Nem toda reao antgeno/anticorpo gera uma manifestao secundria, ento, eu vou ter um grupo de reaes em que o antgeno

e o anticorpo vo se ligar, mas eu no vou ter nem precipitado, nem grumo. Ento, como que a gente vai enxergar? Eu vou ter que usar uma revelao. Na verdade, a gente compra kit fechado. Se a reao antgeno anticorpo no gera precipitado, voc consegue enxergar algum grumo? No. Se no gera grumo, voc no enxerga ____. Ento a indstria deu um jeito de fazer um kit com um revelador, entre aspas, uma molcula que vai revelar a interao antgeno anticorpo. Ento at aqui eu s quero que vocs saibam isso, dai eu vou explicar cada detalhe. Ns temos trs tipos de reaes que visualizam interao primria. O que que isso? Da unio antgeno anticorpo eu no tenho manifestao secundaria. Que reaes so essas? Imunofluorescncia Radioimunoensaio Enzimaimunoensaio Qual que a diferena? A diferena que quando eu tiver uma reao de imunofluorescncia eu vou revelar a interao antgeno anticorpo usando uma molcula fluorescente, por isso que chama imunofluorescencia. Quando eu tiver uma reao radioimunoensaio, eu vou revelar a interao antgeno anticorpo usando um istopo radioativo. Quando eu tiver uma enzimaimunoensaio, eu vou revelar a reao antgeno anticorpo usando um sistema enzimtico. Ns vamos ver que os princpios, os mecanismos das reaes so os mesmos; o que muda a revelao. Porque que eu tenho que usar uma molcula que fluoresce, ou uma molcula que radioativa, ou uma molcula que uma enzima? Porque se no eu no enxergo. Lembra oque eu falei? Nessas reaes o antgeno e o anticorpo se unem, mas no geram nem grumo nem precipitado, ento eu no enxergo. Ns vamos comear com a imunofluorescncia. A imunofluorescencia foi uma tcnica muito usada. At hoje muitos laboratrios utilizam a imunofluorescencia. Mas com o tempo, uma tcnica que est caindo em desuso. Por qu? Porque basicamente.. Em que consiste a imunofluorescencia? Eu vou dar um exemplo pra vcs dai depois eu volto aqui pra explicar a revelao. Vamos pegar o exemplo que ele perguntou l.. Eu tenho um paciente, que vai fazer uma cirurgia, que tem um cncer de estmago, por exemplo. Dai o que vai acontecer... eu vou ter um pedao de tecido, a hora que faz a cirurgia, no vou? O patologista pode pegar este tecido e grudar numa lmina, fazer o corte histolgico l e grudar na lmina. O Que que a gente pode fazer? Eu posso pesquisar protenas especificas do tumor. Vocs j ouviram falar em marcador tumoral? O que que isso? A clula maligna tem na membrana dela uma protena que a nossa clula normal no tem. Se a clula maligna tem protena que a nossa clula no tem, no quer dizer que elas tm eptopos diferentes? Se ela tem eptopo diferente eu posso revelar usando um anticorpo. Ento, vamos imaginar que aqui uma lmina que eu tenho o tecido l do tumor. Todo mundo entendeu a situao? Tem um paciente que tem um l um cncer, faz uma cirurgia e um pedao desse tecido eu grudo em cima da lmina. Mas na verdade a patologia faz isso de rotina. Ai isso vai pro laboratrio de imuno. Dai eu vou perguntar assim: Ser que o cncer de estomago tem uma protena f por exemplo? Que uma protena que no expressa na clula normal. O que que eu vou fazer? Eu vou colocar em cima da lmina que tem um tecido, um anticorpo especifico praquilo que eu to procurando. Se eu estiver procurando uma protena f eu vou ter que por um anti-F, seu eu estiver procurando uma protena g eu vou ter que por um anti-G, e assim por diante. Isso aqui a gente compra pronto. Voc liga l pra empresa e fala, eu quero um anti-G marcado. S que se eu adicionar s anticorpo, e o antgeno ligar no anticorpo, eu vou ver alguma coisa? No. Ento quando eu compro este reagente eu falo l que eu quero um anti-G marcado com uma partcula que emite luz, que a gente chama de fluorocromo. O que que o fluorocromo? uma partcula que a hora que eu incido luz sobre ela, ela brilha. Ento, o que que vai acontecer.. Se esse antgeno, for o antgeno G e eu adicionar um anti-G o que que acontece? Liga o antgeno com o anticorpo. Dai eu pego essa lmina que est com o anticorpo grudado, vou expor isso a uma luz. A hora que a luz incide no fluorocromo, ele brilha. Ento, a hora que eu olho no microscpio, se brilhar positivo, se no brilhar negativo. Eu vou dar um exemplo aqui pra voc. Isso uma fotografia de verdade tah.. Vocs esto enxergando que isso aqui fluoresce? Por que fluoresce? Porque o antgeno e o anticorpo esto ligados. Ento a imunofluorescncia nada mais do que a reao antgeno anticorpo revelada por um fluorocromo. S que essa tcnica que eu mostrei pra vocs aqui , S quem faz o laboratrio de patologia, porque a gente, na verdade, no faz esse tipo de teste. Nas anlises clnicas, no vai chegar tecido pra voc analisar marcador tumoral. Quem faz isso o laboratrio de patologia. O Que que a gente pode fazer? Uma adaptao desta tcnica. Por exemplo, eu quero saber se o paciente tem doena de chagas. Se ele tem doena de chagas, o que que eu vou procurar? Vou procurar um parasita? S se tiver em fase aguda. Se tiver em fase crnica, voc vai achar? No. O que que eu posso procurar? O anticorpo. Ento eu posso procurar no soro do paciente um anticorpo contra o Tripanossoma cruzi, no posso? Ento o que que eu fao? Eu compro da indstria uma lmina, que j vem grudado, j vem na lmina isso, um eptopo do Tripanossoma cruzi. Se eu quiser procurar anticorpo contra HIV, que eptopo que eu tenho que grudar na lmina? Um HIV. Se eu quiser procurar anticorpo contra o vrus do herpes, o que que eu tenho que grudar na lamina? O eptopo da herpes. Vocs entendem que isso aqui muda de acordo com o que eu quero? Ento, voltando ao meu exemplo. Eu quero saber se o paciente tem doena de chagas. Ento eu comprei uma lmina, a gente chama de lmina sensibilizada, ou seja, uma lmina que tem grudada o eptopo que eu quero. Ai eu pingo o soro do paciente. No soro do paciente, eu estou procurando o que? Eu quero saber se ele tem ou no tem o que? O anticorpo. Vamos fazer de conta que ele tem. A hora que o anticorpo reconhece o antgeno o que que acontece? Ligou antgeno anticorpo, mas eu enxergo? No. Eu tenho que dar um jeito de revelar. Ento, quando eu comprei esta lmina, no mesmo kit, veio uma molcula, que chamada de conjugada. O que que o conjugado? O conjugado um anticorpo que responde, que feito, contra o anticorpo humano. Ento, na verdade, um anti imunoglobulina humana, marcada com um fluorocromo, isso eu compro, no comrcio. Dai vocs vo me perguntar, como que eu fao um anticorpo, contra o anticorpo humano? Isso aqui feito, no ? Como ser que a indstria produz um anticorpo, contra um anticorpo? Eu pego o anticorpo do homem, injeto num coelho, ou num ratinho, no que vocs quiserem, e a cobaia produz o que? Um anticorpo contra o anticorpo humano. Ento isso aqui, na verdade produzido em cobaia. Dai s vocs saberem tah... Ento, por que que eu preciso do conjugado? Se eu no tiver o conjugado eu vou saber se positivo ou negativo? No. Ento eu preciso do conjugado para revelar. Qual que a funo do conjugado? Revelar a interao antgeno anticorpo. Sem o conjugado eu enxergo alguma coisa? No, ento, voltando.. Peguei a lmina que tinha o eptopo do Tripanossoma, coloquei o soro do paciente, reagiu, reao antgeno anticorpo. Pra revelar eu coloco o conjugado. O conjugado no reage com o anticorpo? Ento onde o anticorpo estiver grudado, ele liga. Se tiver s o epitopo, o conjugado no liga. Ento este conjugado s vai ligar se o anticorpo estiver ligado. Se no tiver anticorpo no soro, o conjugado liga em algum lugar? No. Ento, se o conjugado ligar, fluoresce. Se o conjugado no ligar, no fluoresce.

Esse mtodo, por ser uma variao, a gente chama de mtodo indireto. Eu no to revelando diretamente a presena do antgeno, eu estou revelando a presena do anticorpo contra ele. Esse mtodo o que a gente usa no dia a dia. Hoje a gente usa imunofluorescencia para chagas, para toxoplasmose, hiv, sfilis e mais um monte de outras coisas, mas principalmente essas quatro doenas. Eu falei pra vocs assim, a imunofluorescencia j foi uma tcnica muito utilizada, mas atualmente ela esta caindo em desuso. Por que ser? Eu falo pra vocs que uma tcnica sensvel, uma tcnica especifica, e de boa reprodutibilidade. Mas como que eu vou ver a fluorescncia? Pra eu ver a fluorescncia, eu vou pegar aquela lamina, vou colocar num microscpio, que parecido com esse microscpio que vocs tem aqui, s que no lugar da lmpada branca que vocs tem, na verdade uma lmpada de mercrio. Por qu? Porque ela estimula o brilho. Eu coloco a lamina aqui e vou lendo. Se brilhar positivo, se no brilhar negativo. A, eu digo para vocs, uma tcnica especifica, uma tcnica sensvel, ento por que ser que o povo esta parando de usar? Vamos fazer de conta que vocs esto l no laboratrio. Isso que eu trouxe pra vocs um resultado excelente. Ento eu vou l ao laboratrio, fiz a reao, e olhei, brilho aqui, presente. Se tivesse s o campo escuro eu ia dizer que negativo. Agora, voc j imaginou aquela pessoa que no tem prtica? Se ela deixar de lavar nos passos em que ela tem que lavar, ou lavar mais ou menos, ou fizer uma reao meio desequilibrada, vai sobrar reagente na lmina, e ai vai dar aquele brilho fraco. Isso positivo ou negativo? Ento, o grande problema da imunofluorescencia a subjetividade da leitura. Depende do operador. Ento eu vejo uma lmina diferente de vocs. Eu tenho certeza que se eu trouxesse aqui dez lminas de imunofluorescencia e passasse aqui pra todo mundo fazer o mesmo, o resultado ia ser diferente. Por qu? Porque depende s do olho de que est vendo. E isso, pra ns, no laboratrio ruim. Por que que ruim? Porque induz o erro. Eu posso soltar positivo e voc pode soltar negativo. Ento a imunofluorescencia esta caindo em uso porque ela tem a inconvenincia, a grade desvantagem, de ser subjetiva a leitura, ou seja, depende do operador. (15:00) Radioimunoensaios eu nem vou dar mais pra vocs, por que no usa mais. Era uma tcnica que no lugar do fluorocromo, era um istopo radioativo. Ai a gente tirava o raio-x e revelava. Por que que caiu em desuso? Por causa do risco. Ento, pra trabalhar com radioimunoensaio voc tinha que tem um laboratrio com parede de chumbo, tinha que usar avental, uma serie de inconvenientes que invivel em um laboratrio clinico. Ento hoje a gente no usa mais. Enzimaimunoensaio. O mais utilizado hoje. o forte da imuno dentro do laboratrio. Eu queria chamar muito a ateno de vocs pro seguinte, eu j vi profissionais do mercado falar que enzimaimunoensaio e ELISA a mesma coisa, e no . A enzimaimunoensaio uma reao em que a revelao enzimtica. Todo mundo j viu aquele teste de gravidez que duas tirinhas, que voc pe e fica duas fitinhas colorida, ou uma fitinha, se no tiver gravida? Aquilo um ensaio imunoenzimatico. S que no uma ELISA. Por que que a grande maioria das pessoas acha que enzimaimunoensaio e ELISA so sinnimos? Porque hoje, num laboratrio clinico, eu posso dizer pra vcs, que 99% das reaes de enzimaimunoensaio ELISA. Ento, quando a gente fala de enzimaimunoensaio ns temos dois tipos: (17:22) Homogneos Heterogneos Ento eu tenho dois tipos de reao de enzimaimunoensaio. Como que eu vou saber se ele homogneo ou se ele heterogneo? Ns vamos fazer assim: Os homogneos no tem etapa de lavagem, eles so mais rpidos. Os heterogneos so aqueles que tm etapa de lavagem e por isso demandam mais tempo. Mas o principio o mesmo da imunofluorescencia, mas ao invs de a gente usar uma marcao fluorescente, eu vou usar uma marcao enzimtica. Os homogneos, ns vamos ter muito pouco num laboratrio de analises clinicas. O homogneo usa geralmente laboratrio de farmaco. Um laboratrio de farmaco usa o ensaio enzimtico pra detectar a concentrao metablito de medicamentos na corrente circulatria. Por exemplo, pra saber se um paciente est ou no tomando um medicamento, existem alguns testes que eu posso fazer pra detectar a presena daquele medicamento, e nessa caso eles so homogneos, porque eles no dependem de lavagem. Eu coloquei um exemplo aqui, por que quem for pra anlises clnicas no vai ver, s vai ver quem for fazer pesquisa, quem for pra rea de farmaco... Por exemplo, eu quero saber se o paciente est tomando determinada droga, ou seja, minha pergunta , tem a droga ou o metablito dela na corrente circulatrio? O que que eu vou fazer... Eu vou adicionar uma enzima, Tem o medicamento na corrente circulatria? Sim ou no? Ai qual que o meu reagente? Eu vou adicionar a enzima que no seu sitio ativo, j vem grudado aqui, o mesmo medicamento, ento, por exemplo, eu quero saber se o meu paciente toma gentamicina. Eu tenho que comprar um kit, que me de uma enzima, que tenha em sitio ativo uma molcula de gentamicina. Se eu quisesse dosar, por exemplo, o zovirax, aciclovir, tenho que ter uma enzima, que tenha no seu sitio ativo uma molcula do aciclovir. Eu tenho que comprar um kit correspondente ao que eu precisar. Dai, o que que vai acontecer.. eu vou adicionar um anticorpo anti- meu eptopo, ou seja, minha droga. Tudo isso aqui vem no kit. Ento eu vou por no soro do paciente. Qual que minha pergunta? Est tomando droga? Se tiver tomando a droga, o que que ele vai ter no plasma? O medicamento. Eu vou adicionar na lmina uma enzima que tem o medicamento grudado no stio ativo, e um anticorpo. O que que vai acontecer. Se o paciente tiver tomando medicamento, esse anticorpo aqui vai ser consumido, ou seja, ele vai ligar aqui! Se ele ligar aqui, isso aqui no fica livre? O sitio ativo enzimtico no fica livre? Agora, se o paciente no tiver tomando medicamento, o que que acontece.. o anticorpo tem onde se ligar? Nao. Onde que ele vai ligar ento? Ento quando o paciente no toma medicamento o anticorpo faz isso... A hora que o anticorpo liga na enzima ele bloqueia o sitio ativo? Bloqueia, ento essa enzima no tem funo. Ai que que eu fao.. Eu adiciono o substrato na enzima. Quando o sitio ativo esta livre, o substrato encaixa, e muda de cor. Quando o anticorpo esta ocupando o sitio ativo tem como o substrato encaixar? Ento aqui permanece inalterado. Ento na verdade que que eu fiz... Eu usei uma reao catalisada por uma enzima pra detectar, neste exemplo, um antgeno, que a minha droga. Mas, eu poderia, por outros mtodos, pesquisar anticorpo tambm. Isso aqui gente, ns no vamos fazer em laboratrio de analises clinicas.. Isso no da diagnostico.. Isso um ensaio homogneo, no depende de etapa de lavagem.. Agora, o que que o grosso do laboratrio, em termos de enzimaimunoensaio.. So os heterogneos... Os ensaios heterogneos, eles so ensaios que dependem de etapa de lavagem.. estes ensaios so os chamados, ELISA, que significa (Enzyme Linked Immunoabsorbent Assay). Ensaio imobilizado em fase slida. Cuidado ao escreverem isso, por que no uma sigla? tudo em maisculo. Ento o nome j diz. Eu tenho que ter um suporte pra fazer, no posso ficar pingando tudo na lmina. Esse suporte, antigamente era feito em placa, na microplaca, ou em p..... Hoje em dia a gente s usa microplaca. Ento as

reaes de ELISA hoje so feitas em microplaca, uma plaquinha, s que a plaquinha vai funcionar como um suporte da reao. Ento a plaquinha essa daqui . Essa plaquinha vem numerado de A H, e de 1 a 12. Ento no poo A1 eu vou ter um paciente, no poo A2 eu vou ter outro paciente e assim por diante. Isso aqui como se fossem vrios tubos individuais. Ento o que que tem nessa plaquinha. Faz de conta que isso daqui um pocinho daquela plaquinha. Vamos fazer de conta que eu quero fazer um ELISA, que a gente faz muito, pra diagnostico de HIV. Todo mundo lembra que eu no vou conseguir pesquisar o vrus, eu vou ter que pesquisar o anticorpo. Ento chega o paciente, este paciente tem HIV? Eu quero dizer, ele tem anticorpo contra esse vrus? Na minha plaquinha eu vou ter um antgeno grudado l. Ento a plaquinha da ELISA, ela sensibilizada l, com um eptopo, no meu exemplo, do HIV. Se eu colocar uma ELISA pro HCV pode ser o mesmo eptopo? No, tem que ser outro. Se eu fizer uma ELISA pra toxoplasmose, pode ser o mesmo eptopo? No, tem que ser outro. A placa que vocs vo comprar de acordo com aquilo que vocs vo pesquisar. Ento hoje a gente compra um kit, pra diagnostico de HIV. J vem a placa sensibilizada, com o eptopo grudado, um revelador, e todos os meus reagentes. Ento eu vou pegar aquela plaquinha, e em todos os pocinhos dela ela tem antgeno, ou seja, o eptopo, uma protena do vrus. Ai eu pingo o soro do paciente. O que que eu to pesquisando no soro do paciente? Presena de anticorpo. Se ele tiver o vrus, ele tem o anticorpo, se ele no tiver o vrus, tem como ele ter o anticorpo? Ento eu pinguei o soro do paciente. Ai eu deixo ele meia hora no banco. Pra que? Pro anticorpo conseguir achar o antgeno. Ai depois dessa fase aqui, o que que eu fao. Eu fao uma lavagem. Eu pego agua e lavo, lavo, lavo. Por que se o anticorpo estiver grudado ele vai sair? No. Ele vai estar grudado aqui. Mas tudo o resto que esta no soro, eu no falei pra vocs que o soro tem sais, tem vitamina, tem protenas, tudo o resto tal ah. Fica s o anticorpo. Se no tiver esse anticorpo o que que que sobra? Sobra eptopo. Ento se o paciente tiver o HIV, ele tem o anticorpo que gruda na protena. Eu enxergo alguma coisa? No. Ai eu vou adicionar meu conjugado. Meu conjugado uma anti-imunoglobulina humana. Qual a diferena da imunofluorescencia? Ao invs de ela ser marcada por um fluorocromo, ela marcada por uma enzima. Por isso que eu falei, o principio o mesmo, s a revelao que muda. Se o anticorpo estiver grudado, o que que vai acontecer? O conjugado se liga. Por que o conjugado reconhece o que? O anticorpo. Agora, se o anticorpo no estiver ligado, o conjugado vai ligar? No, porque ele s reconhece anticorpo. Ai nessa fase aqui, eu lavo tambm. Vocs imaginem assim, eu peguei o conjugado, ele ta ali, se eu no lavar, vai dar tudo positivo, ento a lavagem certa... a hora que eu pingo conjugado e no tem anticorpo, ele gruda na placa? Ele vai embora na lavada. E ai? Ai eu revelo.. adiciono substrato, geralmente um substrato homogneo, e muda de cor. Esse mtodo o mtodo indireto, ento eu to pesquisando o anticorpo, se o paciente for positivo ele tem o anticorpo, ligou no antgeno, se o anticorpo estiver presente, o conjugado liga, se o conjugado ligar, ele no tem uma enzima? (30:12) A maior parte das enzimas que a gente usa ou peroxidade ou fosfatase alcalina. Quando eu uso o meu produto bas, o meu substrato pra ela o peroxido de hidrogenio. Ento qo que que acontece. O que que a peroxidade faz?. Peroxido de hidrognio a mesma coisa que agua oxigenada. Quando a peroxidase age sobre o peroxido de hidrognio, no gera uma reao qumica? Que produz agua e oxignio? Isso aqui incolor, eu no consigo enxergar. Por isso que eu tenho que usar um agente cromogneo (?) na verdade, a gente usa um agente que chama DNB, se a enzima tiver lah, o que que acontece com o peroxido de hidrognio? Ele quebrado, eu oxido o oxignio e oxida o ___. Na verdade, tudo isso aqui, s acontece pq eu tenho a enzima. Se o conjugado no estiver ligado, eu no tenho a enzima, o que que acontece quando eu adiciono o peroxido de hidrognio no dnb? Vai pra amarelo? No. Ento na verdade tudo por causa da enzima... Ento ficou amarelo pq a enzima ligou.. No fica amarelo pq a enzima naao liga... Esse o mtodo direto, mais usado hoje em dia, que pra detectar anticorpo. Ai eu tenho um ELISA especifico que chama mtodo para captura de IgM, vocs lembram que quando eu comecei a dar aula pra vocs, eu falei pra vocs que importante eu detectar separadamente a presena de anticorpo IgM e IgG. lembram disso? Por que ser que importante? Por trs motivos. importante saber se o paciente tem IgM? Sim. Primeiro: determina a fase do doente. Segundo: avalia risco de transmisso. E terceiro: o nico anticorpo que marca infeco na criana, porque no atravessa placenta. Tudo isso eu j dei, eu s to recapitulando. Ento eu tenho que ter teste pra pegar s IgM. Na plaquinha de __________ eu no tenho antgeno, eu tenho na verdade um anticorpo que s liga na IgM. Vamos fazer de conta que o mesmo paciente, um paciente que tem HIV, s que agora eu preciso saber se este anticorpo IgM ou IgG. Ai eu pingo o soro dele. Se o soro dele tiver IgM, vai ligar. S que vocs entendem que vai ligar se for IgM pra HIV mas vai ligar tambm se for IgM pra qualquer outra coisa. Ento nessa fase aqui, o que tiver IgM liga. Ai o que que eu fao? Eu pipeto um antgeno especfico do HIV. aqui que esta a grande sacada desse mtodo. Por que se este anticorpo for contra a Herpes, o antgeno vai ligar? No. Esse antgeno s liga se esta IgM for anti-HIV. E ai? Ai eu ponho meu conjugado. S que neste exemplo o meu conjugado um anticorpo, marcado por uma enzima. E ai o resto igual, o substrato promove ........ Agora vem minha pergunta... Se eu fizer um ELISA de captura pra IgM, e der negativo, exclui o risco de estar doente? Eu to l no laboratrio, eu fiz um ELISA de captura pra IgM, e no ficou amarelo, dai eu falo que negativo, isso quer dizer que o paciente no tem a doena? No, porque pode ser IgG. Entenderam a diferena? Isso aqui no vai dar diagnstico, essa vai me dar diagnostico. (apontando para os exemplos) A gente muita vezes tem a ideia que as reaes imunolgicas so s para pesquisar anticorpos, porque a maioria das reaes so mesmo. Mas a gente pode pesquisar antgenos, por exemplo, todas as tcnicas que vocs tem hoje em analises clnicas, para detectar hormnio enzimtica. Como que eu fao? s inverter. Eu no quero pesquisar o antgeno agora? Ento na minha plaquinha eu no vou ter mais o antgeno, eu vou ter o anticorpo. Ento vamos imaginar que isso aqui pra pesquisar TSH. Na plaquinha eu vou ter que ter um anti-TSH. Vou pipetar o soro do paciente. Se o hormnio estiver l o que que vai acontecer? Vai se ligar. S que eu no enxergo. Ai eu adiciono um conjugado. O que que o conjugado? Um anti-TSH marcado com uma enzima. Ai ele gruda, por isso chama sanduiche. O antgeno fica no meio de dois anticorpos. Esse aqui marcado por uma enzima, se ele marcado por uma enzima, eu adiciono um substrato cromgeno ele........ Estes testes aqui a gente usa muito pra detectar hormnio. ..... E vocs vo ver que no substrato cromogneo. Todos os testes que eu passei pra vocs at agora, vocs perceberam que o positivo que tem cor? Ento, at agora, a intensidade da cor que d aqui, e diretamente proporcional concentrao, ou seja, quanto mais anticorpo eu tiver, mais amarelo fica. Esses mtodos, a gente chama de mtodos no competitivos. O que que um mtodo no competitivo? aquele em que a intensidade da cor diretamente proporcional a concentrao. Ento quanto mais anticorpo eu tiver, mais amarelo vai ficar. Por qu? A grande maioria dos mtodos desse tipo. No laboratrio, a maioria dos testes que a gente ver desse tipo. S qeu a gente tem alguns mtodos competitivos. Eu vou dar um exemplo. Aqui, eu tenho um mtodo de competio pra pesquisar antgeno, vamos dar o mesmo exemplo que eu dei l em cima. Vocs querem detectar TSH no soro do paciente. S que ao invs de eu sar este mtodo, vocs escolheram no mercado, por que era mais barato, pq era mais sensvel, por n motivos, comprar este kit. Este kit tem principio diferente. Ele no no competitivo, ele competitivo. Na placa eu tenho um TSH sinttico. A hora que eu pingo o soro do paciente eu no tenho outro TSH? Ai eu adiciono o conjugado, o que que o conjugado?

 um anticorpo, marcado por uma enzima, qeu reage com o TSH. Vocs concordam que quando mais hormnio eu tiver no soro do paciente, mais anticorpo vai se ligar no hormnio do soro, que o que esta livre? A hora que eu lavar o qeu que vai acontecer? Ele vai sair. Vocs concordam que quando mais hormnio eu tiver, mais hormnio fica na placa? E o que que vai acontecer? Menor intensidade da cor. Ento no mtodo competitivo, o antgeno da placa e o antgeno do soro competem com a ligao com o conjugado. Por isso que competitivo. Quanto mais antgeno o soro tiver, ele no vai consumir o conjugado? Menos conjugado vai sobrar pra ligar na placa, menos intensidade de cor. A intensidade da cor inversamente proporcional a concentrao. Por que quanto mais ele ligar, oq eu esta no soro, mais vai embora, menososbra pra ligar, nesse caso, o antgeno da placa, e o antgeno do soro competem pela ligao do anticorpo quanto mais antgeno eu ligo aqui, ou seja, quanto mais TSH eu tiver, mais eu vou consumir o conjugado,menos conjugado vai sobrar pra ligar, ou seja, menor a intensidade da cor. A reao a mesma, peroxido de hidrognio, ento minha pergunta: o positivo o que sempre fica colorido? No, depende do principio do mtodo. 45.00 Vamos fazer de conta que voc no tem TSH no seu soro. Quando voc coloca o conjugado se eu no tenho aqui no soro, ele vai ligar aonde? No que est na placa. A hora que voc lavar ele vai sair? No. Aqui da uma cor forte. Ento quanto maior a cor, menos eu tinha, por isso competitivo. Existe no mercado um sistema, que na verdade, ele pode at dispensar o conjugado, que um sistema qumico, de duas molculas, que chama biotina-avidina. Ento ao invs de eu marcar com uma enzima, eu posso marcar... Ento aqui eu tenho o meu antgeno, aqui eu tenho meu anticorpo, dai o conjugado, ao invs de eu marcar diretamente com a enzima, eu marco com uma molcula qumica que chama biotina. E a enzima, eu marco com uma molcula qumica que chama avidina. Todo lugar que eu tenho biotina avidina assim, ela se liga, igual um polo positivo e outro polo negativo. Qual que o resultado disso? A nica diferena que a empresa que vende esse kit resolveu marcar o conjugado, uma molcula qumica, e a enzima o outro. Ela fez separado. Mas o resultado final vai ser o mesmo. O uso desse tipo de material esta crescendo agora, porque tem mais estabilidade. Se voc no tem o conjugado com a enzima ligado diretamente ele dura mais tempo ento o prazo de validade so mais longos. a nica diferena, mas o principio igual. Tudo igual. Tem o antgeno, que liga o anticorpo, que liga o conjugado se deu cor positivo, no deu cor negativo. S que eles usam uma outra estratgia. Aqui um exemplo de como fica uma reao.. Nem todos os laboratrios fazem esse mtodo, pq... pq a plaquinha, pra vcs terem uma ideia tem 96 poos, toda reao, pra eu validar, eu tenho que ter um controle positivo e um controle negativo. Ento, quantas amostras eu posso fazer ao mesmo tempo? 94. Se a placa tem 96, e eu tenho que fazer um pos e um neg sobra 94. S que ser que todo laboratrio entra 94 pra tirar HIV, por exemplo, todo dia? Ento por exemplo.. Eu no posso demorar muito pra soltar resultado.. Eu no posso soltar resultado daqui 3 meses.. Se entrar 4 amostras, vcs concordam que eu vou 1,2,3,4, um pos e um neg? Todo mundo entendeu? Eu vou gastar aqui 6 poos. Dai amanha entra mais 4.. S que vcs concordam que tem que por o pos e o neg de novo? Ento eu perco dois..sempre... ou seja.. Quanto maior o numero de amostras, mais barato fica o teste, pq eu consigo fazer mais.. pq se eu for fazendo de pouquinho, eu vou gastando o pos e o neg todo dia.. Ento eu vou perdendo este teste.. Ento muitos laboratrios fazem a opo por no fazer, mas mandar pra fora pra outro laboratrio fazer. O ELISA tanto mais barato medida que voc faz um grande volume, pq vc economiza. O que que voc pode fazer.. Eu no vou ficar falando assim.. Esse aqui positivo, esse aqui positivo, e esse aqui, o que ser que ? Positivo ou negativo? Eu no vou ficar fazendo isso neh gente.. Tem que ter algum jeito de eu automatizar isso.. Ento o que que a gente faz.. Isso no cor? Cor, a gente l no espectrofotmetro. Ento eu leio l no espectrofotmetro.. vcs lembram l da curva que eu dei pra vcs.. De sensibilidade/especificidade? A gente define um cut off, fala assim, ABO que for acima, por exemplo, de 0,6 vai ser positivo, e ABO que for abaixo de 0,2 vai ser negativo. O que tiver entre 0,2 e 0,6 vai ser inconclusivo. Ento na verdade, vcs no vo olhar a cor. Isso vai ser lido no espectrofotmetro. Hoje, o ELISA to usado, que as empresas que vendem o kit, se voc comprar um quantidade X de kits por ms, eles colocam um equipamento pra leitura, chama leitor de ELISA, no seu laboratrio, vc no paga por isso, a gente chama isso de regime de comodat (?). Ento os grandes laboratrios, que tem grande rotina, a gente compra o kit, e a empresa, por exemplo, a Roche, todo mundo vende kit de ELISA hoje em dia. A hora que eu compro um kit da Roche, eles vo l e instalam um aparelho pra mim. Ai eu posso me automatizar. A gente pode s fazer leitura automatizada, ou a gente pode automatizar todo o procedimento, onde eu coloco o soro e ele faz tudo sozinho e isso uma grande vantagem. 51.00 Bom, ns temos, nesse exemplo que eu dei pra vocs, nos temos a cor, pq eu uso um cromgeno, um agente cromognio, lembram que eu marquei aqui? Mas, com o passar do tempo, comearam a aparecer diferentes tipos de revelao, o principio da reao o mesmo, mas o que que acontece, ao invs de eu ter um substrato cromogneo, ou seja, uma coisa que da cor, eu posso ter um substrato fluorigeneo, que fluoresce. O que que muda? S aquele dnb l. Ao invs de colocar um dNB, eu coloco uma substancia que eu posso ver no fluorimetro, num comprimento de onda. a nica diferena. Esse mtodo aqui, usando um substrato fluorigeneo, no pegou muito, pq da muita dificuldade de interpretao. O que que hoje esta sendo usado.. um substrato quimioluminescente, ento ao invs de eu ver cor, eu vou medir luz. Ao invs do meu tnb mudar de incolor pra amarelo, se ele for oxidado, ele vai emitir luz. E ai o meu equipamento vai ler a intensidade de luz. Ento qual que a diferena? Um d cor, e outro d luz. Hoje gente, praticamente todos os laboratrios esto substituindo os substratos colorimtricos pelos quimioluminescentes. Quimioluminescencia no outro mtodo, uma forma de leitura de ELISA, diferente. Por que? Eu s troco o substrato cromatogenico pelo substrato quimioluminescente. a nica diferena. Esse inteirinho automatizado. por isso que a gente est tentando substituir. E depois, quando eu tenho qualquer reao de ELISA, vocs percebem que l no pocinho eu tenho um nico eptopo? Todo mundo percebeu que em todos os exemplos que eu dei que l no pocinho tem uma protena s. S que quando eu tenho o agente infeccioso, eu formo anticorpo s contra uma protena desse vrus ou dessa bactria? No, eu tenho uma resposta policlonal, ou seja, eu tenho anticorpo contra tudo aquilo que este agente tem. O que que vai acontecer.. muitas vezes a gente fica como inconclusivo, ou seja, no consegue fechar diagnostico, ento eu tenho que fazer um teste que tem maior o que.. Especificidade ou sensibilidade? Especificidade. O que que vai acontecer.. o que a gente elege o immunoblot. O immunoblot muito parecido com ELISA. Ele uma tira de nitrocelulose, onde eu tenho todas as protenas daquele agente infeccioso. Vou dar um exemplo bem fcil. Quando eu vou fazer ELISA pra HIV, na minha placa tem uma protena, que chama GP120, GP143, depende do tipo de ELISA que eu compro. Aqui eu consigo ter a gp120, a gp 141, a gp 104, todas as protenas do vrus. E no diferente? como se eu tivesse um monde de ELISA junto. Ai vamos fazer de conta que o meu ELISA deu inconclusivo. Deu inconclusivo pq? Provavelmente pq aquele eptopo que eu tenho na placa no ta sendo especifico pro que eu quero. A hora que eu fao a reao de ELISA em cima de uma tira que tem um monte de protena, vocs concordam que esse paciente tiver HIV ele vai ter anticorpo contra essa protena, anticorpo contra essa protena, e assim por diante... Ento o imunoblot ele consegue detectar diferentes anticorpos que aquele paciente produziu contra o mesmo vrus.

E no eu consigo sair dessa questo de ........?? qual que a diferena.. o ELISA pega um anticorpo nico e exclusivamente. Mas nos dois se eu tiver uma ELISA no vai conjugao, agora, o immunoblot no, ele pega a resposta policlonal e aqui, acima de 2 ou 3 bandas ele j consegue positivo. Pq muita coincidncia neh eu ter dois vrus que tem 2, 3 4 protenas iguais. Uma ate pode ser, tipo a p24, p24 uma protena que o HIV tem mas o vrus da herpes tambm tem. Ento se eu fizer um ELISA pro p24, quem tiver herpes vai dar reao cruzada. Agora se eu puser uma dessa no immubobloc no. O ELISA mais sensvel mas immnobloc mais especifico. Pq que eu no uso direto o immunobloc, se ele mais especifico? pq ele menos sensvel. Lembra, aquele que mais especifico menos sensivel. Geralmente os testes de triagem so sensveis, e os testes de confirmao so especficos. Hoje gente, o immunobloc a gente s ta fazendo pra HIV, e pra HTLV, antigamente a gente fazia pra hepatite C, pra um monte de coisa, hoje a gente no faz mais. Esse ltimo aqui, um ensaio imunoenzimtico tambm que aquele teste de gravidez que vocs vem na farmcia. Na verdade, um teste imumocromatogafico. O que que tem naquela fitinha? A gente no enxerga tem e que tem. Nessa regio da fita a gente tem um anticorpo anti BHCG, de coelho, que j ta grudado no substrato de propsito. Na metade da fita a gente tem um anticorpo anti BHCG e nesse outra extremidade, eu que +/- a faixa de controle, a gente tem uma antiimunoglobulina de coelho, ou seja, s vai grudar se tiver anticorpo de coelho. Ai eu coloco isso aqui na urina. Se a mulher tiver o BHCG por cromatografia, isso como se fosse uma tirinha de papel, o hormnio vai subir. Ento esse hormnio subiu. Passou por aqui, no anti BHCG?, no liga no anti-bhcg, entao grudou. Grudou aqui. Dai isso aqui continua subindo. Esse aqui no anti-BHCG? Entao ele vai ligar. Porque o anticorpo liga no antgeno. Ligou, formou a primeira fitinha aqui. Ai, o que que acontece, muitas vezes eu tenho excesso de anticorpo, anticorpo livre, sobra. Esse anticorpo no do tipo M? a hora que eu chego aqui eu no tenho uma antiimunoglobulina tipo M? Ento ela liga diretamente no anticorpo. Aqui eu tenho a tira do controle, e aqui eu tenho a tira teste. Ento o que que acontece, essa faixa, s aparece se tiver o hormnio. Vocs concordam que se no tiver essa bolinha no tem como ligar? Agora, aqui, liga sempre. Por que que liga sempre? Porque um anticorpo, e aqui um anti -anticorpo tipo M. Se no aparecer nenhum, tem que ir l e fazer de novo tah. Por que pensa gente, tem que ter alguma coisa que aparea, mesmo na ausncia do hormnio. Esse o teste de farmcia, na verdade a ordem da tira controle e positivo varia de teste pra teste, de marca pra marca, mas o principio esse, um teste que pinga o hormnio entre dois anticorpos, o controle um anti anticorpo do tipo M, e o anticorpo tipo M no depende da presena de hormnio. Esse o imunocromatrogrfico, e o imunoenzimatico tambm. Bom, com isso... aqui s uma ilustrao.. se vocs virem as duas tiras positivo, se virem as duas tiras negativo, se vocs no verem nada, o reagente desestabilizou, guardou errado, est invalido, tem que repetir.. sempre assim gente.. quando eu fao um teste de laboratrio eu sempre vou ler os controles. O controle positivo tem que ser positivo e o controle negativo tem que ser negativo. S depois que eu posso validar o teste. Geralmente o controle padronizado, a concentrao, mas o hormnio da urina no n.. Tem mulher que vai ter mais e tem mulher que vai ter menos. O que pode acontecer que a mulher est gravida h pouco tempo e tem uma quantidade pequena, dai o teste pode no ser sensvel pra detectar. Ai voc tem um falso negativo. Mas isso pq ela tem pouco ainda. 01h03min00seg Gente, ns vimos todos os testes imunolgicos que a gente tem por ai. Tudo, tudo, tudo. O que que falta eu dar pra vcs agora.. s o fluxo das doenas.. Ento o que que a gente vai ver.. Eu no vou mais falar em teste, pq teste, o princpio vcs j viram. Agora ns vamos estudar os fluxogramas. Ento presta bastante ateno, pq a aula que eu dei h 2 anos atrs j diferente dessa pq p fluxograma mudou o ano passado. Entao vcs tem que ficar espertos, pq o ministrio muda os protocolos que a gente tem que seguir em cada caso. Infeco pelo HIV. Quando eu vou fazer diagnostico de infeco pelo HIV. Pelo cronograma gente, eu tinha que dar tudo de diagnstico, depois tudo de banco de sangue, eu prefiro dar junto. Vou falar de HIV, j falo como que pra diagnstico e com oque pra banco de sangue, pra no ter que repetir tudo de novo. Todo teste de diagnstico, de triagem, ele tem que ser mais sensvel do que especifico. Todo teste confirmatrio, ele tem que ser mais especifico do que sensvel. Ento os testes de triagem tem sensibilidade, enquanto os testes confirmatrios tem especificidade. Pra laudar, ou seja, no Brasil ns temos uma legislao, eu s posso emitir laudo de kit registrado na ANVISA. Ento quando vcs forem comprar, vcs s vo comprar kit que tem registro na ANVISA, se no vocs no podem soltar laudo. Vocs podem ate usar pra fazer pesquisa, pra fazer o que vocs quiserem, mas pra laudar no pode. Existe uma portaria que rege diagnstico do HIV, que a portaria 151 de 2010, essa portaria revogou a portaria anterior, que era de 2003. Ento hoje, todos os laboratrios que vo fazer diagnstico, eles tem que triar a mostra, fazer a confirmao, sempre que necessrio, e por ultimo, se for o caso, tem que fazer o immunoblot. Eu j vou destrinchar isso que eu falei pra voces. At agora, o que que eu preciso que vocs saibam, triagem um teste sensvel, confirmatrio um teste especifico. Eu posso usar um teste confirmatrio pra fazer triagem? No. Pq no? Pq ele no sensvel. Bom, o que que fala na portaria.. esse ai o fluxograma, mas ns no vamos ficar decorando fluxograma. Ns vamos fazer assim .. Pra diagnstico.. Todo mundo entendeu? O que eu to falando de diagnstico, no vale pra doador de sangue. Chega a amostra, pra diagnstico do HIV. Qual que o fluxo? O primeiro teste o enzimaimunoensaio. o ensaio imunoenzimatico, pode ser um ELISA, por exemplo. Ento chegou a amostra, eu fao um ELISA. Se der negativo, eu solto esse laudo. Se der positivo, eu no posso liberar. Se der positivo eu tenho que fazer um segundo teste que no pode ter o mesmo principio, o que que eu quero dizer, no pode ser enzimaimunoensaio. Entao aqui, a gente pode usar imunofluorescencia indireta ou hemaglutinacao. Entao se o ELISA da positivo, eu no posso soltar, eu tenho que confirmar, tah. Ai qual que so as possibilidades? Quando eu fao o segundo teste. Positivo. Se der positivo, ele j no estava positivo? Ou qual que o outro resultado? Negativo, ai voc fica com um positivo e um negativo. O que que voc solta? Nenhum. Ai voc vai fazer o immunobloc, e aqui que voc vai laudar. Entao assim, o ELISA, s fecha diagnstico se for negativo. Se for positivo, pela portaria voces tem que fazer um segundo teste, que tem que ter principio diferente, se confirmar voces soltam, se for discrepante ai voc vai pro immunobloc. Dai aqui j entra o indeterminado, mas a gente sabe que se der indeterminado aqui, e aqui no adianta fazer o westernbloc que vai dar indeterminado tambm. Entao , pra HIV, vc faz um ELISA, na amostra, se der negativo voc solta, amostra no reagente para anti-HIV. Se der positivo ou indeterminado voc tem que confirmar. Comq eu teste voc confirma? Voc pode usar qualquer coisa, menos enzimaimunoensaio. Se bater o resultado, esse positivo e esse positivo, voc solta. Se no bater, voc vai fazer o immunobloc. Esse o fluxo correto que a gente tem que seguir. Ai voces podem flar pra mim assim.. , se aqui deu negativo, ele pode estar na janela. Pode. Mas dai o medico quem vai ter que pedir daqui 30 dias um novo exame.

Gente, pra doador, no a mesma portaria que a gente segue. To falando pra voces, hoje vale a portaria 153, mas vai mudar, pq j tem uma consulta publica pra mudar essa portaria. Entao vcs fiquem espertos pq pode ser que at o final do ano mude. Como que a gente faz hoje? Pra doador agora. Colheu a bolsa. Qual que a grande diferena. Quando eu vou fazer diagnostico, na amostra eu fao uma ELISA, dependendo do resultado dele que eu sigo o fluxo, no assim? Quando doador, a gente faz ao mesmo tempo, dois ELISAS simultneos, por metodos diferentes. Entao eu compro l um EILSA comercializado pela ____ e outro ELISA comercializado pela Roche, e eu fao os dois testes na mesma amostra. O que que vai acontecer? Se os dois testes derem no reagentes, derem negativos, eu libero a bolsa. Se os dois testes derem positivo, eu bloqueio a bolsa, pra que? Pra no dar pra ningum. Dai eu vou repetir. No doador, voc s vai liberar a bolsa pra uso se os dois ELISA derem negativo. (...)Se tiver na janela no pega. (...) Se um dos dois der positivo ou indeterminado vc bloqueia, vc jah vai la no computador e diz no pra usar essa bolsa. Pq na verdade gente, eu no sei se vcs tem essa ideia, qdo vcs tiverem hemato vcs vao ter essa ideia. A gente no transfunde sangue total, no o sangue que a gente tira de vcs e transfunde, a gente faz transfuso s de de plasma, a egente faz transfuso s de plaquetas, entendeu? No o sangue total que a gente transfunde. Se discordou, ou se deu reagente em um aqui, vc jah bloqueou. Voc repete o teste em duplicata. Entao voc faz de novo o teste em duplicata, duas vezes cada um. Dai se eles concordarem, os dois testes derem negativo, voc pega e libera aa bolsa. Dai se os dois derem positivo, ou indeterminado, voc bloqueia e convoca o doador, pq o banco de sangue no para a hra que eu bloqueio a bolsa. (...) A hora que eu bloqueio a bolsa e falo assim eu no posso usar a bolsa desse paciente, desse doador, pq ele deu positivo no teste de HIV, eu no posso parar ai. Eu tenho que chamar essa pessoa pra ir triar. Pq que eu tenho que fazer isso? Voces lembram que eu falei que em banco de sangue a gente usa testes de alta sensibilidade? Ou seja, da muito falso positivo. Entao eu tenho que chamar essa pessoa, encaminhar ela pra ambulatrio, e l ela vai fazer um teste mais especifico, pra que, pra ver se esse positivo que eu peguei era positivo mesmo, e ai vai ser encaminhado pra servio especializado, ou se um falso positivo. Ento tudo isso que eu falei tah ai nesses fluxogramas. 01h16min30seg Existe um outro vrus, que parecido com o HIV, que chama HPLV, na verdade muito raro, um vrus que esta associado a linfoma. muito raro ele entrar pra diagnostico, mas ele faz parte da triagem do doador de sangue. Entao o que que ns vamos fazer.A gente vai fazer um teste de triagem, geralmente ELISA, Por que gente? Porque quem faz ELISA pode implantar vrios testes no mesmo tipo porque o equipamento o mesmo. S vai mudar o kit. E ai o que que vai acontecer? No reagente eu libero. Reagente ou indeterminado eu vou repetir em duplicata. Se repetir em duplicata e deu no reagente nos dois, eu vou soltar. Se deu reagente ou indeterminado vai pro immunoblot. o segundo caso que eu fao immunoblot. Hoje a gente s faz immunoblot pra HIV e pra HPL. Onde vcs vao ver bastante de HPL, em triagem de doador, pq faz parte do fluxograma. Pra diagnostico mesmo muito pouco. 1h19min Hepatites Virais Hepatite um termo muito genrico. Hepatite um termo que a gente designa qualquer inflamao que eu tiver no fgado. Por exemplo, eu posso ter hepatite alcoolica, quem bebe muito pode ter fibrose no fgado e ter hepatite. Eu posso ter hepatite medicamentosa. Quem toma muito medicamento pode levar a fibrose heptica e hepatite. E eu tenho as hepatites induzidas por vrus. O vrus vai l, parasita o fgado causa um quadro de fibrose que pode evouluir pra degradao do fgado. Tem um monte de heptite, no s mais at a E, tem a F, G, tem um monte. O que que interessa pra gente em termo de doena infecciosa? a hepatite B e C. por que? Hepatite A e Hepatite E, por transmisso oral. Ento pega quando a gente come alimento qe esta contaminado, alguma coisa nesse sentido. muito frequente em criana, pq criana tem habito de higiene precria. Hoje, o problema de sade publica a hepatite B e C. porque B e C transmitida via parenteral, por sangue, por relao, por compontens.. por contato com fluidos biolgicos. Pra Hep B a gente tem vacina, embora a gente saiba que a vacina no 100% eficaz. Pra hep C a gente no tem nada pra fazer em termo de profilaxia. Ento por exemplo, se vcs forem trabalhar num laboratrio, ou num hospital, e se por um acaso vcs sofrerem um acidente de trabalho, por exemplo, eu to l colhendo sangue e espirra sange no meu olho. Vcs j viram algum colhendo sangue de culos? Ento, a mucosa ocular e oral so o jeito mais fcil de pegar qualquer coisa pq ela altamente vascularizada, caiu ali ta no sangue. Ento o que que acontece. To la colhendo, tive um acidente e espirrou sangue no meu olho. O que que eu vou fazer.. primeira coisa que eu vou fazer.. eu, se eu sou profissional da sade eu sou vacinada pra Hep B. no tem nenhum profissional de sade hoje que no vacinado. Certo? Todo mundo tem que ser vacinado. Pra Hep B tem vacina. Pra HIV, eu vou l, passo pela Infecto, tem um protocolo pra seguir, e eles vao me dar oq eu a gente chama de profilaxia antirretroviral. Ento eu vou tomar o medicamento. E pra Hep C? que que eu vou fazer? Esperar. Pra HEp C, eu vou chegar e vou acompanhar, vou fazer exames peridicos, e a nica chance que vc pegue antes. Pq o grande risco da Hep C hoje , no tem profilaxia, dependendo do tipo de vrus a gente s tem 50% de eficincia teraputica, dependendo do tipode vrus, tem vrus que muito eficiente a teraputica, e ela assintomtica, ouseja, tem um monte de gente que tem e no sabe que tem. E pra vcs terem uma ideia, o vrus da Hepatite vive at 7 dias no ambiente. O vrus da aids morre em horas. Ento a hora que sofre um acidente, a gente ve pq chega l no laboratrio, o povo fica tudo desesperado por causa do HIV e a chance de vc pegar HIV muito menor do que vc pegar hepatite. Ento hoje a hepatite considerada um problema de sade publica, a gente ga vendo, a gente ta em regio endmica. Ento, no laboratrio eu vou ter que fazer triagem pra hepatite B e Hepatite C. na verdade, o diagnostico sorolgico pra hepatite B um dos mais complexos que a gente tem hoje. Por que? No um anticorpo que eu pesquiso, mas sim um conjunto de marcadores. Entoimaginem l. Eu tenho um vrus, que entrou no meu organismo. Esse vrus, no vai la pro hepatcito, l no fgado? S que at ele chegar la tudo, a minha clula de defesa no vai querer destruir ele? Ento logo que a gente se infecta eu comeo a ter partcula viral circulante. Eu comeo a ter pedao de vrus circulante. Ento o primeiro marcador que a gente consegue identificar o AgHBs, que o antgeno de superfcie. Por que? Porque a hora que eu peguei o vrus eu j tenho partcula do vrus circulante. Ai aparece antes que o anticorpo. Com o passar do tempo, eu vou ter os anticorpos. Anti-HBc, aqui o anticorpo contra o antgeno do core, que aqui mais interno. Ento o antgeno de superfcie, o nome j diz, fica la fora, o antgeno do core, esse aqui dentro. A gente no consegue detectar o antgeno do core, mas o anticorpo formado contra ele. Esse anticorpo ele pode ser da classe IgM ou da classe IgG, depende da fase da doena. Tudo bem at aqui? Ai o que que vai acontecer.. com o tempo, eu vou evouluir pra cura, no vou? Ento, o meu sistema imune vai ficando melhor, e ele vai produzindo um anticorpo contra esse antgeno, que o Anti-HBs. Ento que que eu posso fazerna hora de fazer diagnstico... pra fazer diagnstico eu vou fazer todos. Pra banco de sangue eu vou fazer s AgHBs e anti-HBc. Pra diagnostico eu tenho que fazer todos. Pq? Pra diagnostico no adianta eu dizer se tem ou no tem, pq eu posso dizer em que fase que t, se esta evolindo pra cura ou se no ta... vou dar um exemplo. O individuo que tem AgHBs + (positivo) e todos os outros negativos, tem a

doena? Tem. Eu posso dizer que tem a doena e ta na fase inicial. Pq nenhum anticorpo detectvel. A medida que esse individuo progride, ele no vai ficando assim? Ele tem o antgeno, ai ele tem o anticorpo na fase IgM, no em fase aguda de doena? Se esse individuo progredir um pouquinho mais, ele comea a ter o anticorpo IgG. E ta transitando, da fase aguda pra fase crnica. Com o tempo vai acontecer isso... eu sei que fase crnica pq no tem mais o IgM. Com o tempo espera-se que acontea isso.. desaparea o antgeno e aparea o anticorpo que marca o ......... ento o individuo que teve a doena e ta curado, ele s vai ter anti-HBc IgG e anti-HBs. Enquanto ele no tiver o anti_HBs positivo, eu no posso dizer que ele curou. E se esse individuo aqui, continuar se dando o antgeno positivo, significa que no ta evoluindo rpa cura. Uma hepatite B, evoluindo pra cura, o AgHBs tem que desaparecer. Ento cada marcador indica uma coisa. Agora, j no tem vacina? Sera que a vacina igual? No gente. Eu tenho que ter um jeito de diferenciar o paciente que teve hepatite e se curou, do paiente que s tomou vacina. Um paciente que s tomou a vacina, ele s tem Anti-HBs. O resto tudo negativo. Pq a vacina feita s com o antgeno de superfcie. Ento qual que a diferena do individuo que imunizado por vacina e daquele individuo que imunizado por doena? Aquele que teve a doena e se curou, ele tem o anti-HBc IgG. Aquele que s foi vacinado, ele no tem esse marcador. Ele s vai ter o anticorpo da vacina. Existe um outro antgeno que eu posso pesquisar, mas eu no pesquiso pra fazer diagnostico. Pra fazer diagnostico, eu fechei, eu procurei esses marcadores, dei o resultado e fechei diagnostico. S que ai, por medico, ele vai comear a tratar, se o paciente for positivo. Ele trata, trata, trata, trata... como que o medico vai saber se o tratamento esta fazendo efeito. Na verdade, ele vai pedir um sorolgico com pesquisa de AgHBe, que um outro antgeno. Enquanto o AgHBe for positivo, significa replicao viral. Ento eu posso dizer pra vcs assim, se o AgHBe for positivo o vrus ta em multiplicao, se eu fizer o teste e o AgHBe der negativo, o que que indica? Que o vrus no esta se multiplicando. Ou seja, o tratamento esta sendo efetivo. Ento na verdade, esse marcador aqui , ele no feito pra diagnostico. Ele s feito pra acompanhar tratamento. Ele so marca atividade replicativa do vrus. Se o AgHBe for positivo, o vrus ta se replicando. A gente nunca faz AgHbe pra diagnostico, so deposi. Pra doador de sangueeu j falei ne, ele faz AgHBs e Anti-HBc Hepatite C mais fcil. Pra hep C, na verdade, a gente s tem um ELISA, a gente pesquisa anti_HCV. Ento, uma amostra suspeita pra hep C, que que o medico vai fazer? Ele vai solicitar um sorolgico, que nti-HCV total. Pra Hep C eu no vou pesquisar IgM e IgG separado, eu vou pesquisar total. Se der negativo, eu vou soltar esse resultado, mas o medico tem que ficar esperto pq a janela pra HepC muito grande. Ento depois de algum tempo ele tem que colher de novo e repetir o teste. Mas se der negativo a gente libera o resultado e depois o medico colhe nova amostra pq a janela imunolgica muito grande.(janela de 60 a 70 dias). Se der positivo, eu vou liberar o laudo positivo, s que o que que acontece...quando a gente libera aqui, positivo, esse positivo pode ser verdadeiro positivo, oui seja o paciente tem mesmo o vrus, e ai tem que tratar. Ou o paciente no tem o vrus e esse positivo aqui foi reao cruzada. Isso gente, o medico no vai saber nunca. Ele vai ter que ficar repetindo o exame. S que toda vez que der positivo, o que que a gente faz.. a gente encaminha pra servio especializado. O que que eles vao fazer.. ser positivo, no significa necessariamente que vai tratar. Eu s vou tratar o paciente que tiver HepC se esse vrus estiver em atividade. Pq se o vrus estiver quietinho l no hpatocito eu no vou tratar meu paciente, pq ele no esta em atividade. Ento a gente manda pra servio especializado, o que que eles vao fazer.. eles vao procurar se tem material gentico do vrus circulante. Pq o vrus no parasita o hepatcito? Se eu achar vrus no sangue, quer dizer que ele est se multiplicando... e se eu no achar vrus no sangue, quer dizer queele esta la quietinho no hepatcito. AgHBe pra hepatite B, Hepatite C no tem isso!! Ai o que que vai acontecer.. se a gente achar vrus circulante no plasma, ele positivo, ai vai tratar.. se a gente no achar vrus circulante no plasma, ele negativo, ai eu no vou tratar. S que vcs entendem que esse negativo aqui , no plasma, no quer dizer que no tenha a doena, pode no ter vrus no plasma e ele estar l no hepatcito. Ento esse paciente no vai poder doar sangue nunca. E esse positivo aqui eu no vou saber nunca se reao cruzada ou se positivo mesmo. Ento a hepatite C tem todos esses pequenos problemas. Alm disso, no nem da minha disciplina mas s por uma curiosidade, depois que a gente ve e fala que o vrus ta em atividade replicativa, o laboratrio ainda tem que detectar qual tipo de vrus que , pq no Brasil, de acordo com o diferente tipo de vrus, o tratamento diferente, ento antes do medico tratar ele tem que saber que tipo de vrus que .