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.br DEPARTAMENTO DE ENSINO, PESQUISA E EDUCAO COMUNITRIA DEPECOM

PROGRAMA DE INICIAO CIENTFICA RELATRIO PARCIAL DE INICIAO CIENTFICA

GRUPO DE PESQUISA: Oncologia Oral PROJETO: Expresso imuno-histoqumica de protenas relacionadas com a reabsoro ssea em carcinoma epidermide de palato duro, gengiva e rebordo alveolar. TTULO DO PLANO DE TRABALHO: Expresso imuno-histoqumica de protenas relacionadas com a reabsoro ssea em carcinoma epidermide de palato duro, gengiva e rebordo alveolar.

ESTUDANTEs: Gurgiane Rodrigues Gurgel Francisco Pinto ORIENTADOR(AS): Antonio de Lisboa Lopes Costa PERODO: Agosto de 2012 a dezembro de 2012 NDICE INTRODUO No Brasil, excluindo-se o cncer de pele, o cncer oral (CO) e de faringe representam o 5 em incidncia de cncer entre os homens e o 6 entre as mulheres. Segundo dados do INCA (2012), as estimativas deste tipo de neoplasia para este ano, correspondem a 14.170 novos casos no total geral, sendo 9.990 destes em homens e 4.180 em mulheres, onde para o Estado do Rio Grande do Norte foram previstos 190 casos, sendo 55 destes casos na capital. O carcinoma epidermide oral (CEO) pode originar-se em qualquer parte da cavidade oral, como lngua, lbio, assoalho bucal, mucosa jugal, gengiva e

palato, sendo que as localizaes anatmicas mais acometidas variam geograficamente, refletindo a exposio a diferentes fatores de risco de acordo com a populao estudada (SCULLY e BAGAN, 2009; JOHNSON et al., 2010). Embora tenha havido alguns avanos nas pesquisas, o mecanismo preciso pelo qual o CEO invade o osso permanece incompletamente descrito. Acredita-se que o processo de invaso ssea ocorra por interaes entre tumor-hospedeiro, por extenso direta. Apesar de algumas controvrsias que ainda existem, os estudos precedentes sugerem que a destruio ssea, invaso e metstase do CEO so mediadas por osteoclastos e no diretamente por clulas do carcinoma (TANG et al., 2008). Para explorar os fatores que contribuem para reabsoro ssea causada pelo cncer, vrios grupos de pesquisa, in vitro e em animais, tm investigado a expresso de molculas liberadas por clulas tumorais que regulam a expresso do RANKL e OPG, como a: interleucina (IL)-1b, IL-6, IL-8 (YUVARAJ et al., 2009), fator de necrose tumoral- , peptdeo relacionado ao paratormnio (PTHrP), M-CSF, a calcitonina e estrognio, em CEO humanos (TADA et al., 2009). Dentre estas, a IL-6 uma citocina importante que estimula a reabsoro ssea mediada por osteoclastos por induzir a expresso de RANKL nas clulas osteoblsticas. Apesar disto, investigaram extensivamente seu papel na associados ao CEO (KAYAMORI et al., 2010). Diante disto, esta pesquisa visa comparar a expresso do RANKL, OPG, e IL-6, atravs da tcnica imuno-histoqumica, em CEO de lngua, gengiva e palato duro e rebordo aveolar. Na tentativa de avaliar o papel desses marcadores na patognese e progresso da doena e verificar a associao dos mesmos com a reabsoro ssea. poucos de estudos, formao osteoclastos

ATIVIDADES REALIZADAS CONSIDERAES TICAS O projeto de pesquisa ser registrado no Sistema Nacional de Informaes Sobre tica em Pesquisa envolvendo Seres Humanos (SISNEP) e

submetido anlise de seu contedo pelo Comit de tica em Pesquisa da Liga Norteriograndense Contra o Cncer. POPULAO Para o estudo a populao ser representada por todos os casos de CEO de palato duro, gengiva e rebordo alveolar registrados no Servio de Anatomia Patolgica do Hospital Dr. Luiz Antnio, Natal-RN, no perodo de 2004 a 2009.

AMOSTRA A amostra ser constituda de 90 casos, a fim de obter uma boa disperso dos dados em torno da mdia (SIEW, 2000), de CEO de palato duro, gengiva e rebordo alveolar, registrados no Servio de Anatomia Patolgica do Hospital Dr. Luiz Antnio, Natal-RN, no perodo de 2004 a 2009, cujos dados sero obtidos nos pronturios mdicos que contenham todas as informaes necessrias realizao do estudo. Os pronturios mdicos permaneceram no referido Servio, assim como, o material biolgico resultante da teraputica cirrgica instituda, aps a obteno dos espcimes para o estudo. Diante do exposto, para esta pesquisa definiu-se por utilizar 37 casos de CEO por localizao anatmica e como possui trs regies anatmicas: palato duro, gengiva e rebordo alveolar, chegou-se ao total de 90 casos. A amostra foi constituda por convenincia, at atingir o nmero total de casos determinado para cada localizao. OBTENO DOS DADOS CLNICOS E EPIDEMIOLGICOS As informaes epidemiolgicas e clnicopatolgicas analisadas sero: idade, sexo, cor de pele, localizao anatmica da leso, TNM, profisso, se o paciente de origem rural ou urbana, hbito (consumo crnico de tabaco, lcool e outros), histria mdica e modalidade teraputica empregada. Todas essas informaes sero obtidas dos pronturios mdicos. Por fim, para anlise de sobrevida, ser coletado o estado clnico da ltima informao no pronturio mdico e/ou data e causa do bito. Os dados sero coletados e armazenados em banco de dados eletrnico. ANLISE MORFOLGICA

Para o estudo morfolgico sero obtidos os blocos parafinados estocados no Servio de Anatomia Patolgica do Hospital Dr Luiz Antonio Natal /RN, os quais sero devolvidos no prazo de sessenta dias. ESTUDO IMUNO-HISTOQUMICO Os espcimes fixados em formol a 10% e emblocados em parafina sero submetidos a cortes histolgicos de 3m de espessura, montados em lminas de vidro previamente limpas, preparadas com adesivos base de 3aminopropyltrietoxi-silano (Sigma Chemical CO, St. Louis, MO, EUA). Aps esse processo, as lminas sero submetidas tcnica da imuno-histoqumica pelo mtodo da estreptavidina-biotina (SABC- streptoavidin biotin complex ), usando anti-corpos primrios anti-RANKL, anti-OPG e anti-IL-6 ANLISE DOS DADOS Os resultados obtidos sero utilizados para construo do banco de dados em uma planilha de Excel os quais sero posteriormente transferidos para software SPSS 13.0 para ambiente Windows, para serem submetidos anlise descritiva dos dados e a testes estatsticos adequados, a fim de testar as hipteses levantadas. Todos os testes sero realizados tomando como base os nveis de significncia de 5% (p<0,05) para determinar se existe significncia estatstica. O projeto est na fase de coleta de dados e anlise de fichas clnicas. J foram feitas a coleta dos blocos e o HE dos casos de palato duro. ATIVIDADES COMENTRIOS FINAIS O prximo passo do projeto ser imunohistoqumica do RANKL, OPG e IL-6.

realizao

da

anlise

CRONOGRAMA ATUALIZADO (ATIVIDADES E CRONOGRAMA) Ano 2012

Atividades Pesquisa Bibliogrfic a Introduo X X X X
Jan Fe v Ma r Ab r Ma i Ju n Jul Ag o Se t Ou t No v De z Ja n

Ano 2013
Fev Mar Abr Mai

Reviso da Literatura Colheita dos espcimes Fase laboratorial Anlise morfolgic a e Imunohistoqumic a Anlise dos resultados Discusso Concluso

X X

BIBLIOGRAFIA
1. Bryne M. Is the invasive front of an oral carcinoma the most important area for prognostication?. Oral Dis. 1998; 4(2):70-7. 2. Cochran, D.L. Inflammation and bone loss in periodontal disease. J Periodontol 2008; 79 (8): 1569-1576. 3. Canon JR, Roudier M, Bryant R, Morony S, Stolina M, Kostenuik PJ, et al. Inhibition of RANKL blocks skeletal tumor progression and improves survival in a mouse model of breast cancer bone metastasis. Clin Exp Metastasis 2008; 25:11929. 4. Chen Z, Malhotra PS, Thomas GR, et al . Expression of proinflammatory and proangiogenic cytokines in patients with head and neck cancer. Clin Cancer Res 1999; 5: 13691379. 5. Chuang FH; Hsue SS; Wu CW; Chen YK . Immunohistochemical expression of RANKL, RANK, and OPG in human oral squamous cell carcinoma. J Oral Pathol Med 2009; 38: 753758. 6. Cui N, Nomura T, Noma H, Yokoo K, Takagi R, Hashimoto S, Okamoto M, Sato M, Yu G, Guo C, 7. Shibahala T. Effect of YM529 on a model of mandibular invasion by oral squamous cell carcinoma in mice. Clin Cancer Res 2005, 11:27132719. 8. Deyama Y, Tei K, Yoshimura Y, Izumiyama Y, Takeyama S, Hatta M, Totsuka Y, Suzuki K. Oral squamous cell carcinomas stimulate osteoclast differentiation. Oncology Reports 2008, 20: 663-668. Hwang YS, Lee SK.; Park KK, Chung WY. Secretion of IL-6 and IL-8 from lysophosphatidic acid-stimulated oral squamous cell carcinoma promotes osteoclastogenesis and bone resorption. Oral Oncology 2012; 48:4048. 9. INCA. Cncer de boca. 2012. Disponvel em: <http://www.inca.gov.br/conteudo_view>. Acesso em: Ago/2012 Ishikuro M, Sakamoto K,

10. Bryne M. Is the invasive front of an oral carcinoma the most important area for prognostication?. Oral Dis. 1998; 4(2):70-7. 11. Cochran, D.L. Inflammation and bone loss in periodontal disease. J Periodontol 2008; 79 (8): 1569-1576. 12. Canon JR, Roudier M, Bryant R, Morony S, Stolina M, Kostenuik PJ, et al. Inhibition of RANKL blocks skeletal tumor progression and improves survival in a mouse model of breast cancer bone metastasis. Clin Exp Metastasis 2008; 25:11929. 13. Chen Z, Malhotra PS, Thomas GR, et al . Expression of proinflammatory and proangiogenic cytokines in patients with head and neck cancer. Clin Cancer Res 1999; 5: 13691379. 14. Chuang FH; Hsue SS; Wu CW; Chen YK . Immunohistochemical expression of RANKL, RANK, and OPG in human oral squamous cell carcinoma. J Oral Pathol Med 2009; 38: 753758. 15. Cui N, Nomura T, Noma H, Yokoo K, Takagi R, Hashimoto S, Okamoto M, Sato M, Yu G, Guo C, 16. Shibahala T. Effect of YM529 on a model of mandibular invasion by oral squamous cell carcinoma in mice. Clin Cancer Res 2005, 11:27132719. 17. Deyama Y, Tei K, Yoshimura Y, Izumiyama Y, Takeyama S, Hatta M, Totsuka Y, Suzuki K. Oral squamous cell carcinomas stimulate osteoclast differentiation. Oncology Reports 2008, 20: 663-668. Hwang YS, Lee SK.; Park KK, Chung WY. Secretion of IL-6 and IL-8 from lysophosphatidic acid-stimulated oral squamous cell carcinoma promotes osteoclastogenesis and bone resorption. Oral Oncology 2012; 48:4048. 18. INCA. Cncer de boca. 2012. Disponvel em: <http://www.inca.gov.br/conteudo_view>. Acesso em: Ago/2012 Ishikuro M, Sakamoto K, 19. Shin M, MatsuoK, Tada T, Fukushima H, Furuta H, Ozeki S, Kadowaki T, Yamamoto K, Okamoto M, Jimi1 E. The inhibition of RANKL/RANK signaling by osteoprotegerin suppresses bone invasion by oral squamous cell carcinoma cells. Carcinogenesis 2011; 32(11): 16341640. 20. Siew C. Ada guidelines for the acceptance of toothwhitening products. Compend 2000; 21: 44-47. 21. Sood SK,. Balasubramanian S, Higham S, Fernando M, Harrison B. Osteoprotegerin (OPG) and Related Proteins (RANK, RANKL and TRAIL) in Thyroid Disease. World J Surg 2011; 35: 19841992. 22. Tada T, Jimi E, Okamoto M, Ozeki S, Okabe K. Oral squamous cell carcinoma cells induce osteoclast differentiation by suppression of osteoprotegerin expression in osteoblasts. Int J Cancer 2005; 116: 25362. 23. Tada T: Shin M; Fukushima H; Okabe K; Ozeki S, Okamoto M, Jimi E. Oral squamous cell carcinoma cells modulate osteoclast function by RANKL-dependent and -independent mechanisms. Cancer Letters 2009; 274: 126131. 24. Takayanagi H, Iizuka H, Juji T, Nakagawa T, Yamamoto A, Miyazaki T, Koshihara Y, Oda H, Nakamura K, Tanaka S. Involvement of receptor activator of nuclear factor jB ligand/osteoclast differentiation factor in osteoclastogenesis from synoviocytes in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 2000;43:25969. 25. Tang CH, Chuang JY , Fong YC, Maa MC, Way TD, Hung CH. Bone-derived SDF-1 stimulates IL-6 release via CXCR4, ERK and NF-kB pathways and promotes osteoclastogenesis in human oral cancer cells. Carcinogenesis 2008; 29(8): 14831492.

 ANEXOS Histrico Acadmico

SIGAA - Sistema Integrado de Gesto de Atividades Acadmicas UFRN - Universidade Federal do Rio Grande do Norte PROGRAD - Pr-Reitoria de Graduao DACA - Diretoria de Administrao e Controle Acadmico Campus Universitrio BR-101 - Lagoa Nova - Natal/RN - CEP 59078-900

Histrico Escolar - Emitido em: 11/12/2012 s 12:15 Dados Pessoais Nome: GURGIANE RODRIGUES GURGEL GURGIANE RODRIGUES GURGELGURGIANE RODRIGUES GURGEL Matrcula: 2009055225 Data de Nascimento: 04/04/1990 Local de Nascimento: BRASLIA/DF Nome do Pai: SEBASTIO GURGEL DE LIMA Nome da Me: GILKA RODRIGUES DO NASCIMENTO GURGEL Endereo: RUA Granada, 10 - - BLOCO. Bairro: ROSA DOS VENTOS Municpio: PARMAMIRIM UF: RN Dados do Curso

Curso: ODONTOLOGIA - NATAL - PRESENCIAL - CCS - FORMAO - MT ndices Acadmicos nfase: Currculo: 04 - 2007.1 Status: ATIVO MC: 7.8215 MCN: 485.567 Autorizao do Curso: DECRETO N 31.209 Ato Normativo: 29/07/1952 D.O.U.: 03/08/1952 Ano/Perodo Letivo Inicial: 2009.2 Perfil Inicial: 0 Forma de Ingresso: VESTIBULAR Perodo Letivo Atual: 7 2017.1Prazo para Concluso: Trancamentos: Nenhum Prorrogaes: 0 perodos letivos Ano/Perodo Letivo de Sada: Tipo Sada: Data da Colao de Grau: Trabalho de Concluso de Curso: Componentes Curriculares Cursados/Cursando Ano/Perodo Letivo Componente Curricular CH Turma Freq % Nota Situao 2009.2 ENADE Dispensado(a) em razo do calendrio trienal (Portaria 40-2007/MEC, art. 33-G, 2). DATA DA PROVA: 08/11/2009 0 -2009.2 DBG0003 BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR 75 01 100.0 9.3 APROVADO 2009.2 DBG0142 GENETICA VII 60 01 100.0 8.8 APROVADO 2009.2 DCS0345 SOCIOLOGIA DA SAUDE 60 01 100.0 9.7 APROVADO 2009.2 DOD0100 INTRODUCAO A ODONTOLOGIA 30 01 100.0 8.8 APROVADO 2009.2 MOR0022 HISTOLOGIA II 75 01 100.0 7.2 APROVADO 2009.2 MOR0043 EMBRIOLOGIA III 45 01 100.0 7.9 APROVADO 2009.2 MOR0080 ANATOMIA GERAL 60 01 100.0 8.8 APROVADO 2010.1 DAN0001 ANTROPOLOGIA I 60 01 83.0 8.8 APROVADO 2010.1 DBQ0100 BIOQUIMICA 90 01 96.0 6.2 APROVADO 2010.1 DFS0036 FISIOLOGIA II 120 01 100.0 7.0 APROVADO 2010.1 DMP0018 MICROBIOLOGIA GERAL 60 01 100.0 6.6 APROVADO 2010.1 DOD0101 IMUNOLOGIA 45 01 100.0 6.6 APROVADO 2010.1 MOR0081 ANATOMIA DA CABECA E DO PESCOCO 75 01 100.0 9.2 APROVADO 2010.2 DBF0202 FARMACOLOGIA II 75 01 100.0 7.7 APROVADO 2010.2 DOD0059 PATOLOGIA GERAL 60 02 100.0 7.5 APROVADO 2010.2 DOD0102 METODOLOGIA DA PESQUISA CIENTIFICA 60 01 100.0 8.5 APROVADO 2010.2 DOD0103 ODONTOLOGIA, CULTURA E SOCIEDADE 60 01 100.0 9.1 APROVADO 2010.2 DOD0104 MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA ORAL 30 01 100.0 6.8 APROVADO 2010.2 DOD0130 ANATOMIA E ESCULTURA DENTARIA 60 01 88.0 8.1 APROVADO 2010.2 * DSC0090 SAUDE E CIDADANIA 60 05 100.0 9.6 APROVADO 2010.2 PSI0082 PSICOLOGIA APLICADA A ODONTOLOGIA 60 01 100.0 8.5 APROVADO 2011.1 DOD0106 SAUDE BUCAL COLETIVA I 45 01 83.0 8.0 APROVADO 2011.1 DOD0107 PATOLOGIA ORAL 120 01 95.0 5.8 APROVADO 2011.1 DOD0108 ESTOMATOLOGIA 60 01 97.0 7.2 APROVADO 2011.1 DOD0109 IMAGENOLOGIA 60 01 100.0 6.6 APROVADO

Para verificar a autenticidade deste documento entre em http://www.sigaa.ufrn.br/documentos/ informando a Pgina 1 de 3 matrcula, data de emisso e o cdigo de verificao: ca67686823 SIGAA - Sistema Integrado de Gesto de Atividades Acadmicas UFRN - Universidade Federal do Rio Grande do Norte PROGRAD - Pr-Reitoria de Graduao DACA - Diretoria de Administrao e Controle Acadmico Campus Universitrio BR-101 - Lagoa Nova - Natal/RN - CEP 59078-900

Histrico Escolar - Emitido em: 11/12/2012 s 12:15 Nome: GURGIANE RODRIGUES GURGEL Matrcula: 2009055225 Componentes Curriculares Cursados/Cursando Ano/Perodo Letivo Componente Curricular CH Turma Freq % Nota Situao 2011.1 DOD0110 CARIOLOGIA 45 01 100.0 7.1 APROVADO 2011.1 DOD0111 MATERIAIS DENTARIOS 90 01 100.0 7.1 APROVADO 2011.1 DOD0112 CLINICA INTEGRADA NIVEL I 60 01 100.0 6.3 APROVADO 2011.2 * DOD0054 TPICOS ESPECIAIS EM SADE BUCAL 30 01 97.0 8.1 APROVADO 2011.2 DOD0113 ODONTOLOGIA PREVENTIVA 60 01 100.0 7.5 APROVADO 2011.2 DOD0114 CIRURGIA BUCO-MAXILO FACIAL I 120 01 100.0 7.8 APROVADO 2011.2 DOD0115 CLINICA INTEGRADA NIVEL II 270 01 99.0 7.6 APROVADO 2011.2 * DOD0116 BIOESTATISTICA 30 01 100.0 9.5 APROVADO 2012.1 DOD0117 SAUDE BUCAL COLETIVA II 60 01 100.0 8.2 APROVADO 2012.1 DOD0118 CLINICA INTEGRADA NIVEL III 180 01 99.0 8.0 APROVADO 2012.1 DOD0119 CLINICA INFANTIL I 240 01 92.0 8.5 APROVADO 2012.2 DOD0055 PRTESE DENTRIA I 150 01 -MATRICULADO 2012.2 DOD0056 PRTESE DENTRIA II 120 01 -MATRICULADO 2012.2 DOD0057 CLINICA INTEGRADA NIVEL IV 120 01 -MATRICULADO 2012.2 @ DOD0067 TRABALHO DE CONCLUSO DE CURSO - TCC I 30 01 -MATRICULADO 2012.2 DOD0122 CLINICA INFANTIL II 60 01 -MATRICULADO Legenda * Comp. Optativo e Comp. Equivalente a Obrig. & Comp. Equivalente a Optativo # Comp. Eletivo @ Ativ. Obrigatria Ativ. Optativa Obrigatrias Optativos Total Comp. Curricular Atividade CH Total Comp. Curricular/Atividade CR CH CH CH CR CH Exigido 242 3630 615 4245 4245424542454245424542454245

105 242 4350Integralizado 178 2670 0 2670 120 178 2790Pendente 64 960 61515750 64 1575 Componentes Curriculares Obrigatrios Pendentes:18 CdigoComponente Curricular CH DOD0057 CLINICA INTEGRADA NIVEL IV Matriculado120 h DOD0055 PRTESE DENTRIA I Matriculado150 h DOD0067 TRABALHO DE CONCLUSO DE CURSO - TCC I Matriculado30 h DOD0056 PRTESE DENTRIA II Matriculado120 h DOD0122 CLINICA INFANTIL II Matriculado60 h DOD0123 CIRURGIA BUCO-MAXILO FACIAL II 90 h DOD0127 CLINICA INTEGRADA NIVEL V 240 h DOD0124 TRAUMATOLOGIA BUCO-MAXILAR-FACIAL 60 h DOD0151 ESTAGIO SUPERVISIONADO EM TBMF 45 h DOD0125 ODONTOLOGIA LEGAL 45 h DOD0126 DISFUNCAO TEMPOROMANDIBULAR E DOR OROFACIAL 30 h DOD0154 ESTAGIO SUPERVISIONADO CRUTAC 135 h DOD0129 IMPLANTODONTIA 45 h DOD0155 ATIVIDADES COMPLEMENTARES 105 h DOD0153 SAUDE BUCAL COLETIVA III 45 h DOD0152 TRABALHO DE CONCLUSAO DE CURSO II 30 h DOD0064 CLNICA INTEGRADA NVEL VI 225 h ENADE ENADE CONCLUINTE PENDENTE 0 h Para verificar a autenticidade deste documento entre em http://www.sigaa.ufrn.br/documentos/ informando a Pgina 2 de 3 matrcula, data de emisso e o cdigo de verificao: ca67686823 SIGAA - Sistema Integrado de Gesto de Atividades Acadmicas UFRN - Universidade Federal do Rio Grande do Norte PROGRAD - Pr-Reitoria de Graduao DACA - Diretoria de Administrao e Controle Acadmico Campus Universitrio BR-101 - Lagoa Nova - Natal/RN - CEP 59078-900

Histrico Escolar - Emitido em: 11/12/2012 s 12:15 Nome: GURGIANE RODRIGUES GURGEL Matrcula: 2009055225 Ateno, agora o histrico possui uma verificao automtica de autenticidade e consistncia, sendo portanto dispensvel a assinatura da coordenao do curso ou DACA. Favor, ler instrues no rodap. Para verificar a autenticidade deste documento entre em http://www.sigaa.ufrn.br/documentos/ informando a Pgina 3 de 3 matrcula, data de emisso e o cdigo de verificao: ca67686823