TRABAJO PRACTICO 1

DETECCION DE BIOMOLECULAS

Lic. Gastn Westergaard

2. Test para la deteccin de azcares simples reductores.

Se basa en el carcter reductor de los monosacridos y de la mayora de los disacridos (excepto la sacarosa). Si el glcido que se investiga es reductor, se oxidar dando lugar a la reduccin del sulfato de cobre (II), de color azul, a xido de cobre (I), de color rojoanaranjado. Todos los azucares que contienen un grupo hemiacetal dan pruebas positivas. Los carbohidratos que solo contienen grupos acetal dan pruebas negativas con estas soluciones y se llaman azcares no reductores.
Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com) 2

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

Miel: contiene un 80 % de azcar en forma de fructosa Manzana: Un 85% de su composicin es agua, por lo que resulta muy refrescante e hidratante. Los azcares, la mayor parte fructosa (azcar de la fruta) y en menor proporcin, glucosa y sacarosa
Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com) 6

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

3. Test para la deteccin de almidn.

El polisacrido almidn se colorea de azul-violeta en presencia de yodo, debido no a una reaccin qumica, sino a la fijacin del yodo en la superficie de la molcula del almidn, fijacin que slo tiene lugar en fro.

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

Polisacridos
Los polisacridos son monosacridos unidos entre s por uniones glucosdicas en largas cadenas. Pueden o no tener el mismo tipo de monosacrido como eslabn en esas cadenas. Los principales son: almidn, celulosa y glucgeno. El almidn es la forma principal de almacenamiento de glucosa en la mayora de las plantas. Es fabricado por las plantas verdes durante la fotosntesis. Forma parte de las paredes celulares de las plantas y de las fibras de las plantas rgidas. A su vez sirve de almacn de energa en las plantas, liberando energa durante el proceso de oxidacin en dixido de carbono y agua. Los grnulos de almidn de las plantas presentan un tamao, forma y caractersticas especficos del tipo de planta en que se Lic. Gastn G. Westergaard ha formado el almidn
(gastongw@gmail.com)

Existe en dos formas: En el primero, la amilosa, que constituye el 20 % del almidn ordinario, los grupos estn dispuestos en forma de cadena continua y rizada, semejante a un rollo de cuerda;

En el segundo tipo, la amilopectina, se produce una importante ramificacin lateral de la molcula. Pero ambas estn formadas por unidades de glucosa unidas entre si por enlaces glicosdicos alfa 1-4.

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

10

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

11

Test para la deteccin y el reconocimiento de algunas propiedades de los lpidos.

Las grasas se colorean en rojo anaranjado por el colorante denominado Sudan III.

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

12

Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequesimas gotitas formando una "emulsin" de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo, por reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sita sobre la de agua. Por el contrario, las grasas son solubles en los llamados disolventes orgnicos como el ter, benceno, xilol, cloroformo, etc.

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

13

Test para la deteccin de protenas. REACCION DEL BIURET La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -)que se destruye al liberarse los aminocidos. Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, de frmula:

que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluda, da una coloracin violeta caracterstica.

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

14

REACCION XANTOPROTEICA Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteinas con aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

15

REACCION DE AMINOACIDOS AZUFRADOS Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo. 1. 2. 3. 4. 5. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albmina de huevo (clara de huevo). Aadir 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%. Calentar el tubo hasta ebullicin. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar proteinas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

16

Extraccin de cidos nucleicos.

Hgado de pollo Varilla de vidrio Mortero Vasos de precipitado Pipeta Probeta

Alcohol de 96: Cloruro sdico 2M SDS Arena Trozo de tela para filtrar

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

17

Triturar medio higadito de pollo en un mortero. Aadir arena para que al triturar se puedan romper las membranas de y queden los ncleos sueltos.

Aadir al triturado, 50 centmetros cbicos de agua. Remover hasta hacer una especie de papilla o pur.

Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper
Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com) 18

Medir el volumen del filtrado con una probeta

Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro sdico 2M. Con sto conseguimos producir el estallido de los ncleos para que queden libres las fibras de cromatina.

A continuacin se aade 1 centmetro cbico de SDS. (Nota: Si no se dispone de este producto puede sustituirse por un detergente de vajillas, tipo Mistol o similar). La accin de este detergente es formar un complejo con las proteinas y separarlas del ADN. As nos quedar el ADN libre de las que tiene asociadas. Lic. Gastn G.proteinas Westergaard 19
(gastongw@gmail.com)

Aadir mediante una pipeta 50 centrmetros cbicos de alcohol de 96:. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN.

Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin. En la fotografa nmero 9 se indica con mayor precisin las capas. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupacin de muchas fibras de ADN
Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com) 20

Esta prctica puede completarse con una tincin especfica de ADN. Tenemos que tomar una muestra de las fibras que se van depositando sobre la varilla de vidrio y depositarlas sobre un porta. Teir durante unos minutos con un colorante bsico. Observar al microscopio.

Lic. Gastn G. Westergaard (gastongw@gmail.com)

21