Mtodos diagnsticos en Gentica Clnica

Dra. Norma Elena de Len Ojeda MsC. Mayra Hernndez Iglesias Lic. Lourdes Marrn Portales MsC. Marta Mara Acosta Sabats

Dermatoglifos
Grabado en la piel. Harold Cummins ( 1926)

La evidencia ms antigua que se conoce de las huellas digitopalmares fue encontrada en una cueva aborigen de Nueva Escocia. Durante siglos los chinos utilizaron la impresin de las huellas como identificacin personal para legalizar transacciones comerciales. La quiromancia fue la primera referencia al examen sistemtico de la mano y sus configuraciones, su prctica en China e India se remonta a los albores del siglo IV a.c.

Aplicaciones de los Dermatoglifos

Medicina Forense: En dactiloscopia para la identificacin personal. Antropologa Fsica: Para el estudio de marcadores dermatoglficos en poblaciones humanas. Estudio de gemelos: Como elemento de ayuda en la determinacin de la cigocidad gemelar. Paternidad: Como recurso excluyente o ms probable en una relacin de parentesco de primer grado.

En gentica mdica son empleados especficamente en el estudio de:

Anomalas y variantes dermatoglficas. Enfermedades monognicas. Enfermedades multifactoriales.

Tcnica de obtencin del dermatoglifo

Materiales
Tinta

Rodillo Lmina de cristal Papel Lpiz Lupa Microscopio estereoscpico

Huella digitopalmar

Crestas drmicas

Nomenclatura
Trirradio: Sistema de crestas que confluyen en un punto

Dedos:

Bucle ulnar (U)

Bucle radial (R)

Vorticilo (W)

Arco (A)

Nomenclatura (cont.) Areas palmares Tenar Hipotenar Espacios Interdigitales Pliegues de flexin palmares

rea Tenar
Figuras verdaderas

Bucle proximal

Figura compuesta

Bucle distal

Vorticilo

rea Tenar
Figuras no verdaderas

Campo abierto

Vestigio

rea Hipotenar
Figuras verdaderas

Bucle radial

Bucle carpal

Bucle ulnar

Vorticilo

rea Hipotenar
Figuras no verdaderas

Arco ulnar

Arco carpal

Arco radial

Espacios interdigitales
Figuras verdaderas

Bucle

FiguraD

Vorticilo

Lneas principales: A, B, C y D.

Constituyen el radiante mayor de cada trirradio subdigital. Su salida de la palma se designa como tipo modal de lnea principal (A, B, C, D).

Parmetros cuantitativos.

ndice de Walker

Conteo de crestas ab, bc y cd.

ngulo atd

ndice de lneas principales

Pliegues de flexin palmares

Distal Transverso Proximal

Surco simiano

Lnea de Sydney

Informe dermatoglfico
Dedos: 1 2 3 W R U 4 U 5 U

Mano control

IW= 12,3% t atd= 40 Area tenar= 0/0 Area hipotenar = Au Espacios Interdigitales I2=0 I3=L I4=0 Pliegues de flexin palmares y digitales = n/s Conclusiones: Dentro de lmites normales.

Sndromes con patrones dermatoglifcos Alteraciones dermatoglficas en Sndromes Genticos

I- Craneosinostosis II- Extremidades con/sin defectos faciales III- Secuencias disruptivas IV- Cardiopatas congnitas V-Displasias neuroectodrmicas

Continuacin

VI- Baja talla con/sin displasia esqueltica VII- S. Sobrecrecimiento con defectos asociados VIII- S. Craneodigitales IX- S. Cromosmicos

CROMOSOMAS HUMANOS

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos. Tipos de cromosomas. Cariotipo.

Obtencin de cromosomas.

Tipos de cromosomas. Cariotipo. Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y. Obtencin de cromosomas. Cromatina sexual. Cuerpo Barr .

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Citogentica
Tipos de cromosomas. Cariotipo. Obtencin de cromosomas.

Ciencia que estudia los Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y. cromosomas y el proceso de divisin celular

Obtencin de cromosomas humanos

Tipos de de cromosomas. Toma muestra porCariotipo. puncin venosa 0C Cultivo de sangre en incubadora a 37 Obtencin de cromosomas. durante 72 horas Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y. Medio de cultivo Fitohemaglutinina Colchicina o Colcemid Solucin hipotnica Fijacin

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Tipos de Cromosomas

Metac ntricos: Centrmeros en posicin medial Tipos de cromosomas. Cariotipo. del cromosoma, definiendo brazo corto (p) y brazo Obtencin de cromosomas. largo (q) Cromatina sexual. Cuerpo y cuerpo Y. Submetac ntricos : CentrBarr mero desplazado de la posicin medial. Acrocntricos: Centrmero casi terminal y se define en el brazo corto (p) con tallos y satlites

Clasificacin de los cromosomas

Grupo A:cromosomas. pares 1 - 3 Cariotipo. Tipos de Grupo B: pares 4 - 5 Obtencin de cromosomas. Grupo C: pares 6 - 12 (incluyendo el X) Cromatina sexual. Cuerpo Grupo D: pares 13 - 15 Barr y cuerpo Y. Grupo E: pares 16 - 18 Grupo F: pares 19 - 20 Grupo G: pares 21 - 22 (incluyendo el Y)

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Definicin de Banda
Tipos de cromosomas. Cariotipo. Es una parte del cromosoma que se distingue Obtencin de cromosomas. claramente de su segmento adyacente mediante una apariencia ms oscura clara Cromatina sexual. Cuerpo Barr y ms cuerpo Y.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Tipos de cromosomas. Cariotipo. Obtencin de cromosomas. Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Concepto de cariotipo
Tipos de cromosomas. Cariotipo.

Es el ordenamiento de los cromosomas Obtencin de cromosomas. de acuerdo a criterios internacionalmente Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y. establecidos Los cromosomas se clasifican por pares en grupos denominados por letras de la A a la G

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos. CARIOTIPO 46, Tipos de cromosomas. Cariotipo. Obtencin de cromosomas. Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.

XX

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos. CARIOTIPO 46, XY Tipos de cromosomas. Cariotipo. Obtencin de cromosomas. Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

ESTUDIO DE LA CROMATINA SEXUAL

Tipos de cromosomas. Cariotipo.

Toma de muestra por raspado de la Obtenci n de cromosomas. mucosa oral. Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y. Extensin el lminas portaobjetos. Coloracin. Observacin al microscopio.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Corpsculo o cuerpo Barr:

Tipos de cromosomas. Cariotipo.

Uno de los cromosomas X, el que completa su Obtencin de cromosomas. replicacin ms tarde que su homlogo, queda Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y. condensado e inactivo durante la interfase de clulas somticas. # cuerpos Barr = # cromosomas X 1

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Tipos de cromosomas. Cariotipo. # cuerpo Barr Hembra Varn Obtencin de cromosomas. 0 45,X 46,XY 1 46,XX Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y. 47,XXY 2 47,XXX 48,XXXY 3 48,XXXX 49,XXXXY

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

CUERPOS DE BARR Tipos T de C cromosomas. N I C A A CCariotipo. E T O O R C E N A

Obtencin de cromosomas. Cromatina sexual. Cuerpo Barr y cuerpo Y.

Tcnicas para el estudio de los cromosomas humanos.

Ventajas de la tcnica de Cromatina Tipos de cromosomas. Cariotipo. Sexual:

Obtencin de cromosomas. Cuerpo Barr y cuerpo Y. 1-Cromatina Rpida ysexual. sencilla. 2- Se realiza en ncleos interfsicos . 3- No requiere de cultivo de clulas. 4- Da el estado de los cromosomas sexuales de forma inmediata.

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Tecnologa del ADN recombinante

Hibridacin molecular. Southern blot. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Diagnstico prenatal de enfermedades monognicas en Cuba

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Tecnologa del ADN recombinante Obtencin de un segmento especfico de ADN del genoma humano Unin de este segmento a una molcula de ADN de un microorganismo Obtencin de mltiples copias del segmento de ADN humano que se estudia

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Herramientas 1.Enzimas de restriccin 2.Un vector 3.Sondas, probes y oligonucletidos

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Enzimas de restriccin. Producidas por las bacterias. Tienen la propiedad de degradar o destruir todo ADN extrao que penetre en ellas. Este mecanismo se conoce como RESTRICCIN

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN Vector

Se emplean (virus, cromosomas artificiales de levadura o plsmidos) para introducir un segmento de ADN en el ADN de otra clula o una bacteria. Propiedades Que se REPLIQUE Que se pueda DETECTAR Que se pueda INTRODUCIR en una clula

Pruebas de laboratorio para el estudio del ADN

Sondas de cidos nucleicos

Hebra de ADN marcada con sustancias fluorescentes o radiactivas que se hibridiza con la hebra complementaria del fragmento de ADN objeto de estudio.

Hibridacin con sondas o Southern blot

etapas:
Digestin del ADN con enzimas de restriccin tras conseguir extraer un ADN de alta pureza. Separacin de los fragmentos obtenidos por medio de una electroforesis en gel de agarosa. Desnaturalizacin de los fragmentos separados y cortados. Transferencia de las cadenas simples a una membrana de nitrocelulosa o nylon y fijacin de las mismas por medio de calor (80C).

Prehibridacin con sondas de ADN inespecfico para bloquear los lugares de unin inespecficos que pudiera haber en la membrana. Marcaje de la sonda con nucletidos radioactivos (P 32 normalmente). Hibridacin de la sonda marcada y desnaturalizada con los fragmentos de ADN fijados a la membrana, y lavado de la membrana para eliminar el exceso de sonda o aquellas que hayan hibridado mal. Revelado en placa radiogrfica e interpretacin de los resultados.

Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Esta tcnica fue ideada en 1989 por Kary B. Mullis que obtuvo el premio Nobel de Qumica en 1993 por dicho invento. Permite amplificar ms de un milln de veces un ADN obtenido a partir de una regin seleccionada del genoma, siempre y cuando se conozca su secuencia de nucletidos. El uso de la PCR permite amplificar muestras tan mnimas como pueden ser clulas de la raz del pelo, una minscula mancha de sangre o semen e incluso caspa son suficientes en muchos casos para llevar a cabo un anlisis de identificacin gentica.

Fases o pasos de la reaccin en cadena de la polimerasa

1. Desnaturalizacin: Se produce la separacin de las dos cadenas de ADN a temperaturas entre 90 y 95 C 2. Hibridacin: Se disminuye la temperatura entre 40 y 60 C para producir la unin de los primers a las secuencias flanqueantes del fragmento que se va a amplificar. 3. Extensin: La Taq polimerasa incorpora nucletidos en el extremo 3' del primer utilizando como molde la cadena de ADN previamente desnaturalizada. La Taq polimerasa alcanza su mxima actividad a los 72C.

Descripcin de la reaccin en cadena de la polimerasa

Lectura de los resultados de la PCR La forma ms habitual conlleva

Separacin electrofortica de los fragmentos

amplificados en un gel de agarosa Tincin con bromuro de etidio (u otro colorante fluorescente o radioactivo) Observacin final en transiluminador con luz ultravioleta

Ventajas de la PCR
Permite amplificar muestras mnimas parcialmente degradado.

o en casos en los que el ADN est

Permite obtener en poco tiempo un elevado nmero de copias de la secuencia de ADN que es objeto de estudio. Permite la determinacin y agrupacin allica en clases discretas, lo que facilita la elaboracin de bases de datos al ser la estandarizacin inmediata y posibilitar la aplicacin de mtodos bioestadsticos y programas elaborados.

Usos de la PCR
* Individualizacin genotpica para alelos seleccionados. * Test de Paternidad * Diagnstico de enfermedades hereditarias * Clonacin de genes * Mutagnesis * Anlisis de ADN fsil * Genotipo de mutaciones especficas

Diagnstico prenatal molecular en Cuba

1. Fibrosis Quistica (HAR) 2. Sicklemia (HAR) 3. Acondroplasia (HAD) 4. Distrofia Muscular Duchenne ( HRLX) 5. Corea de Huntington (HAD) 6. Ataxia Espinocerebelosa de Holguin (HAD) 7. Distrofia Miotnica (HAD) 8. Atrofia ptica de Leber (HM) Sancti Spiritus 9. Hemofilia (HRLX) 10.Atrofia Espinal Wernig- Hoffman (HAR) 11.Frgil X (HLX) 12.Fenilcetonuria (HAR)