Metabolismo de Carboidratos: Ciclo de Krebs

O metabolismo dividido em catabolismo e anabolismo. O catabolismo so as reaes de degradao de macromolculas a seus precursores e o anabolismo so as reaes de sntese dessas macromolculas a partir dos seus precursores. Geralmente, no catabolismo h produo de ATP e das coenzimas reduzidas (NADH + H+ e FADH2), ou seja, produo de energia qumica. Essa energia qumica produzida pode tanto ser utilizada para a manuteno do metabolismo quanto para a produo de novas macromolculas. Geralmente, as vias de degradao tanto de aminocidos quanto de cidos graxos e glicose geram uma molcula comum: a acetil-coenzima A (acetil-CoA). A acetil-CoA pode ser utilizada em vias de sntese de novas macromolculas ou pode ser degradada no Ciclo de Krebs, dependendo das necessidades metablicas do organismo. Durante o Ciclo de Krebs sero geradas coenzimas reduzidas, que doaro seus eltrons para a cadeia de transporte de eltrons (oxidao fosforilativa), que sintetizar o ATP. Assim, a degradao das macromolculas que formaro acetil-CoA formar energia. Complexo enzimtico piruvato-desidrogenase: O piruvato formado atravs das reaes de quebra da glicose no citossol: GLICOSE (6C) 2 PIRUVATO (3C) O piruvato pode ser transformado em acetil-CoA. Essa transformao mediada por um complexo enzimtico chamado de piruvato-desidrogenase, presente na mitocndria. Como a gliclise, que formar piruvato, acontece no citossol, o piruvato dever ser transportado para dentro da mitocndria para a formao de acetilCoA. Esse transporte feito atravs do transportador piruvato-transportase. A piruvato-transportase faz um co-transporte de piruvato e de prtons H +. Assim, o piruvato s entra na mitocndria se houver prtons H+. Dentro da mitocndria, o piruvato pode enfim ser transformado em acetil-CoA. Essa converso acontece atravs de uma descarboxilao (sada de CO 2) e a formao de uma coenzima reduzida NADH + H+: PIRUVATO (3C) + CoA ACETIL-CoA (2C) + CO2 A sada de CO2 acontece porque o piruvato possui trs carbonos e o acetilCoA s possui dois carbonos. O complexo enzimtico piruvato-desidrogenase composto por trs enzimas que so responsveis pela converso do piruvato em acetil-CoA, sendo elas E1, E2 e E3. A enzima E1 a piruvato-desidrogenase propriamente dita, que d nome ao complexo. A E2 a diidro-lipoamidaacetiltransferase. A E3 a diidro-lipoamida-desidrogenase. A reao catalisada pelo complexo enzimtico piruvato-desidrogenase necessita, tambm, de cinco coenzimas: tiamina-pirofosfato, cido lipico, coenzima A, FAD e NAD+. A reao acontece em cinco etapas: 1- A primeira etapa da reao catalisada pela E 1 (piruvato desidrogenase), que utiliza o piruvato como substrato e a tiamina-pirofosfato (TPP) como coenzima. A E1 descarboxila o piruvato, gerando o intermedirio hidroxietil-tiamida-pirofosfato (HETPP), baseado na interao da tiaminapirofosfato e o piruvato descarboxilado.

2- A segunda etapa da reao catalisada pela E2 (diidro-lipoamidaacetiltransferase), que vai retirar o grupo acetil que se ligou ao TPP e transferi-lo. Como o nome j diz, a E 2 possui ligada covalentemente sua estrutura uma lipoamida. Quando a enzima percebe a presena do intermedirio da primeira etapa da reao (HETPP), ocorre uma reduo na lipoamida, gerando uma diidro-lipoamida, agora capaz de receber o acetil ligado ao TPP, formando um intermedirio acetil-diidro-lipoamida. 3- Ligada, enfim, ao grupo acetil, a E 2 pode transferi-lo para a coenzima A e gerar o produto da terceira etapa da reao: acetil-CoA. O subproduto da reao a diidro-lipoamida ligada E2. 4- A quarta etapa da reao catalisada pela E3 (diidro-lipoamidadesidrogenase). A E3 uma flavoprotena, ou seja, est ligada coenzima FAD. O FAD est envolvido em reaes de oxirreduo e est ligado covalentemente E3. A E3 reduz o FAD ligado a ela, oxidando a diidrolipoamida, formando novamente a E2 original, com seu complexo lipoamida com capacidade oxidativa. 5- Os eltrons recebidos pelo FAD so transferidos para o NAD +, gerando novamente a E3 original, com seu FAD capaz de oxidar a E2. Primeiramente, vale ressaltar a diferena entre o FAD e o NAD: ambos so coenzimas capazes de receber e transferir eltrons, porm o FAD liga-se covalentemente enzima (formando flavoprotenas) e o NAD no se liga s enzimas. Dessa forma, o NADH + H+ (estado reduzido do NAD) pode ser descrito como subproduto da reao, enquanto o FADH2 (estado reduzido do FAD) no o , pois este faz parte da enzima. Enfim, analisando novamente as reaes do complexo enzimtico piruvatodesidrogenase, pode-se perceber que a E1 e a E2 foram as responsveis pela formao do acetil-CoA e a E3 foi a responsvel pela recuperao do estado natural da lipoamida da E2, para que a E2 seja capaz de realizar novamente sua funo. Ciclo de Krebs (Ciclo do cido Ctrico) O ciclo de Krebs composto por oito reaes enzimticas, que vo oxidar o acetil-CoA. Ele recebe esse nome, pois, diferentemente de outras vias metablicas em que o substrato somente precursor do produto, de forma linear, no Ciclo de Krebs, por exemplo, o produto da ltima reao enzimtica utilizado, novamente, na primeira reao, formando um ciclo. As oito reaes do Ciclo de Krebs so catalisadas por oito enzimas. Durante cada volta do Ciclo de Krebs (entrada de um novo acetilCoA) so produzidas 3 coenzimas reduzidas (NADH + H +), 1 FADH2 e 1 molcula de GTP, que pode ser convertida em ATP. As reaes so as seguintes: 1- Condensao do oxalacetato (4C) com o acetil-CoA (2C). Essa reao catalisada pela citrato-sintase, formando o citrato (6C). Durante a reao, dois aminocidos do stio ativo da citrato-sintase se destacam: o aspartato e a histidina. Eles interagem com os substratos, primeiramente com o acetil-CoA e, depois, com o oxalacetato, catalisando a formao do citrato. Durante a reao formado um intermedirio, o citril-CoA, que perde sua coenzima A e liberado como citrato.

2- Catalisada por uma enzima que liga Fe 2+, a aconitase. A aconitase vai converter o citrato em isocitrato, primeiramente eliminando uma molcula de H2O e formando o intermedirio cis-aconitato e, posteriormente, incorporando uma molcula de H2O, formando finalmente o isocitrato. A diferena do citrato e do isocitrato a posio do grupamento hidroxila (OH): essa hidroxila ligada, no citrato, no carbono 3 e, no isocitrato, no carbono 2. A converso do citrato a isocitrato feita porque a enzima que vai catalisar a prxima etapa do ciclo (isocitrato-desidrogenase) no capaz de reconhecer o citrato, somente o isocitrato. 3- Catalisada pela isocitrato-desidrogenase. Essa enzima vai oxidar o isocitrato, formando um intermedirio oxalsuccinato e, aps descarboxilao (sada de CO2) desse intermedirio, o produto final -cetoglutarato. Para oxidar o isocitrato, a isocitratodesidrogenase vai reduzir um NAD+ a NADH + H+. 4- Catalisada por um complexo enzimtico chamado de -ceto-glutaratodesidrogenase. Esse complexo enzimtico tambm possui trs enzimas: a) E1 -ceto-glutarato-desidrogenase. b) E2 succinil-transferase c) E3 diidro-lipoamida-desidrogenase Durante essa reao, forma-se outra molcula de NADH + H + e liberada uma molcula de CO2. O produto formado o succinil-CoA. 5- Catalisada pela succinil-CoA-sintetase. Essa enzima vai utilizar o succinilCoA para formao do succinato. Durante a reao, a succinil-CoAsintetase vai formar uma molcula de GTP. A enzima age atravs da oxidao temporria de uma histidina do seu stio ativo. A fosforilao acontece porque, para que a coenzima A saia do succinato, este precisar ganhar um fosfato, formando um intermedirio chamado succinil-fosfato. O succinil-fosfato ser, ento, atacado pela histidina da succinil-CoA-sintetase que vai se fosforilar, formando enfim o succinato. O fosfato ganho pela histidina da succinil-CoA-sintetase ser passado para um GDP, formando assim um GTP, que pode ser facilmente transformado em ATP. Essa reao chamada de fosforilao em nvel de substrato. 6- Catalisada pela succinato-desidrogenase. Essa enzima fica na membrana interna da mitocndria, enquanto todas as demais enzimas do Ciclo de Krebs encontram-se na matriz mitocondrial. A succinato-desidrogenase uma flavoprotena, ou seja, quando ela for oxidar algum, o FAD ligado a ela ser reduzido a FADH 2. A reao catalisada pela succinatodesidrogenase a oxidao do succinato a fumarato. Atravs de seu FADH2 reduzido, a succinato-desidrogenase uma enzima que doa eltrons para a cadeia respiratria (fosforilao oxidativa). Essa doao de eltrons mediada por um transportador de eltrons de natureza lipdica, a ubiquinona. O malonato, por ser muito parecido com o succinato (anlogo estrutural), atua como inibidor competitivo da succinato-desidrogenase. 7- A stima enzima do Ciclo de Krebs a fumarase. Ela vai converter o fumarato em malato. Essa reao acontece quando a fumarase adiciona uma molcula de H2O ao fumarato, rompendo uma dupla ligao C=C deste fumarato, formando o malato.

8- A ltima reao a oxidao do malato a oxalacetato. Durante a oxidao do malato a oxalacetato, ser gerada a terceira molcula de NADH + H+. Esse oxalacetato gerado ser utilizado pela primeira reao, em que ele ser condensado pela citrato-sintase ao acetil-CoA, para formar o citrato, gerando todo o ciclo novamente. O Ciclo de Krebs uma via anfiblica porque seus intermedirios podem servir tanto ao catabolismo quanto ao anabolismo. Dessa forma, a degradao de glicose, cidos graxos e alguns aminocidos podem gerar acetil-CoA, que ser usado no Ciclo de Krebs. Porm, os intermedirios desse ciclo podem, tambm, formar as molculas precursoras do acetil-CoA. Por exemplo: o oxalacetato pode entrar na sntese de glicose, o citrato pode ajudar na sntese de cidos graxos e o -ceto-glutarato pode ser convertido em glutamato, servindo de precursor para outros aminocidos. A velocidade do Ciclo de Krebs pode ser regulada atravs da concentrao de intermedirios. Como o Ciclo de Krebs produtor de NADH + H+ e FADH2, existem reaes chamadas de reaes anaplerticas que acontecem para que o Ciclo de Krebs no pare completamente. Por exemplo: em certas condies, pode-se desviar muito oxalacetato do Ciclo de Krebs para a gliconeognese atravs de uma outra enzima, a piruvato-carboxilase, que vai carboxilar o piruvato gerando oxalacetato. Assim, ter-se- mais oxalacetato que poder ser usado tanto no Ciclo de Krebs quanto na gliconeognese. Em algumas bactrias e plantas esse oxalacetato gerado pela enzima fosfoenol-piruvato-carboxilase, que vai converter o fosfoenol-piruvato em oxalacetato. As reaes de gerao de oxalacetato tm como objetivo impedir que os nveis de oxalacetato, substrato da primeira reao do ciclo, caiam muito e o Ciclo de Krebs pare. Apesar de o oxalacetato ser um precursor da sntese da glicose, o acetil-CoA no o , mesmo eles participando da mesma reao de formao de citrato. Isso pode ser percebido pela degradao de cidos graxos: caso o acetil-CoA fosse um possvel precursor da sntese de glicose, a degradao de cidos graxos formaria glicose, mas experimentalmente sabe-se que isso no acontece. A degradao dos cidos graxos forma apenas o acetil-CoA, incapaz de se transformar em glicose. Regulao do complexo enzimtico Piruvato-Desidrogenase O complexo da piruvato desidrogenase fortemente inibido por ATP, acetilCoA e NADH, os produtos das reaes catalisadas por esse complexo. Tanto a E 2 quanto a E3 so reguladas alostericamente. A E2 tem como modulador alostrico positivo a coenzima A e a E3 tem como modulador alostrico positivo o NAD +. Isso acontece porque a E2 transfere o acetil para a coenzima A. Assim, conforme a concentrao de coenzima A aumenta, a velocidade da reao aumentada. A E 3 transfere seus eltrons ganhos atravs da oxidao da diidro-lipoamida e reduo do seu FAD em FADH2 para o complexo NAD+. Dessa forma, quanto maior a concentrao de NAD+, mais rpida ser a reao. Analogamente, os moduladores alostricos negativos da E2 e da E3 so, respectivamente, o acetil-CoA e o NADH + H+. Ambos os moduladores negativos so produtos das reaes catalisadas pelas enzimas. Dessa forma, os produtos, quando em grande quantidade, sinalizam que a converso de substrato em mais produto desnecessria.

A E1 (piruvato-desidrogenase) modulada por uma modificao covalente em sua estrutura: a fosforilao. Quando a E1 est desfosforilada, ela encontra-se ativa. Quando ela est fosforilada, encontra-se inativa. A piruvato-desidrogenase-quinase vai fosforilar a E1. A piruvato-desidrogenase-fosfatase vai desfosforilar a E 1. A quinase e a fosfatase fosforilam e desfosforilam a E 1 respondendo a certas modificaes alostricas: QUINASE a quinase vai fosforilar E 1 quando houver NADH + H+ e acetil-CoA no meio, ou seja, quando o produto HETPP for desnecessrio, tornando a E 1 inativa. O ADP e o piruvato vo atuar negativamente na quinase, tornando-a inativa e fazendo com que no haja fosforilao da E1, tornando-a ativa. O piruvato vai modular positivamente a E1 porque indica alta taxa de gliclise e conseqente necessidade de acetil-CoA. O ADP modula positivamente E1 porque h escassez de ATP e E1 far com que haja acetil-CoA suficiente para formao de mais ATP. Esquematizando: NADH + H+ - Quinase - Fosforilao de E1 - Atividade de E1 ADP e Piruvato - Quinase - Fosforilao de E1 - Atividade de E1 FOSFATASE a fosfatase vai desfosforilar E1-Pi (inativa) quando a atividade dessa enzima for novamente necessria. A fosfatase geralmente ativa na presena de Ca2+. O Ca2+ modula positivamente a fosfatase e, conseqentemente, a E1, pois a alta concentrao de Ca2+ indica alta taxa de contrao muscular. Para essa contrao muscular acontecer necessrio, alm do Ca2+, ATP. Dessa forma, a E1 ser modulada positivamente para que produza o ATP necessrio. Esquematizando: Ca2+ - Fosfatase - Desfosforilao de E1-Pi - Atividade de E1 A regulao do complexo piruvato desidrogenase afeta o Ciclo de Krebs porque altera as taxas de formao de acetil-CoA, produto essencial para o ciclo. Regulao das enzimas do Ciclo de Krebs So trs as enzimas reguladas no Ciclo de Krebs: a isocitrato-desidrogenase, a citrato-sintase e a -ceto-glutarato-desidrogenase. A isocitrato-desidrogenase sofre apenas regulao alostrica. Os moduladores alostricos positivos dessa enzima so o FAD+ e o ADP. O modulador alostrico negativo o NADH + H+. Em bactrias, a isocitrato-desidrogenase , tambm, regulada por modificaes covalentes, sendo inativada por fosforilao. A citrato-sintase e a -ceto-glutarato-desidrogenase sofrem regulao alostrica. O modulador alostrico positivo da citrato-sintase o ADP e seus moduladores negativos so o NADH + H+, o succinil-CoA, o citrato (produto da enzima) e o ATP. A -ceto-glutarato-desidrogenase tem como modulador alostrico positivo o Ca2+ e como modulador alostrico negativo o succinil-CoA e o NADH + H+. O succinil-CoA modulador alostrico negativo da citrato-sintase mesmo sem jamais ser utilizado pela citrato-sintase. Ele inibe a citrato-sintase atravs de meios de feedback negativo para que a velocidade do Ciclo de Krebs diminua. Em algumas plantas, pode acontecer o ciclo do bioxalato. Este ciclo tambm acontece a partir do acetil-CoA e possui algumas enzimas em comum com o Ciclo de Krebs, produzindo, no final do ciclo, o oxalacetato. No ciclo do bioxalato, h duas enzimas que no existem no Ciclo de Krebs: a isocitrato-liase e a malato-sintase. A isocitrato-liase degrada o isocitrato em succinato e bioxalato. O bioxalato gera o malato atravs da malato-sintase. O acetil-CoA dessas plantas, ao contrrio do acetilCoA humano, gliconeognico.