Identifikasi exopolysaccharides penghasil laktat asam bakteri dari Burkina Faso susu fermentasi sampel

Aly Savadogo*, Cheik A. T. OuattaraPaul W. Savadogo, Nicolas Barro, Aboubacar S.Ouattara, Alfred S. Traor Laboratoire de Microbiologie et de Biotechnologie. Centrede Recherche en Sciences biologiques Alimentaires etNutritionnelles (CRSBAN) UFR / SVT Universit de Ouagadougou Burkina Faso 03 BP 7131.Institut de l'Environnement et de la Recherche Agricole (INERA) 01BP476 Ouagadougou, Burkina Faso. ABSTRAK
Spacer daerah antara 16S rRNA dan 23 S gen dari tiga belas strain bakteri asam laktat dari Burkina Sampel Faso susu fermentasi yang diperkuat oleh reaksi berantai polimerase (PCR). Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermentum, Streptococcus thermophilus, Pediococcus spp, Leuconostoc mesenteroides subsp mesenteroides diidentifikasi. Lactobacillus The Kelompok adalah bakteri dominan. Plasmid diidentifikasi berkisar antara tahun 2000 dan 4000 bp. Exopolysaccharides (EPS) produksi bervariasi dari 181 mg / l dan 814 mg / l, analisis menunjukkan monomerbahwa glukosa dan galaktosa yang dominan. Kata kunci: bakteri asam laktat, susu fermentasi, PCR, exopolysaccharides.

PENDAHULUAN Bakteri asam laktat (BAL) secara luas digunakan dalam tradisional fermentasi susu, dalam fermentasi industry proses dan budaya sebagai starter dalam industri susu.Beberapa strain bakteri asam laktat memiliki kepentingan dalam kesehatan umum, menyediakan mikroflora menguntungkan dalamsaluran usus (Salminen et al., 1993) dan mampumensintesis exopolysaccharides (EPS) (Cerning, 1990;Sikkema, Oba, 1998; Cerning, Marshall, 1999; De Vuyst,Degeest, 1999, Ricciardi, Clementi, 2000).Exopolysaccharides diproduksi oleh bakteri asam laktattelah mendapatkan perhatian meningkat selama beberapa tahun terakhirkarena kontribusi mereka terhadap reology dan teksturproduk makanan (Cerning dan Marshall, 1999).Bakteri asam laktat memainkan peran penting dalam makananfermentasi, sebagai produk yang diperoleh dengan bantuan merekaditandai oleh keamanan higienis, stabilitas penyimpanan danmenarik sensorik sifat.Mendeteksi dan mengidentifikasi berbagai spesies LAB denganmetode molekuler alternatif kuat untuk* Sesuai penulis. E-mail: aly.savadogo @ univouaga.bf.tradisional diferensiasi bakteri. Hal ini juga pentinguntuk pengendalian kualitas produk susu.

Sebelumnya, adatelah beberapa laporan tentang spesies-probe khusus untukberbeda LAB berasal dari RNA ribosomal (rRNA),Terutama 16S dan 23S rRNA urutan (Hensiek et al.,1992, Hertel et al, 1993;. Ehrmann et al, 1994).. Barry etal, 1991. telah menunjukkan bahwa intergenik ribosomaldaerah yang lebih bervariasi antara spesies bakteridibandingkan dengan 16S rRNA dan 23 S gen.Sifat produk fermentasi berbeda dari satudaerah ke daerah lainnya. Hal ini tergantung pada adat setempatmikroflora, yang pada gilirannya mencerminkan kondisi iklimdaerah. Jadi tradisional fermentasi susu di wilayah denganiklim dingin suhu yang terkandung bakteri mesofilikseperti Lactococcusand Leuconostoc spp., sementarathermophilic bakteri, yang meliputi sebagian besar Lactobacillusdan Streptococccus, menang di daerah dengan panas,subtropis atau iklim tropis (Thomas, 1985; Taminedan Robinson, 1988; Kurmann, 1994).Burkina Faso produksi susu diperkirakan 37.392ton susu komersial pada tahun 1998 (RseauDocumentaire d'Elevage, 1998). The Fulani dari BurkinaFaso, fermentasi susu mereka di calabashes, labu, dan tanah liatpot. Burkina Faso penduduk yang masih menghasilkan dipasteurisasi190 Afr. J. Biotechnol.susu fermentasi dengan metode tradisional, karena susu tersebutproduk masih menikmati setia dalam masyarakat.Untuk pengetahuan kita, informasi yang tidak ada padaBurkina mikroflora fermentasi tradisional. Jadi kita fokuspenelitian kami pada isolasi dan identifikasiexopolysaccharides memproduksi LAB menggunakan DNA-baseddeteksi spesifik sistem dengan PCR dan analisis EPS olehHPLC. BAHAN DAN METODE Sampling Tiga puluh sampel susu fermentasi yang diperoleh dari individurumah tangga di daerah pedesaan di utara Burkina. Sampel yangdikumpulkan dalam botol kecil yang steril dan disimpan di laboratorium bawahpendinginan pada suhu 4 C sampai mereka digunakan dalam percobaan. Isolasi bakteri asam laktat Serial pengenceran homogen sampel susu fermentasi 0,1%pepton saline digunakan untuk microbialisolation dengan berikutMedia: (a) agar MRS (De Man et al, 1960.) (Fluka Biochemika69.966) diinkubasi secara anaerob selama 48 jam pada 42 C untuk isolasiLactobacilli termofilik dan Streptococcus, (b) agar MRS diinkubasianaerob selama 48 jam pada 35 C untuk isolasi Lactobacilli mesofilikdan Leuconostoc, (c) M17 agar (Terzaghi dan Sandine, 1975)(DIFCO) diinkubasi aerobik selama 48 jam pada 30 C untuk isolasi lactococci, (d) agar Rogosa (Rogosa et al., 1951) (DIFCO) diinkubasi anaerob selama 48 jam pada 35 C untuk isolasi laktobasilus.Lima puluh isolat diperoleh dari pemilihan byrandom berlendir(Exopolysaccharides produser) koloni (Smitinont et al, 1999.)dari semua media yang digunakan. Ini isolat diuji untuk exopolysaccharides produksi di modifikasi MRS broth. Fenotipik dan biokimia karakterisasi dipilih isolate Pewarnaan Gram, aktivitas katalase, produksi gas dari glukosa, pertumbuhan NaCl 6,5% ditentukan menurut metode untukbakteri asam laktat (Roissart Luquet, 1994). Sel morfologi adalahditentukan dengan sel tumbuh dalam MRS broth untuk 35 C pada 20 jam dengan menggunakan mikroskop fase kontras.

Isolasi, pemurnian, dan kuantifikasi EPS Isolat terpilih ditumbuhkan dalam modifikasi MRS broth (glukosa 20 g / litu remplaced oleh laktosa 75 g / l), sel-sel yang dipanen olehsentrifugasi selama 10 menit pada 11 x 000 g. Dua volume etanol dingin ditambahkan ke supernatan budaya dan disimpan semalam di 4 C.Bahan endapan dikumpulkan dengan sentrifugasi (20 menit pada 2500 xg) resuspended dalam air demineralised, dan dicampur dengan 2volume etanol dingin. Sampel disentrifugasi 2500 x g danpelet dikeringkan pada 100 C. Total isi karbohidrat EPS ditentukan dengan menggunakan prosedur fenol asam sulfat-Dubois et al. (1956). Monosakarida analisis Setelah hidrolisis lengkap EPS (2 jam dalam 1 M H2SO4at 100 C dalam penerima) disegel monosakarida komposisi hidrolisat yang ditentukan oleh HPLC (menggunakan corogel colum 87C, dan RIdetektor) dengan laju alir 0,6 ml / menit (menggunakan pompa Jasco PU-980) danproporsi relatif dari puncak (menggunakan Integrator SP4290) daerah dihitung untuk memperkirakan komposisi monomer. Ekstraksi DNA total bakteri DNA total ekstrak dari 10 ml kultur dipanen pada fase mid-log (OD600of 0,5 -1). Sel dikumpulkan dengan sentrifugasi (3000 xg, 10 menit, 4 C) dan dibekukan selama setidaknya 1 jam pada -20 C. Itu pelet dicairkan dicuci dalam 1 ml penyangga TES (sukrosa 6,7%, 50 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1mM EDTA) dan resuspended dalam 300 ml Stet penyangga (sukrosa 8%, 5% Triton X-100, 50 mM Tris-HCl, pH 8,0, 50 mM EDTA). Tujuh puluh lima mikroliter buffer lisis (TES mengandung 1.330 U ml-1 mutanolysine dan 40 mg ml-1 lysosyme) adalah ditambahkan dan suspensi diinkubasi pada 37 C selama 1 jam. Setelah penambahan dari 40 ml dipanaskan (37 C) SDS 20% di TE buffer (10mm Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8,0) dan manik-manik kaca, sel vortexed selama 60 s dan diinkubasi pada 37 C selama 10 menit, diikuti dengan 10 menit pada inkubasi 65 C. Seratus mikroliter TE buffer ditambahkan dan lisat diekstraksi dengan 1 volume fenol / kloroform / Isoamil alkohol (49:49:1). Fase dipisahkan dengan sentrifugasi (18000 xg, 5 menit) dengan menggunakan kunci fase gel tabung (Eppendorf). The air fase hati-hati dicampur dengan 70 ml NaCl 5M, 1 ml isopropanol,dan DNA diendapkan di atas es untuk setidaknya 15 menit. DNA dikumpulkan oleh sentrifugasi (20000 xg, 30 menit, 4 C) dan pelet dicuci dalam dingin 70% etanol. DNA dikeringkan dengan kecepatan DNA vaksin dan resuspended dalam 100 ml TE. Solusi DNA yang diperoleh disimpan pada suhu 4 C. PCR amplifikasi PCR dilakukan dalam DNA thermal cycler (Perkin Elmer cetus)dengan kit polimerase Sigma. Campuran reaksi yang khas (50 ml) untukPCR dari wilayah 16S-23S rRNA spacer gen terdiri dari Reaksi penyangga (end konsentrasi 10 mM Tris-HCl, pH 8,8, 1,5 mM MgCl2, 50 mM KCl, Triton 0,1%), 200 pM dNTP masing-masing, 1 pM masing-masing primer spesifik pair (Table1), 50ng DNA bakteri dan 0,6 U sigma DNA polimerase. Tabung reaksi yang overlayed dengan tetes minyak mineral (Sigma). Profil amplifikasi adalah 95 C untuk 30 s, 55 C selama 30 detik dan 72 C selama 30 s. Hal ini diulang untuk 35siklus. Program ini juga termasuk preincubation pada 92 C selama 2 menit sebelum siklus pertama dan inkubasi pada 72 C diikuti olehpendinginan langkah ke 4 C setelah siklus terakhir. Kehadiran produk

PCR spesifik ditentukan oleh gel elektroforesis pada 0,7% agarose gelcontaining ethidium bromida.Elektroforesis di Tris-borat-EDTA dilakukan pada 100 volt untuk30 menit, dan difoto di bawah cahaya sinar ultraviolet. DNAreferensi strain disertakan.

HASIL DAN PEMBAHASAN Biokimia dan morfologi karakteristik LAB strain Tiga belas strain dipilih dan diidentifikasi sebagaiexopolysaccharides produsen. Semua strain Gram-positif, katalase negatif. Satu strain diproduksigas dari glukosa, sembilan strain tidak tumbuh di NaCl 6,5%.Tiga strain batang, cocobacilli fivewere, empatbola dan satu adalah ovoid (Tabel 2).Savadogo et al. 191 Tabel 1. Spesifik primer yang digunakan dalam penelitian ini. NO 1 2 3 PRIMER 1,2 Lfpr Fermll ACI I SPESIES Lacto bacillus sp Lb fermentum Lactobacilllus acidophilus Lactobacillus delbrueckii URUTAN 5-3 GTAAGG TGGCGATGTGTACCTCAAG CACCGCTACACATGGAG GTAAGG TGGCGATGTGTACCTCAAG CACCGCTACACATGGAG TCTAAGGAAGCGAAGGAT CTCTTCTCGGTCGCTCTA ACGGATGGATGGAGAGCAG GCAAGTTTGTTCTTTCGAACTC REFERENSI Heilig et al, 2002. Walter et al, 2000 (TilsalaTimisjarvi, Alatossava, 1997 TilsalaTimisjarvi, Alatossava, 1997) (Heilig et al., 2002) Ampe et al, 1999. Tilsala-timisjarvi, Alatossava, 1997 Ampe et al, 1999 Moschetti et al, 2000. Lamothe, 2000

ACI II

5 6 7 8 9

DEL I DEL II THR I THR II LMMf

Pediococcus spp Lactococcus Streptococcus thermophilus Leuconostoc

10

LMMr

Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides EPS plasmid TTGTTCTCGAGATGGATATGGGATATAGC TATTCCCCTTTATTAATCTGATATGCCAAGG

GTAAAGTGGCGTGT GTACCTCAAG CACCGCTACACATGGAG CTTTGAGTGATGCAATTGCATC CACCGCTACACATGGAG ACGGAATGTACTTGAGTTTC TTTGGCCTTTCGACCTAAC GATCCATCTCTAGGTGACGCCG CACCGCTACACATGGAG CCGTTACCCCTAAACCCCGAC GACCAAATACAATAGGTTGCG

Tabel 2.Biochemical dan morfologi karakteristik strain acidbacteria laktat dari Burkina Faso sampel susu fermentasi. Strains Pengaturan Pertumbuhan sell sell dalam 6,5 % NACL MR1 Rods Chains dan Pasangan MR2 Cocobacilli Pasangan dan Rantai MR3 Cocobacilli Rantai MR5 Cocobacilli Rantai MR6 Cocobacilli Pasangan MR9 Rods Rantai dan Pasangan MR10 Oviod Rantai dan Pasangan MR11 Rods Rantai dan Pasangan MR12 Cocobacilli Rantai dan Pasangan MR14 Spherical Pasangan MR15 Spherical Rantai MR16 Spherical Pasangan MR17 Spherical Pasangan + = Positif, - = negatif, = respon sedikit. Bentuk sell Gram Katalase Gas dari glulosa + -

+ + + + + + + + + + + + +

Dengan reaksi PCR, bakteri asam laktat (Gambar 1) taksi diidentifikasi. Menggunakan primer spesifik pada Tabel 1,strain MR1, MR9, MR12 diidentifikasi sebagai Lactobacillusacidophilus, strain whilw MR6, MR3, MR11 adalah diidentifikasi sebagai Lactobacillus fermentum (Angka tidak ditunjukkan). The MR10 strain diidentifikasi sebagai Streptococcusthermophilus, dan strain MR14, MR16, MR17 adalah idenfied sebagai Pediococcus spp. The MR15 regangan adalah diidentifikasi sebagai Leuconostoc mesenteroides subsp mesenteroides (Angka tidak ditampilkan).

Tabel 3.Carbohydrates konsentrasi, monomer komposisi exopolysaccharides. NO 1 2 3 4 5 6 7 8 91 0 11 12 13 Exopolysaccharides memproduksi Karbohidrat MR1 MR2 MR3 MR5 MR6 MR9 MR10 MR11 MR12 MR14 MR15 MR16 MR17 Karbohidrat (mg/l) 219 509 322 474 713 512 814 549 181 288 615 559 357 Monomer Komposisi 100% glukosa Nd .18% galaktosa glukosa, 0,80% Nd 95% glukosa pentosa, 97,04% 99,97% galaktosa, pentose 97,04 % Nd ,41% glukosa rhamnosa, 52.57% 81,95% glukosa pentosa, 18,01% 100% glukosa Nd 93.92% glukosa, fruktosa 1,35% pentosa, 5,27% 32.58% mannose, rhamnosa 36,42% fruktosa, 30,41%

nd: tidak ditentukan. PCR produk diperkuat 16S-23S spacer gen RNA LAB daerah yang berbeda menggunakan kelompok forLactobacillus primer. Lanes:M, penanda berat molekul, 1, MR1, 2, MR2, 3, MR3, 4, MR5; 5,MR6, 6, MR9, 7, MR11, 8, MR12). Di antara 13 isolat, 11 memiliki plasmid EPS menggunakanEPS-spesifik primer dalam reaksi PCR. Karbohidrat konsentrasi EPS (Tabel 3) adalah antara 814 mg / luntuk jenis virus MR10 dan 181 mg / l untuk strain MR12.The monosakarida utama (karbohidrat) yang dihasilkandari hidrolisis asam dari EPS strain adalah glukosa.Puncak lain dari galaktosa, rhamnosa pada HPLCkromatogram yang diperoleh (Tabel 3).Isolasi strain dan identifikasi menunjukkan keragaman gugus asam laktat bakteri di Burkinasusu fermentasi. Leuconostoc, Streptococcus,Lactobacillus, Pediococcuswere terisolasi dari susu fermentasi. Di antara strain ditandai,Lactobacillusgenus adalah dominan, yang terdiri dari L.fermentum, L. acidophilub, bakteri delrueckii.These L.sebelumnya telah diisolasi dari makanan fermentasi(Hammes dan Vogel, 1995). L. fermentumproduces baik isomer asam laktat (Kandler dan Weiss, 1986).Plantarumwas Lactobacillus terisolasi di Zimbabwesusu fermentasi (Mutukumira, 1996), di Tanzania susu fermentasi (Isono et al., 1994) di Kamerun susu fermentasi (Jiwoua dan Milliere, 1990).Umumnya gen EPS dikodekan pada besar plasmid (> 20 kb) yang dapat ditransfer dari satu strainsatu sama lain. (Van Kranenburg et al, 1997., 1998,2000). Lactococcus lactisNIZO B40 regangan menghasilkan phosphopolysaccharide, 12 klaster gen kb berisi 14 terkoordinasi mengungkapkan gen, RXABCDEFGHIJKL,terlokalisasi pada 40 kb plasmid spesifik untuk EPS produksi (Van Kranenburg et al, 1997.).Karbohidrat konsentrasi yang tinggi dibandingkan denganhasil yang diperoleh oleh al et Cerning, 1988;. Cerning, 1990 EPS dengan L. lactissubsp.lactis (100-600 mg / l). Lain penulis memperoleh

konsentrasi yang lebih tinggi tinggi dari EPS yang diperoleh dalam penelitian ini (Van de Berg et al, 1995;. De Vuyst dan Degeest, 1999).Setelah hidrolisis analisis HPLC menunjukkan bahwa dominangula netral adalah galaktosa dan glukosa (Tabel 3). Kami Hasil ini mirip dengan beberapa penulis yang menunjukkan bahwa galaktosa dan glukosa adalahgula netral sering terjadi pada bakteriexopolysaccharides (De Vuyst et al, 1998;. Cerning,1990, 1995, Nakajima et al, 1990;. Grobben et al, 1995.;Gruter et al, 1993.).Para monosakarida terjadi paling sering diexopolysaccharides berbagai dari bakteri asam laktat adalahglukosa dan galaktosa (Cerning, 1990, 1995), namunrhamnosa (Cerning et al, 1986, 1988,.. Nakajima et al,1990, 1992, Gruter et al, 1993;. Grobben et al, 1995),.mannose (Petit et al., 1991) fruktosa (Manca de Nadra etal, 1985.) arabinosa dan xilosa (Cerning et al., 1988, 1992) atau gula derivatif seperti N-asetilgalaktosamin (acara dokumenter et al, 1990;.. Petit et al, 1991) M1 3 2.456 78 9 1,5 kb 2,0 kb dan N-asetilglukosamin (Cerning et al, 1994.) juga ditemukan. Bakteri asam laktat memainkan peran penting dalam makananfermentasi, sebagai produk yang diperoleh dengan bantuan mereka ditandai oleh keamanan higienis, stabilitas penyimpanan danmenarik sensorik sifat. Karena budaya starterdicampur secara empiris untuk karakteristik yang diinginkan dariakhir produk, pemeliharaan keseimbangan regangan tersebut yang optimalselama proses fermentasi adalah penting.EPS dalam lingkungan alam mereka diperkirakan memainkanperan dalam perlindungan dari sel mikroba terhadap pengeringan, fagositosis, fag serangan, antibiotik atausenyawa beracun, predasi oleh protozoa, osmotic stres, adhesi pada permukaan padat, dan seluler pengakuan. Dalam makanan, mikroba industry exopolysaccharides digunakan sebagai pengental atau viscosifiers, menstabilkan atau pengemulsi agen, dan sebagai gelling dan pengikat air atau agen texturizers(Sutherland, 1994). Fungsional sifatexopolysaccharides dipengaruhi oleh utama merekaStruktur (Sutherland, 1994).Hasil penelitian kami menunjukkan keragaman asam laktatbakteri dalam susu fermentasi tradisional di Burkina Faso.Sampel susu mengandung asam laktat beberapa spesies bakteri dan primer spesifik PCR mampu mengidentifikasi mereka. Strain dapat digunakan sebagai kultur starter dengan diprediksi karakteristik dan berkontribusi padapengembangan produksi skala kecil dan komersialfermentasi susu dengan stabil, kualitas yang konsisten. UCAPAN TERIMA KASIH Kami berterima kasih kepada Moussa Sanogo dan Dr Ismael HN Bassol untukmembantu dalam ekstraksi DNA, PCR, dan electrphoresis.

REFERENSI Ampe F, Ben Omar N, Moizan C, C Wacher, Guyot JP (1999).Polyphasic studi distribusi spasial mikroorganisme dalamMeksiko pozol, adonan jagung fermentasi, menunjukkan perlunyabudidayaindependen untuk menyelidiki metode tradisionalfermentasi. Appl. Environ. Microbiol, 65:. 5.46473. Barry T, G Colleran, Glennon M, Dunican IK, Gannon F (1991). Itu16S/23S wilayah spacer ribosom sebagai target untuk probe DNAmengidentifikasi Eubacteria. Metode PCR Appl. 1: 51-56. Cerning J, Bouillanne C, Desmazeaud M, Landon M (1986). Isolasidan karakterisasi polisakarida exocellular dihasilkan olehLactobacillus bulgaricus. Biotechnol. Lett. 8: 625-628. Cerning J, Bouillanne C, Desmazeaud MJ, Landon M, (1988).Exocellular polisakarida produksi oleh Streptococcusthermophilus. Biotechnol. Lett. 10: 255-260. Cerning J (1990). Exocellular polisakarida yang dihasilkan oleh asam laktatbakteri. Microbiol janin. Wahyu 87: 113-130. Cerning J (1995). Produksi exopolysaccharides oleh asam laktatbakteri dan susu Propionibacteria. Lait 75: 463-472. Cerning J, Bouillanne C, Landon M, Desmazeaud M (1992). Isolasidan karakterisasi exopolysaccharides dari lendir pembentukmesofilik asam laktat bacteria.J. Susu Sci. 75: 692-699. Cerning J, Marshall VME (1999). Exopolysaccharides dihasilkan olehsusu bakteri asam laktat. Hasil terakhir dan PerkembanganMicrobiol. 3: 195-209. Cerning J, Renard CMGC, Thibault JF, Bouillanne C, Landon M,Savadogo et al. 193 Desmazeaud M, L Topisirovic (1994). Sumber karbon persyaratan untuk produksi eksopolisakarida oleh Lactobacillus casei CG11and Struktur parsial analisis polimer. Appl. Environ. Microbiol. 60:3.914-3.919. De Man JC, Rogosa M, Scharpe ME (1960). Sebuah media untukbudidaya Lactobacilli. J. Appl. Bacteriol. 23: 130-135. De Vuyst L, Vanderveken F, Van De Ven S, Degeest B (1998).Produksi oleh dan ofexopolysaccharides isolasi dariStreptococcus thermophilusgrown dalam media susu dan buktipertumbuhan mereka terkait biosintesis. J. of Appl. Micobiol. 84: 1.059-1.068. De Vuyst L, Degeest B (1999). Heteropolisakarida dari laktatbakteri asam. Microbiol janin. Wahyu 23: 153-177.Acara dokumenter T, Wieruszescki JM, Fournet B (1990). Struktur exocellular suatupolisakarida diproduksi oleh Streptococcus thermophilus. Carbohyd.Res. 198: 313-321.

Dubois MA, Gilles KA, Hamilton JK, Rebers PA, Smith F (1956).Kolorimetri metode untuk penentuan gula dan terkait zat. Anal. Chem. 28: 350-356. Ehrmann M, Ludwig W, Schleifer KH (1994). Membalikkan dot blot: yang bergunametode untuk identifikasi langsung dari bakteri asam laktat dalam fermentasi makanan. Microbiol janin. Lett. 117: 143150. Grobben GJ, Sikkema J, Smith MR, De Bont JAM (1995). Produksipolisakarida ekstraseluler oleh Lactobacillus delbrueckii sspNCFB bulgaricus 2772grown dalam media kimia tertentu. J.Appl. Bacteriol 79: 103-107. Gruter M, Leeflang BR, Kuiper J, Kamerling JP, Vliegenthart JFG.(1993). Struktural karakterisasi eksopolisakarida yangdihasilkan oleh Lactobacillus bulgaricus rrgrown subsp delbrueckii diskim susu. Carbohyd. Res. 239: 209-226. Hammes WP, dan Vogel RF (1995). GenusLactobacillus The. Dalam: Kayu BJB dan Holzapfel WH (eds) The genera Bakteri Asam Laktat,Chapman dan Hall, London, Inggris, pp 19-54. Heilig Hans GHJ, Zoetendal Erwin G, Vaughan EE, Marteau P,Akkermans ADL, De Vos Willen M (2002). Molekuler KeragamanLactobacillus spp. Dan lainnya Asam laktat Bakteri dalam ManusiaUsus yang Ditentukan oleh SpecificAmplification 16S RibosomalDNA. Appl. Environ. Microbiol. 68: 114-123. Hensiek R, G Krupp, Stackebrandt E (1992). Pengembangan diagnostic probe oligonukleotida selama empat Lactobacillusspecies terjadi di usus saluran. Sytem. Appl. Microbiol.15: 123-128. Hertel C, W Ludwig, Pot B, Kersters K, Schleifer KH (1993).Diferensiasi Lactobacillioccurring dalam produk susu fermentasi oleh menggunakan probe oligonukleotida dan profil protein elektroforesis.Sistem. Appl. Microbiol 16: 463-467. Isono Y, Shingu I, Shimizu S (1994). Identifikasi dan Karakteristikbakteri asam laktat yang diisolasi dari susu fermentasi masai di Northern Tanzania. Biosci. Biotechnol. Biochem. 58: 660-664. Jiwoua C, Milliere JB (1990). Lactic flora dan Enterococcus dalam pengolahan susu (Pindiam) berbudaya di Adamoua. Kamerun. Lait 70: 475-486. Kandler O, N Weiss (1986). Reguler, non-Sporing Gram-positif batang.Genus Lactobacillus. Dalam: Sneath PHA, Mair NS, Sharpe ME, Holt JG(Eds) Manual Bergey tentang Bacteriology sistematis, Williams danWilkins, Baltimore, pp1209-1234. Kurmann JA (1994). Produksi susu fermentasi di dunia:aspek produksi susu fermentasi. Int. Dairy Federation Bull.179: 16-26. Lamonthe GT (2000). Karakterisasi Molekuler eksopolisakaridabiosintesis oleh subsp.bulgaricus Lactobacillus delbrueckii. Ini dedoctorat, Facult des Sciences de L'Universit de Lausanne, Suisse,p.163.

Manca De Nadra MC, Strasser De Saad AM, Pesce de Ruiz HolgadoAA dan Olivier G (1985). Polisakarida ekstraseluler produksiLactobacillus bulgaricus CRL 420. Milchwissenschaft 40: 409-411. Moschetti G, Blaiotta G, F Villani, Coppola S (2000). Spesifik DeteksiLeuconostoc mesenteroides subsp mesenteroideswith DNAPrimer Diidentifikasi oleh Analisis DNA secara acak Amplified Polymorphic.Appl. Environ. Microbiol. 66: 422-424. Mutukumira AN (1996). Investigasi beberapa prospek untukpengembangan kultur starter untuk produksi industri tradisional fermentasi susu di Zimbabwe. Dokter Scientiarum Skripsi, Jurusan 194 Afr. J. Biotechnol. makanan Sains, Pertanian Universitas Norwegia. Nakajima H, Hirota T, T Toba, Itoth T, Adachi S (1992). Strukturekstraseluler polisakarida dari lendir pembentuk Lactococcus lactissubsp cremorisSBT 0495. Carbohydr. Res.224: 245-253. Nakajima H, Toyoda S, T Toba, Itoh T, T Mukai, Kitazawa H, S Adachi(1990). Sebuah phosphopolysaccharide baru dari lendir pembentuk Lactococcus lactis ssp.cremorisSBT 0495. J. Dairy Sci. 73: 1.472-1.477. Petit C, Grill JP, Maazouzi N, Marczak R (1991). Peraturan polisakarida formasi oleh Streptococcus thermophilusin batch dan umpan curah budaya. Appl. Microbiol. Biotechnol. 36: 216-221. Rseau Documentaire d'Elevage au Burkina Faso (Juillet 1997 -dcembre 1998). Revue de presse sur l'Elevage au Burkina Faso.Syfia Bull. de presse. Ricciardi A, Clementi F (2000). Exopolysaccharides dari asam laktatbakteri: Struktur, produksi dan aplikasi teknologi. ItaliaJ. makanan Sci. 1: 23-45. Rogosa M, Mitchell JA dan Wiseman, R F (1951). Sebuah media selektifuntuk isolasi Lactobacilli oral dan tinja. J. Bacteriol. 62: 132-133. Roissart H, Luquet FM, (1994). Bakteri lactiques. AspekFondamentaux et technologiques. Uriage, Lorica, p. 605. Sikkema J, Oba T (1998). Ekstraseluler polisakarida asam laktat bakteri. Salju Merek R & D Laporan 107: 1-31. Smitinont T, Tansakul C, Tanasupawat S, Keeratipibul S, Navarini L,Bosco M, Cescutti P (1999). Eksopolisakarida penghasil asam laktatbakteri strain dari tradisional makanan fermentasi thai: isolasi,identifikasi dan exopolysaccharidescharacterization. Inter.J.Microbiol. 51: 105-111. Sutherland IW (1994). Struktur-fungsi hubungan dalam mikroba exopolysaccharides. Biotechnol. Adv. 12: 393-448. Tamine AY dan Robinson RK (1988). Fermentasi susu dan masa depan merekatren: aspek teknologi. J. Susu Res.55: 281-307.

Terzaghi BE, Sandine KAMI (1975). Peningkatan media laktatStreptokokus dan bakteriofag mereka. Appl. Environ. Microbiol. 29:807-813. Thomas TD (1985). Peran bakteri asam laktat dan perbaikan mereka untuk produksi produk hewani yang lebih baik-difermentasi. Selandia Baru J.Susu Sci. Technol.20 :1-10. Tilsala-Timisjarvi A, Alatossava T (1997). Pengembangan oligonukleotida primer dari 16S rRNA 23Sintergenikurutan yang berbeda untuk mengidentifikasi susu dan asam laktat probiotikbakteri dengan PCR. Int. J. Makanan Microbiol, 35:. 49-56. Van den Berg DJC, Robijn GW, Janssen AC, Giuseppin MLF, VreekerR, Kamerling JP, Vliegenthart JFG, Ledeboer AM, Verrips CT (1995).Produksi polisakarida ekstraseluler novel karya Lactobacillus sake0-1 dan karakterisasi polisakarida tersebut. Appl. Environ.Microbiol.61: 2.840-2.844. Van Kranenburg R, Marugg JD, Van Swan II, Willem NJ, De Vos WM (1997). Molekul characterizationof plasmid-encoded eps genpenting untuk biosintesis eksopolisakarida di Lactococcus klasterlactis. Mol. Microbiol. 24: 387-397. Van Kranenburg R, Van Swan II, Kleerebezem M, De Vos WM (1998).Expression, gangguan, dan komplementasi dari epsgenes penting untuk biosintesis eksopolisakarida dalam Konferensi lactis.ASM L.Streptokokus Genetika, Vichy, Prancis, pp 45-46. Van Kranenburg R, Kleerebezem M, de Vos WM (2000). NukleotidaUrutan analisis EPS lactococcal plasmid pNZ4000. Plasmid43: 130-136. Walter J, Tannock GW, Tilsala-Timisjarvi A, Rodtong S, Loach DM,Munro K, Alatossava T (2000). Deteksi dan IdentifikasiGastrointestinal Lactobacillus Spesies dengan Menggunakan Gradient denaturingGel Elektroforesis dan spesies-spesifik PCR Primer. Appl.Environ. Microbiol. 66: 297-303.