Universidade Federal de Santa Catarina Centro de Cincias da Sade Departamento de Cincias Farmacuticas

Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade

Professores: Hellen Karine Stulzer Marcos Antonio Segatto Silva Simone Gonalves Cardoso

2012/2

Disciplina de Controle de Qualidade 1 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

AULAS PRTICAS

Disciplina de Controle de Qualidade 2 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Aula 01: Tcnicas Analticas Empregadas em Controle de Qualidade

Introduo de algumas metodologias utilizadas no controle de qualidade de insumos e produtos farmacuticos.

Participao em aula e entrega do relatrio ao trmino da aula prtica uma

forma de avaliao.

Metodologia
Por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero informaes sobre o princpio de funcionamento dos principais equipamentos utilizados em controle de qualidade, com nfase nos equipamentos cujo funcionamento ser demonstrado em aula prtica.

Anotaes:_________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________ ________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 3 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Aula 02: Controle de Qualidade de Matria-Prima

Introduo de conceitos e aplicaes sobre qualificao de matrias-primas farmacuticas.

Participao em aula e entrega do relatrio ao trmino da aula prtica uma

forma de avaliao. Informaes adicionais podem ser observadas nos anexos 3 e 4 . Metodologia Por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero informaes sobre o controle de qualidade de matria-prima, seguida de atividade de avaliao de Paracetamol, matria-prima. Procedimento 1) Descrio: Verificar aspecto, cor. 2) Solubilidade: Verificar a solubilidade da amostra em diferentes solventes. 3) Identificao: Identificao de picos relativos ao frmaco em determinados comprimentos de onda. 4) Identificao de grupo funcional: Reao com cloreto frrico para deteco de grupamento fenlico. 5) Ensaio de limite: Verificar a turbidez gerada em tubos de Nessler, conforme ensaio limite para cloretos descrito na farmacopeia brasileira. 6) Doseamento: Calcular o teor do frmaco atravs da leitura de absorbncias em espectrofotometria ultravioleta.

Anotaes:_________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ____________________________________________________________ Clculos:

Disciplina de Controle de Qualidade 4 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Aula 03: Controle de Qualidade de Slidos (Testes Gerais)

Realizao dos testes gerais de controle de qualidade aplicados a comprimidos e analisar os resultados em relao s especificaes farmacopeias.

Participao em aula e entrega do relatrio ao trmino da aula prtica uma

forma de avaliao. Informaes adicionais podem ser observadas no anexo 5. Metodologia Por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero informaes sobre os fundamentos e descrio dos testes utilizados para a caracterizao fsica de comprimidos. Procedimento 1) Descrio: 1 comprimido. Verificar aspecto, cor. 2) Dimenso: 10 comprimidos. Medir o dimetro e a espessura com paqumetro. 3) Determinao de peso: 20 comprimidos. Pesar, individualmente, 20 comprimidos. Anotar os pesos e calcular o peso mdio. Avaliar conforme especificaes da Farmacopeia Brasileira. 4) Friabilidade: 10 comprimidos. Pesar 10 comprimidos juntos, submeter ao de equipamento especfico por 5 minutos, e pesar novamente. Calcular a % de perda do p. 5) Dureza: 5 comprimidos. Medir, individualmente, a fora necessria para romper os comprimidos. Calcular a mdia. 6) Desintegrao: 6 comprimidos. Submeter os comprimidos ao de equipamento especfico, utilizando gua mantida a 37 C 1C como meio de desintegrao, e avaliar o tempo necessrio para todos os comprimidos desagregarem.

Anotaes:_________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ Clculos:

Disciplina de Controle de Qualidade 5 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Aula 04: Controle de Qualidade de Slidos (Doseamento e Uniformidade de Contedo)

Realizao do doseamento de frmacos em comprimidos por meio de espectrofotometria no ultravioleta, e avaliar a uniformidade de distribuio de doses unitrias.

Participao em aula e entrega do relatrio ao trmino da aula prtica uma

forma de avaliao. Informaes adicionais podem ser observadas no anexo 6. Metodologia Por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero informaes sobre os fundamentos e descrio dos mtodos a serem utilizados para determinar o teor de frmaco nos comprimidos e para a uniformidade de contedo. Procedimento 1) Doseamento: Os comprimidos sero triturados e, a partir do peso mdio previamente determinado, sero pesadas quantidades do p equivalentes quantidade necessria para preparar soluo com a concentrao indicada na monografia do frmaco que ser avaliado. Registrar as diluies necessrias. 2) Uniformidade: Sero separados e analisados, individualmente, 10 comprimidos, conforme procedimento descrito na monografia do frmaco.

Anotaes:_________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ Clculos:

Disciplina de Controle de Qualidade 6 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Aula 05: Controle de Qualidade de Slidos (Teste de Dissoluo in vitro)

Introduo do ensaio de dissoluo in vitro de slidos, ressaltando a importncia e aplicao, com nfase na operacionalizao.

Participao em aula e entrega do relatrio ao trmino da aula prtica uma

forma de avaliao. Informaes adicionais podem ser observadas no anexo 7. Metodologia Por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero informaes acerca da aplicao do teste, dos equipamentos utilizados neste ensaio, da legislao vigente, entre outros aspectos. Para a realizao do ensaio in vitro, ser demonstrada a montagem do equipamento, seguida da realizao do ensaio, coleta de amostras e anlise dos resultados. Materiais/Tcnica Amostra: comprimidos de captopril N de amostras para o teste: 6 comprimidos Meio de dissoluo: HCl 0,1M , 900mL Aparelhagem: Cesta, 50 rpm Tempo: 20 minutos Tolerncia: no menos que 80 % (T) da quantidade declarada de C 9H15NO3S dissolvem em 20 minutos Procedimento 1) Inserir um comprimido na cuba; 2) Aps tempos especficos (5, 10, 15, 20 e 40 minutos) retirar alquota do meio de dissoluo, filtrar e, se necessrio, diluir em cido clordrico 0,1 M at concentrao adequada; 3) Medir imediatamente as absorbncias das solues em 212 nm, utilizando a soluo de HCl 0,1M para ajuste do zero. 4) Calcular a quantidade de C9H15NO3S dissolvida no meio, comparando as leituras obtidas com a da soluo de captopril padro na concentrao de 0,0025% (p/v) preparada no momento do uso.

Clculos:

Disciplina de Controle de Qualidade 7 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Aula 06 e 07: Validao de Metodologia Analtica

Capacitao para planejamento de validao de uma metodologia analtica, utilizando espectrofotometria no ultravioleta.

Participao em aula e entrega do relatrio ao trmino da segunda aula prtica

uma forma de avaliao. Pr-requisito: leitura preliminar do anexo 8. Metodologia Por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero informaes sobre os parmetros a serem considerados na validao de metodologias, bem como o protocolo a ser realizado em aula prtica. Procedimento

Dia 1 - Cada grupo ir preparar uma curva de calibrao com, no mnimo, cinco diferentes concentraes. As solues preparadas sero avaliadas por espectrofotometria na regio do ultravioleta e, a partir das leituras de absorbncias obtidas, sero construdas curvas de calibrao, com auxlio do programa Excel. As curvas sero avaliadas atravs de anlise estatstica. Dia 2 Sero avaliados os parmetros de preciso, exatido e robustez.

Anotaes:_________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ _____________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ _____________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 8 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Aula 08: Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE)

Introduo de conceitos e aplicabilidade da cromatografia lquida de alta eficincia no controle de qualidade de insumos e produtos farmacuticos.

Participao em aula e entrega do relatrio ao trmino da aula prtica uma

forma de avaliao. Metodologia Por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero informaes sobre os princpios da cromatografia lquida de alta eficincia em controle de qualidade.

Anotaes:_________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ Clculos:

Disciplina de Controle de Qualidade 9 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Aula 09: Contagem de Microrganismos Viveis

Realizao dos testes de controle de qualidade microbiolgicos para uma forma farmacutica lquida.

Participao em aula e entrega do relatrio ao trmino da aula prtica uma

forma de avaliao. Informaes adicionais podem ser observadas no anexo 9. Metodologia Por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero instrues sobre o protocolo de anlise e especificaes farmacopicas. A seguir, o medicamento ser analisado pelo grupo. Materiais/Tcnica Amostra: soluo de uso no parenteral
Meio Bactrias Fungos gar casena-soja Agar Sabouraud-dextrose Temperatura (C) 30-35C 25C Tempo (dias) 4 7

Procedimento Mtodo de contagem em placas: Preparo da amostra: diluir 10 mL da amostra em 90 mL tampo fosfato pH 7,2. Agitar at completa homogeneizao. Preparar duas diluies sucessivas, a partir desta primeira. Mtodo de plaqueamento: adicionar a cada placa 1 mL das diluies preparadas e 15-20 mL de gar Casena-soja (bactrias), e gar Sabourauddextrose (fungos) liquefeito a 45C, e incubar conforme tabela abaixo. Aps o perodo de incubao, contar o nmero de colnias desenvolvidas. Calcular o resultado empregando placas com o maior nmero de colnias, sem ultrapassar 250 colnias por placa para bactrias e 50 para fungos.

Clculos:

Disciplina de Controle de Qualidade 10 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Aula 10: Teste de Esterilidade

Conhecimento da tcnica de filtrao por membrana, os materiais empregados e os tipos de capelas de fluxo laminar, bem como avaliar a esterilidade de um produto comercial.

Participao em aula e entrega do relatrio ao trmino da aula prtica uma

forma de avaliao. Informaes adicionais podem ser observadas no anexo 10. Metodologia Por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero noes de tcnica assptica, podero observar a tcnica de filtrao, bem como conhecer os materiais empregados e os equipamentos disponveis. Materiais/Tcnica Amostra: soluo de uso parenteral Mtodo: filtrao por membrana
Meio Tioglicolato fluido Casena-soja Temperatura (C) 30-35C 20-25C Tempo (dias) 7 7

Procedimento Conforme indicados na Farmacopeia Brasileira.

Anotaes:_________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ _____________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 11 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Aula 11: Controle de Qualidade de Lquidos No Estreis

Realizao dos testes de controle de qualidade fsicos e fsico-qumicos de uma forma farmacutica lquida.

Participao em aula e entrega do relatrio ao trmino da aula prtica uma

forma de avaliao. Informaes adicionais podem ser observadas no anexo 11. Metodologia Por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero instrues sobre o protocolo de anlise e especificaes farmacopicas. A seguir, o medicamento ser analisado pelo grupo. Material Amostra: soluo de uso oral Anlise 1) 2) 3) 4) 5) 6) Descrio Volume mdio pH Densidade Identificao da substncia ativa Doseamento

Procedimento 1) Transferir volume da soluo oral equivalente a 0,1 g de paracetamol para balo volumtrico de 100 mL. Completar o volume com metanol e homogeneizar. 2) Transferir 0,5 mL da soluo resultante para balo volumtrico de 50 mL, adicionar 1 mL de cido clordrico 0,1 M, completar o volume com metanol e homogeneizar. 3) Preparar soluo padro na mesma concentrao, utilizando os mesmos solventes. 4) Medir as absorbncias das solues resultantes em 249 nm utilizando soluo metanlica de cido clordrico 0,1 M para ajuste do zero. 5) Calcular a quantidade de C8H9NO2 na soluo oral, a partir das leituras obtidas. Dados: A (1 %, 1cm) = 880, em 249 nm.

Clculos:

Disciplina de Controle de Qualidade 12 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

RELATRIOS

Disciplina de Controle de Qualidade 13 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Relatrio 01: Tcnicas Analticas Empregadas em Controle de Qualidade

Nomes: ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ Turma: ________ Data: ____/____/________________

Descreva o que voc observou em cada equipamento utilizado em aula: Equipamento Fundamento do mtodo Espectrofotmetro UV/VIS

____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________

Cromatgrafo Lquido

DSC

TG

Questo:

_____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 14 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Relatrio 02: Controle de Qualidade de Matria-Prima

Nomes: ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ Turma: ________ Data: ____/____/________________

Identificao da amostra Amostra:

Controle das Caractersticas Fsicas Anlise

Descrio

Especificao

Resultado

Aprovado ou Reprovado

Solubilidade

Identificao - UV
Identiicao Cloreto Frrico

Ensaio Limite Doseamento

Resultado final e concluses:

___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ Questo: ___________________________________________________________________ ____________________________________________________________ __________ ____________________________________________________________

____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 15 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Relatrio 03: Controle de Qualidade de Slidos (Testes Gerais)

Nomes: ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ Turma: ________ Data: ____/____/________________ Identificao da amostra Amostra: Lote: Laboratrio: Data de fabricao: Data de validade: Condies da amostra no recebimento:

Anlises Realizadas
Anlise Especificao Resultado Aprovado ou Reprovado

Descrio Dimenses Peso mdio Friabilidade Dureza Desintegrao

Resultado final e concluses:

___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ Questo: ___________________________________________________________________ ____________________________________________________________ __________ ____________________________________________________________

____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ___________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 16 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Registro de resultados:

Amostra: Descrio: Amostra Uniformidade de peso (mg) Dureza ( )N ( ) Kgf/cm3 P1 = P2 = % perda = (P1-P2)/P1 x100 Especificao: Desintegrao Meio Tempo Mdia Especificao: Amostra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Limites Inferior Superior Mdia Desvpad CV% Especificao: Dimenses Dimetro Espessura Friabilidade

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Mdia s CV%
Variao

Disciplina de Controle de Qualidade 17 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Relatrio 04: Controle de Qualidade de Slidos (Doseamento e Uniformidade de Contedo)

Nomes: ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ Turma: ________ Data: ____/____/________________ Identificao da amostra Amostra: Lote: Laboratrio: Data de fabricao: Data de validade: Condies da amostra no recebimento:

Caracterstica Doseamento

Anlises realizadas Especificao Resultado

Aprovado ou Reprovado

Uniformidade de Contedo

Resultado final e concluses:

___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ Questo: ___________________________________________________________________ ____________________________________________________________ __________ ____________________________________________________________

____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ___________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 18 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Registro de resultados:
Amostra: Referncia: Anlise de teor Mtodo de anlise: Condio (diluente/comprimento de onda): Preparo do padro: Preparo da amostra: Grupo Massa da amostra (mg) Absorvncia Concentrao (g/mL) Teor do frmaco (mg/comprimido) Teor do frmaco (%) Mdia Desvpad CV % Uniformidade de contedo Amostra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Mdia Desvpad CV % Padro Clculos: Concentrao: Abs: Absorvncia Concentrao (g/mL) Teor do frmaco (%) 1 2 3 4

Disciplina de Controle de Qualidade 19 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Relatrio 05: Controle de Qualidade de Slidos (Teste de Dissoluo in vitro)

Nomes: ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ Turma: ________ Data: ____/____/________________ Amostra Tempo (minutos) 5 10 15 20 40 Padro Clculos Concentrao: Abs: Leituras de absorbncias Cuba 1 Cuba 2 Cuba 3 Cuba 4 Cuba 5 Cuba 6

Tempo (minutos) 5 10 15 20 40

% dissolvidas Cuba 1 Cuba 2 Cuba 3 Cuba 4 Cuba 5 Cuba 6 Mdia CV%

Resultado final e concluses:

___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ Questo: ___________________________________________________________________ ____________________________________________________________ __________ ____________________________________________________________

____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 20 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Relatrios 06 e 07: Validao de Metodologia Analtica

Nomes: ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ Turma: ________ Data: ____/____/________________

Lineraridade Concentrao (g/mL) Absorbncias Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 ABS Mdia DP CV %

Equao reta mdia Equao reta grupo

r= r=
Limite de Deteco:

Limite de Quantificao: Preciso 1

Grupo 1: g/mL Grupo 2: g/mL Grupo 3: g/mL Grupo 4: g/mL

Mdia

DP

CV %

ABS Conc. % ABS Conc. % ABS Conc. % ABS Conc. %

Exatido

Balo 100,0 mL 1 2 3

Amostra 500 Padro 500 [ ] Amostra no [ ] Padro no [ ] Final no [ ] Amostra g/mL g/mL balo g/mL balo g/mL balo g/mL + Padro 4,0 4,0 4,0 1,0 2,0 4,0 20,0 20,0 20,0 5,0 10,0 20,0 25,0 30,0 40,0

%
Recuperada

Robustez

____________________________________________________________ ____________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 21 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Relatrio 08: Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE)

Nomes: ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ Turma: ________ Data: ____/____/________________ Identificao da amostra Amostra: Lote: Laboratrio: Referncia: Condies cromatogrficas: Coluna: Fase mvel/fluxo: Preparo do padro: Comprimento de Onda: Preparo da amostra: Data de fabricao: Data de validade: Condies da amostra no recebimento:

reas obtidas Padro 1 2 3 Mdia Desvpad CV% Amostra

Concentrao Teor (g/mL) (mg/unidade)

Teor (%)

Resultado final e concluses:

___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ Questo: ___________________________________________________________________ ____________________________________________________________ __________ ____________________________________________________________

____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 22 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Relatrio 09: Contagem de Microrganismos Viveis

Nomes: ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ Turma: ________ Data: ____/____/________________

Identificao da amostra Amostra: Lote: Laboratrio: Data de fabricao: Data de validade: Condies da amostra no recebimento:

Registro da Contagem do nmero de colnias - UFC/mL Diluies Placa 1 Bactrias Placa 2 Placa 1 Fungos Placa 2

1:10
1:100 1:1000

Resultado final e concluses:

___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ Questo: ___________________________________________________________________ ____________________________________________________________ __________ ____________________________________________________________

____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 23 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Relatrio 10: Teste de Esterilidade

Nomes: ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ Turma: ________ Data: ____/____/________________ Identificao da amostra Amostra: Lote: Laboratrio: Data de fabricao: Data de validade: Condies da amostra no recebimento:

Avaliao dos tubos aps incubao

Amostra

Meio Tioglicolato fluido

Meio casena-soja

Controle negativo: Resultado final e concluses:

___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ Questo: ___________________________________________________________________ ____________________________________________________________ __________ ____________________________________________________________

____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 24 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Relatrio 11: Controle de Qualidade de Lquidos No Estreis

Nomes: ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ Turma: ________ Data: ____/____/________________ Identificao da amostra Amostra: Lote: Laboratrio: Data de fabricao: Data de validade: Condies da amostra no recebimento:

Anlises Realizadas

Anlise
Aspecto Cor Volume mdio pH Densidade Identificao Doseamento

Especificao

Resultado

Aprovado ou Reprovado

Resultado final e concluses:

___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ Questo: ___________________________________________________________________ ____________________________________________________________ __________ ____________________________________________________________

____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________ ____________________________________________________________

Disciplina de Controle de Qualidade 25 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

ANEXOS

Disciplina de Controle de Qualidade 26 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 01: Solicitao do Seminrio Ttulo: Controle de Qualidade de Bulas, Rotulagens e Embalagens Objetivo: Capacitar o aluno a avaliar a qualidade de bulas de acordo a legislao (Resoluo RDC n. 140 de maio de 2003/ANVISA), bem como avaliar a rotulagem de medicamentos de acordo com o regulamento tcnico previsto na Resoluo RDC n. 333 de novembro de 2003. Metodologia: por meio de aula terico-prtica, os alunos recebero instrues sobre a eleio das amostras e realizao do seminrio. Devero ser formados at 4 grupos por turma. A execuo do trabalho segue, resumidamente, as seguintes etapas: 1. Escolha de uma apresentao farmacutica sobre a qual bula e rotulagem devero ser avaliadas criticamente em relao legislao vigente. 2. Analisar a bula e, se necessrio, adequ-la nos termos legislao vigente. 3. Avaliar a rotulagem do medicamento. 4. O trabalho dever ser apresentado em grupo, no perodo definido no cronograma das atividades, nas respectivas aulas prticas, sob a forma de seminrio, com durao mxima de 30 (trinta) minutos. Para a apresentao ser disponibilizado data show. Cabe ressaltar que para a avaliao da rotulagem, a prpria embalagem poder ser mostrada e analisada pelo grupo considerando os aspectos abordados na legislao, i.e., posicionamento de tarja, presena de alertas obrigatrios, presena de lacres, entre outros. Avaliao: A avaliao do seminrio levar em considerao, alm do contedo, aspectos didticos tais como a clareza na exposio da anlise crtica e no material apresentado, bem como a postura e participao do grupo durante toda a atividade.

Bibliografia Recomendada: disponvel no site www.anvisa.gov.br

Resoluo RDC n 333 de novembro de 2003/ANVISA Resoluo RDC n 95, de 11 de dezembro de 2008/ANVISA Resoluo RDC N 47, de 8 de setembro de 2009 Guia de Redao de Bula - Gerncia-Geral de Medicamentos/ANVISA, de setembro de 2009.

Disciplina de Controle de Qualidade 27 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 02: Passo-a-passo para calcular mdia e desvio padro em calculadora CASIO 1. Para zerar a memria de dados: Clicar em SHIFT MODE 2 = 2. Para selecionar o modo estatstico da calculadora: Clicar em MODE 2 3. Para informar os valores das amostras: digitar o VALOR M+ (a cada valor informado, a calculadora informa o nmero (n) de amostras j digitadas). 4. Para selecionar o clculo desejado: digitar SHIFT 2 5. A calculadora ir exibir um menu para escolha do clculo: Para mdia ( ), digitar 1 = Para desvio padro, digitar 3 =

Disciplina de Controle de Qualidade 28 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 03:

Disciplina de Controle de Qualidade 29 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 04:

Disciplina de Controle de Qualidade 30 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 05:

Disciplina de Controle de Qualidade 31 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade 32 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade 33 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade 34 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 06:

Disciplina de Controle de Qualidade 35 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade 36 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade 37 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade 38 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 07:

Disciplina de Controle de Qualidade 39 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade 40 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade 41 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade 42 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 08:
Resoluo - RE n 899, de 29 de maio de 2003 D.O.U. 02/06/2003
O Adjunto da Diretoria Colegiada da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, no uso da atribuio, que lhe confere a Portaria n. 238, de 31 de maro de 2003, considerando o disposto no art.111, inciso II, alnea a 3 do Regimento Interno aprovado pela Portaria n 593, de 25 de agosto de 2000, republicada no DOU de 22 de dezembro de 2000, considerando que a matria foi submetida apreciao da Diretoria Colegiada, que a aprovou em reunio realizada em 6 de maro de 2003, resolve: Art. 1 Determinar a publicao do "Guia para validao de mtodos analticos e bioanalticos" anexo Art. 2 Fica revogada a Resoluo RE no 475, de 19 de maro de 2002. Art. 3 Esta Resoluo entra em vigor na data de sua publicao. ANEXO GUIA PARA VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS E BIOANALTICOS MTODOS ANALTICOS 1. Consideraes gerais 1.1. As informaes contidas nesse Anexo apresentam as caractersticas a serem consideradas durante a validao de procedimentos analticos. O objetivo de uma validao demonstrar que o mtodo apropriado para a finalidade pretendida, ou seja, a determinao qualitativa, semiquantitativa e/ou quantitativa de frmacos e outras substncias em produtos farmacuticos. 1.2. Essas informaes aplicam-se a: 1.2.1. Tcnicas analticas que faam uso de mtodos de cromatografia gasosa (CG) ou cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE); 1.2.2. Mtodos no-cromatogrficos, desde que estes ofeream uma seletividade aceitvel (por ex. titulometria, espectrofotometria UV-VIS); 1.2.3. Testes imunolgicos ou microbiolgicos, desde que observado o grau de variabilidade usualmente associado a estas tcnicas. 1.3. A validao deve garantir, por meio de estudos experimentais, que o mtodo atenda s exigncias das aplicaes analticas, assegurando a confiabilidade dos resultados. Para tanto, deve apresentar especificidade, linearidade, intervalo, preciso, sensibilidade, limite de quantificao, exatido, adequados anlise. 1.4. Deve-se utilizar substncias de referncia oficializadas pela Farmacopia Brasileira ou, na ausncia destas, por outros cdigos autorizados pela legislao vigente. No caso da inexistncia dessas substncias, ser admitido o uso de padres de trabalho, desde que a identidade e o teor sejam devidamente comprovados. 1.5. Para efeito desse guia, considera-se corrida analtica as medies sucessivas de um mesmo analito, efetuadas nas mesmas condies: mtodo, analista, instrumentao, local, condies de utilizao e em intervalo de tempo curto entre as medies. 1.6. No caso de metodologia analtica descrita em farmacopias ou formulrios oficiais, devidamente reconhecidos pela ANVISA, a metodologia ser considerada validada.

Disciplina de Controle de Qualidade 43 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios 1.7. No caso de metodologia analtica no descrita em farmacopias ou formulrios oficiais, devidamente reconhecidos pela ANVISA, a metodologia ser considerada validada, desde que sejam avaliados os parmetros relacionados a seguir, conforme especificado nas Tabelas 1 e 2. 1.7.1. Especificidade e Seletividade 1.7.2. Linearidade 1.7.3. Intervalo 1.7.4. Preciso 1.7.5. Limite de deteco (sensibilidade) 1.7.6. Limite de quantificao 1.7.7. Exatido 1.7.8. Robustez 1.8. No caso da transferncia de metodologias da matriz para suas subsidirias no Brasil e/ou das empresas nacionais para os centro de estudos de equivalncia farmacutica, a metodologia ser considerada validada, desde que sejam avaliados os parmetros de preciso, especificidade e linearidade. Cpia de toda a documentao original da validao da metodologia dever ser anexada, como prova de que a metodologia foi originalmente validada e dever conter, no mnimo, todos os parmetros relacionados no item 1.7. 1.9. Para a garantia da qualidade analtica dos resultados, todos os equipamentos utilizados na validao devem estar devidamente calibrados e os analistas devem ser qualificados e adequadamente treinados. 1.10. Os testes so classificados em 4 categorias, conforme a Tabela 1. Tabela 1. Classificao dos testes, segundo sua finalidade:

1.11. Para cada categoria ser exigido um conjunto de testes, relacionados na Tabela 2.

Disciplina de Controle de Qualidade 44 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios Tabela 2. Ensaios necessrios para a validao do mtodo analtico, segundo sua finalidade:

* pode ser necessrio, dependendo da natureza do teste especfico. ** se houver comprovao da reprodutibilidade no necessria a comprovao da Preciso Intermediria. 1.12. Metodologia analtica dever ser revalidada nas seguintes circunstncias: 1.12.1. Mudanas na sntese da substncia ativa; 1.12.2. Mudanas na composio do produto acabado; 1.12.3. Mudanas no procedimento analtico. Determinadas outras mudanas podem requerer validao tambm, dependendo da natureza das mudanas. 2. Metodologia 2.1. Especificidade e Seletividade a capacidade que o mtodo possui de medir exatamente um composto em presena de outros componentes tais como impurezas, produtos de degradao e componentes da matriz. 2.1.1. Para anlise qualitativa (teste de identificao) necessrio demonstrar a capacidade de seleo do mtodo entre compostos com estruturas relacionadas que podem estar presentes. Isto deve ser confirmado pela obteno de resultados positivos (preferivelmente em relao ao material de referncia conhecido) em amostras contendo o frmaco, comparativamente com resultados negativos obtidos com amostras que no contm o frmaco, mas compostos estruturalmente semelhantes. 2.1.2. Para anlise quantitativa (teor) e anlise de impurezas, a especificidade pode ser determinada pela comparao dos resultados obtidos de amostras (frmaco ou medicamento) contaminadas com quantidades apropriadas de impurezas ou excipientes e amostras no contaminadas, para demonstrar que o resultado do teste no afetado por esses materiais. Quando a impureza ou o padro do produto de degradao no estiverem disponveis, pode-se comparar os resultados do teste das amostras contendo impurezas ou produtos de degradao com os resultados de um segundo procedimento bem caracterizado (por exemplo metodologia farmacopica ou outro procedimento validado). Estas comparaes devem incluir amostras armazenadas sob condies de estresse (por ex. luz, calor umidade, hidrlise cida/bsica, oxidao).

Disciplina de Controle de Qualidade 45 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios 2.1.3. Em mtodos cromatogrficos, deve-se tomar as precaues necessrias para garantir a pureza dos picos cromatogrficos. A utilizao de testes de pureza de pico (por exemplo, com auxilio de detector de arranjo de fotodiodos ou espectrometria de massas) so interessantes para demonstrar que o pico cromatogrfico atribudo a um s componente. 2.2. Linearidade a capacidade de uma metodologia analtica de demonstrar que os resultados obtidos so diretamente proporcionais concentrao do analito na amostra, dentro de um intervalo especificado. 2.2.1. Recomenda-se que a linearidade seja determinada pela anlise de, no mnimo, 5 concentraes diferentes. Estas concentraes devem seguir os intervalos da Tabela 3. 2.2.2. Se houver relao linear aparente aps exame visual do grfico, os resultados dos testes devero ser tratados por mtodos estatsticos apropriados para determinao do coeficiente de correlao, interseco com o eixo Y, coeficiente angular, soma residual dos quadrados mnimos da regresso linear e desvio padro relativo. Se no houver relao linear, realizar transformao matemtica. 2.2.3. O critrio mnimo aceitvel do coeficiente de correlao (r) deve ser = 0,99. 2.2.4. Deve-se apresentar as curvas obtidas (experimental e a resultante do tratamento matemtico). 2.3. Intervalo O intervalo especificado a faixa entre os limites de quantificao superior e inferior de um mtodo analtico. Normalmente derivado do estudo de linearidade e depende da aplicao pretendida do mtodo (Tabela 3). estabelecido pela confirmao de que o mtodo apresenta exatido, preciso e linearidade adequados quando aplicados a amostras contendo quantidades de substncias dentro do intervalo especificado. Tabela 3. Limites porcentuais do teor do analito que devem estar contidos no intervalo de linearidade para alguns mtodos analticos.

Disciplina de Controle de Qualidade 46 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios 2.4. Preciso A preciso a avaliao da proximidade dos resultados obtidos em uma srie de medidas de uma amostragem mltipla de uma mesma amostra. Esta considerada em trs nveis. 2.4.1. Repetibilidade (preciso intra-corrida): concordncia entre os resultados dentro de um curto perodo de tempo com o mesmo analista e mesma instrumentao. A repetibilidade do mtodo verificada por, no mnimo, 9 (nove) determinaes, contemplando o intervalo linear do mtodo, ou seja, 3 (trs) concentraes, baixa, mdia e alta, com 3 (trs) rplicas cada ou mnimo de 6 determinaes a 100% da concentrao do teste; 2.4.2. Preciso intermediria (preciso inter-corridas): concordncia entre os resultados do mesmo laboratrio, mas obtidos em dias diferentes, com analistas diferentes e/ou equipamentos diferentes. Para a determinao da preciso intermediria recomenda-se um mnimo de 2 dias diferentes com analistas diferentes. 2.4.3. Reprodutibilidade (preciso inter-laboratorial): concordncia entre os resultados obtidos em laboratrios diferentes como em estudos colaborativos, geralmente aplicados padronizao de metodologia analtica, por exemplo, para incluso de metodologia em farmacopias. Estes dados no precisam ser apresentados para a concesso de registro. A preciso de um mtodo analtico pode ser expressa como o desvio padro ou desvio padro relativo (coeficiente de variao) de uma srie de medidas. A preciso pode ser expressa como desvio padro relativo (DPR) ou coeficiente de variao (CV%), segundo a frmula,

em que, DP o desvio padro e CMD, a concentrao mdia determinada. O valor mximo aceitvel deve ser definido de acordo com a metodologia empregada, a concentrao do analito na amostra, o tipo de matriz e a finalidade do mtodo, no se admitindo valores superiores a 5%. 2.5. Limite de Deteco Limite de deteco a menor quantidade do analito presente em uma amostra que pode ser detectado, porm no necessariamente quantificado, sob as condies experimentais estabelecidas. 2.5.1. O limite de deteco estabelecido por meio da anlise de solues de concentraes conhecidas e decrescentes do analito, at o menor nvel detectvel; 2.5.2. No caso de mtodos no instrumentais (CCD, titulao, comparao de cor), esta determinao pode ser feita visualmente, onde o limite de deteco o menor valor de concentrao capaz de produzir o efeito esperado (mudana de cor, turvao, etc). 2.5.3. No caso de mtodos instrumentais (CLAE, CG, absoro atmica), a estimativa do limite de deteco pode ser feita com base na relao de 3 vezes o rudo da linha de base. Pode ser determinado pela equao,

Disciplina de Controle de Qualidade 47 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

em que: DPa o desvio padro do intercepto com o eixo do Y de, no mnimo, 3 curvas de calibrao construdas contendo concentraes do frmaco prximas ao suposto limite de quantificao. Este desvio padro pode ainda ser obtido a partir da curva de calibrao proveniente da anlise de um nmero apropriado de amostras do branco; IC a inclinao da curva de calibrao. 2.6. Limite de Quantificao a menor quantidade do analito em uma amostra que pode ser determinada com preciso e exatido aceitveis sob as condies experimentais estabelecidas. O limite de quantificao um parmetro determinado, principalmente, para ensaios quantitativos de impurezas, produtos de degradao em frmacos e produtos de degradao em formas farmacuticas e expresso como concentrao do analito (por exemplo, porcentagem p/p ou p/V, partes por milho) na amostra. 2.6.1. O limite de quantificao estabelecido por meio da anlise de solues contendo concentraes decrescentes do frmaco at o menor nvel determinvel com preciso e exatido aceitveis. Pode ser expresso pela equao,

em que: DPa o desvio padro do intercepto com o eixo do Y de, no mnimo, 3 curvas de calibrao construdas contendo concentraes do frmaco prximas ao suposto limite de quantificao. Este desvio padro pode ainda ser obtido a partir da curva de calibrao proveniente da anlise de um apropriado nmero de amostras do branco; IC a inclinao da curva de calibrao. 2.6.2. Tambm pode ser determinado por meio do rudo. Neste caso, determina-se o rudo da linha de base e considera-se como limite de quantificao aquela concentrao que produza relao sinal-rudo superior a 10:1. 2.7. Exatido A exatido de um mtodo analtico a proximidade dos resultados obtidos pelo mtodo em estudo em relao ao valor verdadeiro. Vrias metodologias para a determinao da exatido esto disponveis: 2.7.1. Frmaco 2.7.1.1. Aplicando-se a metodologia analtica proposta na anlise de uma substncia de pureza conhecida (padro de referncia); 2.7.1.2. Comparao dos resultados obtidos com aqueles resultantes de uma segunda metodologia bem caracterizada, cuja exatido tenha sido estabelecida; 2.7.2. Forma Farmacutica

Disciplina de Controle de Qualidade 48 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios 2.7.2.1. Na anlise de uma amostra, na qual quantidade conhecida de frmaco foi adicionada a uma mistura dos componentes do medicamento (placebo contaminado); 2.7.2.2. Nos casos em que amostras de todos os componentes do medicamento esto indisponveis, aceita-se a anlise pelo mtodo de adio de padro, no qual adiciona-se quantidades conhecidas do analito (padro de referncia) ao medicamento. 2.7.3. Impurezas 2.7.3.1. Anlise pelo mtodo de adio de padro, no qual adiciona-se quantidades conhecidas de impurezas e/ou produtos de degradao ao medicamento ou ao frmaco; 2.7.3.2. No caso da indisponibilidade de amostras de certas impurezas e/ou produtos de degradao, aceita-se a comparao dos resultados obtidos com um segundo mtodo bem caracterizado (metodologia farmacopica ou outro procedimento analtico validado). A exatido calculada como porcentagem de recuperao da quantidade conhecida do analito adicionado amostra, ou como a diferena porcentual entre as mdias e o valor verdadeiro aceito, acrescida dos intervalos de confiana. A exatido do mtodo deve ser determinada aps o estabelecimento da linearidade, do intervalo linear e da especificidade do mesmo, sendo verificada a partir de, no mnimo, 9 (nove) determinaes contemplando o intervalo linear do procedimento, ou seja, 3 (trs) concentraes, baixa, mdia e alta, com 3 (trs) rplicas cada. A exatido expressa pela relao entre a concentrao mdia determinada experimentalmente e a concentrao terica correspondente:

2.8. Robustez A robustez de um mtodo analtico a medida de sua capacidade em resistir a pequenas e deliberadas variaes dos parmetros analticos. Indica sua confiana durante o uso normal. Durante o desenvolvimento da metodologia, deve-se considerar a avaliao da robustez. Constatando-se a susceptibilidade do mtodo variaes nas condies analticas, estas devero ser controladas e precaues devem ser includas no procedimento. A Tabela 4 relaciona os principais parmetros que podem resultar em variao na resposta do mtodo. Tabela 4. Fatores que devem ser considerados na determinao da robustez do mtodo analtico.

Disciplina de Controle de Qualidade 49 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios MTODOS BIOANALTICOS 1. Definies Amostra termo geral que abrange: controles, brancos, amostras processadas e desconhecidas. Amostra branco amostra de uma matriz biolgica na qual nenhum analito foi adicionado, utilizada para avaliar a especificidade do mtodo bioanaltico. Amostra de Controle de Qualidade (CQ) amostra de matriz biolgica adicionada do analito, usada para monitorar o desempenho de um mtodo bioanaltico e para avaliar a integridade e validade dos resultados das amostras desconhecidas analisadas numa corrida individual. Amostra processada extrato final (anterior anlise instrumental) de uma amostra que foi submetida a vrias manipulaes (ex.: diluio, extrao, concentrao). Amostra desconhecida amostra biolgica que objeto de anlise. Analito composto qumico especfico a ser mensurado, podendo ser o frmaco notransformado, biomolcula ou seu derivado, metablito ou produto de degradao em uma matriz biolgica. Corrida analtica (ou lote) conjunto completo de amostras em estudo, com um nmero apropriado de padres e CQs para sua validao e que tem sua anlise completa nas mesmas condies. Especificidade habilidade do mtodo bioanaltico de medir e diferenciar o analito de componentes que possam estar presentes na amostra, tais como metablitos, impurezas, compostos de degradao ou componentes da matriz. Estabilidade parmetro que visa determinar se um analito mantm-se quimicamente inalterado numa dada matriz sob condies especficas, em determinados intervalos de tempo. Exatido representa o grau de concordncia entre os resultados individuais encontrados e um valor aceito como referncia. Faixa de quantificao corresponde a uma faixa de concentrao, incluindo o LSQ e o LIQ, que pode ser confivel e reprodutivelmente quantificada com exatido e preciso, por meio da relao concentrao-resposta. Limite de Deteco (LD) menor concentrao de um analito que o procedimento bioanaltico consegue diferenciar confiavelmente do rudo de fundo. Limite Inferior de Quantificao (LIQ) menor quantidade de um analito numa amostra que pode ser determinada quantitativamente com preciso e exatido aceitveis. Limite Superior de Quantificao (LSQ) maior quantidade de um analito numa amostra que pode ser determinada quantitativamente com preciso e exatido. Linearidade corresponde capacidade do mtodo de fornecer resultados diretamente proporcionais concentrao da substncia em exame (analito). Matriz biolgica material distinto de origem biolgica, que pode ser amostrado e processado de modo reprodutvel. Mtodo descrio compreensvel de todos os procedimentos usados em anlises de amostras.

Disciplina de Controle de Qualidade 50 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios Padro de calibrao matriz biolgica a qual foi adicionada uma quantidade conhecida de analito. Os padres de calibrao so usados para construir a curva de calibrao, com a qual so determinadas as concentraes do analito nos CQs e nas amostras desconhecidas em estudo. Padro Interno (PI) composto, geralmente com caractersticas estruturais similares ao analito, adicionado aos padres de calibrao e amostras em concentraes conhecidas e constantes, para facilitar a determinao do analito. Preciso representa o grau de repetibilidade entre os resultados de anlises individuais, quando o procedimento aplicado diversas vezes numa mesma amostra homognea, em idnticas condies de ensaio. Recuperao eficincia de extrao de um mtodo analtico, expressa como a porcentagem da quantidade conhecida de um analito, obtida da comparao dos resultados analticos de amostras branco acrescidas de padro e submetidas ao processo de extrao, com os resultados analticos de solues padro no extradas. Reprodutibilidade preciso entre dois laboratrios. Tambm representa a preciso do mtodo sob as mesmas condies operacionais, num curto perodo de tempo. Validao parcial modificao no mtodo bioanaltico validado que no requer a necessidade de uma revalidao total. Validao total estabelecimento de todos os parmetros de validao de um mtodo bioanaltico, aplicveis anlise das amostras. 2. Consideraes gerais 2.1. As informaes contidas neste guia aplicam-se a mtodos bioanalticos, tais como cromatografia gasosa (CG), cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) e estas combinadas com espectrometria de massa (MS) tais como LC-MS, LC-MS-MS, CG-MS, CG-MS-MS, utilizados na determinao quantitativa de frmacos e/ou metablitos em matrizes biolgicas, tais como sangue, soro, plasma ou urina. Tambm se aplica a outras tcnicas analticas, tais como mtodos microbiolgicos e imunolgicos, ou para outras matrizes biolgicas, embora, nestes casos, pode-se observar um alto grau de variabilidade. 2.2. A validao deve garantir, por meio de estudos experimentais, que o mtodo atenda s exigncias das aplicaes analticas, assegurando a confiabilidade dos resultados. Para tanto, deve apresentar preciso, exatido, linearidade, limite de deteco e limite de quantificao, especificidade, reprodutibilidade, estabilidade e recuperao adequadas anlise. Desse modo, importante ressaltar que todos os equipamentos e materiais devem apresentar-se devidamente calibrados e os analistas devem ser qualificados e adequadamente treinados. 2.3. Deve-se utilizar substncias qumicas de referncia e /ou padres biolgicos oficializados pela Farmacopia Brasileira ou por outros cdigos autorizados pela legislao vigente. Sero admitidos estudos utilizando padres secundrios desde que seja comprovada sua certificao, na ausncia de substncias qumicas de referncia e/ou padres biolgicos farmacopicos. 2.4. Para os estudos de biodisponibilidade relativa/bioequivalncia deve-se utilizar padro interno, sempre que mtodos cromatogrficos forem utilizados. Deve-se justificar a impossibilidade de sua utilizao. 2.5. Deve ser realizada validao total antes da implementao de um mtodo bioanaltico para a quantificao de um frmaco e/ou metablitos.

Disciplina de Controle de Qualidade 51 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios 2.6. Devem ser realizadas validaes parciais quando ocorrerem modificaes no mtodo bioanaltico j validado. Os ensaios de validao parcial podem ser desde uma pequena determinao, como a determinao da exatido e preciso intra-ensaio, at prximo de uma validao total. As mudanas tpicas que podem requerer uma validao parcial incluem, entre outras: 2.6.1. transferncias de mtodos entre laboratrios e analistas; 2.6.2. mudanas na metodologia analtica, por exemplo, substituio do sistema de deteco; 2.6.3. mudana de anticoagulante na coleta das amostras; 2.6.4. mudana de matriz, por exemplo, de plasma para urina; 2.6.5. mudana no procedimento de preparao da amostra; 2.6.6. mudanas relevantes na faixa de concentrao; 2.6.7. mudanas de instrumentos e/ou softwares; 2.6.8. demonstrao de seletividade do analito na presena de medicaes concomitantes; 2.6.9. demonstrao de seletividade do analito na presena de metablitos especficos. 2.7. A avaliao da robustez deve ser considerada durante a fase de desenvolvimento do mtodo. Constatando-se suscetibilidade a variaes nas condies analticas, estas devero ser adequadamente controladas ou precaues devero ser includas no procedimento. Exemplos de variaes: 2.7.1. estabilidade das solues analticas. 2.7.2. tempo de extrao. Variaes tpicas em cromatografia lquida: 2.7.3. influncia da variao de pH da fase mvel. 2.7.4. influncia da variao da composio da fase mvel. 2.7.5. diferentes colunas (diferentes lotes e/ou fabricantes). 2.7.6. temperatura. 2.7.7. velocidade de fluxo. Variaes tpicas em cromatografia gasosa: 2.7.8. diferentes colunas (diferentes lotes e/ou fabricantes); 2.7.9. temperatura; 2.7.10. velocidade de fluxo. 3. Validao pr estudo 3.1. Especificidade 3.1.1. Deve-se analisar amostras da matriz biolgica (sangue, plasma, soro, urina, ou outra) obtidas de seis indivduos, sendo quatro amostras normais, uma lipmica e uma hemolisada, sob condies controladas referentes ao tempo, alimentao e outros fatores importantes para o

Disciplina de Controle de Qualidade 52 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios estudo. Cada amostra branco deve ser testada utilizando o procedimento e as condies cromatogrficas propostas. Os resultados devem ser comparados com aqueles obtidos com soluo aquosa do analito, em concentrao prxima ao LIQ. 3.1.2. Qualquer amostra branco que apresentar interferncia significativa no tempo de reteno do frmaco, metablito ou padro interno, deve ser rejeitada. Caso uma ou mais das amostras analisadas apresentarem tal interferncia, novas amostras de outros seis indivduos devem ser testadas. Caso uma ou mais das amostras deste grupo apresentarem interferncia significativa no tempo de reteno do frmaco, o mtodo deve ser alterado visando elimin-la. 3.1.3. Os interferentes podem ser componentes da matriz biolgica, metablitos, produtos de decomposio e medicamentos utilizados concomitantemente ao estudo. A interferncia da nicotina, cafena, produtos de venda isenta de prescrio e metablitos deve ser considerada sempre que necessrio. 3.1.4. Caso o mtodo seja destinado quantificao de mais de um frmaco, cada um deve ser injetado separadamente para determinar os tempos de reteno individuais e assegurar que impurezas de um frmaco no interfiram na anlise do outro. 3.1.5. A resposta de picos interferentes no tempo de reteno do frmaco deve ser inferior a 20% da resposta do LIQ. As respostas de picos interferentes no tempo de reteno do frmaco e do padro interno devem ser inferiores, respectivamente, a 20% e 5% da resposta na concentrao utilizada. 3.2. Curva de calibrao/linearidade 3.2.1. A curva de calibrao representa a relao entre a resposta do instrumento e a concentrao conhecida do analito. Deve-se gerar uma curva de calibrao para cada frmaco e corrida analtica, a qual ser usada para calcular a concentrao do frmaco nas amostras, utilizando-se a mesma matriz biolgica proposta para o estudo. A curva de calibrao deve incluir a anlise da amostra branco (matriz biolgica isenta de padro do frmaco e do padro interno), da amostra zero (matriz biolgica mais o padro interno) e de, no mnimo, 6 (seis) amostras contendo padro do frmaco e padro interno, contemplando o limite de variao esperado, do LIQ at 120% da concentrao mais alta que se pretende analisar. 3.2.2. Para a determinao da curva de calibrao, deve-se analisar amostras extradas da matriz apropriada, no mnimo 6 (seis) concentraes diferentes. Procedimentos alternativos devem ser justificados, como na obteno de uma correlao no-linear, em que um maior nmero de concentraes de padres sero necessrios. 3.2.3. Os resultados devem ser analisados por mtodos estatsticos apropriados como, por exemplo, o clculo de regresso linear pelo mtodo dos mnimos quadrados. Deve-se apresentar as curvas obtidas (experimental e a resultante do tratamento matemtico), o coeficiente de correlao linear, o coeficiente angular e o intercepto da reta. 3.2.4. Critrios de aceitao da curva de calibrao: 3.2.4.1. desvio menor ou igual a 20% (vinte por cento) em relao a concentrao nominal para o LIQ; 3.2.4.2. desvio menor ou igual a 15 % (quinze por cento) em relao concentrao nominal para as outras concentraes da curva de calibrao; 3.2.4.3. no mnimo quatro de seis concentraes da curva de calibrao devem cumprir com os critrios anteriores, incluindo o LIQ e a maior concentrao da curva de calibrao;

Disciplina de Controle de Qualidade 53 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios 3.2.4.4. o coeficiente de correlao linear deve ser igual ou superior a 0,98. 3.3. Preciso 3.3.1. A repetibilidade do mtodo verificada utilizando-se, no mnimo, 3 (trs) concentraes (baixa, mdia e alta), contemplando a faixa de variao do procedimento, realizando-se, no mnimo, 5 (cinco) determinaes por concentrao. 3.3.2. A preciso deve ser determinada em uma mesma corrida (preciso intra-corrida) e em corridas diferentes (preciso inter-corridas). 3.3.3. Pode ser expressa como desvio padro relativo (DPR) ou coeficiente de variao (CV%), no se admitindo valores superiores a 15%, exceto para o LIQ, para o qual se admite valores menores ou iguais a 20%, segundo a frmula:

onde, D P o desvio padro e C M D, a concentrao mdia determinada. 3.4. Exatido 3.4.1. A exatido do mtodo deve ser determinada utilizando-se, no mnimo, 3 (trs) concentraes (baixa, mdia e alta), contemplando a faixa de variao do procedimento, realizando-se, no mnimo, 5 (cinco) determinaes por concentrao. 3.4.2. A exatido deve ser determinada em uma mesma corrida analtica (exatido intra-corrida) e em corridas diferentes (exatido inter-corridas). 3.4.3. O desvio no deve exceder 15%, exceto para o limite de quantificao, para o qual se admite desvios menores ou iguais a 20%. 3.4.4. A exatido expressa pela relao entre a concentrao mdia determinada experimentalmente e a concentrao terica correspondente: 3.5. Limite inferior de quantificao (LIQ) 3.5.1. Estabelecido por meio da anlise de matriz biolgica contendo concentraes decrescentes do frmaco at o menor nvel quantificvel com preciso e exatido aceitveis. 3.5.2. Pode-se, tambm, utilizar a razo de 5:1 entre o sinal e o rudo da linha de base, devendose especificar o mtodo utilizado para determinao do LIQ. 3.5.3. O LIQ deve ser, no mnimo, cinco vezes superior a qualquer interferncia da amostra branco no tempo de reteno do frmaco. 3.5.4. O pico de resposta do frmaco no LIQ deve ser identificvel e reprodutvel com preciso de 20% (vinte por cento) e exatido de 80 120 % (oitenta a cento e vinte por cento), atravs da anlise de, no mnimo, 5 (cinco) amostras de padres. 3.6. Limite de deteco (LD) Estabelecido por meio da anlise de solues de concentraes conhecidas e decrescentes do frmaco, at o menor nvel detectvel. Recomenda-se que o LD seja de 2 a 3 vezes superior ao rudo da linha de base. 3.7. Recuperao

Disciplina de Controle de Qualidade 54 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios A recuperao mede a eficincia do procedimento de extrao de um mtodo analtico dentro de um limite de variao. Porcentagens de recuperao do analito e do padro interno prximos a 100% so desejveis, porm, admite-se valores menores, desde que a recuperao seja precisa e exata. 3.7.1. Este teste deve ser realizado comparando-se os resultados analticos de amostras extradas a partir de trs concentraes (baixa, mdia e alta), contemplando a faixa de linearidade do mtodo, com os resultados obtidos com solues padro no extradas, que representam 100% de recuperao. 3.7.2. O clculo da recuperao deve ser feito em funo da relao de rea do padro extrado e no extrado, tanto para o analito quanto para o padro interno separadamente. 3.8. Controle de qualidade (CQ) 3.8.1. CQ do limite inferior de quantificao (CQ-LIQ): mesma concentrao de LIQ. 3.8.2. CQ de baixa concentrao (CQB): menor ou igual 3 x LIQ. 3.8.3. CQ de mdia concentrao (CQM): aproximadamente a mdia entre CQB e CQA 3.8.4. CQ de alta concentrao (CQA): 75 a 90% da maior concentrao da curva de calibrao. 3.9. Estudo de estabilidade do frmaco em lquidos biolgicos: 3.9.1. Consideraes especficas relevantes Para a realizao do estudo de estabilidade devem ser observados os parmetros de exatido, preciso, linearidade, limite de deteco, limite de quantificao, especificidade, limite de variao e robustez, previamente validados. A estabilidade do frmaco em lquidos biolgicos depende de suas propriedades qumicas, da matriz biolgica e do material de acondicionamento utilizado. A estabilidade determinada para um tipo de matriz e de material de acondicionamento especfico no pode ser extrapolada para outros. As condies de realizao dos ensaios de estabilidade devem reproduzir as reais condies de manuseio e anlise das amostras. Deve ser avaliada a estabilidade do analito durante a coleta e manuseio da amostra, aps armazenagem de longa durao (congelamento) e curta durao ( temperatura ambiente), aps ciclos de congelamento e descongelamento e nas condies de anlise. Deve-se incluir tambm avaliao da estabilidade do analito nas solues-padro, preparadas com solvente apropriado em concentraes conhecidas. As determinaes de estabilidade devem utilizar um conjunto de amostras, preparadas a partir de uma soluo estoque recente do frmaco em anlise, adicionado matriz biolgica isenta de interferncia. 3.9.2. Estabilidade aps ciclos de congelamento e descongelamento Deve-se testar a estabilidade do frmaco aps trs ciclos de congelamento e descongelamento, utilizando-se, no mnimo, trs amostras das concentraes baixa e alta determinadas na validao do mtodo analtico, nas seguintes condies: as amostras devem ser congeladas temperatura indicada para o armazenamento e mantidas por 24 horas, sendo ento submetidas ao descongelamento temperatura ambiente. Quando completamente descongeladas, as amostras devem ser novamente congeladas temperatura indicada para o armazenamento, por 12 a 24 horas e, assim sucessivamente, at contemplar os trs ciclos, quantificando-se o frmaco

Disciplina de Controle de Qualidade 55 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios nas amostras aps o terceiro ciclo. Os resultados devem ser comparados com aqueles obtidos da anlise das amostras recm-preparadas. 3.9.3. Estabilidade de curta durao Para verificao dessa estabilidade utilizam-se, no mnimo, trs amostras das concentraes baixa e alta determinadas na validao do mtodo analtico. Cada uma delas dever permanecer temperatura ambiente de 4 (quatro) a 24 (vinte e quatro) horas (baseado no tempo em que as amostras do estudo sero mantidas temperatura ambiente) e analisadas. Os resultados devem ser comparados com aqueles obtidos da anlise das amostras recm-preparadas. 3.9.4. Estabilidade de longa durao 3.9.4.1. O tempo de armazenamento para o estudo de estabilidade de longa durao deve exceder o intervalo de tempo compreendido entre a coleta da primeira amostra e a anlise da ltima, de acordo com o cronograma apresentado no protocolo de estudo de biodisponibilidade relativa/bioequivalncia. 3.9.4.2. A temperatura utilizada no ensaio deve reproduzir a recomendada para armazenamento das amostras, normalmente igual a -20 C. 3.9.4.3. Para verificao dessa estabilidade utilizam-se, no mnimo, trs amostras das concentraes baixa e alta determinadas na validao do mtodo analtico. As concentraes de todas as amostras de estabilidade devem ser comparadas com a mdia dos valores anteriormente calculados para as amostras do primeiro dia do teste. 3.9.5. Estabilidade ps-processamento Em caso de utilizao de equipamentos que empregam sistemas automticos de amostragem/injeo, deve-se realizar estudo de estabilidade do frmaco, na amostra processada para anlise, incluindo o padro interno, na temperatura sob a qual o teste ser realizado e por perodo de tempo superior durao da corrida analtica. Utiliza-se, no mnimo, trs amostras das concentraes baixa e alta determinadas na validao do mtodo analtico. Os resultados devem ser comparados com aqueles obtidos da anlise das amostras recm-preparadas. 3.9.6. Estabilidade das solues-padro 3.9.6.1. Deve ser avaliada a estabilidade das solues-padro do frmaco e do padro interno, mantidas temperatura ambiente por, no mnimo, 6 (seis) horas aps preparao. 3.9.6.2. Em caso de tais solues serem armazenadas sob refrigerao ou congelamento, a estabilidade tambm deve ser avaliada, contemplando a temperatura e o perodo de armazenamento das mesmas. 3.9.6.3. Os resultados desse teste devem ser comparados com aqueles obtidos utilizando-se solues recentemente preparadas do frmaco e do padro interno. 3.9.7. Anlise dos resultados As amostras sero consideradas estveis quando no se observar desvio superior a 15% do valor obtido das amostras recm-preparadas, com exceo do LIQ, para o qual se aceita desvio de at 20%. Qualquer que seja o mtodo estatstico utilizado para avaliar os resultados dos estudos de estabilidade, este dever estar descrito claramente no procedimento operacional padro (POP).

Disciplina de Controle de Qualidade 56 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios 4. Critrios de aplicao do mtodo bioanaltico validado 4.1. A anlise de todas as amostras de um analito em matriz biolgica deve ser concluda dentro do perodo de tempo para o qual a estabilidade tenha sido determinada. 4.2. Uma corrida analtica deve conter: amostras de CQ, padres de calibrao e amostras desconhecidas de um ou mais voluntrios do estudo. prefervel que todas as amostras de um mesmo voluntrio sejam analisadas numa nica corrida. 4.3. No permitido estimar a concentrao das amostras atravs de extrapolao da curva de calibrao abaixo do LIQ ou acima do maior padro. Em vez disso, a curva deve ser redefinida ou as amostras de concentraes superiores devem ser diludas e re-analisadas. 4.4. No uso rotineiro do mtodo analtico validado, sua preciso e exatido devem ser monitoradas regularmente para assegurar a continuidade do desempenho satisfatrio. Para atingir este objetivo, amostras de CQ devem ser analisadas juntamente com as demais amostras, em cada corrida analtica. 4.5. As amostras de CQ devem ser incorporadas em intervalos adequados, dependendo do nmero total de amostras da corrida, sempre em igual nmero de replicatas de cada concentrao (CQB, CQM e CQA). 4.6. O nmero de amostras de CQ (em mltiplos de trs) a ser incorporado em cada corrida analtica no deve ser inferior a 5% (cinco por cento) do nmero de amostras desconhecidas. Para corridas analticas constitudas de at 120 amostras, pelo menos 6 (seis) CQs (uma duplicata de cada concentrao) devem estar presentes. 4.7. Os resultados das amostras de CQ serviro de base para aceitao ou rejeio da corrida analtica. No mnimo, 67% (quatro de seis) das amostras de CQ devem estar dentro de mais ou menos 15% dos seus respectivos valores nominais, exceto para o LIQ, para o qual se admite desvios menores ou iguais a 20%; 33% (duas de seis) amostras de CQ podem estar fora destes limites, mas no para a mesma concentrao.

Disciplina de Controle de Qualidade 57 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 09:

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Disciplina de Controle de Qualidade 59 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Disciplina de Controle de Qualidade 60 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 10:

Disciplina de Controle de Qualidade 61 Apostila de Aulas Prticas e Relatrios

Anexo 11: