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INTRODUCCIN AL ESTUDIO DE LA CLULA


Silvia Mrquez - Lionel Valenzuela Prez - Gladys Glvez - Luis A. Fernndez - Cecilia Bocchino

NIVELES DE ORGANIZACIN
Fig. 1.1. Niveles de organizacion de la materia A los seres vivos se los define por sus caractersticas, una de stas es su organizacin. Esta organizacin biolgica representa el patrn complejo que nos muestra el camino que ha seguido la evolucin, desde formas sencillas a otras ms complejas. Los seres vivos estn formados por materia. La materia est formada por elementos (92 elementos naturales, como el Cloro, por ejemplo) y se caracteriza por poseer determinadas propiedades intensivas, tales como el punto de fusin, punto de ebullicin, conductividad elctrica, etc. Los elementos estn formados por tomos. Un tomo es la porcin ms pequea de un elemento que conserva sus propiedades qumicas. Las investigaciones de los fsicos han descubierto un variado nmero de partculas subatmicas (Nivel Subatmico), para nuestros fines mencionaremos slo tres : protones, neutrones y electrones. Los protones son partculas con carga positiva; los electrones, en cambio, tienen carga

negativa y masa muy pequea; los neutrones son partculas neutras, sin carga, y su masa es casi idntica a la de los protones; los protones y neutrones forman casi toda la masa de un tomo y se localizan en el ncleo atmico. Si combinamos un protn y un electrn se forma un tomo de Hidrgeno, entidad con propiedades diferentes a las de un protn y un electrn ( Nivel Atmico). Si combinamos tomos de Hidrgeno entre s obtenemos Hidrgeno molecular (H 2), que es un gas incoloro; si, en cambio, combinamos el H 2 con Oxgeno, otro gas, obtenemos agua, una molcula (Nivel Molecular) cuyas propiedades todos conocemos y que no son las mismas que las del H2 y el O2 y que tambin difieren de las propiedades de las partculas subatmicas y de los tomos que stas forman. La vida surgi a partir de tomos y molculas. Si combinamos molculas entre s, formamos grandes y complejas molculas: las macromolculas, como las protenas y los cidos nucleicos ( Nivel Macromolecular). Estas macromolculas constituyen la materia prima que forman los virus (Nivel Prebitico o Supramolecular) y las clulas (Nivel Celular). En el Nivel Subcelular mltiples molculas se ensamblan y dan lugar a estructuras especializadas como los organoides (mitocondrias, cloroplastos, etc). Podemos decir que la vida aparece como propiedad definitoria en el Nivel Celular, o de otro modo, la clula es la porcin ms sencilla de la materia viva que es capaz de realizar todas las funciones imprescindibles para la vida. En la mayor parte de los individuos pluricelulares, las clulas se organizan de acuerdo a sus caractersticas y funciones conformando tejidos como el conectivo, muscular, epitelial, nervioso (Nivel Tisular). Los tejidos estn ordenados en estructuras funcionales, denominadas rganos como el corazn y los pulmones en los animales, o las hojas y las races en las plantas. Las funciones biolgicas bsicas se llevan a cabo por un sistema o aparato, que es una asociacin coordinada de tejidos y rganos. Los organismos o individuos pluricelulares estn formados por sistemas que actan en forma coordinada y rigurosa. Existen otros niveles de organizacin biolgica, adems de los nombrados anteriormente, donde las propiedades provienen de la relacin entre los organismos. Por ejemplo, el Nivel de organizacin POBLACIN rene a todos los individuos de una misma especie que viven en un mismo lugar, en el mismo tiempo, y que comparten el mismo hbitat. Estas poblaciones interactan de distinta manera con otras poblaciones del lugar constituyendo una COMUNIDAD, por ejemplo la poblacin de seres humanos de la ciudad de Buenos Aires y el conurbano, aprovecha para alimentarse a las distintas poblaciones de animales y plantas de la zona y se halla parasitada por las mismas poblaciones de parsitos intestinales. Esta comunidad comparte el mismo lugar fsico que presenta caractersticas particulares. La unin de estos factores fsicos con los factores biolgicos constituyen los ECOSISTEMAS. Todos los ecosistemas de la Tierra estn relacionados, directa o indirectamente. Es por ello que un cambio drstico o continuo de alguno de ellos indefectiblemente acarrear cambios en los restantes. Del mantenimiento de un equilibrio entre los distintos ecosistemas, depende la vida en el planeta.

Tabla 1.1- Niveles de Organizacin 1. Nivel Subatmico 2. Nivel Atmico 3. Nivel Molecular (Monosacridos, Aminocidos, Nucletidos, etc.) 4. Nivel Macromolecular (Polisacridos, Protenas, Acidos nucleicos, Lpidos complejos, etc. ) 5. Nivel Prebitico o Supramacromolecular (Virus ) 6. Nivel Subcelular (Organoides: Mitocondrias, Cloroplastos, Ribosomas, etc.) 7. NIVEL CELULAR {Clula Procarionte, Clula Eucarionte) Individuos Unicelulares: Bacterias, Algas unicelulares, Levaduras, Protozoos, etc. 8. Nivel Tisular (Tejidos: Conectivo, Epitelial, Muscular, etc.) 9. Organos (Corazn. Pulmones. Estmago, etc.) 10. Sistemas y Aparatos (Aparato Circulatorio, Sistema digestivo, etc. ) 11. Organismos(Individuos Pluricelulares, Animales y Vegetales Superiores). 12. Poblacin 13. Comunidad. 14. Ecosistema 15. Universo Durante el desarrollo de nuestra materia, nos ocuparemos de los niveles de organizacin ms sencilla y haremos hincapi en el Nivel Celular de Organizacin.

ORGANIZACIN CELULAR
TEORA CELULAR La clula es la unidad de vida ms pequea. Es la unidad anatmica y fisiolgica de todos los seres vivos. Dos cientficos alemanes el botnico Mattias Schleiden (1804-1881) y el zologo Theodor Schwann (1810-1882) fueron los primeros en sealar que "Los cuerpos de las plantas y de los animales estn compuestos por clulas y por productos celulares " enunciando el postulado inicial de la Teora Celular Posteriormente, Rudolph Virchow (1821-1902) amplio la Teora Celular y afirm: " Todas las clulas proceden de otra preexistente" . Por lo tanto, las clulas no surgen por generacin espontnea a partir de materia inanimada. Otra importante conclusin de la Teora Celular afirma que todas las clulas actuales, tienen un origen comn. La evidencia ms importante, sobre el origen comn de todas las formas celulares, radica en las similitudes bsicas de sus estructuras y principalmente de su composicin molecular. Tabla 1.2 Postulados de la Teora Celular

1- Todos los seres vivos estn formados por clulas y productos celulares (unidad anatmica) 2- Las funciones de un ser vivo son el resultado de la interaccin de las clulas que lo componen (unidad fisiolgica) 3- Toda clula slo puede tener origen en una clula progenitora. 4- Toda clula tiene la informacin hereditaria de el organismo del cual forma parte, y esta informacin pasa de una clula progenitora a una clula hija. CARACTERSTICAS DE LAS CLULAS Todas las clulas estn cubiertas por una membrana externa, llamada membrana plasmtica, que las separa de otras clulas y del medio circundante con el cual intercambian materia y energa. Este intercambio esta altamente regulado y es selectivo. De esta forma la membrana plasmtica debe actuar no slo como limite celular sino tambin como barrera selectiva. Por lo tanto la clula, mantiene una composicin qumica muy ordenada y diferente a la del entorno. Todas las clulas poseen un metabolismo o conjunto de reacciones qumicas, que posibilitan el mantenimiento de la vida. Este metabolismo para sustentarse necesita de una o ms fuentes de energa. Las clulas, necesitan de distintivos tipos de molculas energticas: * Monedas energticas, como el ATP * Molculas combustibles, como la glucosa o los cidos grasos * Molculas de reserva de energa, como el glucgeno o el almidn Dentro de las reacciones para obtener e interconvertir diferentes forma de energa, son muy importantes las reacciones de oxido-reduccin o reacciones REDOX. En este tipo de reacciones es esencial la participacin de las coenzimas de oxido-reduccin, como el NAD+ y el FAD. Todas las clulas, almacenan en forma de ADN , cido desoxirribonucleico, a informacin necesaria para controlar sus actividades (reproduccin, metabolismo), y para establecer su propia estructura. El ADN, es un polmero formado por una secuencia lineal, de monmeros, llamados nucletidos. Esta secuencia de nucletidos, especifica una secuencia de aminocidos (estructura primaria de una protena). La especificidad de la secuencia de aminocidos determinada por la secuencia de bases del ADN esta regida por el cdigo gentico. La secuencia de bases del ADN, que codifica una protena, es un GEN. Las protenas, son molculas que llevan a cabo gran parte de las funciones celulares. Muchas protenas son enzimas, molculas encargadas de dirigir y regular el metabolismo celular. Las enzimas aceleran las reacciones qumicas, hacindolas compatibles con la vida. De esta manera las enzimas, dirigen la sntesis y degradacin de todas las molculas biolgicas, incluidos lpidos, glcidos, protenas y los mismos cidos nucleicos. De esta forma, el ADN al almacenar la estructura de las enzimas y otras protenas reguladoras, ejerce el control del metabolismo celular. El ADN utiliza un segundo cido nucleico, el ARN, cido ribonucleico, como intermediario. A partir de la secuencia de bases del ADN, que codifica una protena, se sintetiza una secuencia

de bases de ARN. Este proceso es llamado transcripcin. EL cido ribonucleico encargado de transportar la informacin, recibe la denominacin de ARN mensajero. Este ARN mensajero, porta la informacin necesaria para la sntesis de protenas, proceso llamado traduccin, el cual tiene lugar en el citoplasma con la intervencin de dicho ARNm, los ribosomas y el ARNt que porta los aminocidos. Las clulas para perpetuarse necesitan reproducirse. Esto significa que la informacin almacenada en el ADN debe duplicarse para poder ser transmitida a las clulas hijas. El ADN tiene la excepcional caracterstica de ser una molcula capaz de autorreplicarse, es decir de generar una copia de si misma. Este proceso es llamado duplicacin o replicacin.

DIMENSIONES DE LAS CLULAS


Por qu son tan pequeas las clulas? Las clulas deben captar alimento y otros materiales a travs de su membrana plasmtica y deben eliminar los productos de desecho, generados en las distintas reacciones metablicas rpidamente antes de que estos se acumulen hasta niveles txicos para la supervivencia celular. Por lo tanto, las clulas son pequeas, de modo que en ellas las molculas recorren distancias cortas, lo que acelera las actividades celulares. Adems, a mayor superficie celular, mayor es el transporte de molculas a travs de la membrana, siendo importante para la continuidad de los procesos metablicos la proporcin superficie celular sobre volumen celular . Supongamos una clula de forma cbica, cuanto ms grande es, su superficie crece proporcionalmente lado x lado, es decir a la segunda potencia de la longitud de un lado, en cambio el volumen celular aumenta proporcionalmente a la tercera potencia. Por lo tanto, el volumen celular aumenta ms que su superficie a medida que la clula crece, determinando el limite superior al tamao de la clula en cuestin. Est clula slo podr iniciar el proceso de divisin celular (previa duplicacin de su ADN) o perecer. Por otra parte, debemos recordar que en las clulas el material Gentico (localizado en el ncleo, en clulas eucariontes), posee un rea limitada de influencia sobre el citoplasma circundante, que es el que incrementa marcadamente su tamao durante el crecimiento celular, siendo otra limitante del tamao celular la relacin ncleo/citoplasma.

CLULAS EUCARIOTAS Y PROCARIOTAS


CARACTERSTICAS PRINCIPALES Todas las clulas se parecen y responden a un patrn comn por ms diversas que sean. Las clulas de organismos pluricelulares son diferentes en su funcin, por ser distintas estructuralmente, pero todas concuerdan con un patrn comn. Por ejemplo, aquellas especializadas en la sntesis de lpidos, tendrn mayor desarrollo del retculo endoplasmtico liso y sern distintas de las neuronas especializadas en la transmisin del impulso nervioso, cuya especializacin es tan grande que pierden su capacidad de reproducirse. A pesar de las semejanzas y diferencias entre las clulas y que todas cumplen con los

postulados de la Teora Celular, se distinguen dos grandes tipos de clulas:

PROCARIOTAS (sin ncleo verdadero) y EUCARIOTAS (con ncleo).


Tabla 1.3- Principales caractersticas comunes entre clulas eucariotas y procariotas 1- En ambos tipos celulares el ADN es el material gentico. 2- Ambos tipos celulares poseen membranas plasmticas como lmite celular. 3- Poseen ribosomas para la sntesis proteica. 4- Poseen un metabolismo bsico similar 5- Ambos tipos celulares son muy diversos en formas y estructuras. Los eucariontes son organismos cuyas clulas poseen un sistema de endomembranas (membranas internas) muy desarrollado. Estas membranas internas forman y delimitan organelos donde se llevan a cabo numerosos procesos celulares. De hecho l ms sobresaliente de estos organelos es el ncleo, donde se localiza el ADN. Justamente, el trmino eucarionte, significa ncleo verdadero (eu: verdadero, carion: ncleo). Por lo tanto, las clulas eucariontes, poseen diversos compartimentos internos, rodeados por membranas. De esta forma es ms eficiente reunir a los sustratos y sus enzimas, en una pequea parte del volumen celular total. Adems de conseguirse una mayor velocidad, las membranas favorecen la aparicin de estructuras reguladoras que orientan el flujo de molculas y su posterior conversin en otros productos. Ciertos procesos como la fotosntesis y la cadena respiratoria estn altamente organizados gracias a la localizacin de las enzimas en diferentes estructuras de membrana. Por otra parte, las membranas tambin impiden la aparicin de sustratos en forma inespecfica en distintas regiones de la clula, ya que actan como barrera selectiva. En cuanto al tamao, podemos decir que en promedio una clula eucarionte es diez veces mayor que una clula procarionte. En cuanto al material gentico, podemos decir que el ADN eucariota posee una organizacin mucho ms compleja que el ADN procarionte. Las clulas procariontes carecen de ncleo y generalmente son mucho menores que las clulas eucariontes. El ADN de las clulas procariontes no est rodeado por una membrana, pero puede estar limitado a determinadas regiones denominadas nucleoides. Las clulas procariontes, al igual que las clulas eucariontes, poseen una membrana plasmtica, pero carecen de membranas internas, que formen organelos. Sin embargo, debemos precisar que en algunas clulas procariontes, la membrana plasmtica forma laminillas fotosintticas. Las clulas procariontes poseen una caracterstica nica, una pared de peptidoglicanos, un gran polmero de glcidos y aminocidos. Tabla 1.4- Caractersticas Diferenciales entre el Modelo Celular Procaritico y Eucaritico Caracterstica Ncleo Cromosomas Clula Procaritica No posee membrana nuclear Clula Eucaritica Posee membrana nuclear

Un nico cromosoma circular y Posee uno o ms cromosomas

desnudo ADN extracromosmico Organelas citoplasmticas Puede estar presente como plsmidos No posee

lineales unidos a protenas (cromatina) Presente en organelas Mitocondrias y cloroplastos, (los cloroplastos presentes slo en clulas vegetales) Semipermeable, sin las funciones de la membrana procaritica Presenta REG, REL, Golgi, lisosomas, vacuolas y vesculas.

Membrana plasmtica

Contiene las enzimas de la cadena respiratoria, tambin puede poseer los pigmentos fotosintticos No posee

Sistema de endomembranas Pared celular

Capa rgida de peptidoglucano No poseen pared de (excepto micoplasmas) peptidoglucano. Pueden poseer una pared de celulosa o quitina Ausentes (excepto micoplasmas) Ausente Ausente 70 S en el citoplasma Fisin Binaria (amitosis) 0,2 a 10 mm Generalmente presentes Presente. Formado por filamentos proteicos. Presente 80 S en el retculo endoplsmico y en el citosol Mitosis - Meiosis Siempre superior a 6 mm

Esteroles Citoesqueleto Exocitosis y Endocitosis Ribosomas Divisin Tamao

ESTRUCTURA DE LAS CLULAS PROCARITICAS

Fig. 1.2- Esquema de una ultraescructura de una bacteria idealizada

BACTERIAS, MICOPLASMAS Y ALGAS CIANOFCEAS

Cuadro 1.1- Estructura de una Clula procarita Las bacterias pueden definirse como organismos unicelulares procariontes que se reproducen por fisin binaria. Contienen toda su informacin gentica en un nico cromosoma bacteriano circular. Tambin poseen sistemas productores de energa y biosintticos necesarios para el crecimiento y la reproduccin. Poseen como caracterstica particular una pared rgida de peptidoglicanos. Son generalmente de vida libre y poseen ADN extracromosmico en forma de plsmidos, estos codifican genes de resistencia a antibiticos o factores "sexuales" como los pili. Los micoplasmas son las bacterias mas pequeas de vida independiente. Son muy flexibles y deformables por lo que atraviesan los filtros de esterilizacin. Entre sus caractersticas principales se encuentran: a) carecen de pared celular, b) en su membrana plasmtica poseen esteroles, que no son sintetizados por la bacteria sino que son absorbidos del medio de cultivo o

del tejido donde se desarrolla.. Los micoplasmas son resistentes a la penicilina (carecen de pared de peptidoglucano) y por la misma razn no toman la coloracin de Gram. Las cianobacterias, anteriormente llamadas algas cianofceas (azulverdosas), son bacterias Gramnegativas. Se encuentran presentes en estanques, lagos, suelo hmedo, cortezas de rboles, ocanos y algunas en fuentes termales. La mayor parte de las cianobacterias son auttrofos fotosintticos. Contienen clorofila a, que tambin se encuentra en plantas y algas. La clorofila a y pigmentos accesorios se localizan en membranas fotosintticas, llamadas laminas internas o laminillas fotosintticas. Muchas especies de cianobacterias fijan nitrgeno, este proceso enriquece el suelo. En la Tabla 1.4 se aprecian las diferencias ms importantes entre las clulas procariotas (bacterias) y eucariotas PLSMIDOS Un plsmido es una molcula de ADN extracromosmico que se replica en forma autnoma, por lo que al igual que el cromosoma es un replicn. Puede haber hasta 50 copias de un plsmido en una bacteria. Funcionalmente los plsmidos son elementos genticos accesorios, es decir que la bacteria puede vivir sin ellos. Sin embargo, la informacin que contienen puede contribuir a la adaptacin de la bacteria al medio y a la evolucin de la misma. Los plsmidos pueden contener genes que codifican factores de resistencia a antibiticos (los plsmidos R) y factores de patogenicidad como exotoxinas. La evolucin bacteriana a travs de los plsmidos es factible, ya que pueden ser intercambiados entre distintas bacterias (por ejemplo, el plsmido F). Es decir que ciertos genes pueden transferirse de una bacteria otra mediante el pasaje de plsmidos, a este mecanismo se lo denomina conjugacin. Para que la conjugacin pueda llevarse a cabo las dos bacterias deben ponerse en contacto fsico . Esto es posible debido a que una de las bacterias, posee pili sexuales (pelos) en su envoltura. Estos pili se encuentran codificados en el mismo plsmido F (plsmido conjugativo). La bacteria que transfiere el plsmido es la que posee pili y se la denomina F+, la clula receptora es F-. TRANSPOSONES Los transposones son elementos genticos movibles, que se encuentran presentes en los procariontes (aunque tambin en las clulas eucariontes). El descubrimiento de los transposones se lo debemos a Barbara McClintock. Los transposones son fragmentos de ADN que se mueven de una localizacin a otra del cromosoma. Esta transposicin es catalizada por una enzima llamada transposasa. El gen de la transposasa esta incluido dentro del mismo transposn. Los transposones al ser elementos mviles, dentro del genoma, pueden provocar mutaciones al insertarse en nuevas regiones del ADN. PARED CELULAR. BACTERIAS GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS Por fuera de la membrana celular, se encuentra una pared celular rgida de peptidoglicano, que esta presente en todas las bacterias excepto los micoplasmas. La presencia de la pared protege

a la bacteria de la diferencia de presin osmtica entre el medio interno de la bacteria y el medio exterior. De no existir la pared la bacteria estallara. Adems la pared cumple funciones de proteccin como por ejemplo contra sustancias txicas . Existen dos tipos de pared bacteriana que pueden diferenciarse por la Tincin de Gram (siglo XIX). El primer grupo de bacterias son aquellas capaces de retener el colorante cristal violeta luego de la decoloracin con alcohol-cetona. Estas bacterias son llamadas Grampositivas. El segundo grupo esta conformado por aquellas bacterias incapaces de retener el colorante luego del tratamiento decolorante, por lo tanto son llamadas Gramnegativas. LA PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS GRAMPOSITIVAS

Fig. 1.3- Esquema de la parecelular de una bacteria Grampositiva La pared celular de las Grampositivas es ms gruesa que la de los Gramnegativas. Posee peptidoglicano, cidos teicoicos y lipoteicoicos. El componente fundamental es la murena, un peptidoglicano que solo se encuentra en los procariontes. La murena consiste en una cadena

lineal de dos azcares alternados N-acetilglucosamina y cido acetilmurmico. A cada residuo de cido murmico se encuentra unido un tetrapptido compuesto de D- y L- aminocidos. Aproximadamente un tercio de los tetrapptidos presentes participan de la unin lateral entre cadenas adyacentes de murena. La pared celular es biolgicamente estable, resiste el ataque de las enzimas de los mamferos, excepto de la lisozima que la degrada. La sntesis de la pared puede ser afectada por antibiticos como la penicilina. Los cidos teicoicos son el principal determinante antignico de las bacterias Grampositivas y por lo tanto definen la individualidad inmunolgica de estas bacterias. LA PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS GRAMNEGATIVAS

Fig. 1.4- Esquma de la pared celular de una bacteria Gramnegativa El espesor de la pared celular de una bacteria Gramnegativas es considerablemente menor que el de una Grampositivas. La cantidad de murena es mucho menor en los Gramnegativas. Los cidos teicoicos no estn presentes en las bacterias Gramnegativas. A ambos lados de la fina pared de murena se encuentra un gel periplsmico, que define al llamado periplasma (antes llamado espacio periplasmtico). Por fuera del periplasma se encuentra una estructura exclusiva de las Gramnegativas, la denominada membrana externa. Si bien es estructuralmente similar a una bicapa lipdica, su composicin es diferente de la de otras membranas biolgicas. Esta bicapa es muy asimtrica, la semicapa interna esta compuesta por fosfolpidos, pero la semicapa externa esta compuesta por lipopolisacridos (LPS), altamente txico para el ser humano (endotoxina). Para obtener nutrientes las bacterias Gramnegativas, poseen porinas que son protenas que forman poros en la membrana externa.

CPSULAS Por fuera de la membrana externa de las Gramnegativas y de la gruesa pared de las Grampositivas, se encuentra presente, en algunas bacterias, una cpsula o matriz exopolisacrica, formada por un gel hidroflico. En general esta cpsula o matriz esta formada por polmeros de azcares. Las cpsulas permiten a las bacterias evadir los mecanismos de defensa de los organismos pluricelulares, tambin tienen funciones de adherencia a epitelios permitiendo de esta manera colonizar los tejidos del husped.

ESTRUCTURA DE LAS CLULAS EUCARITICAS

Cuadro 1.2- Estructura de una Clula eucarita

Fig.1.5- Esquema de la ultraestructura tridimencional de una clula animal y sus principales componenetes

Presentan este modelo celular, los organismos de los reinos Protista, Hongos, Plantas y Animales. Si bien existe una gran diversidad entre estas clulas, el modelo bsico es similar, presentando como estructura sobresaliente el ncleo celular. NCLEO CELULAR Las diversas partes de una clula eucaritica interactan de forma integrada. Esto es posible porque existe un centro primordial de control: el ncleo celular. Una membrana doble, la envoltura nuclear (constituida por dos unidades de membrana), controla el transporte, muy selectivo, de sustancias entre el ncleo y el citoplasma. El pasaje se realiza a travs de los poros nucleares. La envoltura nuclear posee ribosomas adheridos a la cara citoplasmtica y una estructura proteica en su parte interna llamada lamina nuclear, que sirve como esqueleto al ncleo. En el interior del ncleo, se encuentra el material gentico (ADN) asociado a protenas bsicas llamadas histonas, formando una estructura fibrilar muy enrollada denominada cromatina y el nucleolo, sitio de ensamblaje de los ribosomas (estructuras esenciales para la sntesis de

protenas, formados por ARN ribosomal y protena). El ARN ribosmico se sintetiza en el nucleolo, y las protenas ribosmicas en el citoplasma, para pasar despus al ncleo y de all al nucleolo, donde se unen al ARN ribosomal para formar los ribosomas. Tabla 1.5- Caractersticas del Ncleo Celular y sus Componentes Estructura : Ncleo Celular Ncleo Descripcin Funcin Estructura rodeada por una doble Regular la funcin celular. membrana con poros. Contiene Control del metabolismo, cromatina/cromosomas y reproduccin (ciclo celular) y nucleolo. diferenciacin celular. Estructura formada por dos unidades de membrana unidas a nivel de los poros nucleares. Continuacin del REG. Posee poros que regulan el pasaje entre ncleo y citoplasma

Envoltura Nuclear

Nucleolo

Cuerpo granular en el ncleo, que Sitio de sntesis del RNA consiste en ARN y protenas. ribosmico y de ensamble de los ribosomas. ADN asociado a protenas, tanto estructurales (histonas) como a protenas regulatorias. La cromatina es visible durante la interfase celular ADN asociado a protenas, en estado superenrrollado. Visible en forma de estructuras cilndricas cuando la clula se divide, ya sea en mitosis o meiosis. Empaquetamiento (plegamiento) de ADN. El ADN compone los genes. Funciones regulatorias de la transcripcin gentica. Contienen los genes que son las unidades de informacin, que rigen las funciones y estructura celular.

Cromatina

Cromosomas

Rodeando al ncleo encontramos el CITOPLASMA, coloide donde predominan como constituyentes agua, iones, enzimas y donde se encuentran incluidos los organelos celulares. El citoplasma se encuentra separado del ambiente exterior por la membrana plasmtica. MEMBRANA PLASMTICA Estructuralmente esta compuesta por una bicapa fosfolipdica. El colesterol esta presente en las clulas animales, pero esta ausente, en general, en plantas, hongos y procariontes (salvo micoplasmas). La membrana plasmtica tambin contiene mltiples protenas con diversas funciones. Podemos dividirlas en dos grandes grupos: a) protenas integrales de membrana y b) protenas perifricas de membrana. Las primeras atraviesan la membrana de lado a lado, mientras que las segundas estn en contacto con la membrana, pero no la atraviesan. Algunas son enzimas reguladoras, otras receptores hormonales. Existen tambin protenas transportadoras y canales reguladoras del movimiento de iones y molculas a travs de la membrana plasmtica, de all su enorme especificidad. Otra funcin importante de la

membrana es la comunicacin intercelular y el reconocimiento de diversos tipos de molcula (hormonas, virus, anticuerpos, toxinas, etc.) que interactan con ella. En general esta funcin es llevada acabo por glucoprotenas y glucolpidos, que se encuentran solo en el lado externo de la membrana plasmtica. Se cree que los glcidos juegan un importante papel en la adhesin entre clulas. A esta capa, de glucolpidos y glucoprotenas se la denomina glucoclix. SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS Este sistema se compone de sistemas membranosos interconectados entre s, como el retculo endoplalmtico liso o agranular (REL), el retculo endoplasmtico rugoso o granular (REG) y el aparato de Golgi. Estas estructuras permiten la circulacin de sustancias siempre dentro de formaciones limitadas por membrana interactuando por medio de vesculas. Tabla 1.6 - Organizacin del Sistema de endomembranas Estructura Retculo endoplasmtico rugoso (REG) Descripcin Funcin Membranas internas en forma Sntesis de Protenas destinadas de sacos aplanados y tbulos. a secrecin(exportacin) o a la Con ribosomas adheridos a su incorporacin de membranas. superficie externa. La envoltura nuclear es parte del REG. Membranas internas donde predominan los tbulos. Sin ribosomas adheridos. Pilas de sacos membranosos aplanados (dictiosomas). Funcional y estructuralmente polarizado. Sitio de biosntesis de lpidos y detoxificacin de medicamentos. Modificacin de protenas (glicosilacin). Empaquetamiento de protenas secretadas. Clasificacin de las protenas que se distribuyen a membrana plasmtica, secrecin o lisosomas.

Retculo endoplasmtico liso (REL) Aparato de Golgi

Lisosomas

Vesculas (sacos) membranosas Contienen enzimas hidrolticas, que desdoblan materiales ingeridos, secreciones y deshechos celulares. Sacos membranosos principalmente, en plantas, hongos y algas. Transporte de materiales, deshechos y agua.

Vacuolas

ORGANELAS Tabla 1.7 - Principales organoides membranosos de la clula eucarionte

Estructura Mitocondria

Descripcin

Funcin

Organelas semiautnomas. Poseen Metabolismo aerbico. Sitio ADN y ribosomas tipo procarionte. de muchas de las reacciones Una doble membrana les sirve de de la respiracin celular. All envoltura. La membrana interna se realizan el ciclo de Krebs, forma las crestas mitocondriales. la cadena respiratoria y la fosforilacin oxidativa. Es decir la transformacin de la energa de lpidos o glucosa (molculas combustibles) en ATP (moneda energtica). Organela semiautnoma. Posee La clorofila capta la energa ADN y ribosomas tipo procarionte. luminosa para formar ATP y Una doble membrana envuelve a otros compuestos con gran los tilacoides. La clorofila, se cantidad de energa. Estos encuentra en las membranas compuestos altamente tilacoidales. energticos sirven para sintetizar, glucosa a partir de CO2. Vesculas membranosas que contienen diversas enzimas relacionadas con el metabolismo del oxigeno y el perxido de hidrogeno. No poseen ADN ni ribosomas Sitio de muchas reacciones metablicas. Enzimas que protegen de la toxicidad del oxigeno, por ejemplo la catalasa.

Cloroplasto

Microcuerpos (Peroxisomas)

RIBOSOMAS Y POLIRRIBOSOMAS Son estructuras redondeadas que a diferencia de las anteriores, carecen de unidad de membrana. Estn constituidos por dos subunidades, mayor y menor separadas entre s. Ambas subunidades se unen cuando leen una molcula de ARNm. Las subunidades estn formadas por ARNr y protenas, siendo ensambladas en el nucleolo. Cuando hay varios ribosomas unidos a una molcula de ARNm, lo denominamos polirribosoma. La funcin de los ribosomas es sintetizar protenas. CITOESQUELETO El citoesqueleto es una red de fibras protenicas. Esta red es dinmica encontrndose en constante cambio. Sus funciones, son esenciales para las clulas eucariontes y abarcan motilidad celular, forma, diferenciacin, reproduccin, regulacin, etc.

Tabla 1.8 - Organizacin General del citoesqueleto Estructura Descripcin Tubos huecos compuestos por la forma monomrica de la protena tubulina. (monmero globular) Funcin Sostn estructural, participan en el movimiento de organelas y la divisin celular (aparato mittico), componentes de cilios, flagelos y centrolos.

Microtbulos

Filamentos de actina (microfilamentos)

Sostn estructural, Estructura slida en forma de participan en el movimiento huso consistente en la protena de la clula y sus organelos y actina. (monmero globular) en la divisin celular. Sostn estructural. Forman Protenas filamentosas, en redes que conectan la forma de tubos. Compuestas por membrana plasmtica con la monmeros fibrosos. envoltura nuclear. El huso mittico se forma entre los centrolos durante Pares de cilindros huecos, la divisin de clulas localizados cerca del centro de animales, fija y organiza los la clula, formados por microtbulos. Estn microtbulos. ausentes en las plantas superiores. Movimiento de algunos Proyecciones relativamente organismos unicelulares. Se cortas que se extienden desde utiliza para mover la superficie celular. Compuestas materiales en la superficie por microtbulos. de algunos tejidos. Proyecciones largas compuestas Locomocin celular de por microtbulos. Cubiertos por espermatozoides y algunos membrana plasmtica organismos unicelulares.

Filamentos intermedios

Centrolos

Cilios

Flagelos

Fig. 1.6- Esquema de componentes del citoesqueleto

CLULA EUCARITICA ANIMAL Y VEGETAL

Fig. 1.7- Esquemas de una clula vegetal (izquierda) y tridimencional de un cloroplasto con sus componentes (derecha)

Cuadro 1.3- Modelos bsicos de clula eucarita Las clulas eucariontes poseen dos modelos estructurales bsicos: a) clulas auttrofas

fotosintticas y b) clulas hetertrofas. Las clulas auttrofas son aquellas que sintetizan su propio alimento, es decir sus propias molculas combustibles. En este caso las clulas eucariontes vegetales son clulas auttrofas fotosintticas, por lo tanto utilizan la luz solar como fuente de energa. Transforman la energa solar en energa qumica, este proceso es llamado fotosntesis. La fotosntesis en las clulas vegetales se lleva a cabo en un organelo membranoso llamado cloroplasto. Dentro del cloroplasto se encuentran sacos membranosos apilados, denominados tilacoides, en cuyas membranas encontramos el pigmento llamado clorofila, esencial para la fotosntesis. Las clulas hetertrofas son aquellas que no sintetizan su propio alimento sino que necesitan una fuente externa de energa tanto como de materiales de construccin de sus propias molculas. Las clulas animales (y los hongos), son clulas eucariontes hetertrofas. Las clulas animales y las clulas vegetales poseen unas organelas membranosas llamadas mitocondrias, donde se lleva acabo la respiracin celular. En este proceso son rotos los enlaces de alta energa de las molculas combustibles orgnicas. Esta energa liberada es utilizada para la sntesis de las monedas energticas como el ATP. El ATP es esencial para las diferentes funciones celulares. Para que este proceso se lleve a cabo dentro de las mitocondrias es necesaria la presencia de oxigeno. Por lo tanto en ambos tipos celulares son necesarias las mitocondrias , para obtener energa qumica en forma de ATP a partir de las molculas combustibles. Pero es diferente el origen de las molculas orgnicas utilizadas como combustibles. En el caso de las clulas vegetales (auttrofas), ellas sintetizan sus propias molculas combustibles en los cloroplastos, en el proceso de fotosntesis. En cambio las clulas animales (hetertrofas), necesitan una fuente externa de molculas energticas que sirvan como combustible celular. Tabla 1.9 - Principales diferencias entre clulas animales y clulas vegetales Estructura Pared celular Aparato mittico (Huso acromtico ) Centrolos Vacuolas Metabolismo Mitocondrias Cloroplastos Clula animal Ausente Astral Presente Vacuolas pequeas Hetertrofo Presentes Ausentes Clula vegetal Pared celular constituida por celulosa. Anastral Ausente Vacuolas grandes, puede ser una grande central Auttrofo Presentes Presentes

Fig. 1.8- Esquema de la ultraestructura de una clula animal idealizada

Fig. 1.9- Esquema de la ultraestructura de una clula vegetal idealizada

VIRUS
Hacia fines del siglo pasado se formulo la teora de que cada enfermedad era producida por un germen especfico. Hasta ese momento los patlogos estaban convencidos de que para cada enfermedad seria posible encontrar el microorganismo responsable, utilizando las

siguientes tcnicas: a) observacin del germen con la ayuda del microscopio, b) cultivo sobre un medio nutritivo y c) retencin por filtros. Sin embargo, en 1892, Iwanowski (o Ivanovsky?) pudo demostrar que el agente productor de la enfermedad del mosaico de tabaco pasaba a travs de los filtros para bacterias y no poda ni verse ni cultivarse. Luego en 1898 Beijerinck, determin que la enfermedad del mosaico del tabaco era provocada por un nuevo agente infeccioso a los que denomino virus filtrables (virus: palabra de origen latino que significa veneno). Los virus estn ampliamente distribuidos en la naturaleza y afectan a todo tipo de organismos, tanto del reino animal, vegetal o protista. CARACTERSTICAS ESTRUCTURALES DE LOS VIRUS La estructura de los virus esta integrada por dos tipos de macromolculas: cidos nucleicos y protenas, los que forman las partculas virales o viriones. Bsicamente existen dos tipos de partculas virales: partculas virales simples (virus desnudo) o partculas virales envueltas (virus envuelto). El virus desnudo consta de un cido nucleico (genoma) asociado a protenas y una cubierta proteica o cpside. Por otra parte los virus envueltos aaden a esta estructura bsica una envoltura lipoproteica de origen celular. La funcin de la cpside es de servir al cido nucleico como proteccin y vehculo. Postulado de Lwoff

"nicamente sern considerados virus aquellos agentes infecciosos cuya partcula elemental contenga un solo tipo de cido nucleico". Es decir poseen ARN o ADN, pero no ambos tipos de cidos nucleicos funcionales a la vez. Por lo tanto los virus pueden ser ADN o ARN virus. Debido a la estructura simple de virus, para su multiplicacin dependen en forma absoluta de la clula husped que infectan. Por lo tanto consideraremos a los virus como parsitos intracelulares obligados.

REPLICACIN VIRAL
La clula husped, una vez infectada, sintetizar nuevas molculas de cido nucleico viral, ya que el genoma viral tomara el control de las actividades metablicas de la clula. Bajo este control, tambin se producirn gran cantidad de protenas virales. De esta manera el ensamblado de nuevas partculas virales provendr de la asociacin de las nuevas molculas de cido nucleico viral con las protenas. Este proceso es muy diferente de la reproduccin celular, tanto de los procariontes como de los eucariontes. Por lo tanto es mas apropiado hablar de REPLICACION VIRAL. LOS VIRUS COMO PARSITOS INTRACELULARES Hasta el momento no se ha podido demostrar que ningn virus aislado pueda utilizar o almacenar energa mediante procesos similares a la respiracin, tampoco pueden sintetizar protenas. Es decir no tienen metabolismo propio, dependiendo en forma absoluta del medio ambiente celular. El parasitismo de los virus se ejerce a nivel gentico, ya que el genoma viral dentro de la clula

desplaza al genoma de la clula hospedadora del control celular. PROVIRUS Anteriormente hemos explicado que los virus, infectan las clulas y hacen replicas de si mismos. Luego abandonan la clula husped y pasan a otra, recomenzando su ciclo. Pero tambin puede ocurrir que el genoma viral se integre al ADN del husped. Cuando el genoma viral se integra al genoma celular y se replica junto con este se lo denomina PROVIRUS. Un provirus puede activarse espontneamente o bien expuesto a diversos estmulos, una vez activado puede inducir la produccin de virus completos. Los provirus pueden modificar la morfologa celular y su metabolismo, esto puede deberse a la produccin de alguna protena viral. Estos cambios en la estructura celular, generalmente asociados a cambios en la membrana celular, inducidos por un provirus reciben el nombre de transformacin. En algunos casos estas clulas transformadas por los provirus pueden ser cancerosas. LOS VIRUS COMO AGENTES INFECCIOSOS El parasitismo celular obligado es la causa bsica por la cual un virus puede causar dao. La relacin que establece un virus y su clula husped es variable. El resultado de la interaccin depende tanto del virus en cuestin como de la clula husped. Por ejemplo, se denominan virus citocdicos , a los que como resultado de su multiplicacin, producen una rpida induccin hacia la muerte celular. Por otra parte se encuentran los virus no citocdicos, que son aquellos que no provocan la muerte celular. Ejemplos de virus no citocdicos serian los virus moderados y los virus oncognicos. Los virus moderados son aquellos que producen partculas virales y no producen la muerte celular. Han llegado con la clula husped a un estado de equilibrio ms o menos estable. Luego estn los virus oncognicos, capaces de estimular la divisin celular, estos cambios pueden ser irreversibles si la clula pierde la capacidad de regular su ciclo celular. Este estado se denomina transformacin celular. Los virus no citocdicos pueden causar dos tipos de infecciones : 1- Las infecciones latentes, donde el virus permanece sin manifestarse, alojado en clulas no productoras. Ante determinados estmulos, estrs, enfermedades, exposicin a la luz solar, el virus se reactiva, recomenzando la sntesis de cidos nucleicos y protenas virales. Ejemplos: L Herpes simplex, Varicela zoster. 2- Las infecciones crnicas, donde de una persona enferma siempre es posible obtener virus infeccioso, aun por periodos muy prolongados de tiempo. Por ejemplo, virus de la hepatitis B, Epstein-Barr, virus de la rubola.

Fig. 1.10- Virus del Mosaico del Tabaco (ARN virus) y Bacterifago T4 (ADN virus) MORFOLOGA VIRAL Los virus poseen gran variedad de formas y tamaos. Por ejemplo los virus que al microscopio electrnico aparecen aproximadamente esfricos se denominan isomtricos. En estos virus el cido nucleico esta rodeado por una cpside (caja) proteica. Las subunidades estructurales que forman la cpside, visibles al microscopio electrnico, se denominan capsmeros. A su vez los capsmeros estn formados por subunidades proteicas. La cpside por su naturaleza antignica es la que determina la identidad viral. El cido nucleico viral no se encuentra desnudo, sino que esta asociado a protenas distintas de las de la cpside, cuya funcin puede ser estructural (plegado del ADN) o enzimtica (polimerasa). Al conjunto de cido nucleico y protenas asociadas se lo denomina "core". Por ultimo diremos que los virus donde la cpside rodea directamente al cido nucleico (es decir que no hay un "core" evidente), el conjunto de cpside y cido nucleico recibe la denominacin de nucleocpside. GENOMA VIRAL El genoma, que puede encontrase en los distintos tipos de virus, puede sistematizarse de acuerdo a diversos criterios: 1- Tipo de cido nucleico: ADN o ARN 2- Polaridad o sentido: + o - (aplicado principalmente a los ARN virus) 3- Nmero de cadenas: monocatenario o bicatenario 4- Genoma circular o desnudo

5- Genoma entero o fragmentado Debemos recordar que las cadenas de un cido nucleico de doble cadena, son de polaridad (sentido) opuesto. Por convencin se considera que si una tiene sentido + la otra ser -. De acuerdo a este criterio se considera que un virus es + (o cadena +), cuando su genoma monocatenario tiene la misma polaridad que un ARNm. Es decir el mismo genoma viral, puede actuar dentro de la clula como ARNm y llevar a cabo directamente la sntesis de protenas virales. Los "virus +", pueden infectar con el cido nucleico solo, salvo los retrovirus que siendo +, necesitan una transcriptasa reversa asociada al genoma para poder infectar. Por el contrario, se denomina "virus -" cuando el genoma no puede actuar directamente como mensajeros. El ARN - puede actuar como molde, para la sntesis de ARN +, el ARNm viral.

Fig. 1.11- Esquema y microfotograa electrnica de un Bacterifago BACTERIFAGOS Los Bacterifagos son virus especficos de las bacterias. Bacterifagos, significa que se "alimenta" o multiplica a expensas de bacterias. Los Bacterifagos que infectan clulas husped, pueden establecer dos tipos de procesos: 1- Ciclo Ltico: en este tipo de ciclo el virus produce inmediatamente gran cantidad de cidos nucleicos virales y protenas de la cpside. Estos se ensamblan produciendo nuevas partculas virales que son liberadas al medio al producirse la lisis celular. 2- Ciclo Lisognico: en este ciclo la relacin entre clula husped y virus, puede prolongase por periodos variables de tiempo. El virus integra su genoma al cromosoma bacteriano, replicndose conjuntamente el cido nucleico del parsito y el del husped. Un virus bacteriano integrado al cromosoma se denomina profago. Por lo tanto el profago se replica junto con el ADN bacteriano. En determinadas circunstancias (por ejemplo ruptura del ADN bacteriano por luz

ultravioleta o agentes qumicos), el profago se activa, y comienza la produccin de cido nucleico viral y protenas virales, produciendo luego la lisis celular. Las bacterias que portan profagos se denominan lisognicas. Los Bacterifagos que pueden integrarse como profagos y que no lisan inmediatamente a las clulas se denominan fagos atenuados.

Fig. 1.12- Esquema del Ciclo Ltico Viral (de multiplicacn) y del Ciclo Lisogenico Viral LOS VIRUS COMO VECTORES Los virus pueden servir como vehculos (vectores), para transferir material gentico de una clula a otra. Este fenmeno se denomina transduccin. Durante el ciclo ltico, el ADN del husped queda fragmentado y alguno de esos fragmentos puede ser tomado al azar y quedar dentro de la cpside. De esta forma, cuando el virus infecta una nueva clula, transporta genes de una antigua clula husped a otra nueva.

VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA (HIV) El SIDA (sndrome de inmunodeficiencia humana), es una enfermedad infecciosa crnica producida por el virus HIV. Esta enfermedad esta caracterizada por una deficiencia inmunolgica progresiva, con la expresin clnica de infecciones oportunistas y/o tumores. El HIV es un retrovirus. Los retrovirus son virus cuyo material gentico es ARN. Una vez que el virus ha penetrado en una clula, una enzima llamada retrotranscriptasa, produce ADN a partir del ARN viral. El ADN recin sintetizado viaja al ncleo y se integra al ADN cromosmico . En este punto la infeccin se ha hecho permanente , y la forma integrada del virus se denomina provirus. El HIV es un LENTIVIRUS. Por lo tanto su ciclo vital intracelular (ciclo de infeccin) puede prolongarse por aos. Sus genomas son complejos y sus mecanismos regulatorios son solo parcialmente conocidos. Los Lentivirus causan infecciones crnicas. El sistema inmune del hombre reconoce las protenas del HIV como antgenos y produce anticuerpos contra ellas. Por lo tanto una persona infectada tendr circulando en sangre anticuerpos contra las protenas del HIV. En este aspecto se basa el test de diagnstico ms utilizado en la actualidad: el test de ELISA (inmunoensayo ligado a enzima).

Fig. 1.13- Esquema del Virus de la Inmunideficiencia Hunama (HIV) El virin del HIV, esta recubierto por una membrana lipdica, por lo tanto se trata de un virus envuelto. De la membrana sobresalen glicoprotenas: la gp41 y la gp120. La membrana compuesta por lpidos y protenas recubre el ncleo (core) del virin, formado por las protenas p28 y p24. En el core se encuentran el ARN del virus y la enzima transcriptasa inversa.

Ciclo Vital Intracelular de un retrovirus


Empieza cuando un virin o partcula vrica , se une a la superficie externa de una clula susceptible. Este primer estadio del ciclo se lo denomina adsorcin. Luego el virus fusiona su envoltura lipoproteica con la membrana celular, introduciendo en la clula su nucleocpside

junto con el ARN que constituye su dotacin gentica. En cada partcula viral se encuentran dos cadenas de ARN vrico. A este proceso se lo conoce como penetracin. La enzima transcriptasa inversa es una ADN polimerasa que primero produce una copia de ADN simple cadena que a continuacin se copia a si misma obtenindose ADN doble cadena. Por lo tanto este ADN doble cadena se obtuvo a partir de ARN. La sntesis del ADN doble cadena ocurre junto con la degradacin del ARN original. El ADN doble cadena (provirus), emigra hacia el ncleo y se integra en el propio ADN celular. La integracin de este ADN doble cadena en el cromosoma del husped es necesaria para la sntesis de nuevas molculas de ARN, por la ARN polimerasa celular, ya que el virus carece completamente de la maquinaria metablica necesaria para realizar la transcripcin y la sntesis de protenas necesarias para la cpside y la misma transcriptasa reversa.

Fig. 1.14- Esquema del Ciclo Vital Intracelular de un Retrovirus VIRUS DE LA HEPATITIS B (VHB) La hepatitis B en si misma, es un problema sanitario grave y muy extendido . Pero encierra

una amenaza peor. El virus que la produce es el carcingeno humano ms importante despus del tabaco. Trescientos millones de personas , la mayora habitantes con escasos recursos asistenciales, estn crnicamente infectados con el virus y tienen una probabilidad muy elevada de contraer cncer de hgado. En el tercer mundo, el virus suele transmitirse de madre a hijo, durante el primer mes de vida, y principalmente durante el nacimiento. Si el pequeo es nia, se convertir probablemente en portadora crnica y transmitir el virus de la hepatitis B (VHB) a su descendencia cuando alcance la edad frtil. En cambio en los pases desarrollados su incidencia es mayor en adultos, que por su profesin tienen contacto directo con la sangre (cirujanos, enfermeras, dentistas), los receptores de sangre u hemoderivados o personas que reciben tratamientos de dilisis o drogadictos intravenosos. El virus de la hepatitis B (VHB) es mucho ms contagioso que el HIV. EXPERIMENTO DE FRENKEL-CONRAT Y SINGER

Fig. 1.15- Esquema del experimento de Frenkel - Conrat y Singer Este experimento demostr que el ARN es el material gentico del virus del mosaico del tabaco. Los resultados del experimento son extensibles a otros tipos de virus con genoma a ADN. VIROIDES Los viroides son agentes infecciosos que poseen al igual que los virus un solo tipo de cido nucleico y son parsitos absolutos, pero y esta es la gran diferencia con los virus, carecen de cpside y envoltura. Por lo tanto los viroides estn constituidos solo por una secuencia de nucletidos, adems los viroides carecen de informacin para la sntesis de protenas, en cambio

los virus siempre poseen dicha informacin.

PRIONES
Las partculas infecciosas llamadas priones, estn constituidas nicamente por una protena de aproximadamente 250 aminocidos. Es decir carecen completamente de cidos nucleicos. Es esta la razn por la cual fue resistida durante mucho tiempo, la hiptesis de que las protenas por si solas podan ser la causa de enfermedades infecciosas. De acuerdo al dogma imperante hasta 1980, las enfermedades transmisibles (infecciosas) necesitaban material gentico, para que la infeccin se asentara en el husped. Hasta ese momento eran los virus los agentes infecciosos ms pequeos conocidos, y todos ellos poseen ADN o ARN como material gentico necesario para codificar sus protenas y dirigir la replicacin viral en el husped. Pero ahora sabemos que las partculas protenicas infecciosas (priones), pueden ser el sustrato de diversas enfermedades, hereditarias o contagiosas. Este comportamiento dual tanto infeccioso como hereditario era desconocido. Posteriormente se descubri que los priones se multiplican por una va increble y desconocida hasta ese momento: convierten protenas normales en MOLECULAS INFECCIOSAS, con solo alterar la estructura proteica. Las encefalopatas espongiformes transmisibles (EET), son las enfermedades degenerativas del sistema nervioso central que afectan a animales y seres humanos causadas por los priones. Se denominan espongiformes ya que el cerebro adquiere un aspecto parecido al de una esponja. Las EET que sufren los seres humanos son el Kuru (o muerte de la risa), la enfermedad de Creutzfeldt -Jakob (ECJ), el sndrome de Gerstman-Straussler-Scheinker (GSS) y el insomnio Familiar Fatal (IFF); las EET de animales, incluyen el scrapie (del ingles to scrape, raspar, por la tendencia de los animales infectados a rasparse contra postes , troncos o cercas para combatir la picazn) de ovejas y cabras, la enfermedad de agotamiento crnico de mulas y ciervos en cautiverio y la encefalitis espongiforme bovina (EEB), o enfermedad de la vaca loca. Las EET se caracterizan por su prolongado periodo de incubacin (en el hombre puede tener un periodo de incubacin de 30 o mas aos), generalmente asociadas a declives progresivos de las funciones motoras y cognitivas (enfermedad activa), y por su evolucin inevitablemente fatal. Las EET en el ser humano generalmente aparecen en personas de edad avanzada. Aparentemente todas las EET son causadas por el cambio en la estructura de una protena normalmente presente en las membranas celulares, denominada protena prinica (PrP). La forma anormal de la PrP se designa PrP sc (scrapie), para diferenciarla de la forma normal llamada PrPc (celular). La secuencia de aminocidos (estructura primaria) de la PrP c y la PrPsc es idntica lo que varia es su conformacin (plegamiento en el espacio). De acuerdo a esta teora la protena alterada (PrPsc), puede unirse a la protena normal (PrP c) y cambiar su conformacin, transformndola a su vez en una protena alterada. De esta forma se propagara la enfermedad y se generaran nuevas protenas infecciosas. De esta forma el pasaje de la forma normal a la patolgica es catalizada por el mismo prin (PrP sc), por lo tanto solo hace falta una pequea cantidad de este para provocar la transformacin de toda la protena normal, ya que se trata de un fenmeno de crecimiento exponencial.

Recientemente , se ha aceptado que los priones pueden ser transmitidos, posiblemente por comida, inoculacin directa en el cerebro, piel, msculo o estmago. Por esto la epidemia de EEB, ocurrida en Gran Bretaa provoco un enorme inters en todo el mundo. Desafortunadamente han aparecido en ese pas una nueva variedad de la ECJ (casos en personas mucho mas jvenes que lo usual), lo que probara una relacin causal entre la EEB y los casos seres humanos. El gobierno britnico tuvo que admitir la posibilidad de que la aparicin de estos extraos casos de la ECJ hubieran sido provocados al ingerirse carne vacuna infectada (tejido nervioso). Al principio habamos hablado de la dualidad de los priones, por un lado partculas infecciosas y por el otro responsables de enfermedades hereditarias. Esto es naturalmente confuso. Por ejemplo, ciertas enfermedades prinicas como la GSS, son hereditarias. Esta enfermedad tiene una herencia autosomal y dominante, lo cual significa que si un padre desarrolla la enfermedad , los hijos tienen un 50 por ciento de probabilidades de desarrollarla. La explicacin a estos hechos vino dado por el descubrimiento de mutaciones gnicas puntuales en la secuencia de nucletidos del gen que codifica la PrP . Estos genes mutados provocan cambios en la secuencia de aminocidos de la protena PrP. Estos cambios podran incrementar la probabilidad de la transformacin de la protena PrP mutante de una forma normal a una anormal patgena. Diferentes mutaciones en el gen provocaran diferentes protenas mutantes, con mayor o menor tendencia a transformarse en la forma aberrante patgena. Esto explica tambin las distintas enfermedades prinicas hereditarias, la ECJ espordica , un 15 por ciento de los casos hereditaria y la GSS autosomal dominante. Tabla 1.10- Principales Enfermedades causadas por Priones Enfermedad Kuru Sntomas tpicos Va de Propagacin Distribucin Nueva Guinea 2600 casos 1 persona por milln en todo el mundo Prdida de Infeccin, coordinacin, demencia probablemente por canibalismo Demencia, prdida de coordinacin De ordinario desconocida (espordica)

ECJ

100 familias En un 15 por ciento de identificadas (forma los casos hereditaria, heredada) por mutacin del gen que determina la Forma infecciosa 80 protena PrP casos Raramente por infeccin (por ejemplo por un transplante u otro tratamiento medico) EGSS Prdida de Herencia de una 50 familias

coordinacin, demencia mutacin en gen de la PrP IFF

identificadas

Trastornos del Sueo, Herencia en una 9 familias identificadas insomnio demencia mutacin del gen de la PrP

TCNICAS DE ESTUDIO DE LA CELULA


UNA COMBINACIN DE MTODOS AYUDA AL ESTUDIO DE LA CLULA El desarrollo de la biologa celular y molecular se produce en forma paralela a la invencin de instrumentos y tcnicas biofsicas y bioqumicas que extienden los sentidos a nuevos lmites y acrecientan el conocimiento de la estructura y funcionamiento de la clula. El acceso a este tipo de conocimiento resulta dificultoso pues las clulas son pequeas y transparentes. El ojo humano slo puede discriminar dos puntos separados por ms de 0,1 mm 100 micrmetros (mm). La mayora de las clulas son mucho ms pequeas y se necesita del microscopio ptico cuyo lmite de resolucin es de 0,2 mm. Para estructuras ms pequeas, que midan entre 0,4 y 200 nanmetros (nm), se requiere del microscopio electrnico. Para mayores detalles, consulte la Tabla 1a.2 Como se aprecia, las principales unidades de medida que se emplean corrientemente en microscopia no son las de uso cotidiano. En la siguiente tabla se expresan aquellas unidades y sus equivalencias: Tabla 1.11-Medidas utilizadas en microscopia Unidad Centmetro Milmetro Micrmetro Smbolo cm mm mm Equivalencia (m) 0,01 metro 0,001m 10-6 m en metroUtilizacin principal en citologa Objetos macroscpicos a simple vista. Huevos grandes. Objetos macroscpicos a simple vista. Clulas muy grandes. Microscopia de luz (ptica) Casi todas las clulas y organelos grandes. Nanmetro nm 10-9 m Microscopia electrnica. Organelas grandes. Angstrom 10-10 m pequeas, macromolculas

Microscopia electrnica. Mtodos de difraccin de rayos X. Molculas y tomos.

Por lo tanto: 1m=102 cm=102 mm=103 mm=106 nm=109

Por otra parte, la mayora de los componentes de la clula viva son transparentes debido a su alto contenido de agua. Al disecarla no presenta un significativo contraste. Entonces la tincin selectiva de ciertos componentes celulares resuelve el problema del contraste. Sin embargo la mayora de estas tcnicas conduce a la muerte de la clula y an ms, a cambios qumicos y morfolgicos que no se encuentran en las clulas activas y en la matriz extracelular. Cabe destacar que algunos pigmentos del citoplasma y de organoides vegetales pueden absorber determinadas longitudes de onda (l) [1] y no necesitan de previo tratamiento para su observacin al microscopio ptico. Para el estudio de la clula viva se emplean tcnicas pticas especiales como, por ejemplo, la microscopia de contraste de fase o la de interferencia.

Fig. 1.16 Cuadro comparativo de distintos ejemplos de niveles de organizacin a nivel microscpico.

En el nivel macromolecular, la difraccin de rayos X resulta ser la tcnica ms adecuada para estudiar la configuracin molecular de protenas, de cidos nucleicos y de algunos entes prebiticos tales como los virus. Los compuestos qumicos que constituyen la clula pueden ser detectados, descriptos y localizados dentro y fuera de la clula mediante mtodos adaptados de la Qumica Analtica. Las tcnicas aislamiento y separacin especfica de clulas, organelas y macromolculas y el preparado de cultivos celulares para el estudio detallado son herramientas invalorables para el avance de la biologa celular y molecular. LOS MICROSCOPIOS PROVEEN VENTANAS PARA EL MUNDO DE LA CLULA

Fig. 1.17- Esquema de un Microscopio ptico El descubrimiento y estudio temprano progres con la invencin y mejora de los microscopios en el siglo XVII. Los microscopios de varios tipos son an herramientas indispensables para el estudio de las clulas. Los microscopios primeramente usados en el Renacimiento tanto como los que son utilizados en los laboratorios hoy, son microscopios pticos. La luz visible pasa a travs de la muestra y de las lentes de vidrio por donde la luz es refractada (doblada) de tal manera, que la imagen del espcimen es amplificada cuando se proyecta en el ojo. Dos valores importantes en microscopia son el aumento y el poder de resolucin . Entendemos por aumento a las dimensiones aparentes de los objetos comparados con su tamao real. El poder de resolucin es la medida de la nitidez de la imagen; es la capacidad del instrumento para brindar imgenes distintas de dos puntos cercanos. El microscopio ptico nunca puede resolver detalles menores a 0,2mm, la medida de una pequea

bacteria. Esta resolucin es limitada por la longitud de onda de la luz visible usada para iluminar la muestra. Los microscopios pticos o de luz pueden aumentar efectivamente alrededor de 1000 a 1500 veces el tamao de la muestra real; si se incrementase el aumento la imagen proyectada sera borrosa. La mayora de las mejoras en microscopia de luz del comienzo de este siglo ha involucrado nuevos mtodos para aumentar el contraste. Sin estas tcnicas sera imposible para el ojo humano el conocimiento del mundo celular. La mayora de las organelas son demasiado pequeas para ser visualizadas por la microscopia de luz. La Biologa Celular avanz rpidamente hace un poco ms de cincuenta aos con la introduccin del microscopio electrnico. En lugar de luz visible, el microscopio electrnico utiliz un haz de electrones [2] a travs de la muestra. El poder de resolucin est inversamente relacionado con la longitud de onda (l) de la radiacin que un microscopio usa y un haz de electrones tiene longitudes de onda mucho ms cortas que la luz visible. Para mayores precisiones al respecto, consulte el cuadro 1.4 Cuadro 1.4- Poder de resolucin del Microscopio En cualquier tipo de microscopio, el poder de resolucin depende de la longitud de onda (l) y de la apertura numrica (AN) del objetivo (la capacidad de colectar la luz). As, el lmite de resolucin, que es la distancia mnima que debe existir entre dos puntos para que puedan ser discriminados como tales, y responde a la siguiente ecuacin: Lmite de resolucin=0,61 l /AN A su vez, AN = n . seno a donde, n es el ndice de refraccin del medio que atraviesa el haz y a es el ngulo de apertura Ntese que el lmite de resolucin es inversamente proporcional al poder resolutivo del instrumento, de modo tal que cuanto mayor sea ste, menor ser el lmite de resolucin conseguido.

Fig. 1.18- Comparacin entre un Microscopio ptico y Electrnico La mayora de los microscopios electrnicos modernos pueden lograr una resolucin de 0,2 nm, unas 1000 veces mejor que la obtenida con el microscopio ptico. Los bilogos usan el trmino ultraestructura celular para referirse a la anatoma celular cuando se resuelve por un microscopio electrnico. Hay dos tipos de microscopio electrnico: el microscopio electrnico de transmisin (MET) y el microscopio electrnico de barrido (MEB): El MET permite develar la ultraestructura de las clulas y de la matriz extracelular. El haz de electrones es desviado por un campo electromagntico (que actuara como lente). En este tipo de microscopia se requiere que las muestras tengan un grosor de 100 nm. El MEB es especialmente til para estudios de superficie del espcimen. El haz de electrones explora la superficie de la muestra la que usualmente se recubre con una pelcula de oro. El haz excita a los electrones sobre la superficie de la misma muestra y estos electrones secundarios se recolectan y enfocan sobre una pantalla. Esto forma una imagen de la topografa del espcimen. Un importante atributo del MEB es su gran profundidad de campo, la cual resulta en una imagen tridimensional. El ME revela muchas organelas que son imposibles de resolver con MO. Pero el MO ofrece muchas ventajas especialmente para el estudio de la clula viva. Una desventaja de ME es que los mtodos qumicos y fsicos usados para preparar la muestra, no slo matan a las clulas sino que puedan introducir artefactos, estructuras peculiares vistas en micrografas que no existe en una clula viva.

La preparacin de la muestra para el MO y el ME resulta similar si se trabaja con las clulas muertas. En la tabla 1.9 se comparan los pasos a seguir en ambos tipos de microscopia para la preparacin de la muestra: Tabla 1.12 -Tcnicas para Preparar una Muestra en Microscopia ptica y Electrnica Paso OBTENCIN: Se hace cuidadosamente con instrumental adecuado. FIJACIN: se destina a Pueden usarse fijadores impedir la autodegradacin qumicos (formol, etanol, enzimtica (autlisis)de las metanol o mezclas fijadoras). clulas tratando de evitar, en lo Tambin se utilizan mtodos posible, la alteracin de las fsicos como la desecacin, el estructuras originales y su calor seco, el fro o la autodigestin. congelacin. Se realiza con paraformaldehido, con tetrxido de osmio o, ltimamente, con glutaraldehido, en soluciones acuosas de pH neutro y concentracin salina semejante al medio. Luego se lava la pieza y se post-fija con tetrxido de osmio durante una hora; el osmio se une a estructuras lipoproteicas (membranas celulares) ofreciendo mayor contraste en la imagen. Esto se conoce como coloracin o contrastado. Microscopia ptica Microscopia Electrnica

DESHIDRATACIN: retira elPasajes sucesivos por alcoholes Baos con alcohol o acetona. agua de las piezas fijadas, parade concentracin creciente. que luego puedan ser incluidas en un elemento que es insolubles en solventes acuosos. ACLARACIN Se realiza para eliminar de la No requiere muestra restos de alcohol y toda sustancia hidrosoluble. Se impregna la muestra con un solvente no acuoso, orgnico y soluble en parafina, como xileno, tolueno o benceno. Se incluye el material en parafina o celoidina previamente calentada, la que al solidificarse sirve de sostn Se utilizan resinas sintticas tipo epoxi que luego de secarse se transforman en un material muy duro, apto para que se le

INCLUSIN

de la muestra y posibilita su corte. Se forma el taco. CORTE Es lo suficientemente delgado como para ser atravesado por la luz. Esto se logra utilizando el micrtomo con el que se realiza cortes uniformes del tejido a un dado espesor. Se retira la parafina con xilol y se lava con alcoholes de concentracin creciente. Al ser los colorantes solubles en agua resulta indispensable rehidratar Las clulas y los tejidos son coloreados para lograr mayores contrastes facilitando la observacin. La coloracin de hematoxilina-eosina es una de las ms comnmente utilizadas. Tie el ncleo de azul y el citoplasma de rosa.

efecten cortes extremadamente delgados. Debe obtenerse un corte de la muestra tal que el haz de electrones logre atravesarla. El ultramicrtomo realiza cortes de 20 a 100 nm de espesor con cuchillas de vidrio o diamante.

REHIDRATACIN

COLORACIN

MONTAJE

El corte se monta sobre un Estas muestras se montan en portaobjetos. El cubreobjetos pequeas grillas de cobre El corte se coloca sobre ciertaspuede colocarse por encima clases de estructuras. para proteger el preparado. Este puede conservarse durante dcadas si el cubreobjetos se sella. CONTRASTADO La pieza se impregna en acetato de uranilo, citrato de plomo u otras sustancias.

Las diferencias ms notables de los principales componentes del MO y del ME y sus caractersticas singulares se especifican en la siguiente tabla. Tabla 1.13 - Diferencias entre el MO y ME MICROSCOPIO PTICO CARACTERSTICA MICROSCOPIO ELECTRNICO De dispersin de electrones Al vaco con gran diferencia de potencial Filamento de tungsteno De interferencia de rayos 1) IMAGEN DADA POR luminosos MECANISMO: Simple con aire Luz (fotones) 2) TUBO 3) FUENTE

(electrones) Lentes: Ocular, objetivo y 4) ELEMENTOS condensador Clulas vivas o muertas Coloreadas o no 5) ESTUDIAN 6) OBSERVACIN DE LA IMAGEN 7) LIMITE DE RESOLUCIN Bobinas electromagnticas Clulas muertas Distintas tonalidades de gris. En la actualidad se ven imgenes "sombreadas" electrnicamente. 3 a 5 (terico) 10 (en la prctica) 5.500 (trmino medio) 500 X a 1500 X Carnoy u otros fijadores Parafina o coloidina 8) LONGITUD DE ONDA 0,056 9) AUMENTO (el signo X significa 30.000 X a 1.000.000 X aumento) 10) FIJACIN 11) INCLUSIN Bicromato de potasio, tetrxido de osmio, formaldehdo. Acrlicos o resinas de epoxi. Con ultramicrtomo. (cuchilla de diamante o vidrio) Cortes de 100 a 500 . Placas de Colodion, aluminio o berilio. Nivel submicroscpico: ULTRAESTRUCTURA

0,25m

Con el micrtomo. (cuchilla 12) CORTES de acero). Cortes de 10m De vidrio Nivel microscpico: ESTRUCTURA 13) PORTAOBJETO 14) NIVEL DE OBSERVACIN

LAS CLULAS VIVAS PUEDEN SER OBSERVADAS A TRAVS DEL MICROSCOPIO Se pueden utilizar ingeniosamente las propiedades ondulatorias de la luz aumentando el contraste de las estructuras transparentes. As surgieron varias clases de microscopios pticos convirtindose en herramientas destacadas en el estudio de la clula. Ms an, si se considera la posibilidad de que algunos componentes de la clula puedan perderse o distorsionarse durante la preparacin de la muestra. En consecuencia, el examen de la clula viva (sin fijacin ni congelacin) resulta til. Los microscopio de contraste de fase y de interferencia son sistemas pticos especiales que logran intensificar la escasa interferencia [3] y proporcionan mayor contraste que el obtenido con un MO comn. En el microscopio de campo oscuro, el haz luminoso se proyecta oblicuamente y los sistemas de lentes detectan la luz reflejada por la muestra que se ve como un objeto brillante contra un fondo oscuro, logrndose un gran relieve de rasgos de la clula que son invisibles en el MO. El microscopio de luz polarizada puede proveer datos sobre la estructura a nivel molecular de las clulas y los tejidos no slo en las clulas vivas sino en preparados post-mortem. Ciertos

componentes celulares y tisulares se comportan peculiarmente cuando la luz polarizada (luz que gira nicamente en un plano) los atraviesa. LAS ORGANELAS PUEDEN AISLARSE PARA ESTUDIARLAS MS PROFUNDAMENTE La descripcin de las diversas organelas dentro de la clula revela poco acerca de su funcin. La Biologa Celular actual desarrolla la integracin de la Citologa con la Bioqumica, es decir el estudio de la estructura celular junto con el anlisis de los procesos qumicos de la vida (metabolismo). El fraccionamiento celular ha sido particularmente importante en esta ciencia. El objetivo del fraccionamiento celular es disgregar las clulas separando las organelas principales de modo que, sus funciones individuales puedan ser estudiadas. El instrumento usado para fraccionar las clulas es la centrfuga capaz de girar a diversas velocidades. La ms poderosa, llamada ultracentrfuga puede dar vueltas tan rpidamente como 80000 revoluciones por minuto (RPM) y aplicar fuerzas sobre las partculas de 500000 veces mayores que la fuerza de la gravedad (500000g).

Fig. 1.19- Esquema del Proceso de Fraccionamiento Celular

El fraccionamiento celular comienza con la homogeneizacin, o sea la ruptura de la clula. El objetivo es romper las clulas sin daar severamente sus organelas. El homogenato se centrifuga logrndose la separacin de las partes de la clula en dos fracciones: el pellet que consiste en las estructuras ms grandes depositadas en el fondo del tubo y el sobrenadante constituido de partes ms pequeas suspendidas en el lquido por encima del pellet. El sobrenadante es transvasado a otro tubo y centrifugado otra vez. El proceso es repetido incrementando la velocidad en cada paso. De esta manera se consigue recolectar componentes ms pequeos de los sucesivos pellets. Los detalles de esta marcha se aprecian en la Fig.1.19. El fraccionamiento celular permite preparar los componentes especficos de la clula tanto cualitativa como cuantitativamente. LAS POBLACIONES CELULARES PUEDEN SER SEPARADAS POR EL CITMETRO DE FLUJO Este instrumento posee un tubo muy delgado por donde se hacen pasar a las clulas una tras otra. Un determinado tipo celular emitir fluorescencia, previo tratamiento con fluorocromo (pigmento fluorescente). Esto permite la discriminacin y, por lo tanto, la separacin de las clulas as tratadas de acuerdo a la fluorescencia que emitan. LAS CLULAS VIVAS PUEDEN SER ESTUDIADAS MEDIANTE EL CULTIVO CELULAR Con el objetivo de preservar toda la informacin que sea posible sobre todos los tipos celulares, se han desarrollado tcnicas de disociacin de las clulas. En los primeros tiempos, la tcnica consista en colocar un explante de un pequeo trozo de tejido en un medio compuesto por suero sanguneo, extracto de embriones y solucin salina. Hoy se conocen los requerimientos nutricios de las clulas eucariontes. Se las mantienen y hacen crecer en un medio sinttico enriquecido de suero. Se distinguen tres tipos de cultivos: Cultivos Primarios se obtienen de los animales o vegetales. El tejido se separa en condiciones aspticas y se corta en pequeos trozos y se los trata con tripsina (enzima proteoltica) que disocia los agregados celulares y genera una suspensin de clulas libres que se cultivan en un medio apropiado. Cultivos Secundarios se obtienen mediante el tratamiento con tripsina de un cultivo primario, seguido de un nuevo cultivo en una caja de Petri. Cultivos de lneas establecidas cuyo crecimiento se prolonga debido a las condiciones cancerosas de las clulas. Entre las ms usadas se encuentran las clulas HeLa. A pesar de tales anomalas son muy tiles para el estudio del cncer. LAS MOLCULAS ORGNICAS SON ESTUDIADAS DENTRO Y FUERA DE LA CLULA

A nivel molecular, los organismos estn formados por relativamente pocos tipos de compuestos. El agua constituye alrededor del 70% de la mayora de los seres vivos. De los dems compuestos, los principales son los glcidos, los lpidos, las protenas y los nucletidos, muchos de ellos combinados para formar los cidos nucleicos, cido ribonucleicos (ARN) y cido desoxirribonucleico(ADN). Aunque hay muchos otros compuestos presentes, estas cuatro categoras constituyen la mayora de las molculas orgnicas de los seres vivos y son los actores de los procesos metablicos. Por lo tanto, su localizacin y funcin dentro de la clula como un estudio ms detallado fuera de ella se hace necesario. Algunos ejemplos de tcnicas para el estudio, la ubicacin y la cuantificacin de molculas orgnicas se mencionan a continuacin: RECONSTRUCCIN DE IMGENES A PARTIR DE ELECTROMICROGRAFAS Las microfotografas electrnicas poco claras de cristales de molculas o estructuras supramoleculares se colocan en la trayectoria de un haz de rayos lser para obtener un diagrama de difraccin ptica. Este diagrama es procesado por un programa de computacin consiguiendo la reconstruccin de las molculas individuales en las fases y amplitudes correspondientes a un rea de la microfotografa. DIFRACCIN DE RAYOS X Este mtodo consiste en el bombardeo de la molcula por un delgado haz de rayos X y provoca la dispersin (difraccin) de la radiacin a travs de los electrones de los tomos de la muestra. Este haz disperso debe alcanzar una placa fotogrfica. La estructura molecular tridimensional se deduce de las posiciones y las intensidades de las manchas registradas en la placa fotogrfica. LOS MTODOS CITOQUMICOS Los compuestos qumicos se identifican "in situ" por medio de mtodos citoqumicos. Este objetivo es cualitativo y cuantitativo y muchas veces persigue el estudio de los cambios dinmicos producidos en el contenido qumico celular en las distintas etapas del metabolismo. Para ello, el compuesto qumico debe ser: a) inmovilizado en posicin original e, b) identificado por un procedimiento especfico para el compuesto o para un grupo qumico caracterstico que posea. Los mtodos fsicos y reacciones qumicas similares a las implementadas en Qumica Analtica pero adaptadas a tejidos se usan para llevar a cabo este tipo de identificacin.

LAS DIVERSAS MOLCULAS DE LA CLULA PUEDEN LOCALIZARSE POR LAS TCNICAS INMUNOHISTOQUMICAS Cuando los vertebrados superiores, los animales e incluso el hombre, son expuestos a la actividad de los microorganismos o a molculas ajenas a sus ultraestructuras, ya sea naturalmente o por inyeccin, aquellos sintetizan anticuerpos. Estos son protenas que pueden fijarse selectivamente a los materiales extraos que desencadenaron su sntesis. Por lo tanto, el organismo produce tantos anticuerpos como partculas extraas (antgenos) son reconocidas. As, se puede obtener una gran variedad de anticuerpos. Los anticuerpos son herramientas experimentales muy verstiles para reconocer y manipular clulas y molculas. Si un animal de una especie determinada es inyectado con un componente celular o molecular de otra especie, el primero logra fabricar anticuerpos capaces de reconocer y fijar fuertemente aquel componente (el del segundo animal). A estos anticuerpos se acoplan colorantes fluorescentes que son visibles al MO. De modo similar, con el M.E. se pueden detectar molculas trazadoras acopladas en anticuerpos. De esta manera, los componentes celulares y moleculares quedan teidos en forma diferencial por los anticuerpos que se fijan a ellos. Como todava no se han presentado los aspectos fundamentales de las molculas orgnicas, otros mtodos fisicoqumicos de ms fina determinacin, purificacin y cuantificacin de las biomolculas se mencionarn en las prximas unidades. Como se ver, dichas tcnicas son de uso corriente en el diagnstico mdico rutinario. CUESTIONARIO DE AUTOEVALUCIN 1. a. b. c. d. Cul de los siguientes organoides no forman parte del Sistema de Endomembranas?: envoltura nuclear cloroplasto aparato de Golgi retculo endoplasmtico

2. Un determinado veneno destruye el citoesqueleto. Cul de las siguientes funciones sera afectada directamente?: a. b. c. la divisin celular la respiracin celular la fotosntesis

d. 3. a. b. c. d. 4. a. b. c. d. 5. 6. 7.

la sntesis de protenas Cul de las siguientes organelas est presente en la clula animal y vegetal?: cloroplasto pared celular mitocondria centrolos. Qu organela est presente en una clula procarionte?: mitocondria ribosoma cloroplasto retculo endoplasmtico En qu parte de la mitocondria aparecen las crestas? Qu organela carece de membrana? En qu parte de la bacteria se realiza la respiracin?

8. Si Ud. tuviera que argumentar acerca de que los virus son organismos vivos, qu caractersticas estructurales y funcionales del virus podra utilizar para apoyar su argumentacin? 9. Qu tipo de clulas pensara Ud. que alcanzaran el mayor tamao: una clula muy aplanada o una esfrica? Por qu? 10. Por qu casi todas las clulas casi siempre son microscpicas? 11. Cules son las propiedades fundamentales que comparten todas las clulas? Describa la importancia de cada una de ellas. 12. Compare en un cuadro las diferencias estructurales, funcionales y metablicas entre las clulas procariontes y eucariontes. 13. Qu propiedades distinguen a un virus de una bacteria?

14. Enumere los pasos de la infeccin viral, y describa brevemente cada paso. 15. Utilizando el Sistema Mtrico Decimal resuelva las equivalencias en metros de: a) 1 nm; b) 1 mm. 16. Indique el poder de resolucin del: a) M.O.; b)M.E.T.; c)M.E.B. 17. Cuntas veces son mayores los aumentos del M.E. en relacin a los del M.O.? 18. A qu es igual el poder de resolucin?: a. b. c. d. AN / 0.61 x l 0.61 x l / AN 0.61 / AN x l 0.61 x AN /l.

19. Qu compuesto se usa como fijador en microscopia electrnica? Y en microscopia ptica? 20. Explique qu tcnicas utilizara para crear suficiente contraste cuando se usa el M.O. y el M.E. 21. Qu tipo de microscopios se usan para la observacin de la clulas vivas? 22. Cules son las ventajas de estudiar las clulas con el M.E.T. y el M.E.B.? 23. Cundo utilizara la microscopia de contraste de fase? Por qu? 24. Para qu se utiliza la tcnica de fraccionamiento celular? Qu se obtiene en cada paso? 25. Qu es un anticuerpo? Por qu es una herramienta til en la investigacin biolgica? 26. Para qu se utiliza la difraccin de rayos X? 27. Cuando una clula de forma esfrica crece, los mm 2 de superficie de la membrana plasmtica por mm3 del volumen celular: a. b. c. decrece aumenta se mantiene constante

d.

se vuelve ms delgada

28. El microscopio de interferencia es: a. b. c. d. una variante del M.O. una variante del M.E. til cuando se colorea la muestra utilizado para visualizar tomos

29. La ultracentrfuga se emplea en: a. b. c. d. citometra de flujo b) microscopia electrnica fraccionamiento celular difraccin de rayos

30. Las muestras de clulas vivas o preparados fijados se pueden estudiar indistintamente con: a. b. c. d. microscopia electrnica microscopia de interferencia microscopia de luz polarizada difraccin de rayos X.

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[1] La longitud de onda (l) es la distancia entre dos puntos consecutivos que vibran en fase. Siempre que dos puntos estn separados por una distancia igual a la que recorre la onda en un perodo, o a un mltiplo de ella, los dos puntos vibrarn en fase. [2] Los electrones pueden considerarse como una variedad de radiacin de pequea longitud de onda. [3] Interferencia: Es un fenmeno fsico producido entre ondas cuyos "picos" y "valles" no coinciden, es decir no estn en fase.