Universidad Nacional Autnoma de Nicaragua-Len Departamento de Agroecologa Area de Fitopatologa

Uso de nematodos entomopatgenos como controladores biolgicos de insectos plagas

M. Sc. Wilber Salazar A.

Profesor de Fitopatologa

Octubre de 2007
Generalidades

Los nematodos entomopatogenos son organismos de suelo capaces de causar enfermedades en insectos que petenecen al phylum nematoda. El termino entomopatogenico viene el griego entomon que significa insecto y pathos dolor o enfermedad. Aunque hay muchos nematodos parasticos que causan enfermedades en plantas, animales y humanos, los nematodos entomopatgenos como su nombre los implica causan enfermedad solamente en insectos. Este tipo de nematodos, viven dentro del cuerpo de sus hospederos por lo que se les conocer como endoparasticos. Estos organismos han sido encontrados en una gran diversidad de habitat, desde campos cultivados hasta desiertos. Los nematodos que parasitan insectos han sido conocidos desde el siglo 17, sin embargo; fue hasta en 1930 que se les considero seriamente como una opcin para el control de insectos. En 1929, se encontr que un nematodo estaba infectando larvas del escarabajo japons ( Popillia japonica). Ese nematodo fue ese mismo ao descrito como Eoaplectana glaseri, nombre que mas tarde cambiara a Steinernema glaseri. Alrededor de 1930 se realizaron estudios de campo para probar la efectividad de este nematodo como controlador del escarabajo japons, esto estudios se realizaron en 73 localidades en New Jersey. Larvas de este escarabajo fueron encontradas infectadas con el nematodo en 72 de 73 localidades despus de dos semanas de aplicadas. El porcentaje de parasitismo oscil entre 0.3-81%. Estudio de persistencia demostraron que los nematodos podan persistir en las parcelas por 8.5 aos. En nuestro pais, el uso de nematodos como agentes de control biolgico es muy escaso, lo que ha hecho que su utilizacin sea prcticamente inexistente con algunas excepciones como es el caso de algunos ingenios azucareros. Sin embargo, el poco conocimiento de esta alternativa de control biolgico no reduce su efectividad y alta utilidad dentro del Manejo Integrado de Plagas. Los efectos adversos del uso indiscriminado de los insecticidas qumicos han creado una situacin, en la cual los insecticidas biolgicos surgen como una alternativa promisoria. La agricultura moderna exige la utilizacin de productos qumicos seguros al ambiente, con baja toxicidad, corta persistencia en el suelo y baja movilidad para prevenir la contaminacin de las aguas subterrneas. El manejo de plagas de suelo reviste un reto puesto que requiere que el producto utilizado para el control de la plaga sea mezclado con agua y

luego sea aplicado al suelo para que se introduzca en el mismo tan profundamente como sea posible. Esto ltimo aunque positivo para el manejo de insectos es negativo al medio ambiente puesto que incrementa la probabilidad de contaminacin de las aguas subterrneas. Una opcin para reducir este problema productivo, que al mismo tiempo es un problema ambiental, es la patologa de insectos. Esta ciencia estudia las enfermedades de los insectos, utilizndolas para el control de insectos plaga. Este mtodo de control consiste en usar racionalmente los patgenos para mantener poblaciones de plagas a un nivel que no cause dao econmico. Los insectos pueden ser atacados por virus, bacterias, hongos, protozoarios y nematodos. En este ltimo caso, se les denomina nematodos entomopatgenos, los cuales estn siendo usados para controlar plagas en cultivos de alto valor comercial y podrn ser usados muy pronto a gran escala en programas de manejo integrado, o en pequeas plantaciones comerciales, granjas y sistemas de agricultura sustentable.

Clasificacin
Por mucho tiempo el gnero Steinernema sp fue el nico clasificado en la familia Steinernematidae, sin embargo; tiempo despus fue identificado el gnero Neosteinernema sp el cual fue encontrado parasitando termitas. En 1976 fue descrito un nuevo gnero de nematodo entomopatogeno, Heterorhabditis bacteriophora, el cual fue clasificado en una nueva familia Heterorhabditidae la cual posee actualmente las especies ms importantes de nematodos entomopatogenos. Las familias taxonmicas mas utilizadas en el control biolgico de insectos, son las de la clase Adenophorea: Mermitidae y de la clase Secernentea: Steinernematidae y Heterorhabditidae. Actualmente se conocen 24 especies del gnero Steinernema y ocho especies del gnero Heterorhabditis. Los nematodos pertenecientes a la clase Adenophora durante su estado infectivo son de vida libre en el suelo o el agua. Los nematodos entomopatgenos se caracterizan por su asociacin mutualstica con bacterias especficas del gnero Xenorhabdus sp y Photorhabdus sp para Steinernematidae y Heterorhabditidae, respectivamente.

A continuacin se presenta una descripcin de las caractersticas ms importantes en relacin a los dos gneros de nematodos entomopatgenos ms importantes.

Steinernema sp A nivel mundial este nematodo es el ms ampliamente investigado entre los nematodos entomopatgenos. Adems de esto, es el que se encuentra generalmente ms disponible para aplicaciones debido a que es fcil de producir y manejar. En aplicaciones en campo se ha comprobado que Steinernema carpocapsae es el que ha mostrado mas efectividad contra las larvas de lepidpteros. Las caractersticas morfolgicas distintivas del gnero Steinernema sp son que los nematodos machos no poseen bursa, poseen espculas incoloras o gris, poseen un apndice en la cola y poseen una espina retrctil en la punta de la cola. Una de las caractersticas fundamentales es la presencia de un poro excretor localizado en posicin anterior al anillo nervioso. Estos nematodos no poseen esclerotizacin en la cabeza. Plaga que controla, Diatraea sp. Heterorhabditis sp Estos nematodos son menos disponibles que Steinernema sp debido a que es mas difcil de criar y es mas susceptible a condiciones ambientales adversas. Sin embargo, pruebas de campo han demostrado consistentemente que este gnero supera a Steinernema sp en su eficiencia para el control de algunos insectos. Los nematodos que pertenecen al gnero Heterorhabditis sp se caracterizan por tener machos que poseen bursa, espculas apareadas y separadas. Una de las caractersticas fundamentales de este gnero es que poseen el poro excretor localizado posterior al anillo nervioso y poseen esclerotizacin en la cabeza. Plaga que controla, Phyllophaga sp. El primero steinernema y el segundo

Heterorhambidits sp Heterorhabditis sp

Ciclo de vida
Los ciclos de vida de los nematodos pertenecientes a las familias Steinernematidae y Heterorhabditidae son muy similares. El ciclo de vida empieza con un juvenil infectivo cuya funcin es buscar e infectar hospederos. Los juveniles infectivos entran al insecto hospedero a travs de las aberturas naturales (boca, ano y espirculos) y penetra al hemocele. En ocasiones, pueden penetrar tambin a travs de las reas intersegmentales hasta el hemocelo. Una vez que el nematodo ha entrado en el insecto, libera una bacteria a la cual se encuentra asociado de manera mutualistica. Estas bacterias pertenecen a los gneros Xenorhabdus o Photorhabdus las cuales estn asociadas a los nematodos Steinernematidae y Heterorhabditidae respectivamente, causando la muerte de los insectos en 48 horas. Los nematodos proveen de proteccin a la bacteria, la cual a su vez mata al insecto hospedero y provee nutrientes al nematodo. Posteriormente, el nematodo y la bacteria se alimentan de los tejidos del insecto y se reproducen por muchas generaciones dentro del tejido del insecto. En el caso de juveniles de Steinernematidae estos se pueden convertir machos o hembras, mientras que los juveniles de Heterorhabditidae se convierten hermafroditas los que generan nematodos con ambos sexos. Cuando la disponibilidad de alimentos en el insecto hospedero se vuelve escaso, los adultos producen nuevos nematodos juveniles infectivos los cuales son capaces de adaptarse a las condiciones adversas que son frecuentes en el medio ambiente exterior. Entre las caractersticas que

permiten a los nematodos sobrevivir en condiciones hostiles estn la utilizacin de reservas alimenticias, poseen doble cutcula y otras adaptaciones fisiolgicas y morfolgicas. Despus de una semana, cientos de miles de nematodos juveniles infectos emergen y inician las bsqueda de nuevos hospederos, en esta bsqueda los nematodos llevan consigo su respectiva bacteria mutualstica. Una vez en el hemocele, los juveniles liberan las bacterias, las cuales se multiplican y matan al insecto en 48 horas. Los nematodos se alimentan de las clulas bacterianas y degeneran el tejido del hospedero, produciendo dos o tres generaciones y emergiendo del cadver los juveniles para buscar nuevos hospederos. Cada juvenil de Heterorhabditidae, tiene el potencial de reproduccin, porque se desarrolla en un individuo hermafrodita en la primera generacin.

Estrategias alimenticias de nematodos entomopatgenos

La estrategia de bsqueda de alimentos de los nematodos entomopatgenos vara entre especies e influencia su distribucin en el suelo y la preferencia de sus hospederos. Los juveniles infectivos usan estrategias para encontrar sus hospederos los cuales varan desde emboscadas hasta busqueda activa. Los nematodos que emboscan a sus presas tales como Steinernema carpocapsae y Steinernema scapterisci, tienen una estrategia de "inmovilidad y espera," y tienden a permanecer cerca de la superficie del suelo, atentos para adherirse a los insectos pasan caminando sobre el suelo, los cuales usualmente son mucho mas grandes que ellos y se alimentan sobre la superficie del suelo. Algunas especies del gnero Steinernema son capaces de saltar y adherirse a los insectos que caminan sobre la superficie del suelo. Esto lo logran formando un aro con su cuerpo y almacenando energa en su cuerpo la cual al ser liberada los propulsa por los aires permitiendo adherirse a los insectos. Otras especies de nematodos como Heterorhabditis bacteriophora, tienen una estrategia activa de bsqueda de sus hospederos dentro del suelo. La mayora de los nematodos con esta estrategia tienden a ser altamente mviles y responden a los estmulos qumicos del hospedero y estn adaptados a insectos menos mviles en el suelo. Cabe sealar que las dos estrategias representan los extremos en el comportamiento de los nematodos entomopatgenos, pero es importante reconocer que existe un gradiente entre estos dos extremos. La estrategia de alimentacin de los nematodos define el rango de hospederos que atacaran, de esta manera los nematodos como que usan inmovilidad y espera parasitan insectos comunes en la superficie del suelo. Nematodos que usan una estrategia activa parasitan principalmente insecto que se mueven a mayor profundidad en el suelo.

La efectividad y persistencia de los nematodos entomopatgenos depende principalmente de condiciones favorables del suelo. La falta de humedad, la exposicin a la luz y las temperaturas extremas, constituyen los factores determinantes que disminuyen la probabilidad de xito al usarlos. El consenso general es que los principales factores que afectan la infectividad de nematodos entomopatgenos son: el tipo de suelo, tamao de la partcula del suelo, potencial de humedad del suelo y temperatura. Por otra parte, algunos nematodos entomopatgenos poseen mecanismos de sobrevivencia que les permiten permanecer largos perodos en el ambiente: tolerancia osmtica, a las temperaturas extremas (fro y calor), a la desecacin, resistencia a los plaguicidas y limitaciones de aireacin.

Competencia y coexistencia
Dentro de los insectos hospederos los nematodos entomopatgenos experimentan competencia intraespecifica e interespecifica. La competencia intraespecifica se lleva a cabo entre nematodos de la misma especie, cuando el numero de juveniles infecivos que penetran un insecto excede la cantidad de alimento disponible. La competencia interespecifica ocurre cuando la competencia se lleva a cabo entre nematodos de diferentes especies las cuales compiten por los mismos recursos. En ambos casos los nematodos compiten entre si indirectamente al consumir los mismos recursos, lo cual puede causar la extincin de una de las especies dentro del hospedero. La competencia por interferencia puede tambin ocurrir en la cual una especie interfiere en la habilidad de otra de parasitar un insecto. e.g. un nematodo de la familia Steinernematideae que parasita un hospedero usualmente es capaz de excluir especies de la familia Heterorhabditidae si estos llegan despus. Esto lo logran gracias a los antibiticos producidos por la bacteria Xenorhabdus sp que habita simbiticamente com nematodos de la familia Steinernematidae. Estos antibiticos impiden que la bacteria simbitica de los nematodos de la familia Heterorhabditidae pueda desarrollarse y multiplicarse. Para evitar este tipo de competencia, algunas especies de nematodos hacen un anlisis previo de la calidad del hospedero a infectar. Los juveniles infectivos de Steinernema carpocapsae no parasitan insectos que tengan mas de 24 horas de haber sido parasitado. Esta repelencia se puede deber al olor liberado por la bacteria mutualistas del nematodo que parasito primero al insecto.

Competencia interespecifica entre nematodos de diferentes especies puede ocurrir en el suelo. Se ha demostrado por ejemplo que la introduccin del nematodos Steinernema riobrave significativamente reducen las poblaciones del nematodo Heterorhabditis bacteriophora, pero nunca los elimin completamente del suelo a pesar de ser introducido frecuentemente por 2 aos. Por otro lado, la introduccin continua de S. riobrave no tuvo ningn efecto sobre poblaciones de nematodos nativos, como es el caso de S. carpocapsae, lo que sugiere que es posible que nematodos de diferentes especies coexistan en el mismo espacio. Otros factores que influyen y favorece la coexistencia de nematodos es los diferentes nichos ecolgicos donde los nematodos viven, diferentes estrategias de alimentacin y la distribucin focalizada lo que limita la interaccin que pudiera ocurrir entre nematodos.

Distribucin de nematodos entomopatgenos en el campo

Los nematodos entomopatognicos usualmente son encontrados distribuidos focalizados en el campo. Esta distribucin vara entre especies. Algunos factores que influyen en la distribucin focalizada de estos nematodos son el comportamiento de cada especie, la variabilidad espacial y temporal de los enemigos naturales de los nematodos, como los hongos que atrapan nematodos. Los nematodos tambin tienen una limitada habilidad para dispersarse, e.g. Muchos nematodos infectivos provenientes de un insecto parasitado pude producir un foco en el campo. Otro factor que puede influir en la distribucin no uniforme de los nematodos es la heterognea distribucin de los hospederos y nutrientes en el suelo. Algunos estudios recientes sugieren que los nematodos entomopatgenos podran estar usando insectos no hospederos como lombrices para transportarse de un lugar a otro.

Simbiosis nematodo-bacteria
El modo de accin de estos nematodos incluye la introduccin de una bacteria simbionte en la cavidad del insecto, la cual destruye los tejidos internos del insecto parta crear un medio favorable para alimentarse y reproducirse. Estos nematodos son los nicos patgenos de insectos con un amplio rango de hospederos que incluye a la mayora de los rdenes de insectos y pueden ser multiplicados artificialmente a gran escala en medio lquido o slido. Los nematodos de las familias Heterorhabditidae y Steinernematidae estn simbiticamente asociados con bacterias del gnero Photorhabdus sp y Xenorhabdus sp respectivamente. Los juveniles infectivos de estos nematodos llevan las clulas de sus bacterias simbiontes en la parte

anterior del intestino. Independientemente de la presencia de la bacteria simbitica, los nematodos Steinernematidae desarrollan una vescula intestinal durante la formacin del estado infectivo, la cual almacena las clulas bacteriales. Los Heterorhabditidae no poseen esta estructura y las clulas de Photorhabdus sp. estn distribuidas en el lumen del intestino, a menudo rodeadas de una especie de membrana de origen desconocido. La simbiosis mencionada es indispensable para que el insecto se enferme y muera. Existen muchas asociaciones entre los nematodos y los insectos, siendo las ms importantes: a) parasitismo facultativo y b) parasitismo obligado. Los nematodos son atrados hacia los insectos por la presencia de CO2, la temperatura del cuerpo del insecto, la presencia de la bacteria Xenorhabdus nematophlus, componentes fecales del insecto, el insecto hospedero y el plasma del insecto hospedero. El grado de esta atraccin vara entre las especies del insecto.

Cra masiva
Los nematodos entomopatgenos pueden ser multiplicados in Vivo en un insecto hospedero. En general se puede afirmar que todas las especies de Steinernematidae y Heterorhabditidae pueden ser multiplicadas en insectos. La polilla de la cera, Galleria mellonella (L.) (Lepidptera: Pyralidae) la cual habita en las colmenas de los apiarios, pueden ser fcilmente criadas en cera y polen. Sin embargo, ha sido utilizado tambin para su produccin diferentes tipos de dietas entre las que podemos mencionar una combinacin de germen de trigo, miel, afrecho etc. La produccin masiva de G. mellonella no necesita requerimientos especiales y una larva de G. mellonella puede producir hasta 200.000 juveniles infectivos de nematodos. Para mantener una produccin de nematodos entomopatgenos en el laboratorio, es necesaria la cra de un hospedero de los mismos, que nos permita obtener grandes cantidades del tercer estadio de los juveniles, el cual es el estadio infectivo. Varios hospederos alternativos se conocen para este fin, entre ellos Spodoptera frugiperda (Smith), (Lepidptera: Noctuidae) han sido usados para la cra de nematodos de una manera econmica. Sin embargo, la polilla de la cera G. mellonella, es la comnmente usada, debido a que se consigue con facilidad en los apiarios, es muy susceptible a la infeccin por el nematodo y muestra una diagnosis muy fcil de los sntomas de infeccin, as como la facilidad de criarla en el laboratorio sin equipos costosos.

Control biolgico usando nematodos entomopatogenos

A pesar de que el control biolgico de insectos utilizando nematodos ha sido conocidos desde la dcada de los ochenta, muy poco se conoce acerca de su biologa en ecosistemas naturales y agroecosistemas. Las interacciones entre los nematodos y sus hospederos son pobremente entendidos y muchos de los insectos que pueden ser controlados usando nematodos aun permanecen sin estudiar. La falta de conocimiento en relacin a la ecologa de los nematodos ha hecho que muchos intentos de utilizacin de nematodos como controladores biolgicos hayan sido fallidos. Esto se puede deber a que en algunos casos los nematodos son incapaces de nadar lo que les imposibilita nada y atrapar larvas de mosquito. Otros nematodo son altamente sensibles a la luz solar y la desecacin lo que hace que su uso como controladores biolgico de insectos foliares sea difcil. Los insectos susceptibles a ser controlados con nematodos entomopatgenos de la familia Mermithidae son aquellos que pasan un estadio de su ciclo en depsitos de agua (charcos, lagunas, aguas estancadas), especialmente aquellas especies dpteras de importancia, por causar problemas de salud pblica. Las familias Heterorhabditidae y Steinernematidae son usadas principalmente en cultivos agrcolas en aquellos insectos que poseen un estadio susceptible en el suelo o en la superficie del mismo; por ejemplo, el gusano cortador: Agrotis ipsilon (Hufnagel) (Lepidptera: Noctuidae), y Diatraea saccharalis Fabricius (Lepidptera: Pyralidae). Para el manejo de insectos usando nematodos entomopatogenos se han integrado algunas estrategias de uso para emplearlos en el control de plagas, bajo diferentes situaciones. Estas estrategias fueron desarrolladas para otros mtodos de control, pero pueden se adaptados para el caso de nematodos entomopatogenos. 1. Desinfeccin de partes vegetativas de plantas usadas para la propagacin. Muchas plantas que son propagadas vegetativamente, utilizando races laterales, cormos o esquejes pueden estar infestadas por insectos. Los nematodos entomopatgenos pueden ser usados para desinfestar estas partes, particularmente si estn infestadas por lepidpteros taladradores, los cuales, por lo general hacen galeras que son fcilmente penetradas por los nematodos. Un caso exitoso es el uso de Steinernema feltiae para el manejo Diatraea saccharalis en estacas caa de azcar.

2. Trampas en los cultivos para atraer a los insectos y luego aplicarles los nematodos. En este caso, se aplican los nematodos en cultivos que han sido sembrados previamente para atraer la plaga de otro cultivo; por ejemplo, el maz es usualmente atacado primero por Helicoverpa zea Boddy (Lepidptera: Noctuidae), una plaga del tomate. Aplicando Steinernema carpocapsae al maz se controla la plaga en maz y no en el tomate. 3. Trampas o cebos para atraer los insectos a la fuente de los nematodos. Este es un mtodo muy usado con productos qumicos. En este caso, se reemplazan los qumicos por nematodos entomopatgenos y se transforman en una trampa biolgica. Es muy usado contra el picudo negro del pltano Cosmopolites sordidus (Schmith) (Coleoptero: Curculionidae) utilizndose discos de pseudos tallo de musaceas donde se aplican los nematodos para luego ponerlos en los campos y esperar que sean colonizados por los picudos. 4. La tcnica de "Los nematodos primero" (antes que los insectos sean detectados). Se basa en el principio de que los nematodos sobreviven por un largo perodo en el suelo e infectarn a una plaga en el momento que sta invada el rea donde los nematodos han sido colocados. Se usa en el caso de terrenos donde se colocan plntulas jvenes, alrededor de semilleros o como una barrera en el suelo a plagas que pupan en el mismo; Ejemplo, aplicacin de nematodos al suelo y posteriormente siembra caa de azcar con el fin de controlar la gallina ciega Phyllophaga spp (Coleoptero: Scarabeidae) 5. Incremento de la susceptibilidad de los insectos a los nematodos, mediante estrs. Aqu se incluyen factores ambientales, fsicos, qumicos y biolgicos, los cuales pueden predisponer al insecto a la infeccin por el nematodo. Es muy comn el caso de insectos que han sido debilitados por residuos de insecticidas o por otras enfermedades (bacterias, virus), hacindolos ms susceptibles al ataque de los nematodos. 6. Combinacin nematodos con otros agentes de control. Cuando se incluyen otras especies de nematodos y otros controladores biolgicos, principalmente hongos y virus, puede incrementarse la eficacia total de un control contra una especie de plaga. La combinacin de nematodos entomopatgenos con otros agentes biolgicos, como por ejemplo, el uso del hongo Beauveria bassiana (Bals. Criv.) Vuill y Heterorhabditis bacteriophora, produce una mortalidad mayor que cuando se usan por separado. La combinacin de nematodos y de Bacillus thuringiensis Berlliner tambin ofrece la posibilidad de controlar diferentes especies en una misma aplicacin, ya que la bacteria ataca sobre el suelo (larvas de

lepidptero) y el nematodo a las plagas que habitan el suelo (larvas de coleptero). Un ejemplo de esta prctica es el uso de la bacteria Bacillus thuringiensis Berliner y Heterorhabditis bacteriophora contra Trichoplusia ni (Hubner) (Lepidptera: Noctuidae) en las hojas y larvas de Phyllophaga spp en el suelo.

Ventajas y desventajas
Ventajas del uso de nematodos entomopatgenos * Resisten a algunos qumicos usados en la agricultura. * Poseen efecto sinergstico con otros agentes entomopatgenos. * Poseen un alto ndice de mortalidad que provocan. * Poseen buena capacidad de adaptacin a nuevos ambientes. * Tienen la capacidad de movilizarse en el ambiente y de buscar a su hospedero. * No causan dao a las plantas ni a los mamferos. *Algunos nematodos pueden reproducirse en ausencia de machos (Partenogennesis) Desventajas del uso de nematodos entomopatgenos * Dificultad para obtener las cantidades elevadas de poblaciones de nematodos necesarias para el control, dentro de un lmite econmico aceptable. * Aplicaciones de poblaciones de nematodos en condiciones ambientales desfavorables, lo cual conduce a fracasos inesperados o aparentemente inexplicables. * La existencia de un mecanismo de defensa por parte del insecto hospedero hacia los nematodos.

Ejemplo de dos productos comerciales en base a nematodos entomopatogenos Ingrediente activo Nmero de nematodos Area a aplicar Precio

Steinernema sp Steinernema sp Steinernema sp Steinernema sp Heterohabditis bactereophora H. bactereophora H. bactereophora H. bactereophora

10 mil 50 mil 100 mil 200 mil 10 mil 50 mil 100 mil 200 mil

(900/2500 sq ft) 1/4 acre 1/2 acre 1 acre 2200 sq ft 4400 sq ft 1/2 acre 1 acre

$24.90 $54.00 $99.00 $190.0 0 $25.90 $54.00 $104.0 0 $196.0 0