EL DESCUBRIMIENTO DE LA INVERSA TRANSCRIPTASA

A travs de una serie de experimentos llevados a cabo en los aos 1940, 1950 y 1960, los principios por los cuales se transfiere la informacin gentica en los sistemas biolgicos fueron demostraros. ADN es el cdigo, que luego era transcrito en un tipo de ARN (ARNm), luego este lleva el mensaje que se traduce en protenas. Estos experimentos forman un paradigma tan firmemente creble que era conocido como el "dogma central". Sin embargo, en 1970, el trabajo sobre los virus tumorales de ARN mostraron que tal vez el dogma central no explica todo el cuadro.

Fondo

En 1961, Howard Temin comenz a reunir pruebas de que el dogma central era inconsistente. Temin, que dedic su vida al estudio de los virus tumorales de ARN (en la actualidad conocido como retrovirus), centr su trabajo en los principios de Rous, El sarcoma virus (RSV). Este virus ARN es capaz de transformar clulas normales en clulas cancerosas. Temin senti que la mejor explicacin para el comportamiento del virus era un modelo mediante el cual el virus permanece en un estado latente, o proviral, estado en la clula. Sin embargo, puesto que el ARN es muy inestable, Temin propuso que el genoma de ARN del RSV se convierte en un provirus de ADN. Con este modelo en mente, se propuso probar su hiptesis. l acumul los datos que muestran que RSV es sensible a los inhibidores de la sntesis de ADN y que sugiere que el ADN, complementaria al RSV genmica del ARN, est presente en las clulas transformadas. Otros investigadores, aun as, no quedaron convencidos. Un experimento definitivo sera necesario para demostrar finalmente su modelo.

Mientras tanto, otro virlogo, David Baltimore, estuvo estado estudiando la replicacin de virus. Estaba tomando un enfoque bioqumico, mirando directamente a ARN y Sntesis de ADN en los propios viriones (partcula vrica morfolgicamente completa e infecciosa) . Anteriormente, haban aislado una actividad de ARN-polimerasa dependiente de ARN en los viriones del virus de la estomatitis vesicular, una no tumoral ARN del virus. Su atencin se volvi hacia el tumor ARN virus, establecindose finalmente en la leucemia murina Rauscher virus (R-MLV). Con este organismo, que probara de forma independiente el modelo Temin.

El experimento

Sorprendentemente, estos dos cientficos viajaron de distintas vas a la misma serie de experimentos crticos. Ambos comenzaron con poblaciones puras de virus, que luego parcialmente interrumpieron el uso de detergentes no inicos. Con un stock de virus alterado en la mano que podra hacer la pregunta fundamental: Puede un retrovirus realizar la sntesis de ADN? Para responder a esta pregunta, cada uno de los grupos aadi radiomarcado desoxitimidina trifosfato (dTTP) junto con los otros tres desoxinucletido trifosfatos (dATP, dCTP, dGTP) a los preparativos del virin, y busc la incorporacin de material radiactivo dTTP en el ADN. En efecto, en cada experimento radiactivamente dT TP se incorpor en cido nucleico. Cuando Baltimore aadido un radiomarcado ribonucletido trifosfato (rNTP) y los otros tres ribunucleotidos trifosfatos para interrumpir los virus, l no pudo detectar sntesis de ARN. Para demostrar que el producto formado era de hecho ADN , se trataron con las enzimas que especficamente degradar o ARN (ribonucleasa, o RNasa) o DNA (Desoxirribonucleasa, o DNasa). Se encontr que el producto era sensible

solamente a la DNasa. Los resultados de estos sencillos experimentos, que se resumen en la tabla, demostraron que una enzima en las partculas podran sintetizar ADN. Sin embargo, la cuestin se mantuvo. . . Cul era la plantilla? Para mostrar una vez por todas que el ADN podra ser sintetizado a partir de un molde de RNA, Baltimore y Temin preincubaron los viriones con RNasa, que cataliza la degradacin de ARN en monofosfatos ribonucletidos (RNMPs). Si el ARN fue realmente la plantilla, a continuacin, la degradacin de la plantilla impedira la sntesis de ADN por las preparaciones virin. De hecho, este fue el caso. Cuanto mayor sea el pretratamiento de viriones con RNasa, menor ser la cantidad de ADN-sintetizar la actividad, lo que demuestra que una enzima en el virin podra catalizar ARN dependiente de la sntesis de ADN. Debido a esta actividad era el inverso de la bien conocida ADN dependiente de ARN sntesis visto en la transcripcin, la enzima catalizada pronto era descrita a la transcriptasa inversa. Al principio, muchos cientficos no estaban dispuestos a creer que la transcriptasa inversa exista debido a que su actividad violaba el dogma central. Tras el aislamiento y la caracterizacin de la enzima de rotura del paradigma pronto convenci a los escpticos.

Discusin Temin y Baltimore fueron llevados de forma independiente por diferentes deducciones clave para el descubrimiento de la transcriptasa inversa. Temin crea firmemente que la actividad existi. Para l, era el proceso de hacer experimentos bioqumicos en purificin de viriones, ms que en las clulas infectadas, que le permiti para demostrar al mundo lo que saba. Baltimore, por otra parte, cree que los virus lleva las actividades de la polimerasa con ellos. Su idea clave era poner a prueba para la actividad de polimerizacin (agrupacin qumica) de ADN dependiente RNA que tena Temin propuso. Ambos cientficos, sin embargo, tena

que tener la conviccin de creer y de informar lo que estaban viendo, a pesar de ser contraria a un paradigma aparentemente inquebrantable. El descubrimiento de la transcriptasa inversa ha impactado la vida dentro y fuera de la ciencia en una cantidad de formas. La capacidad para convertir ARNm a la creacin de ADN permitida de ADNc las bibliotecas, las colecciones de ADN formado nicamente por los genes expresa en un tejido particular. Esto ha facilitado la la clonacin y el estudio de genes implicados en todas las facetas de la biologa. El descubrimiento tambin provoc una explosin de la investigacin en los retrovirus, virus de ARN que se replican a travs inversa transcripcin. Este trabajo preliminar fue crtico de 15 aos despus cuando el virus humano inmunodeficiente (VIH), que causa el SIDA, ha demostrado ser un retrovirus. La importancia del trabajo Temin y Baltimore fue reconocido de forma rpida, dando lugar a que reciban el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina en 1975 por el descubrimiento de transcriptasa inversa.