Introduo A colorao de Gram constitui uma das tcnicas de colorao diferencial mais utilizadas em Bacteriologia e foi desenvolvida empiricamente por Hans Christian Gram, em 1884. As bactrias coradas por este mtodo podem dividir-se em dois grupos: as bactrias Gram positivas (Gram +), que retm o corante primrio (violeta de genciana), apresentando uma colorao violeta escura; as bactrias Gram negativas (Gram -), que perdem o corante primrio e so coradas pela safranina (corante secundrio), apresentando uma cor avermelhada. As explicaes mais plausveis para o esclarecimento da reao ao mtodo de Gram referem-se estrutura e composio qumica da parede celular. As bactrias Gram negativas tm uma concentrao mais elevada de lpidos quando comparadas com as Gram positivas; as suas paredes so tambm mais finas do que as paredes celulares dos microrganismos Gram positivos. O iogurte um produto coagulado obtido atravs da fermentao lctica do leite pela aco das bactrias das espcies Lactobacillus bulgaricus e Streptococcus thermophilus. Ambas as espcies apresentam, frequentemente, cadeias longas e desenvolvem-se bem em meios cidos 2. Objetivos: 1.1 Selecionar o material adequado execuo e observao de uma preparao microscpica. 1.2 Descrever o procedimento necessrio para a execuo de uma preparao e posterior observao microscpica. 1.3 Executar uma preparao microscpica com recurso s tcnicas do esfregao, fixao pelo calor e colorao diferencial, aplicando a tcnica de Gram. 1.4 Classificar as bactrias com base na sua resposta tcnica de colorao de Gram e explicar o comportamento verificado. 1.5 Inferir da importncia desta classificao para a medicina. 12A
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Verificar significados 3. Escrever breves descries dos seguintes termos: Termos (s) Bactria Breve descrio
Clula procaritica
Parede celular
Preparao microscpica
Colorao de Gram
Tcnica de esfregao
Tcnica de fixao
Colorao diferencial
Corante primrio
Mordente
Diferenciador
Antibitico
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4.1- Colocar uma gota de gua destilada numa lmina seca. 4.2 -Retirar um pouco de iogurte com uma ansa de inoculao. 4.3 - Colocar o material sobre a gota de gua na lmina e efetuar a tcnica do esfregao. 4.4 - Fixar o esfregao pelo calor. 4.5 - Adicionar umas gotas de lcool para retirar o excesso de gordura e secar ao ar. 4.6 - Corar o esfregao com violeta de genciana durante 1 minuto. Remover o corante com gua destilada e secar cuidadosamente com papel. 4.7 - Cobrir o esfregao com soluto de Lugol e deixar atuar durante 1 minuto. 4.8 - Escorrer o soluto de Lugol, descorar com lcool e lavar de seguida com gua destilada. 4.9 -Corar o esfregao com soluo de safranina durante 2 minutos. 4.10 - Lavar o esfregao com gua destilada e secar cuidadosamente com papel. 4.11 Colocar a lmina no microscpio e, sem colocar lamela, proceder sua focagem com as objetivas de menor ampliao. 4.12 Colocar uma ou duas gotas de leo de imerso sobre o esfregao e observar com a objetiva de imerso (100x). 4.13 Aps a observao e respetivo registo proceder limpeza da objetiva de imerso com algodo embebido num pouco de xilol. 5. Analisar o procedimento descrito nos pontos 4.1 a 4.13 e descrev-lo resumidamente. 6. Executar e observar ao microscpio a preparao efetuada, com recurso objetiva de imerso. 7. Efetuar o registo da observao atravs de um esquema legendado. 8. Classificar as bactrias em Gram positivas ou Gram negativas tendo em conta a colorao apresentada. 9. Explicar o comportamento das bactrias em funo do processo de colorao utilizado. 10. Explicar a funo dos diversos reagentes utilizados. 11. Justificar em que medida o Mtodo de Gram trouxe vantagens para um melhor conhecimento das bactrias e inferir da sua importncia deste conhecimento na Medicina.
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