Anda di halaman 1dari 5

PEMERIKSAAN ALT(ANGKA LEMPENG TOTAL)

HARI, TANGGAL TUJUAN PRINSIP : 11-13 Maret 2013 : Untuk menghitung jumlah kuman dalam makanan : Sampel makanan di buat pengenceran bertingkat lalu ditanam Pada media NA. Kemudian di inkubasi selama 24 jam dalam 37oC, Kemudian hitung kuman pada masing-masing pengenceran, lalu Hitung jumlah total kuman pada bahan makanan atau minuman tersebut. Dasar Teori :

Metode kuantitatif digunakan untuk mengetahui jumlah mikroba yang ada pada suatu sampel, umumnya dikenal dengan Angka Lempeng Total (ALT). Uji Angka Lempeng Total (ALT) dan lebih tepatnya ALT aerob mesofil atau anaerob mesofil menggunakan media padat dengan hasil akhir berupa koloni yang dapat diamati secara visual berupa angka dalam koloni(cfu) per ml/g atau koloni/100ml. Cara yang digunakan antara lain dengan cara tuang, cara tetes dan cara sebar (BPOM, 2008). Prinsip pengujian Angka Lempeng Total menurut Metode Analisis Mikrobiologi (MA PPOM 61/MIK/06) yaitu pertumbuhan koloni bakteri aerob mesofil setelah cuplikan diinokulasikan pada media lempeng agar dengan cara tuang dan diinkubasi pada suhu yang sesuai. Pada pengujan Angka Lempeng Total digunakan PDF (Pepton Dilution Fluid) sebagai pengencer sampel dan menggunakan PCA (Plate Count Agar) sebagai media padatnya. Digunakan juga pereaksi khusus Tri Phenyl tetrazalim Chlotide 0,5 % (TTC). Prosedur pengujian Angka Lempeng Total menurut Metode Analisis Mikrobiologi (MA PPOM 61/MIK/06) yaitu dengan cara aseptik ditimbang 25 gram atau dipipet 25 ml sampel ke dalam kantong stomacher steril. Setelah itu ditambahkan 225 ml PDF, dan dihomogenkan dengan stomacher selama 30 detik sehingga diperoleh suspensi dengan pengenceran 10-1. Disiapkan 5 tabung atau lebih yang masing-masing telah diisi dengan 9 ml PDF. Hasil dari homogenisasi pada penyiapan sampel yang merupakan pengenceran 10-1 dipipet sebanyak 1 ml kedalam tabung PDF
8| A L T ( A n g k a Lempeng Total) Christine dan Diah

pertama, dikocok homogenya hingga diperoleh pengenceran 10-2. Dibuat pengenceran selanjutnya hingga 10-6 atau sesuai dengan pengenceran yang diperlukan. Dari setiap pengenceran dipipet 1ml kedalam cawan petri dan dibuat duplo, ke dalam setiap cawan dituangkan 15-20 ml media PDA yang sudah ditambahkan 1%TTC suhu 45C. Cawan petri segera digoyang dan diputar sedemikian rupa hingga suspense tersebar merata. Untuk mengetahui sterilitas media dan pengencer dibuat uji kontrol (blangko). Pada satu cawan diisi 1 ml pengencer dan media agar, pada cawan yang lain diisi media. Setelah media memadat, cawan diinkubasi suhu 35-37C selama 24-46 jam dengan posisi dibalik. Setelah itu jumlah koloni yang tumbuh diamati dan dihitung. ALAT DAN BAHAN : Alat :

1. Petridish 2. Erlenmeyer 3. Tabung reaksi 4. Gelas ukur 5. Kapas berlemak 6. Lampu spirtus 7. Bulb 8. Math pipet 9. Batang pengaduk 10. Koloni counter 11. Kertas ph Sampel : Jus jeruk Reagensia :Media NA dan larutan penyangga (buffer phosphate, pepton broth, pz steril Aquadest steril).

9| A L T ( A n g k a

Lempeng Total)

Christine dan

Diah

Langkah Kerja : 1. 2. 3. 4. 5. Menyiapkan alat dan bahan. Mensterilisasi alat gelas dan aquadest yang akan digunakan. Membuat media NA (Nutrient Agar) Memipet 90 ml aquadest steril ke dalam erlenmeyer, sebagai pengenceran 10x. Memberi etiket 10-1 pada erlenmeyer. Melakukan pemipetan ke dalam tabung NA. a. Memipet 9 ml aquadest steril ke tabung NA pertama. Memberi etiket 10-2 sebagai pengenceran 100x. b. Memipet 9 ml aquadest steril ke tabung NA kedua. Memberi etiket 10 -3 sebagai pengenceran 1000x. c. Memipet 9 ml aquadest steril ke tabung NA ketiga. Memberi etiket 10-4 sebagai pengenceran 10000x. d. Memipet 9 ml aquadest steril ke tabung NA pertama. Memberi etiket 10-5 sebagai pengenceran 100000x. Melakukan pemipetan sampel ke dalam masing-masing pengeceran. a. 10 ml sampel sebenarnya (belum mengalami pengenceran) ke dalam erlenmeyer, membilas pipet, menghomogenkan dengan 90 ml aquadest steril di dalamnya. b. 1 ml sampel yang diencerkan 10x dari erlenmeyer (10-1) ke dalam tabung NA pertama (10-2), membilas pipet, menghomogenkan dengan 9 ml aquadest di dalamnya. c. 1 ml sampel yang diencerkan 100x dari tabung NA pertama (10-2) ke dalam tabung NA kedua (10-3), membilas pipet, menghomogenkan dengan 9 ml aquadest di dalamnya. d. 1 ml sampel yang diencerkan 1000x dari tabung NA kedua (10-3) ke dalam tabung NA ketiga (10-4), membilas pipet, menghomogenkan dengan 9 ml aquadest di dalamnya. e. 1 ml sampel yang diencerkan 10000x dari tabung NA ketiga (10-4) ke dalam tabung NA keempat (10-5), membilas pipet, menghomogenkan dengan 9 ml aquadest di dalamnya. Melakukan pemipetan dari masing-masing pengenceran sampel sebesar 1ml ke dalam petridish steril dilakukan secara steril. Menambahkan media NA (Nutrient Agar) ke dalam masing-masing petridish. Segera menghomogenkan agar sampel atau pertumbuhan bakteri menyebar. Memipet 1 ml pelarut yang digunakan sebelumnya (aquadest steril), menambahkan media NA (Nutrient Agar) seperti pada sampel, petridish ini berfungsi sebagai kontrol. Menginkubasi selama 24 jam 500 C. Menghitung jumlah koloni dengan Colony Counter. Koloni yang masuk perhitungan adalah koloni yang jumlahnya antara 30-300. Melakukan perhitungan banyaknya kuman sebenarnya dengan mengalikan dengan banyaknya pengenceran.

6.

7. 8. 9. 10. 11. 12.

10| A L T ( A n g k a

Lempeng Total)

Christine dan

Diah

Skema Praktikum :

Sampel : Jus Jeruk 10-1 90 ml aquadest 10 ml sampel 10-2 9 ml aquadest 1 ml sampel (10-1) 10-3 9 ml aquadest 1 ml sampel (10-2)

Pengenceran Sampel

10-5 9 ml aquadest 1 ml sampel (10-4)

10-4 9 ml aquadest 1 ml sampel (10-3)

10-2 9 ml aquadest 1 ml sampel (10-1) 10-1 90 ml aquadest 10 ml sampel

10-3 9 ml aquadest 1 ml sampel (10-2)

10-4 9 ml aquadest 1 ml sampel (10-3)

10-5 9 ml aquadest 1 ml sampel (10-4)

1 ml sampel 10-1 15 ml Nutrient Agar

1 ml sampel 10-2 15 ml Nutrient Agar

1 ml sampel 10-3 15 ml Nutrient Agar

1 ml sampel 10-4 15 ml Nutrient Agar

1 ml sampel 10-5 15 ml Nutrient Agar

Penanaman Media Nutrient Agar


11| A L T ( A n g k a Lempeng Total) Christine dan Diah

Hasil Pengamatan :

~
Control

84

57

31

Jumlah Koloni dalam Sampel Jus Jeruk : = ([84-7] x 10-3) + ([31-7] x 10-5) = (77 x 10-3) + (24 x 10-5) = 77.000 + 2.400.000 = 2.477.000 CFU

12| A L T ( A n g k a

Lempeng Total)

Christine dan

Diah