Algunos autores recomiendan no incubar las placas de agar sangre para la prueba de CAMP en una atmsfera enriquecida con CO2 debido a un probable efecto inhibitorio sobre el sinergismo.

Prueba de CAMP (Christie, Atkins, Munch-Petersen) .

Prueba de hidrlisis de esculina.

Esta prueba se utiliza para la identificacin presuntiva de Streptococcus del grupo D, como S. bovis y S. equinus, y de las especies de Enterococcus, todos los cuales dan esta prueba positiva. Esta prueba se realiza utilizando un medio llamado agar bilis-esculina, el cual contiene 4% de sales biliares y 1% de esculina. La hidrlisis de la esculina resulta en la formacin de glucosa y esculetina. La esculetina en presencia de Fe3+ forma un complejo de color negro. Por lo tanto, las bacterias que crecen en presencia de las sales biliares e hidrolizan esculina tornan el medio de color negro, generalmente en un periodo de incubacin de 18-24 horas a 35-37C. La presencia de crecimiento pero sin la formacin del color negro se considera como una prueba negativa.

Prueba de crecimiento (tolerancia) en 6.5% de NaCl.

Esta prueba permite diferenciar las especies de Enterococcus (crecimiento positivo en presencia de6.5% de NaCl) de los Streptococcus del grupo D (crecimiento negativo en presencia de 6.5% de NaCl). El microorganismo en estudio se inocula en un caldo tripticasa soya conteniendo 6.5% de NaCl. Luego de un periodo de 18-24 horas a 35-37C se observa la presencia o ausencia de crecimiento en el medio de cultivo.

Prueba de resistencia al optoquina.

La prueba de resistencia a la optoquina (hidrocloruro de hidrocuprena) permite la diferenciacin de Streptococcus pneumoniae (sensible al optochin) de otros Streptococcus - hemolticos como los Streptococcus del grupo viridans (resistentes al optochin). Para la realizacin de esta prueba el microorganismo en estudio debe ser inoculado densamente en una placa de agar sangre y sobre el inculo se coloca un disco conteniendo optochin (rotulado con una P) , el cual se presiona levemente para que se adhiera a la superficie del medio. Las placas de agar sangre son posteriormente incubados a 35-37oC por un perodo de 18-24 horas en una atmsfera enriquecida con CO2. La mayora de los discos conteniendo optochin disponibles comercialmente tienen un dimetro de 6 mm. Utilizando estos discos de 6 mm para la prueba de resistencia al optochin, un resultado se considera negativo (susceptible) cuando el halo de inhibicin mide al menos 14 mm de dimetro. Sin embargo, algunas pocas casas comerciales tienen a disposicin discos conteniendo optochin de 10 mm de dimetro. En este caso, un halo de inhibicin igual o superior a 16 mm de dimetro se debe interpretar como un resultado negativo (susceptible).

Prueba de resistencia a la bacitracina.

La prueba de resistencia a la bacitracina se utiliza para la diferenciacin presuntiva de Streptococcus -hemolticos del grupo A de Lancefield (S. pyogenes) de otros Streptococcus - hemolticos como S. pyogenes que se muestra sensible a la bacitracina mientras que otros Streptococcus -hemolticos son generalmente resistentes a la basitracina. Para

realizar esta prueba, el microorganismo en estudio se debe inocular densamente en una placa de agar sangre y sobre el inculo se coloca un disco conteniendo 0.04 unidades de bacitracina (rotulado con una A o una B) el cual se presiona levemente para que se adhiera a la superficie del medio. Las placas de agar sangre son posteriormente incubados a 35-37C por un perodo de 18-24 horas en una atmsfera aerobia no enriquecida con CO2. La presencia de cualquier halo de inhibicin se considera como negativo (susceptible), mientras que el crecimiento bacteriano hasta el borde del disco se considera como positivo (resistente).

Importancia clnica A pesar de las enfermedades infecciosas que causan algunas especies de estreptococo, otras no son patgenas. Los estreptococos forman parte de la flora saprfita de la boca, piel, intestino y el tracto respiratorio superior de los humanos. Por regla general, las especies individuales de los estreptococo se clasifican basados en sus propiedades hemolticas. Estreptococo Alfa-Hemoltico Neumococo
S. pneumoniae, causante de neumona bacteriana, otitis media y meningitis. Son diplococos gram positivos. Al microscopio ptico se ven como cocos Gram positivas de aspecto lanceolado (forma de grano de arroz). En cultivo en agar sangre de cordero se observan a la lupa de luz como colonias umbilicadas (elevacin central) Viridans y Otros S. mutans, un contribuyente para caries dental. S. viridans, causa de endocarditis y Abscesos dentales. S. thermophilus, usado en la manufactura de algunos quesos y yogurts. S. constellatus, patgeno humano ocasional, notable como colonias con crecimiento en Agar Sangre con fuerte olor a caramelo.

Estreptococos Beta-Hemolticos Grupo A

S. pyogenes (tambin conocido como GAS) es el agente causal en las infecciones estreptoccicas del Grupo A, (GAS) incluyendo faringitis estreptoccica ("amigdalitis"), fiebre reumtica aguda, fiebre escarlata, glomerulonefritis aguda y fascitis necrotizante. Si la amigdalitis no es tratada, puede desarrollarse fiebre reumtica, una enfermedad que afecta las articulaciones y las vlvulas cardiacas. Otras especies de Streptococcus tambin pueden poseer el antgeno del Grupo A, pero las infecciones en humanos por cepas no-S. pyogenes GAS (algunas cepas S. dysgalactiae subsp. equisimilis y del Grupo S. anginosus) parecen no ser comunes. La infeccin por Estreptococo Grupo A es diagnosticada generalmente con una Prueba Rpida de Estreptococos o mediante Cultivo. El mtodo ms comnmente empleado en los laboratorios clnicos para la identificacin presuntiva en cultivos de Streptococcus Beta-hemoltico del grupo A (Streptococcus pyogenes) es la prueba de susceptibilidad a la bacitracina o Taxo A. Otra manera es detectar el antgeno A mediante enzimoinmunoanlisis o inmunoaglutinacin.

Grupo B
S. agalactiae, o GBS, causa neumona y meningitis en neonatos y en las personas ms jvenes, con bacteremia sistmica ocasional. Estos tambin pueden colonizar los intestinos y el tracto reproductor femenino, incrementando el riesgo de ruptura prematura de membranas y la transmisin al infante. El Colegio Americano de Obsttras y Gineclogos, la Academia Americana de Pediatras y los Centros para el Control de las Enfermedades recomiendan a todas las mujeres embarazadas entre 35 y 37

semanas de gestacin la evaluacin para GBS. Las mujeres que obtengan un examen positivo debera recibir antibiticos profilcticos durante la labor, con lo cual usualmente prevendr la transmisin al infante.4 En el Reino Unido, los clnicos han sido lentos en la implementacin de los mismos estndares como en los Estados Unidos, Australia y Canad. En el Reino Unido, solamente un 1% de unidades de maternidad han verificado la presencia del Estreptococo Grupo B.5 Aunque el Real Colegio de Obstetras y Gineclogos expidieron normativas basadas en el riesgo en 2003 (dada la revisin en 2006), la implementacin de estas normativas ha sido irregular. Algunos grupos sienten que como resultado 75 infantes en el Reino Unido mueren cada ao por enfermedad relacionada con GBS y otros 600 o ms sufren infeccin seria, la mayora de los cuales pudieran ser prevenidos6 ; no obstante, esto debe an ser probado por RCT en el escenario del Reino Unido y, dada la evidencia para la eficacia de la evaluacin y tratamiento desde otros pases, podra ser que el necesario ensayo a gran escala no recibira respaldo ni aprobacin tica.

Grupo C
Incluye S. equi, el cual causa enfermedad en caballos, S. zooepidemicus, el cual causa infecciones en varias especies de mamferos incluyendo al ganado y caballos. Este tambin puede ocasionar muerte en gallinas y alces. Muchos habitantes de las montaas en Canad han encontrado cadveres de alces yaciendo en la mitad del camino; las pruebas post mrtem han establecido la presencia de estreptococos del grupo C en su sangre.

Grupo D (Enterococos) hemlisis de tipo variable

Muchos estreptococos del Grupo D han sido reclasificados y ubicados en el Gnero Enterococcus (incluyendo S. faecalis, S. faciem, S. durans, y S. avium).9 Por ejemplo, Streptococcus faecalis se conoce en la actualidad como Enterococcus faecalis. Las cadenas remanentes no-enteroccicas del Grupo D incluyen Streptococcus bovis y Streptococcus equinus.

Estreptococos no hemolticos
Los estreptococos no hemolticos rara vez causan enfermedad. Sin embargo, estreptococos del grupo D betahemolticos dbilmente hemolticos y Listeria monocytogenes no deben ser confundidos con estreptococos no hemolticos.

4. Parte prctica
4.1. Tcnica Realizada en 2012-10-09 Previamente a la realizacin de la prctica nos aseguramos de la asepsia del mesn y laboratorio en general, limpiamos el mesn con tego 2%, posteriormente encendemos los mecheros bunsen para tener un campo de trabajo estril de 30-50 cm. Colocamos los agares previamente preparados en el mesn tapa a bajo. Observamos las cajas Petri que contienen los Staphylococcus y Streptococcus a contra luz y luz reflejada para verificar colonias aisladas, color y hemolisis, trabajando con una sola mano y con las cajas boca abajo en el mesn, buscando la zona ms clara y preferentemente luz natural. En los agares nuevos en los que se vaya a cultivar se marcan con un cdigo asignado, fecha del anlisis y tipoi de anlisis. Sembramos estos microorganismos en las cajas Petri que contienen los agares sangre, eosina azul de metileno y el tubo de tiogligolato correspondientemente en el orden indicado. Para sembrar nos aseguramos de trabajar sentados, de esterilizar el asa en el mechero en forma inclinada, enfriar el asa a los dos lados en un lugar de la placa sin muestra, coger muestra suficiente, abrir la caja Petri donde se va a cultivar con cuidado y mirando hacia

la llama del mechero, realizar el estriamiento en tres campos no muy separado y llegando hasta la mitad de la caja, luego se procede a cerrar la caja con una sola mano e inmediatamente esterilizamos el asa Llevamos los cultivos a 37C y esperamos 18-24 horas Sacamos los cultivos que se encuentran en la estufa y colocamos para su posterior observacin en el mesn previa mente limpiado y desinfectado, el cual debe tener encendidos los mecheros bunsen. Procedemos a observar el crecimiento o no de microorganismos con la tcnica de contra luz y a luz reflejada, nos fijamos en la presencia o no de un halo, su color ya que esto es indicador de una hemolisis producida por la bacteria analizada. Anotamos caractersticas y los resultados obtenidos. Aislamos el cultivo de Staphylococus aureus en un tubo pico de flauta que contiene agar soya-tripticasa para poder contar con este microorganismo en el futuro con fines didcticos. Realizamos la prueba de la catalasa tanto para los Streptococcus y Staphylococcus, y observamos o no un burbujeo. En una caja Petri que contiene agar sangre, dividimos la misma en cuatro partes iguales y codificamos, usamos tantas cajas como sea necesario tomando en cuenta el ahorro y que una caja debe ser utilizda solo para 4.2. Al da siguiente 2012-10-10

Streptococcus, otra solo para Staphylococcus

Procedemos hacer la identificacin de especies para esto seguimos el mismo procedimiento de cultivo antes sealado, con muestra suficiente de Staphylococcus cultivamos en agar sangre en un cuadrante para no desperdiciar el agar de manera densa y con gran cantidad de muestra y posteriormente implantamos el acido nalidxico 30ug, para esto nos aseguramos de poseer las pinzas adecuadas y esterilizar su punta en tres ocasiones en tiempos muy cortos, con esas pinzas colocamos encima del estriado denso y presionamos con toques suaves en tres veces, cerramos la caja boca abajo con una sola mano y llevamos a 35 C de 18 a 24 Horas. Hacemos lo mismo, pero ahora con la caja de manitol salado en cuatro partes o las que sean necesarias, y en esta cultivamos solamente los Staphylococcus para su identificacin, en cada cuadrante y con bastante muestra. Esperamos de 18 a 24 horas y vemos resultados. Para la identificacin de Streptococcus, con el asa cogemos muestra suficiente de Staphylococcus aureus, e inoculamos en la caja de agar sangre como una lnea vertical que cruce la caja para realizar la prueba de Camp. Consecutivamente cogemos muestra suficiente del Streptococcus a determinar e inoculamos en el agar sangre antes sealado, en uno de sus cuadrantes y de manera muy densa manteniendo espacio entre los bordes para no tener problemas de identificar la hemolisis. Debajo del estriado denso trazamos dos lneas perpendiculares al inoculo de Staphylococcus aureus sin topar este inoculo, separados aproximadamente 3mm. Cerramos la caja boca abajo y esterilizamos el asa. El mismo proceso se repite para los dems compaeros de grupo con muestra de Streptococcus. Los cultivos llevamos a 35C por 18 a 24 horas.

Al da siguiente 2012-10-11 Sacamos las cajas con cultivo de Streptococcus en agar sangre colocamos en el mesn previamente limpiado y desinfectado con los mecheros encendidos. Procedemos a observar sus caractersticas a contra luz y luz reflejada, observamos la presencia o no de un halo mayor de 14 mm, contando todo el dimetro del halo que incluye el disco de bacitracina diferencial 0.04. Luego observamos o no la presencia de forma de flecha entre las lneas perpendiculares de Streptococcus y

Staphylococcus aureus.
Definimos si se trata de Streptococcus beta-hemoltico tipo A, tipo B o tipo no A.

En cuanto a los Staphylococcus verificamos los resultados en los agares Manitol salado, si existe crecimiento y fermentacin o solo crecimiento. En los agares sangre en los cuales se realizo la prueba de sensibilidad con acido nalidxico se verifica la existencia o no de Staphylococcus epiderminis

5. Discusin de resultados
Tabla 1. Muestra las pruebas realizadas a las bacterias en una caja Petri que se conoca que contena 2 tipos de Staphylococcus y un tipo de Streptococcus. Realizada los das 9-10-11 de Octubre del 2012; Laboratorio de Microbiologa Clnica de la Facultad de Ciencia de la ESPOCH.

Diferenciacin de especies de Staphylococcus.

cido Manitol Bacteria. Salado Positivo Variable nalidxico 30ug --------------Halo Catalasa Positivo Positivo ------------------------------------------------------------------------- ----------Positivo No genera (-) No presenta punta de flecha Bacitracina diferencial Prueba de Camp

S. aureus S.saprophyticus

S. epidermidis

Negativo

>14mm

Streptococcus. betahemoltico no tipo A

------------Negativo

halo o es menor de 14 mm

Los resultados obtenidos mostrados en la tabla numero 1 revelan una secuencia de procedimientos que culminan en la identificacin de Staphylococcus aureus, el cual mostro un halo de color amarillo pardo al ser visto a contra luz y color grisceo al ser visto a luz reflejada, luego se cultivo el microorganismo hasta entonces sospechoso en manitol salado el cual creci y tambin fermento dando una coloracin amarillenta, tambin se realizo la prueba DE LA CATALAZA por lo cual se puede afirmar que la bacteria es Staphylococcus aureus beta-hemoltico coagulasa positivo. Con los respectivos anlisis se comprob la identidad de la otra muestra de Staphylococcus, la cual solo creci en manitol salado y de coloracin rozada, pero que presento sencibildad al cido nalidxico con un halo mayor de 14mm de dimetro; tambin presento beta-.hemolisis por lo cual se puede afirmar que la segunda muestra de Staphylococcus pertenece a Staphylococcus

epidermidis.

Al efectuar los anlisis para la muestra problema de Streptococcus, se verifico beta hemolisis, y con la prueba conjunta de sensibilidad a la bacitracina 0.04 que no presento Halo significativo y prueba de Camp que no present punta de flecha, y por ultimo una prueba de catalasa que dio negativa se puede afirmar que la muestra problema es Streptococcus beta hemoltico no tipo A o no grupo A.

6. Observaciones
6.1. El disco de cido nalidixico 30ug parece haber fallado en los procesos de identificacin ya que la muestra de

Staphylococcus epidermidis no presento el tamao del halo esperado en esta prueba de inhibicin.

7. Conclusiones.

7.1. General: Se identificaron los Staphylococcus aureus

epidermidis, por otro lado se identific Streptococcus beta-hemoltico no grupo A (Streptococcus )

Dentro del G.Staphylococcus existen 3 especies de importancia clnica: S.aureus, S.saprophyticus y

beta hemoltico coagulasa positivo

y Staphylococcus

Dentro de la Flia. Micrococacceae existen 4 gneros, el de mayor importancia clnica es el Gnero Staphylococcus

7.2. Especficos: 7.2.1. Las pruebas a las que son sensibles de manera general los Staphylococcus son: Tincin de Gram: En esta prueba se muestran como cocos Gram positivos, agrupados en racimos. Catalasa: El resultado es positivo manifestado por una reaccin burbujeante. Oxidasa: positiva. O/F: La prueba de O/F es la que diferencia Staphylococcus sp. del gnero Micrococcus sp; este ltimo tiene metabolismo oxidativo. 7.2.2. La enzima catalasa descompone el perxido de hidrgeno (H2O2) en agua y oxgeno. De esta manera las bacterias se protegen del efecto txico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azcares. El desprendimiento de burbujas se considera una prueba positiva.

2H2O2

Enzima catalasa

2H2O + O2

7.2.3. El Staphylococcus aureus es considerado el patgeno ms representativo del gnero Staphylococcus, puede causar enfermedad mediante las sustancias que genera las cuales son las responsables de su virulencia ( Protena A, Toxina del sndrome del shock txico , Toxina exfoliativa A y B, Enterotoxinas, Leucocidina, Hemolisinas Alfa beta, Penicilinasa, Staphylocinasa, Lipasa, Hialuronidasa, Coagulasa)mediante las cuales el estafilo prolifera y ataca rganos y tejidos pudiendo llegar a ser mortal si no se trata a tiempo y adecuadamente. En ocasiones, el

Staphylococo aureus puede entrar en el torrente sanguneo desde el sitio de la infeccin y alcanzar otros tejidos
distantes, como el cerebro o los pulmones siendo esta la patologa ms grave de todas. 7.2.4. Los anlisis respectivos arrojaron que el Streptococcus es de naturaleza beta-hemolitica debido a la presencia de halo amarillento, y que mediante la prueba de sensibilidad a la bacitracina no mostro halo >a 14mm y no presento punta de flecha en la prueba de Camp; por lo tanto se trata de una especie de no Grupo A.

8. Resumen
Las muestras cultivadas en los agares contuvieron Staphylococus aureus beta-hemoltico coagulasa positivo cual muestra hemolisis beta en agar sangre, presenta crecimiento en EAM, crece y fermenta en manitol salado; Staphylococcus epidermidis el cual no crece en manitol salado y presenta un halo de 14 mm en la prueba de sensibilidad por cido nalidxico 30 ug; Streptococcus beta-hemoltico tipo no grupo A que presenta halo de color amarillo, colonias transparentes y que no presenta sensibilidad a basitracina diferencial ni muestra punta de flecha en la prueba de Camp.

9. Bibliografa
Bacteria Staphylococcus aureus: sntomas, contagio y tratamiento http://suite101.net/article/bacteria-staphylococcus-aureus-sintomas-contagio-y-tratamiento-a43652 Gnero Staphylococcus http://kimi-foro.latin-foro.es/t4-genero-staphylococcus Staphylococcus aureus, S. epidermidis, y S. saprophyticus. http://microbitos.wordpress.com/2011/08/03/staphylococcus/

Laboratorio de Microbiologa II http://qfbmicro.blogspot.com/ Prueba O/F, oxido fermentativa o de Hugh-Leifson http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-v/pb-v-3-of.htm IDENTIFICACION DEL GENERO STREPTOCOCCO http://es.scribd.com/doc/9171757/Microbiologiaidentificacion-Del-Genero-Estreptococco Murray P, Rosenthal K, Michael A, Faller P, Microbiologa mdica,Madrid, Elsevier, 2008, pp 221-228 Prescott Lsnsing M, Harley J, Donald K, Microbiologa, 5ed, Madrid, Mc Graw-mill interanericana, 2002, pp 571574 Jawetz Ernest, Microbiologa mdica, 10ed, Mxico, 1983, pp 196-201. Michael J, Pelczar Jr. Elementos de microbiologa, ed exclusiva, colina, 1981. Pp 380-390

10. Glosario de trminos

O/F: Prueba oxido fermentativa, es una prueba que indica del tipo de metabolismo energtico: respiratorio (O) o
fermentador (F). Se suele utilizar glucosa como sustrato. Se detecta la acumulacin de cidos con un indicador cidobase (azul de bromotimol). La bacteria se inocula con el hilo recto (por picadura) y se incuba en condiciones de aerobiosis (sin parafina) y de anaerobiosis (con parafina, tubo cerrado), simultneamente.

Leucocidina: (Del griego lentos, y del latn caedere, matar). Sinnimo: leucocitolisina. Sustancia que goza de la
propiedad de destruir los glbulos blancos de la sangre (toxinas bacterianas, etc).

ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA

Nombre: Mauricio Orna Gamboa Cdigo: 2194 Ctedra: Microbiologa clnica Informacin general de Staphylococcus sp.
El gnero Staphylococcus pertenece a la familia Staphylococacceae, orden Bacillales, clase Bacilli, Phylum Firmicutes. Dentro del gnero Staphylococcus hay 55 especies y subespecies, siendo las ms importantes desde el punto de vista clnico las siguientes: - Staphylococcus aureus subsp. aureus, (referido en adelante como Staphylococcus aureus) - Staphylococcus epidermidis, y -Staphylococcus saprophyticus subsp. Saprophyticus Estos Staphylococcus que se asocian con infecciones humanas son colonizadores principalmente de superficies cutneas y mucosas. El crecimiento de las colonias bacterianas son visibles casi sobre todos los medios de cultivo, en especial en agar sangre. Son bacterias en forma de coco Gram positivas producen catalasa, son aerobios facultativos. Temperatura ideal de crecimiento 37 grados Celsius, temperatura de crecimiento 10-46 grados Celsius. Consumen lpidos, protenas y fermenta una gran variedad de azucares, no es formadora de esporas, crece en niveles de salinidad 7.5-10% puede sobrevivir a 60 Celsius 60min. El microorganismo ms importante por su patogenicidad es Staphylococcus aureus, que se caracteriza por poseer una enzima que coagula el plasma: la coagulasa. Esta prueba permite distinguir a S. aureus del resto de especies de estafilococos que aparecen clnicamente, que no poseen dicho enzima. Los estafilococos de inters en patologa humana que no pertenecen a ninguna de las especies anteriores se informan en el laboratorio como estafilococos coagulasa negativos (SCN) y aunque son colonizadores habituales del ser humano no producen enfermedad tan importante como los anteriores.

Patgenos comunes S. haemolyticus S. lugdunensis Patgenos infrecuentes S. capitis S. saccharolyticus S. hominis S. warneri S. auricularis
S. cohnii

Algunas especies de gneros diferentes, anteriormente relacionados taxonmicamente, como Micrococcus luteus o Kocuria

rosea, que raramente producen infecciones en humanos, tienen caractersticas fenotpicas muy similares desde el punto de vista
morfolgico y bioqumico a los estafilococos, por lo que conviene saber diferenciar ambas especies de las del gnero

Staphylococcus.
El estafilococo aureus es una bacteria Gram Positiva que a veces se torna resistente a los antibiticos como la meticilina (SARM).

Historia.
El nombre de Staphylococcus proviene de la palabra griega Staphule que significa uva por lo tanto se hace la analoga con un racimo de uvas que es la agrupacin observada para esta bacteria en una tincin de GRAM. En 1880, Staphylococcus fue visto por primera vez en la pus de infecciones pirognicas, Alexander Ogston determin que estas bacterias eran cocos Gram positivos. En 1884, S. aureus fue identificado por Rosenbach, como la bacteria causante de infecciones en heridas, as como la forunculosis. En 1928, Alexander Fleming descubre que el hongo penicillium contamina medios de cultivos con cepas de Staphylococcus aureus, y observa la inhibicin de la bacteria evidenciando de esta manera una nueva sustancia (antibitico) la penicilina.

Morfologa.
Son cocos Gram positivos, se observa asociacin en racimos irregulares (similar an racimo de uvas), carecen de flagelos, no producen esporas y rara vez pueden tener cpsula.

Tincin de Gram: Cocos Gram positivo

Microfotografa, tomada con un microscopio electrnico de barrido. Se observa morfologa de coco, carencia de flagelo y asociacin en racimos agrupados en racimos irregulares.

Morfologa colonial.
En agar sangre, nutritivo chocolate, soya tripticasa, etc, se ven colonias pequeas, blanquecinas, de forma circular, bordes redondeados, superficie lisa y convexa. Algunas cepas producen un pigmento carotenoide que les da un color dorado (S. aureus).

Metabolismo.
No son exigentes con sus requerimientos nutricionales, son aerobios facultativos y crecen favorablemente a temperaturas de 30-37C, son capaces de crecer en medios altamente salinos (7.5-10% NaCl).

Hbitat.
S. aureus, Flora normal de las narinas(fosas nasales), nasofaringe, regin perineal(en mujer en hombre) y piel. Puede colonizar diversas superficies epiteliales y mucosas. S. saprophyticus, flora normal de la mucosa del aparato genitourinario (en hombre y mujer). S. epidermidis, Flora normal de piel y mucosas humanas, ampliamente distribuido sobre toda la superficie corporal.

Medios de cultivo comunes donde crece Staphylococcus sp.

Agar sangre Agar chocolate. Agares nutritivos: como BHI (Brain, Heart, Infusin), AST( Agar Soya Tripticasa), Agar nutritivo, etc. Agar Sales y Manitol. Agar Baird-Parker Agar sangre con cido nalidixico. Caldos nutritivos, BHI, Cassoy, entre otros.

Staphylococcus aureus
S. aureus es la especie ms virulenta del gnero que se conoce ya que esta bacteria tiene un amplio espectro de factores que contribuyen para producir infecciones y enfermedad. Algunas cepas de S. aureus pueden producir un pigmento carotenoide que les da un color amarillo, el color es ms evidente en agares nutritivos como agar sangre, agar chocolate, Agar infusin cerebro corazn, agar nutritivo, entre otros. Las cepas de S.

aureus son productoras de coagulasa y beta-hemolisinas (algunas cepas carecen de hemolisina).

Staphylococcus aureus
en agar sangre

Staphylococcus aureus en agar sangre a contra luz para observar la hemolisis beta.

Pruebas bioqumicas para la identificacin de Staphylococcus aureus.

Bacteria

Catalasa Agar sales y manit ol

Sensibil idad a vancom icina

Prueba de coagulasa

DNA asa

Staphylococcus aureus

Factores de virulencia.
Coagulasa : Coagula el plasma de la sangre. Hialuronidasa: Degrada el tejido conectivo.

Staphylocinasa: Degrada cogulos de la sangre. Lipasa: Degrada grasas lo cual le ayuda a colonizar la piel. Penicilinasa: Inactiva la penicilina. Hemolisinas Alfa beta: lisa eritrocitos. Leucocidina: Lisa neutrfilos y macrfagos Enterotoxinas: Induce nausea vmito y diarrea, para inactivarlas se necesita 100 grados Celsius 30min Toxina exfoliativa A y B: Causan descamacin de la piel. Toxina del sndrome del shock txico (TSST por sus siglas en ingls): Induce fiebre, vmito, rash en la piel, dao en rganos. Protena A: Funciona como anticomplemento, antifagocitica, y lesiona a las plaquetas.

Patogenicidad
El estafilococo aureus causa enfermedad mediante sus toxinas, manifestaciones clnicas o por la invasin y destruccin de los tejidos, lo que provoca otras enfermedades debido a la proliferacin del estafilococo. En ocasiones, el estafilococo aureus puede entrar en el torrente sanguneo desde el sitio de la infeccin y alcanzar otros tejidos distantes, como el cerebro o los pulmones. Las enfermedades cuya responsabilidad recae en el estafilococo aureus son muy diversas. Entre las ms destacadas se pueden citar: Osteomielitis. Conjuntivitis. Artritis. Infecciones orbitales graves. Sinusitis. Meningitis. Otitis media. Mastoiditis. Orzuelos. Bronquitis. Neumona estafiloc cica primaria. Parotiditis. Enterocolitis. Cistitis. Prostatitis. Cervicitis. Salpingitis.

Epidemiologa del estafilococo aureus

Como ya se ha mencionado hay muchos portadores del estafilococo aureus que no cursan infeccin; de hecho se considera que entre el 20% y el 40% de los adultos sanos son portadores asintomticos del estafilococo aureus, lo que constituye un serio problema en cuanto a la transmisin de la enfermedad. El estafilococo aureus es una bacteria muy resistente y longeva, permaneciendo en el aire o sobre objetos inanimados, aunque el contagio del estafilococo aureus se produce mayormente de persona a persona. Hay, tambin, ciertos condicionantes que predisponen al portador a desarrollar una enfermedad, como pueden ser aquellos que utilizan sistemticamente agujas diabticos, alrgicos, hemodilisis o drogadictos, los que padecen enfermedades crnicas de la piel psoriasis, eczemas o dermatitis atpica y personal hospitalario. El estafilococo aureus tiene dos maneras de provocar la enfermedad; convirtindose en un invasor local o generalizado, o bien produciendo toxinas que no invaden directamente el tejido. Por lo que respecta a la infeccin local, el estafilococo aureus se caracteriza por la formacin de un absceso, pudiendo ser superficial fornculo, o atacar los rganos debido a la diseminacin bacterimica carbnculo. En este ltimo caso invade el torrente sanguneo, y cuya consecuencia ms letal puede ser un shock txico.

Prevencin ante el Staphylococcus aureus

Una prevencin absoluta contra el estafilococo aureus no es posible. Pero debido a que los hospitales son uno de los focos de contagio ms relevantes, se impone el uso de mascarillas en las intervenciones quirrgicas y curaciones de todo tipo, observando igualmente las necesarias medidas de asepsia y antisepsia en la manipulacin de algodones, vendas y gasas contaminadas y, obviamente, la adecuada esterilizacin de todo el instrumental mdico y material clnico. En los pacientes de especial riesgo, como son aquellos con heridas abiertas, debe evitarse el contacto en lo posible.

Tratamiento del Staphylococcus aureus

La deteccin del estafilococo aureus, para diferenciarlo de otros tipos de estafilococo, se efecta mediante la prueba de la coagulasa. Para una mayor certeza, esta prueba se compagina con la deteccin de antgenos mediante el test de ltex. En la actualidad las cepas ms habituales de estafilococo aureus son resistentes a la penicilina, por lo que los antibiticos que muestran una mayor eficacia para combatir al estafilococo son los aminoglucsidos, las cefalosporinas, la oxacilina o la nafcilina, siendo la rifampicina y la vancomicina los que presentan ms efectividad. Este tratamiento antimicrobiano, segn sea el caso, deber acompaarse de la eliminacin de las vas de entrada como los catteres venosos permanentes o los drenajes quirrgicos. Como sucede en todos los tratamientos, y en especial tratndose del estafilococo aureus, es importante finalizar las dosis prescritas aunque previamente se haya experimentado una clara mejora. Las dosis incompletas conducen a la resistencia del medicamento por parte del estafilococo aureus.

Staphylococcus saprophyticus.
Caractersticas.
Casi nunca se asocia a enfermedades nosocomiales, muchas cepas son manitol positivo, no producen beta-hemolisis en agar sangre, es causante de infecciones urinarias, carece de coagulasa.

Staphylococcus saprophyticus en agar sangre.

Bioqumicas para la identificacin de Staphylococcus saprophyticus.

Agar sales y manitol: negativo o positivo (variable). Prueba de coagulasa: negativo. Sensibilidad a vancomicina: resistente. DNAasa: negativo.

Factores de virulencia.
Dudosos y poco estudiados.

Infecciones y enfermedades causadas por Staphylococcus saprophyticus.

Generalmente causa infecciones urinarias en mujeres jvenes sexualmente activas.

Tratamiento y profilaxis.

Profilaxis: Debe haber una correcta limpieza de la mujer al ir al bao, Buenos hbitos de aseo personal.

Staphylococcus epidermidis.
Caractersticas.
Las infecciones por S. epidermidis son oportunistas, nosocomiales y generalmente esta asociado a los implantes de prtesis, catteres e intervenciones quirrgicas.

Staphylococcus epidermidis en agar sangre.

Pruebas bioqumicas para la identificacin de Staphylococcus epidermidis.

Agar sales y manitol: negativo (da un color rosa). Prueba de coagulasa: negativo. Sensibilidad a vancomicina: positivo.

Factores de virulencia.
La produccin de Slime (exopolisacridos) o biofilm le confiere una adherencia muy eficiente a la bacteria, por lo tanto se puede unir a superficies como catteres vasculares, sondas, prtesis, adems este biofilm forma una barrera que dificulta el paso de los antibiticos.

Infecciones y enfermedades causadas por Staphylococcus epidermidis.

Infecciones en prtesis, en catteres vasculares, bacteremias generalmente en nios que estn en cuidados intensivos, infeccin en LCR, infecciones oculares post-quirrgicas.

Tratamiento y profilaxis.

Profilaxis: Manteniendo las zonas crticas desinfectadas, Tanto los familiares, paciente y el personal mdico deben lavarse las manos con frecuencia sobre todo cuando manipulen material estril y pacientes inmunocomprometidos .

Neisseria
Neisseria es un gnero de bacterias, perteneciente a las proteobacterias, un gran grupo de bacterias Gramnegativas. Las Neisseria son diplococos, que se asemejan a granos de caf al ser observados con el microscopio ptico.1 El gnero incluye las especies Neisseria gonorrhoeae (llamada tambin gonococcus), causante de la gonorrea, y Neisseria meningitidis (llamada tambin meningococcus), una de las ms comunes causas de meningitis bacteriana y agente causal de sepsis meningocccica.

Caractersticas Morfolgicas y Tintoriales

Los miembros del gnero Neisseria son bacterias en forma de diplococos (crecen en pares), Gram negativos, no esporulados y solo N. meningitidis presenta cpsula (de polisacridos), inmviles, catalasa y oxidasa positivos. El tamao promedio de la bacteria es de 1 de dimetro y son aerobios estrictos. En trminos generales, este grupo de bacterias son sensibles a los agentes fisicoqumicos como las altas temperaturas, la desecacin y los metales pesados entre otros. Importancia en la salud pblica

N. gonorrhoeae (gonococo) es el agente etiolgico de la gonorrea o blenorragia, padecimiento considerado como la segunda enfermedad de transmisin sexual por su frecuencia. N.meningitidis (meningococo)figura entre los 3 principales agentes causales de meningitis infantil en los pases de origen sajn. Esta afeccin es muy grave debido a su alta tasa de mortalidad entre los nios, y a la elevada frecuencia con que los pacientes que salvan la vida llegan a presentar consecuencias neurolgicas muy serias. Afortunadamente, las comunidades latinas no resultan susceptibles de infeccin por este microorganismo y los casos son sumamente raros. N. sicca,N. flava, N. subflava, N. perflava y N. lactamicus forman parte de la flora habitual de las vas respiratorias altas y, la ltima de ellas, tambin integra la flora vaginal de mujeres sanas, lo cual no debe pasar inadvertido, porque su observacion al microscpio puede sugerir errneamente la presencia de gonococos. Neisseria bacilliformis La mayora de las especies de Neisseria son cocos gram-negativos, o diplococos, en la actualidad, N. elongata es la nica especie de origen humano con una morfologa bacilar. Aqu reportamos el aislamiento y la caracterizacin de ocho cepas de bacilos otras especies de Neisseria de las infecciones humanas. Los organismos causado o contribuido a infecciones de las vas, ya sea orales relacionadas con la cavidad o respiratoria, y dos cepas fueron aisladas de los hemocultivos. 16S rRNA secuencias de genes de estos organismos, siendo homognea o casi (99,4 a 100% de identidad), corresponde a <96% conoce las especies de Neisseria y form un grupo diferente dentro del gnero. El anlisis de los cidos grasos celulares mostraron gran similitud con unas pocas especies de Neisseria. Los organismos gram negativos y mide 0,6 micras por 1,3 a 3,0 micras. Ellos crecieron bien en agar chocolate y agar sangre de cordero, pero no crecen en Thayer-Martin modificado de agar. Ellos fueron positivos para la oxidasa y negativos para la produccin de indol. No hubo produccin de cido a partir de dextrosa, lactosa, maltosa, sacarosa o. Los ensayos para la reaccin de catalasa, reduccin de nitratos, y tributilin vari con las cepas. Estos resultados sugieren que estos organismos representan una nueva especie dentro del gnero Neisseria, para lo cual el nombre Neisseria sp bacilliformis. noviembre Se propone. La cepa tipo es MDA2833 = ATCC BAA-1200T = CCUG50858T. Distincin entre bacilliformis N. y N. elongata se pueden hacer con confianza por la secuenciacin del gen 16S rRNA o el perfil de cidos grasos celulares, pero puede ser difcil por la morfologa o pruebas bioqumicas de rutina. Pruebas bioqumicas para Neisseria

Caractersticas diferenciales de los gneros de la familia Neisseriaceae

Cracteristicas de N.gonorreae, Nmeningitidis, M. catarrhalis, K. denitrificans

E.M.B. Agar.
Este medio (tambin denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. Fundamento Este medio combina las frmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporacin de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene adems, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. Frmula (en gramos por litro) Peptona Lactosa Sacarosa Fosfato dipotsico Agar Eosina Azul de metileno 10.0 5.0 5.0 2.0 13.5 0.4 0.065 Instrucciones Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos; mezclar, calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos hasta su disolucin. Esterilizar en autoclave a no ms de 121C durante 15 minutos. Enfriar a 45C y distribuir agitando suavemente.

pH final: 7.2 0.2 Siembra En superficie, por estriado a partir de un inculo poco denso, para obtener colonias aisladas. En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas. Incubacin De 24 a 48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

Resultados Microorganismos Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Proteus mirabilis ATCC 43071 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Shigella flexneri ATCC 12022 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Caractersticas del medio: Placas preparadas: color prpura. La esterilizacin del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color prpura se restaura por agitacin. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo. Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C. Medio preparado: a 2-8 C. Tipo de Colonia Verdosas con brillo metlico y centro negro azulado Mucosas, rosa prpura, confluentes Incoloras Incoloras, pequeas, puntiformes Incoloras Incoloras

Presentacin x 100g :Cdigo: B02-101-05 x 500g :Cdigo: B02-101-06 6 x 50 ml: B04-101-84

Composicin del agar sangre

Sangre Agar Base Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos. Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observacin de reacciones de hemlisis. Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate. Fundamento La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, an de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis. Frmula (en gramos por litro) Infusin de msculo de corazn Peptona Cloruro de sodio Agar 375.0 10.0 5.0 15.0

pH final: 7.3 0.2 Instrucciones Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensin homognea. Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar 20 minutos a 121C. Enfriar a 45-50C agregar sangre desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas. Preparacin de la placa de Agar Sangre: aadir en forma asptica un 5% de sangre estril desfibrinada a temperatura ambiente, el agar debe estar a 45C. Preparacin de Agar Chocolate: despus de aadir la sangre y agitando frecuentemente se mantiene el medio de cultivo a 80C por 10 minutos hasta que adquiera un color pardo chocolatado. Siembra Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo. Incubacin El tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del microorganismo que se quiera aislar.

Resultados Microorganismos E. coli ATCC 25922 S. aureus ATCC 25923 S. pyogenes ATCC 19615 S. pneumoniae ATCC 6305 S. pneumoniae ATCC 49619 Limitaciones -Las reacciones hemolticas de muchos microorganismos son diferentes al usar sangre de caballo respecto a la sangre de carnero, tal es el caso de algunas cepas de estreptococos grupo D, que producen beta hemlisis en el agar suplementado con sangre de caballo pero no en agar suplementado con sangre de carnero, y son mal clasificados como Estreptococos Grupo A al usar sangre de caballo. Caractersticas del medio Medio preparado: mbar. Medio preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10-35 C. Medio preparado: a 2-8 C. Crecimiento Abundante Abundante Abundante Abundante Abundante Hemlisis -Beta Beta Alfa Alfa

x 100g :Cdigo: B02-149-05

Presentacin x 500g :Cdigo: B02-149-06

6 x 50 ml: B04-149-84

Composicin agar soya tripticasa(TSA)

Composicin: Triptosa, 15g Peptona, 5g Extracto de levadura, 3g Glucosa, 5g Cloruro sdico, 5g Agar, 15g Agua destilada, 1000 ml Preparacin: Se disuelven todos los componentes excepto el agar en una parte de agua por calentamiento hasta que la solucin sea transparente. Aadir a continuacin el agar y el agua restante agitando hasta ebullicin. Ajustar el pH a 7 y esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121 C. A continuacin se distribuye en placas Petri.

Tioglicolato USP Con Indicador Medio

Medio de cultivo preparado de acuerdo con la Farmacopea Norteamericana para el control de esterilidad de productos biolgicos y farmacuticos. Adems es utilizado para cultivar microorganismos anaerobios, microaerfilos y aerobios, y tambin para detectar la presencia bacteriana en materiales normalmente estriles. Fundamento Este medio de cultivo tiene una composicin bastante similar a la del medio Tioglicolato sin indicador. Permite el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los nutricionalmente exigentes y se observa que las bacterias estrictamente aerobias, crecen en la parte superior, mientras que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las profundidades del medio. La presencia de grupos -SH- (aportados por cistena, tioglicolato, glutatin, etc.) en medios de cultivos con digestos proteicos facilita el aislamiento de diversas bacterias anaerobias. El tioglicolato de sodio disminuye el potencial redox del medio de cultivo y neutraliza el efecto antibacteriano de conservadores mercuriales. La resazurina acta como un indicador de la xido-reduccin, que es de color rosado fucsia en presencia de oxgeno y la glucosa facilita el desarrollo microbiano al brindar una buena fuente de energa. La presencia de una baja cantidad de agar, retarda la dispersin de CO 2 y O2.

Frmula (en gramos por litro) Triptena Extracto de levadura Glucosa Cloruro de sodio Tioglicolato de sodio Agar L-cistina Resazurina 15.0 5.0 5.5 2.5 0.5 0.75 0.5 0.001

Instrucciones Suspender 29,5 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Calentar y agitar con frecuencia hasta disolucin total. Distribuir en recipientes adecuados y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Enfriar y guardar a temperatura ambiente protegido de la luz. Si el medio preparado presenta ms de un 30% de oxidacin volver a calentar para eliminar el oxgeno absorbido.

pH final: 7.1 0.2 Siembra Consultar bibliografa de referencia (por ejemplo: Farmacopea Nacional Argentina 7 Edicin y USP XXVII). Incubacin

El tiempo, temperatura y condiciones de incubacin dependern del microorganismo que se quiera recuperar. Resultados Microorganismos Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Clostridium perfringens S. aureus ATCC 25923 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Caractersticas del medio Medio preparado: mbar claro ligeramente opalescente. Almacenamiento Medio deshidratado: a 10-35 C. Medio preparado: a 2-8 C.

Crecimiento Bueno Bueno Bueno Bueno

Presentacin x 100g :Cdigo: B02-140-05 x 500g :Cdigo: B02-140-06

Manitol Salado Agar.

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos. Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria. Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar. Fundamento Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color. Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o prpura.

Frmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona 1.0 10.0

Instrucciones Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar

d-Manitol Cloruro de sodio Agar Rojo de fenol

10.0 75.0 15.0 0.025

calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121C durante 15 minutos.

pH final: 7.4 0.2 Siembra Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra. Incubacin De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis. La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3 das a 32 C, en aerobiosis. Resultados Microorganismos Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Caractersticas del medio Medio preparado: rojo Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C. Medio preparado: a 2-8 C. Crecimiento Excelente Bueno Inhibido Inhibido Caractersticas de las colonias Amarilla Roja Inhibido Inhibido

Presentacin x 100g :Cdigo: B02-118-05 x 500g :Cdigo: B02-118-06