ADN: Replicacin, transcripcin, traduccin Replicacin La replicacin es el proceso en el cual se copia el ADN. Es un proceso semiconservativo y bidireccional.

l. Funciona igual, tanto en procariotas como en eucariotas, salvo algunos cambios, principalmente de las protenas que participan. Molculas que participan en la replicacin Helicasa Protenas SSB sencilla de ADN Primasa (ARN pol) Sonda de ARN direccin 5-3 ADN pol III complementaria ADN pol I fragmentos de okasaki Fragmentos de okasaki sonda de ARN Ligasa Topoisomeraza ocasionado por el cadena de ADN Transcripcin En la transcripcin, el ADN se copia a ARN. En la cadena transcrita se cambia: la desoxirribosa por ribosa y las timinas por uracilos. desenrolla el ADN estabilizan las regiones de cadena sintetiza la zona de ARN necesario para la sntesis de ADN en sintetiza la cadena de ADN llena los espacios entre los fragmentos extendidos a partir de une los fragmentos de okasaki relaja el superenrrollamiento Desenrollamiento inicial de la

SINTESIS DE ARN: requisitos previos, cadena de ADN que acte como molde, ARN-POLIMERAZAS en eucarioticas, ribonucleotidos trifosfato de A, G, C y U

EL PROCESO DE LA TRANSCRIPCION INICIACION: la ARN-polimerasa reconoce los centros promotores, luego abre la doble hlice para que los ribonucleotidos se unan a la cadena molde. ENLOGACION: la ARN-polimerasa avanza en sentido 3-5 y sintetiza el ARN en sentido 5-3 TERMINACION: la ARN-polimerasa reconoce en el ADN unas seales de terminacin que indican el final de la transcripcin. En procariontes son secuencias palindromicas. LOS PRODUCTOS DE LA TRANSCRIPCION ARN r, ARN t y ARN m Si el ARN m lleva la informacin para una sola protena, se denomina monocistrn, y policistrn, si lleva informacin para ms. Los ARN m que se forman en procariontes, son todos policistrones; en cambio, los eucariontes, son monocistrones. En eucariotas, cmo podramos determinar si un gen est siendo expresado en una clula dada? Si no se conoce nada acerca de la secuencia de un gen, es difcil obtener genes directamente del ADN cromosomal (ADN total), ya que un gen representa slo una pequea fraccin del ADN total. Solucin: Usar ARN m para producir ADN c para clonar, ya que ARN m representa slo las secuencias de genes expresados en la clula. Cmo se construye una librera de ADN c? 1. Aislar ARN celular total (mtodo qumico) 2. Aislar ARN m aprovechando la cola poli A.

3. Convertir ARN m a ADN c usando la enzima transcriptasa reversa (enzima vrica). 4. El producto es una molcula hbrida de doble cadena ARN-ADN. 5. Convertir ARN-ADN en ADN-ADN 6. Clonar

La tecnologa de la clonacin Consiste en generar muchas copias de ADN a travs de la replicacin en un husped.

Se desarroll en los 70s. Puede generar un suministro ilimitado de copias de genes Tiene muchas aplicaciones: Mapeo gentico Secuenciacin de ADN Estudios de mutacin Transformacin Ingeniera gentica

Cul es el objetivo de la clonacin? Generar grandes cantidades de ADN puro que puede ser manipulado y estudiado. Principales pasos en el proceso de clonacin 1. Aislar el ADN de un organismo (extraccin de ADN) 2. Cortar el ADN con enzimas de restriccin con un tamao deseado 3. Ligar cada pieza de ADN en un vector de clonacin para crear una molcula de ADN recombianate. 4. Transformar el ADN recombinante en un husped que lo replicar y transferir copias a la progenie.

Hay varios tipos de vectores de clonacin: 1. Plsmidos 2. Fago 3. Csmidos 4. Cromosomas artificiales de levadura "Yeast artificial chromosomes" (YACs) 5. Cromosomas artificiales de Bacteria "Bacterial artificial chromosomes" (BACs)

1. Vectores plasmdicos Fueron los primeros vectores de clonacin usados. Son fciles de aislar y purificar de las bacterias. Pueden ser reintroducidos en bacterias por transformacin Con frecuencia contienen genes con resistencia a antibiticos, estos se usan para detectar al husped bacteriano que lo porta. Caractersticas generales de los vectores plasmdicos 1. Secuencia de origen (ori): requerido para que se inicie la replicacin del plsmido 2. Caractersticas de seleccin: por ejemplo genes de resistencia a antibiticos, para seleccionar las clulas bacterianas transformadas 3. Sitios de restriccin nicos: Tal que una enzima corte el plsmido slo una vez 4. Un marcador : que permita distinguir bacterias transformadas que lleven el inserto de las que no. Por ej. El gen Lac Z Las biotecnologas modernas que se utilizan actualmente en el sector forestal pueden clasificarse en tres grandes categoras: 1. Tecnologas de multiplicacin vegetativa 2. Biotecnologas basadas en marcadores moleculares

3. Modificacin gentica de especies forestales (rboles transgnicos) Tecnologas de multiplicacin vegetativa La multiplicacin o propagacin vegetativa es posible ya que cada una de las clulas de un vegetal, posee la capacidad de multiplicarse, diferenciarse y generar un nuevo individuo idntico al original. A esta caracterstica se la denomina totipotencialidad. Cultivo in vitro El cultivo de tejidos consiste en aislar una porcin de la planta ( explanto) y proporcionarle artificialmente las condiciones fsicas y qumicas apropiadas para que las clulas expresen su potencial de regenerar una planta nueva. Estas tcnicas se realizan en el laboratorio en recipientes de vidrio ( in vitro), en condiciones de asepsia para mantener los cultivos libres de contaminacin microbiana.

Las plantas se desarrollan en un medio de cultivo que est compuesto por macronutrientes, micronutrientes, gelificantes y compuestos orgnicos tales como hidratos de carbono, vitaminas, aminocidos y reguladores del crecimiento. As, se puede lograr la propagacin masiva de plantas genticamente homogneas, mejoradas, y libres de microbios. Aplicaciones del cultivo in vitro Propagacin masiva de plantas, especialmente para especies de difcil propagacin por otros mtodos, o en vas de extincin Clonacin de individuos de caractersticas agronmicas muy deseables durante todo el ao Obtencin de plantas libres de virus Produccin de semillas sintticas Conservacin de germoplasma (conjunto de individuos que representan la variabilidad gentica de una poblacin vegetal) Ventajas del cultivo in vitro-

 Evita el riesgo de que proliferen agentes patgenos porque la micropropagacin se realiza en medios esterilizados. Se pueden obtener gran cantidad de individuos en espacios reducidos. Permite la obtencin de individuos uniformes. Facilita el transporte del material. Etapas en el proceso de cultivo 1) Eleccin de la planta y/o tejido donante de explantos. 2) Establecimiento, que consiste en la desinfeccin de los explantos (generalmente con hipoclorito de sodio) y su posterior adaptacin al medio artificial de modo de inducir callo, brote, raz o embrin somtico segn se desee. 3) Multiplicacin, para generar una masa vegetal suficiente para la regeneracin del nmero de plantas necesarias. 4) Enraizamiento, en la que se busca la formacin de races con el fin de convertir los brotes o embriones somticos en plntulas completas . 5) Rusticacin, que es la aclimatacin de las plntulas obtenidas in vitro a las condiciones ambientales ex vitro (suelo o algn sustrato inerte) Cmo se relacionan el cultivo in vitro de tejidos y la biotecnologa? Cuando se cultivan rganos, tejidos o clulas con un propsito diferente al de micropropagacin de una especie en particular. Qu se cultiva? Meristemos apicales Yemas axilares Protoplastos Cultivo de clulas germinativas (cultivo de vulos, polen) Cultivo de rganos reproductores Cultivo de races Cultivo de embriones Qu se puede obtener a nivel de producto?

 Obtencin de metabolitos secundarios Produccin de nuevos hbridos Mejora gentica de plantas (incluyendo obtencin de plantas transgnicas) Produccin de haploides. Estudios fisiolgicos diversos. Biotecnologas basadas en marcadores moleculares Los marcadores moleculares son fragmentos de ADN que pueden corresponder o no a una secuencia que se expresa (gen), y pueden usarse en la biotecnologa forestal con los siguientes fines: