Tinciones

Tincin o coloracin de bacterias Los procedimientos que ponen de manifiesto diferencias entre las clulas bacterianas o en partes una clula se conoce como tcnica de coloracin diferencial. Son algo mas que elaboradas que la tcnica simple en la que las clulas se someten a una sola solucin colorante o reactivo colorante. Las tinciones se combinan qumicamente con el protoplasma bacteriano; si la clula no ha muerto el proceso termina de hacerlo. El mtodo, por consiguiente, es bastante drstico y puede producir artificios. Las tinciones ms frecuente son sales. Las tinciones bsicas consiste en un catin coloreado unido a un anin incoloro, mientras las cidas constituyen exactamente lo contrario, unido a dos cationes. Las clulas bacterianas son abundantes en cidos nucleicos, los cuales portan cargas negativas en formas de fosfatos. Los colorantes cidos no tien a las clulas bacterias, y por tanto, pueden utilizarse para teir al fondo con un color de contraste. Las tinciones bsicas tien uniformemente en las clulas bacterianas, a menos que antes de destruyan el ARN del citoplasma. Tambin se pueden usar tcnicas de tincin especiales para flagelos, membranas celulares, paredes celulares, grnulos, nucletidos y esporas. Tincin acidorresistente Las bacterias acidorresistentes son las que retiene la carbolficsina, aun cuando intente descolorarlas con un mezcla de alcohol y cido clorhdrico. Las bacterias acidorresistentes se tien de color rojo; el resto adquiere el color del colorante de contraste en este caso el verde o azul. Tincin negativa Este procedimiento consiste en la tincin de fondo con un colorante cidos para dejar las clulas incoloras en contraste. Comnmente se utiliza el colorante negro llamado

nigrusna. El mtodo sirve para observar bacterias o estructuras que difcilmente se tien con las tcnicas directas. Tincin de los flagelos Los flagelos son estructuras demasiado finas para poder ser visibles en el microscopio de luz. Sin embargo si se tratan con una suspensin coloidal inestable de sales de cidos tnico para formar un precipitado denso en la pared celular y en los flagelos, se pueden poner de manifiesto su presencia y disposicin en las clulas. De esta manera el dimetro aparenta que la estructura aumento de tamao con fuscina bsica los hace visibles en el microscopio ptico. Tincin de la cpsula La cpsula se pone de manifiesto mediante una coloracin negativa o una modificacin de esta. Uno de los mtodos de tincin de la cpsula incluye el tratamiento de las bacterias con un solucin caliente de cristal violeta seguido por un lavado con una solucin de sulfato de cobre. El sulfato de cobre tambin imparte color al fondo y esto resulta en que la clula y el fondo aparezcan teido en color azul oscuro mientras la cpsula aparece de color azul plido. Tincin del ncleo Los ncleos se pueden teir por la tincin de Feulgen la cual es especifica para el ADN. Tincin de la Esporas Las esporas se observan de la manera mas simple como cuerpos refringentes intracelulares en suspensiones de bacterias sin teir, la parte de las esporas relativamente impermeable, las esporas comnmente se tien con verde de malaquita y carbolfucsina o carbolfucsina Tincin Gram. Una caracterstica taxonmica importante de las bacteria es su respuesta a la tincin a de Gram esta caracterstica parece ser fundamental, reaccin a la tincin se correlaciona a con muchas otras propiedades morfolgicas en maneras relacionadas filogenticamente. Microorganismo potencialmente grampositivo puede verse como tal cuando concurren un conjunto de particular de condiciones ambientales en un cultivo joven. El procedimiento para tincin de Gram se inicia con la aplicacin de un colorante

bsico el cristal de violeta. Luego se aplica una solucin de yodo en este momento todas las bacterias de tien de azul. Continuacin las clulas se tratan con alcohol las clulas grampsitiva contienen el cristal violeta-yodo y permanecen de color azul; en cambio las gramnegativa se descoloran completamente por el alcohol. Por ultimo se aplican un colorante de contraste safranina, que es un colorante rojo. De esta manera, las clulas gramnegativas, previamente descoloradas, toman el colorante de contraste y las clulas grampositivas ahora aparecen prpura. La base de la reaccin diferencial de Gram es la estructura de la pared celular. Esta tcnica diferencial es una de las de uso mas comn en microbiologa. El frote bacteriano teido se somete a las soluciones siguientes en el orden en que se indica: cristal violeta, alcohol y safranina o alguna otra solucin de contraste conveniente. Las bacterias gramnegativas contienen un gran porcentaje mas alto de lpidos que de las bacterias grampositivas. Las paredes celulares de la bacterias gramnegativas son tambin mas delgadas que las grampositivas con alcohol extrae lpidos con lo cual se aumenta la porosidad o permeabilidad de la pared celular gramnegativa. As el complejo cristal violeta-yodo (CV-I) puede extraerse en los organismos gramnegativos y de esta manera se destien las paredes celulares de las bacterias grampositivas, por su composicin diferente (bajo contenido lpido) se deshidratan alcohol y se logra extraer el complejo (CV-I). En las bacterias (CV-I) queda retenido en la pared despus del tratamiento con etanol, la cual se supone se supone causa una disminucin de en el dimetro de los poros glucopptido o pptidoglicano de la pared celular. Las bacterias gramnegativas tienen una cantidad mucho menor de ppidoglicano con ligaduras cruzadas menos extensas que en las paredes de las bacterias grampositivas.

Colorantes

Introduccin

La finalidad de las coloraciones es, entre otras, hacer visibles los grmenes y revelar su estructura. El estudio microscpico de un germen puede ser realizado de diversas maneras, incluidas los preparados en fresco. Pueden adems utilizarse tcnicas especiales como contraste de fases, el campo oscuro, la fluorescencia, etc. Los colorantes son sustancias que pueden conferir color a otros cuerpos.

La Coloracin es el proceso mediante el cual un cuerpo es teido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la solucin colorante.

Los colorantes se comportan como compuestos cidos o bsicos y tiene la tendencia de formar uniones electrostticas con los radicales ionizables de los tejidos.

Colorantes

Coloraciones

Clasificacion de los colorantes Segn su origen:

Naturales: como la hematoxilina, el carmn y la orcena. Sinteticos o artificiales: como el azul de metileno, la safranina, azul de anilina, el naranja G, etc..

Segun sus propiedades qumicas La mayora de los colorantes empleados en histologa actan como cidos o bases y tienden a formar uniones salinas con radicales ionizables presentes en los tejidos. Colorantes cidos: como por ejemplo la eosina, colorante cargado en forma negativa, se une a componentes celulares cargados positivamente. Estos componentes cargados positivamente se denominan acidfilos, porque tienen afinidad por los colorantes cidos. Por ejemplo, estos colorantes se unen a grupos aminos de las protenas. Estas

protenas pueden pertenecer al citoesqueleto de la clula o hallarse en la matriz extracelular. Debido al elevado contenido de protenas del citoplasma la eosina es un excelente colorante citoplasmtico. La eosina se une tambin a las membranas plasmticas, sin embargo, se desconoce la naturaleza qumica de esta unin. Las clulas que presentan un gran desarrollo de membranas (muchas mitocondrias, mucho retculo endoplasmtico liso, etc.) son sumamente acidfilas, o sea, se tien intensamente con la eosina. Colorantes bsicos: como por ejemplo el azul de metileno, colorante cargado positivamente, se une a componentes celulares cargados negativamente. Estos componentes cargados negativamente se denominan basfilos, porque tienen afinidad por los colorantes bsicos. Por ejemplo, estos colorantes se unen al ncleo y ciertas regiones del citoplasma.

Como caso particular, la hematoxilina no tiene carga, para teir un tejido se la une a un mordiente que junto a la hematoxilina forman una laca. La laca es bsica y por lo tanto se une a cargas negativas de la clula o matriz extracelular. Colorantes neutros: son colorantes en los que la porcin cida y la bsica colorean. Tien las partes bsicas de una clula de un color y las partes cidas de otro. Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro. Ej. el eosinato de azul de metileno. Colorantes indiferentes: tien aquellas estructuras o sustancias que los disuelven ms fcilmente que el lquido en que estn preparados. Un ejemplo es el colorante sudan, un colorante de lpidos.

ANAE

Las esterasas son un grupo de enzimas que hidrolizan esteres de cidos carboxlicos, localizndose fundamentalmente en los lisosomas. Hay muchos tipos de esterasas distintas que actan sobre diversos sustratos, pero cuyas actividades se solapan, ya que muchas de ellas son capaces de hidrolizar el mismo sustrato. Por ello, la subdivisin de las esterasas se basa en el tipo particular de ester que hidrolizan ms eficientemente y en el efecto de diversos inhibidores enzimticos. La tcnica utilizada en este caso revela todos los tipos de actividad esterasa ya que se emplea como sustrato un ester simple, el alpha-naftil acetato, por ello se denomina esterasa no especfica. Los enzimas liberan el alpha-naftol que se revela con la sal diazoica pararrosanilina con nitrito sdico. Como en la mayor parte de las tcnicas histoenzimticas, se emplean tejidos congelados y cortes obtenidos en criostato, ya que el proceso de deshidratacin e inclusin inactivara los enzimas cuya presencia se quiere demostrar.

RESULTADOS:

los

puntos

con

actividad esterasa aparecen de color marrn rojizo. Imagen: ganglio linftico de rata.

AZUL DE TOLUIDINA

Colorante que tie estructura basfilas, tales como la cromatina. Se puede comportar como colorante ortocromtico (tie de color azul) o metacromtico (tie de color violeta-rojo), dependiendo del pH y de la naturaleza qumica de la sustancia teida.

Como colorante ortocromtico, se usa frecuentemente para teir tejido nervioso, donde tie la heterocromatina y los grnulos de Nissl (acmulos de cisternas de retculo endoplsmico rugoso de los somas neuronales, as como las fibras nerviosas amielnicas y clulas de gla. Tambin se utiliza para la tincin de cortes semifinos. El azul de toluidina tie metacromticamente las estructuras ricas en

proteoglucanos sulfatados, como el heparn sulfato, presente - por ejemplo - en el cartlago joven (condroblastos y matriz inmadura) y en los grnulos de las clulas cebadas.

RESULTADOS: Ortocromasia: las estructuras basfilas

aparecen teidas de color azul. Imagen: Soma neuronal del asta ventral de la mdula espinal de rata.

RESULTADOS: Metacromasia. las estructuras

metacromticas aparecen teidas de color violeta. Imagen: CSF de filamento primario branquial de trucha arco iris.

CORTES SEMIFINOS

La inclusin de las muestras en resinas plsticas (como el Epon o la Araldita y similares) permite la obtencin de cortes de grosor mucho ms delgado que en el

caso de la parafina. Aunque inicialmente esta tcnica de inclusin se us como un mtodo para seleccionar regiones para la obtencin de cortes ultrafinos para la microscopa electrnica de transmisin, hoy en da se utiliza frecuentemente para la microscopa la ptica, ya que se obtiene una resolucin mucho mayor. El grosor de los cortes semifinos vara entre 0,5 y 5 mm y se tien con diversas tcnicas como el azul de toluidina o la hematoxilina-eosina. Usando resinas de bajo punto de solidificacin es posible realizar tambin tcnicas histoqumicas y de inmunomarcaje.

RESULTADOS: se puede apreciar la mayor resolucin de la imagen. Imagen: CSF de filamento branquial de trucha arco iris (Az. toluidina).

FOSFATASAS Son un grupo de enzimas hidrolticos que actan sobre los steres del cido fosfrico. Algunas fosfatasas actan especficamente sobre un sustrato determinado, por ejemplo la adenosina trifosfatasa, pero la mayora actan sobre diversos sustratos y su clasificacin se basa en el pH al cual presentan una actividad ptima, diferencindose dos grupos:

Fosfatasas alcalinas que exhiben actividad ptima a pH elevado (8,3 9,4) Fosfatasas cidas que presentan actividad ptima a pH bajo (4,7 5,5) Las fosfatasas cidas se localizan fundamentalmente en los lisosomas, mientras que la localizacin subcelular de las fosfatasas alcalinas no est clara. Para la demostracin histoqumica de ambos grupos de fosfatasas, se utiliza como sustrato el naftol-AS-BI-fosfato al pH correspondiente. A continuacin, el naftol liberado se demuestra con una sal de diazonio (Fast Red TR para la fosfatasa

alcalina y pararrosanilina con nitrito sdico para la fosfatasa cida). Tras la reaccin, los ncleos se contrastan con hematoxilina. En el caso de la fosfatasa cida, los cortes se deshidratan, se aclaran y se montan con Entelln o DPX. Sin embargo, en el caso de la fosfatasa alcalina no es posible la deshidratacin, por lo que las preparaciones se montan con glicerina gelatina. Como en la mayor parte de las tcnicas histoenzimticas, se emplean tejidos congelados y cortes obtenidos en criostato, ya que el proceso de deshidratacin e inclusin inactivara los enzimas cuya presencia queremos demostrar.

RESULTADOS: Fosfatasa alcalina: las clulas con actividad fosfatasa alcalina aparecen en rojo. Imagen: pronefros de trucha arco iris.

Fosfatasa cida: las clulas con actividad fosfatasa cida aparecen en rojo-anaranjado. Imagen: pronefros de pez gato.

GOMORI: PLATA

Tcnica que utiliza la reduccin de nitrato de plata, que se deposita sobre estructuras argirfilas. Puede usarse sola o en combinacin con otras tinciones nucleares o citoplasmticas.

RESULTADOS: las estructuras argirfilas, como las fibras de reticulina (o reticulares) se tien de negro. Imagen: ganglio linftico de rata.

HEMATOXILINA EOSINA

Esta tcnica utiliza dos colorantes: en primer lugar los cortes se someten a la accin de la hematoxilina, colorante bsico, que se une a cualquier sustancia que tenga grupos cidos, tales como los grupos fosfato del ADN y a las protenas nucleares que poseen carga negativa. A continuacin, los cortes se someten a la accin de la eosina, colorante dbilmente cido, que colorea a las estructuras bsicas.

RESULTADOS: las estructuras basfilas, como los ncleos, se tien de color azul con la hematoxilina, mientras que la eosina tie de rosa ms o menos intenso estructuras acidfilas, como las fibras de colgeno. Imagen: conducto de Wolff de trucha arco iris.

INMUNOPEROXIDASA INDIRECTA

Las tcnicas inmunohistoqumicas se basan en la especificidad de la reaccin antgeno-anticuerpo, que permite la identificacin de una protena (el antgeno), cuya presencia queremos demostrar, mediante su unin a un anticuerpo especfico

(anticuerpo primario) contra ella. En este caso se ha utilizado el mtodo de inmunodeteccin indirecta en dos etapas. En un primer paso, lo cortes se incuban con el anticuerpo primario, que se une a su antgeno especfico all donde est presente. En un segundo paso, se aplica otro anticuerpo (anticuerpo secundario) contra el anticuerpo primario. El anticuerpo secundario est unido covalentemente (se dice que est marcado), en este caso, al enzima peroxidasa (un enzima que cataliza la formacin de perxido de hidrgeno, altamente oxidante). Finalmente, el producto de reaccin de este enzima es revelado utilizando como sustrato 3,3diaminobencidina (DAB) que al oxidarse forma un producto marrn insoluble. El segundo paso permite amplificar el resultado de la reaccin, ya que varias molculas del anticuerpo secundario marcado pueden unirse a cada molcula del anticuerpo primario. Como consecuencia, el sitio donde est localizado el antgeno presenta ms molculas del enzima y as resulta una mayor sensibilidad a la deteccin. Se suelen emplear tejidos congelados y cortes obtenidos en criostato o fijaciones suaves con formol e inclusin en parafinas de bajo punto de fusin, para no desnaturalizar el antgeno. Tras la reaccin enzimtica los ncleos se contrastan con hematoxilina.

RESULTADOS: los puntos o clulas donde se localiza el antgeno aparecen de color marrn. Imagen: ganglio linftico de rata.

NADP - DIAFORASA

Este enzima pertenece al grupo de las deshidrogenasas, enzimas capaces de eliminar hidrgeno de los sustratos y transferirlo a otra sustancia aceptora. Las diaforasas son los enzimas que catalizan la deshidrogenacin del NADH o del

NADPH. La tcnica histoenzimtica utilizada demuestra la presencia de la NADP diaforasa en las mitocondrias de las fibras de msculo esqueltico. Se ha utilizado tejido congelado de rata, a partir del cual se han obtenido cortes de 8 micras en criostato. El sustrato utilizado ha sido NADPH y el NADP liberado se ha revelado con la sal de tetrazolio NBT. Los cortes se montan con glicerina gelatina.

RESULTADOS: azul.

mitocondrias

en

Imagen: msculo de rata.

PAS (REACCIN DEL CIDO PERYDICO- REACTIVO DE SCHIFF)

La reaccin de PAS nos revela todo tipo de carbohidratos (polisacridos, como el glucgeno, mucopolisacridos, glucolpidos, glucoprotenas etc.). Se basa en la reaccin con el reactivo de Schiff de los grupos aldehdo liberados de los grupos vic-glicol presentes en los carbohidratos tras su oxidacin con cido perydico. El reactivo de Schiff contiene fucsina bsica (o pararrosanilina), que en solucin cida y en presencia de SO2 da lugar a una forma no coloreada (cido N-sulfnico). Este reactivo reacciona con los grupos aldehdo libres formando un compuesto insoluble de color prpura. Esta tcnica se utiliza sobre cortes obtenidos de tejido incluido en parafina o de tejido congelado.

RESULTADOS: carbohidratos en color prpura. Imagen: epidermis de trucha, Salmo trutta fario.

PERLS

Esta tcnica sirve para detectar el hierro que se localiza en las clulas en forma de grnulos de hemosiderina que es insoluble, pero no detecta el hierro contenido en la ferritina que es hidrosoluble. Se utiliza sobre cortes obtenidos de tejido incluido en parafina o de tejido congelado. La reaccin de Perls se basa en la liberacin de los iones frricos asociados a protenas mediante la accin del cido clorhdrico, a su vez, los iones frricos liberados reaccionan con el ferrocianuro potsico formando un precipitado azul verdoso de ferrocianuro frrico o azul de Prusia. Tras la reaccin, los ncleos se contrastan con hematoxilina.

RESULTADOS: precipitados azul turquesa en los puntos donde se han liberado los iones frricos. Imagen: bazo de rata.

ROJO-O AL ACEITE

El rojo-O al aceite sirve para visualizar los lpidos en preparaciones histolgicas. Bajo el nombre de lpidos se rene un grupo heterogneo de sustancias que agrupa a lpidos no conjugados, como los cidos grasos y el colesterol, y a lpidos conjugados como fosfoglicridos, esfingolpidos o glucolpidos. Debido a que los lpidos son disueltos rpidamente por el alcohol durante el proceso de deshidratacin, para su visualizacin histolgica se utilizan cortes obtenidos por congelacin. El rojo-O al aceite pertenece al grupo de los lisocromos, sustancias capaces de disolverse en los lpidos y colorearlos. Los lisocromos no son colorantes en sentido

estricto, sino que se trata de sustancias coloreadas, muy solubles en lpidos, solubles tambin en sustancias no liposolubles, como alcoholes de baja concentracin, y que no se unen a otras estructuras tisulares. Para su utilizacin en la tcnica histolgica, se disuelven a saturacin en alcohol al 50% o al 70%. Los ncleos pueden contrastarse con hematoxilina. Finalmente, el montaje de la preparacin debe hacerse con glicerina-gelatina.

RESULTADOS: lipdicas aparecen

las en

gotas rojo.

Ncleos en azul. Imagen: cultivo celular de bazo de trucha arco iris.

TRICRMICO DE GOLDNER (Masson-Goldner) coloraciones tricrmicas usan dos o ms colorantes para teir

Las

diferencialmente las diversas estructuras histolgicas, segn su basofilia / acidofilia o por su apetencia por un colorante especfico. El mtodo del tricrmico de Goldner (tambin conocido como Masson-Goldner) usa hematoxilina de Groat, y los colorantes rojo fucsina Poneau (xilidina Poneau, o Poneau 2R), naranja G (en solucin de cido fosfomolbdico) y verde luz (solucin actica). Fue diseado por Masson y modificado por Goldner para distinguir las clulas de la matriz conjuntiva. RESULTADOS: estructuras basfilas (como las cromatina) de color pardo-marrn a negro, las estructuras dbilmente acidfilas de rojo a naranja y las fuertemente acidfilas (como las fibras de colgeno) de azul a verde. Imagen: glndula salival de rata.

El Microscopio
Microscopio, del griego: "mikro" = pequeo y "scope" = mirar (para mirar cosas pequeas) Un microscopio es un instrumento ptico compuesto de varias lentes que sirve para observar objetos muy pequeos. En el microscopio electrnico, los rayos luminosos del microscopio convencional son reemplazados por un haz de electrones (el aumento puede alcanzar en este caso hasta 100 veces el del microscopio convencional). Aunque la existencia de criaturas demasiado pequeas para ser vistas con el ojo haba sido sospechada desde tiempo atrs, su descubrimiento real est ligado a la invencin del microscopio. La primera persona que vio los microorganismos con algn detalle fue el constructor de microscopios aficionado Antoni van Leeuwenhoek (1632-1723); este holands us microscopios simples construidos por l mismo (se dedicaba a pulir lentes para fabricar sus microscopios que, como mucho, alcanzaran unos 300 aumentos). En 1677 escribe una carta a la Philosophical Transactions of the Royal Society of London en la que comunicaba sus recientes observaciones con los microscopios de su fabricacin. MICROSCOPIO OPTICO

TIPOS, CLASIFICACION Y PARTES BASICAS

MICROSCOPIO El microscopio ptico es el primero que se invent Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista.. Se trata de un instrumento ptico que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. El microscopio ptico puede ser monocular, y consta de un solo tubo. La observacin en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observacin se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepcin de la imagen, ms cmoda la observacin y se perciben con mayor nitidez los detalles.

Est conformado por tres sistemas:

El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes que permiten el movimiento para el enfoque.

El sistema ptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas

El sistema de iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del microscopio.

El

sistema mecnico:

Brazo.- Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el revlver. Adems sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro.

Base o pie.- Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microscopio.

Platina.- Es una pieza metlica, cuadrada, que tiene en su centro una abertura circular

por la que pasar la luz del sistema de iluminacin. Aqu se coloca el portaobjetos con la muestra a observar

Pinsas de sujecion.- Parte mecnica que sirve para sujetar la preparacin. La mayora de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance longitudinal y transversal de la preparacin.

Tornillo macrometrico: Permite hacer un movimiento rpido hacia arriba o hacia abajo del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar. Tornillo micrometrico o de enfoque suaverevolver.- Parte mecnica de movimiento giratorio que nos permite colocar en posicin cualquiera de los objetivos que se encuentran en l.

Tubo.- Parte mecnica que proporciona sostn a los oculares y objetivos.

Cremallera.- Permite que el movimiento de los tornillos macro y micromtrico sea de mayor o de menor amplitud.

El

sistema ptico-.

Ocular.- Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y ampla la imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios eran monoculares, es decir, posean una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo y se les llama binoculares.

Objetivos: Se encuentran incrustados en el revolver Son unos pequeos cilindros colocados en el revolver que proporciona el poder de resolucin del microscopio y determinan la cantidad total de aumento.

Existen

tipos

entre los

que

se

encuentran:

1.- La lupa (4 X) que sirve para hacer observaciones a bajo aumento.

2.- El objetivo seco dbil (10 X) que se utiliza para localizar la imagen que se va a observar.

3.- El objetivo seco fuerte (40 X) aumenta la imagen anterior, para poder observar se necesita primero acercar el objetivo al portaobjetos y posteriormente, enfocar el objetivo hasta que aparezca la imagen.

4.- El objetivo de inmersin (100 X) es un lente especial para observar imgenes tan pequeas como las bacterias. Y se requiere del aceite de inmersin para lograr una buena observacin.

La parte ptica del microscopio es la que determina el nmero de aumentos que presenta la imagen observada .El aumento total que permite un microscopio ptico se calcula multiplicando la magnificacin que producen el objetivo por la que producen los oculares.

Num.

del

objetivo

nm.

de

ocular

nm.

de

aumentos

Ejemplo, si estamos usando un objetivo de 40x (aumenta 40 veces) y un ocular de 10x (aumenta 10 veces), el resultado final ser de 400x, es decir, vemos la muestra aumentada 400 Seco fuerte veces. (40 x) x ocular (10 x) = 400 aumentos

Usando microscopios pticos avanzados se consiguen unos 1000-1500 aumentos (objetivo de 100x ms oculares de 10x o 15x). Algunos microscopios pticos tienen lentes internas que producen aumentos adicionales que tendremos que tener en cuenta para calcular la magnificacin de la imagen que se observa.

El

sistema iluminacin:

La fuente luminosa consiste en un espejo o una fuente de luz elctrica que dirige un haz de luz hacia el condensador.

Condensador.- Es una lente de gran abertura que permite dirigir o condensar la mayor parte de los rayos luminosos en la preparacin. En nuestro microscopio est integrado en la platina y tiene un diafragma unido en la parte inferior.

Diafragma: Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminacin del objeto a observar

Fuente de luz.- Para observar la muestra microscpica es necesario que sta se ilumine con algn tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energa elctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador.