HISTOMORFOMETRIA DENTRIA DE RATAS COM HIPERTIREOIDISMO INDUZIDO DURANTE OU APS A ERUPO E COM HIPOTIREOIDISMO APS A ERUPO DENTRIA

DENTAL HISTOMORPHOMETRY IN RATS WITH HYPERTHYROIDISM INDUCED BY OR AFTER ERUPTION AND WITH HYPOTHYROIDISM AFTER DENTAL ERUPTION
Cristiane Viana Guimares 2 Tammara Grazielle de Souza Cardoso 3 Natlia de Melo Ocarino 4 Rogria Serakides
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Foram realizados trs experimentos a fim de estudar a histomorfometria dos dentes de ratas com hipertireoidismo induzido durante ou aps a erupo dentria e hipotireoidismo induzido aps erupo dentria. O hipertireoidismo alterou a morfologia dos dentes molares quando induzido durante a erupo, acelerando o desenvolvimento das razes dentrias, mas no alterou o dente incisivo de ratas adultas. Os efeitos do hipotireoidismo foram mais significativos nos dentes molares do que nos incisivos Apesar da hipofuno tireoidiana causar reduo da porcentagem de clulas da polpa dentria e da espessura da camada de odontoblastos, houve aumento da espessura da camada de dentina com formao de dentina reacional e necrose. Palavras-chave: Rata, Dente, Hipotireoidismo, Hipertireoidismo

Os dentes so constitudos pelo esmalte, dentina, pr-dentina, polpa dentria e pelo cemento. A dentina, formada pelos odontoblastos e o cemento, pelos cementoblastos so variantes do tecido sseo com constituio semelhante do osso e com morfologia varivel e dependente da idade 1,7,11. A tireide controla o metabolismo geral do organismo, e seus hormnios tiroxina (T4) e triiodotironina (T3) atuam em vrios tecidos, incluindo o osso, onde desempenham papel importante no metabolismo celular3, atuando na reabsoro e aposio sseas12 e na homeostasia mineral17. O hipertireoidismo acelera o turnover sseo, encurtando o ciclo de remodelao por mecanismos ainda no elucidados5 e causa osteopenia varivel e dependente do tempo de exposio do osso hiperfuno tireoidiana14. J o hipotireoidismo causa osteopenia intensa e extensa por inibir a aposio e por promover a retomada da reabsoro ssea13.

INTRODUO

1 Graduanda em Medicina Veterinria na UFMG, Bolsista de Iniciao cientfica da Fapemig 2 Mdica veterinria 3 Professora substituta do Setor de Patologia da Escola de Veterinria da UFMG 4 Doutora em cincia animal, professora adjunta do Setor de Patologia da Escola de Veterinria da UFMG, Pesquisadora do CNPq. serakide@dedalus.lcc.ufmg.br

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Apesar de j serem conhecidas vrias alteraes induzidas pelo hipo e hipertireoidismo no tecido sseo, pouco se sabe sobre seus efeitos nos dentes. Estariam o cemento e a dentina, variantes do tecido sseo, propensos s mesmas alteraes do tecido sseo induzidas pelo hipo e hipertireoidismo? Vrios pesquisadores relatam o aumento da incidncia e da extenso das cries em ratos hipotireideos e a reduo da incidncia de crie quando tratados com tiroxina, mas por mecanismos ainda no totalmente elucidados4,6,18. Alm disso, a literatura carece de informaes no que concerne s alteraes da morfologia dentria induzidas pelas disfunes tireoidianas. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar a histomorfometria dos dentes de ratas com hipertireoidismo induzido durante ou aps a erupo e com hipotireoidismo induzido aps a erupo dentria.

MATERIAL E MTODOS Experimento 1

Foi estudado o efeito do hipertireoidismo nos dentes incisivos de 20 ratas Wistar adultas com cinco meses de idade. As ratas foram alojadas em caixas plsticas, numa densidade de cinco ratas/caixa, recebendo rao comercial (22% de protena bruta,1,4% de clcio e 0,6% de fsforo, alm de micronutrientes) e gua ad libitum. Aps 30 dias de adaptao, as ratas foram separadas em dois grupos, sendo um grupo induzido ao hipertireoidismo, pela administrao diria de L-tiroxina (Armesham International, Buckinghamshire, England), por sonda orogstrica, na dose de 50 mg/animal, por 90 dias. O outro grupo foi mantido em estado eutireideo, pela administrao de gua como placebo, da mesma forma e nos mesmos horrios daqueles tratados com tiroxina (grupo controle). Aps 90 dias de tratamento todas as ratas foram anestesiadas com ter e sacrificadas por puno cardaca. O sangue foi colhido em tubo heparinizado, centrifugado at obteno do plasma e este armazenado a 20C, para posterior dosagem de tiroxina livre pela tcnica da quimioluminescncia em sistema totalmente automtico (Access Immunoassay System, Sanofi Diagnostics Pasteur Inc, Chaska, MN, USA). Os dentes incisivos foram fixados juntamente com a maxila e a mandbula em formol a 10% neutro e tamponado. Depois de dissecados, foram descalcificados em acido frmico a 10%,tamponado com citrato de sdio

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para pH 4,5, sob vcuo moderado. Completada a descalcificao, os dentes foram seccionados transversalmente, processados pela tcnica de incluso em parafina e corados pela hematoxilina-eosina. Com auxlio de uma ocular micromtrica foi realizada a mensurao da espessura das camadas de dentina, prdentina e de odontoblastos em todo o corte histolgico abrangido pelo dente. Ao final, foi aplicado s mdias, um fator de correo obtido pela escala de uma lmina micromtrica.

Experimento 2
Foi estudado o efeito do hipertireoidismo nos dentes molares de 24 ratas Wistar com 12 dias de idade durante a erupo dentria. Toda a ninhada foi alojada numa mesma caixa plstica e mantida em regime de 12 horas de luz e 12 horas sem luz. A me foi mantida dentro da caixa para aleitamento dos seus respectivos filhotes durante todo o perodo experimental, recebendo rao comercial (22% PB; 1,4% Ca; 0,6% P) e gua ad libitum. Os filhotes foram separados ao acaso em dois grupos de 12. Um grupo foi induzido ao hipertireoidismo, pela administrao diria de L-tiroxina (Armesham International, Buckinghamshire, England), por sonda oral, na dose de 7mg administrada nos primeiros oito dias e de 11,5 mg administrada nos sete dias restantes, num total de 15 dias de experimento. O outro grupo foi mantido em estado eutireideo, pela administrao de gua destilada, como placebo. Aos 15 dias aps o incio do tratamento, todas as ratas foram sacrificadas e tiveram seus dentes molares colhidos e processados conforme descrito anteriormente. As tireides tambm foram colhidas e processadas pela tcnica de rotina de incluso em parafina para atestar o efeito da tiroxina administrada sobre a glndula. Com auxlio de uma ocular micromtrica foi realizada a mensurao da espessura das camadas de dentina, pr-dentina e de odontoblastos da raiz e da coroa dentria em toda a rea abrangida pelo primeiro dente molar. Ao final, foi aplicado s mdias, um fator de correo obtido pela escala de uma lmina micromtrica.

Experimento 3
Foi estudado o efeito do hipotireoidismo nos dentes molares e incisivos de 16 ratas Wistar com dois meses de idade, alojadas em caixas plsticas, numa densidade de quatro ratas/caixa, recebendo a mesma rao comercial

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(1,4% de clcio, 0,60% de fsforo e 22% de protena) e gua ad libitum. As ratas foram submetidas a um regime de 12 horas de luz e 12 horas sem luz. Os animais foram separados em dois grupos de oito: grupo hipotireideo e grupo controle. O hipotireoidismo foi induzido pela administrao diria de propiltiouracil (PTU) (Sigma, Usa) por 120 dias, por sonda oro-gstrica, na dose de 1mg/animal, diludo em 5ml de gua destilada. As ratas do grupo eutireideo (controle) receberam 5ml de gua destilada como placebo, tambm administrada por sonda oro-gstrica. Todos os grupos receberam seus respectivos tratamentos no mesmo horrio. Aps 120 dias do incio da administrao do PTU, todos os animais foram anestesiados com ter e sacrificados por puno cardaca. O sangue foi colhido em tubo heparinizado, centrifugado at obteno do plasma e este armazenado a 20 C para posterior dosagem de tiroxina livre pela tcnica de quimioluminescncia em sistema totalmente automtico (Access Immunoassay System, Sanofi Diagnostics Pasteur Inc., Chaska, MN, USA). Os dentes incisivo e primeiro molar foram fixados juntamente com a mandbula em formol a 10% neutro e tamponado. Depois de dissecados foram descalcificados em cido frmico a 10%, tamponado com citrato de sdio para pH4.5, sob vcuo moderado. Completada a descalcificao, os dentes foram seccionados transversalmente, processados pela tcnica de incluso em parafina e corados pela hematoxilina-eosina. Com auxlio de uma ocular micromtrica foi realizada a mensurao da espessura das camadas de dentina, prdentina, odontoblastos e ameloblastos em todo o corte histolgico abrangido pelo dente incisivo. Ao final, foi aplicado s mdias, um fator de correo obtido pela escala de uma lmina micromtrica. Para a determinao da porcentagem de clulas na polpa dentria foi utilizada uma ocular integradora com 25 pontos eqidistantes entre si em toda a rea abrangida pela polpa. Para os trs experimentos, o delineamento estatstico foi inteiramente ao acaso. Para cada varivel estudada foram determinados a mdia e o desvio-padro com comparao das mdias pelo teste SNK.

RESULTADOS Experimento 1
A dosagem de tiroxina plasmtica significativamente maior nas ratas tratadas com tiroxina

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confirmou a induo de hipertireoidismo neste grupo (Tab.1) Independente do tratamento, as ratas adultas apresentavam dentes incisivos com caractersticas semelhantes, no havendo diferena significativa entre os grupos (Tab. 2). A polpa dentria estava bem celularizada e vascularizada constituda por clulas pequenas, ovaladas e com cromatina frouxa. Os odontoblastos apresentavam-se dispostos em varias camadas ao redor da polpa dentria, com espessura homognea, bem arranjada, com ncleo arredondado e com cromatina densa. A pr-dentina apresentava espessura e aspecto uniformes e a dentina era constituda por tbulos uniformemente distribudos e orientados.

Experimento 2
A tireide das ratas controle apresentavam folculos de diferentes dimetros revestidos, na sua maioria, por epitlio cuboidal contendo quantidades variveis de colide com moderada ou intensa quantidade de vacolos de corroso. J a tireide das ratas tratadas com tiroxina, como j era previsto, apresentavam predomnio de folculos grandes, revestidos por epitlio achatado e contendo grande quantidade de colide com poucos vacolos de corroso. O efeito do hipertireoidismo induzido durante a erupo dentria quando comparado ao do hipertireoidismo induzido aps a erupo dentria (experimento 1) foi diferente. Como esperado as ratas do grupo controle, com 27 dias de idade, apresentavam dentes com morfologia tpica da idade. A polpa dentria estava presente em grande quantidade, era bem vascularizada e celularizada e constituda por clulas fusiformes com cromatina frouxa. Os odontoblastos apresentavam-se como clulas cilndricas, ncleo arredondado, com cromatina mais frouxa e dispostos em vrias camadas sendo mais espessa na coroa do dente em comparao com a raiz dentria. A pr-dentina apresentava-se mais espessa na raiz do dente, ao contrrio da dentina que era mais espessa na coroa. A diferena entre os componentes dentrios da raiz e da coroa provavelmente deveu-se ao desenvolvimento incompleto das razes dentrias em funo da idade dos animais e justificou realizar separadamente a morfometria da dentina, pr-dentina e da camada de odontoblastos da raiz e da coroa. O hipertireoidismo induziu alteraes dentrias significativas nos componentes radiculares do dente.

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Embora a porcentagem de clulas da polpa tenha apresentado semelhana entre os dois grupos, a coroa dentria e as camadas de odontoblastos e de dentina da raiz apresentavam-se significativamente menos espessas quando comparadas ao grupo-controle (Tab. 2).

Experimento 3
Os resultados da dosagem de tiroxina livre encontram-se na tabela 1. A concentrao plasmtica de T4 livre no grupo tratado com propiltiouracil foi significativamente menor quando comparada das ratas controle, confirmando a induo do hipotireoidismo. A polpa dentria dos animais controle apresentavase bem vascularizada e celularizada com clulas ovaladas e algumas vezes com citoplasma amplo e claro. A polpa dentria dos animais hipotireideos apresentava clulas com ncleos fusiformes e cromatina mais densa e significativamente menos celularizada, tal como demonstrado pela anlise morfomtrica (Tab. 5). Nas ratas controle, as camadas de odontoblastos, pr-dentina, dentina, esmalte e de ameloblastos dos dentes incisivos eram uniformes enquanto que nos dentes molares houve reduo na quantidade de dentina e de polpa em favor de uma maior quantidade de cemento na regio do encaixe alveolar. J nos animais hipotireideos essas camadas nos dentes incisivos e molares no eram uniformes e muitas vezes algumas delas apresentavam-se descontnuas em alguns pontos. Em ambos os grupos a camada de ameloblastos, geralmente era estratificada com clulas colunares, com ncleo apoiado na base, cromatina densa e vacolos eosinoflicos (secreo de esmalte). No foi observada diferena de espessura dessa camada entre os grupos (Tab. 5). Nas ratas controle a camada de odontoblastos apresentava-se estratificada, mas em alguns momentos dispunha-se em uma nica camada de clulas, tanto nos dentes molares quanto nos incisivos. O ncleo dos odontoblastos era volumoso com cromatina densa (Fig.1). J nos animais hipotireideos a camada de odontoblastos dos dentes molares foi significativamente menor (Tab.6, Fig.2) e descontnua. Os odontoblastos apresentavam ncleos pequenos e com condensao da cromatina. Embora no tenha havido diferena significativa da espessura da camada de pr-dentina entre os grupos, no grupo hipotireideo a pr-dentina apresentava-se mais fina, irregular e ausente em alguns locais nos dentes incisivos e molares. Havia, em alguns dentes de ratas

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hipotireideas reteno de ncleos na pr-dentina e s vezes, tambm na dentina. A dentina no grupo controle era uniforme, com tbulos de tamanhos semelhantes e paralelamente organizados. No grupo hipotireideo a dentina apresentava-se significativamente mais espessa (Tab. 5, Figs 3 e 4) com tbulos irregulares, dilatados ou ausentes e substitudos por material eosinoflico e amorfo e com reteno de ncleos nessas reas, semelhante dentina reacional (Fig.5). Havia tambm reas de necrose com desintegrao da dentina (Fig.6).

DISCUSSO
A dosagem de tiroxina livre significativamente maior nas ratas tratadas com tiroxina e menor nas ratas que receberam propiltiouracil, administrados aps a erupo dentria, comprovou a induo de hiper e hipotireoidismo respectivamente. Nas ratas pr-pberes tratadas com tiroxina, a dosagem hormonal foi substituda pela histologia da tireide, para atestar o efeito do excesso deste hormnio sobre a glndula. Isso se deveu dificuldade em se obter quantidade suficiente de plasma ou soro para a dosagem hormonal nas ratas jovens. Ao contrrio das ratas pr-pberes controle, as ratas com hipertireoidismo apresentavam tireides com folculos grandes revestidos por epitlio achatado e contendo grande quantidade de colide pouco corrodo, caracterstica de pequena sntese e secreo hormonal, o que comprova o efeito de feedback negativo da administrao de tiroxina sobre a glndula. Embora a administrao de tiroxina reduza a incidncia de crie em ratos submetidos a uma dieta cariognica e o hipotireoidismo aumente a incidncia e a severidade desta leso4,6,18, no presente estudo, utilizando dieta normal, tanto o hiper quanto o hipotireoidismo no alteraram a macroscopia dos dentes estudados. No entanto, tanto o hipotireoidismo induzido aps a erupo dentria quanto o hipertireoidismo induzido antes da erupo modificaram significativamente a histomorfometria dentria. A fase eruptiva caracteriza-se pela formao das razes, do ligamento periodontal e da juno dentogengival2. Nas ratas controle, as raizes dentrias eram menos desenvolvidas, ou seja, menos alongadas quando comparadas das ratas hipertireideas. Provavelmente por ter havido maior desenvolvimento das razes dos dentes molares neste grupo, as camadas de odontoblastos e de

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dentina da raiz foram significativamente menos espessas quando comparadas das ratas controle. Assim, a nica alterao causada pelo hipertireoidismo induzido durante a erupo dentria parece ter sido o de acelerar o desenvolvimento das razes dentrias. Embora os dentes desses animais no tenham sido observados diariamente, pode ser que o maior desenvolvimento dentrio tenha reduzido o curso da fase eruptiva. O hipotireoidismo nos dentes molares causou reduo da porcentagem de clulas da polpa e provavelmente por isso houve reduo da espessura da camada de odontoblastos, j que a polpa importante no for necimento das clulas precursoras dos odontoblastos15. A hipotrofia e hipoplasia odontoblsticas indicam inatividade desse tipo celular, o que resultaria em menor produo de dentina. De fato, apesar de no significativa houve reduo da espessura e descontinuidade da camada de pr-dentina. Mas por que a camada de dentina apresentou-se significativamente mais espessa no grupo hipotireideo? Talvez isso tenha ocorrido por reduo ainda mais intensa da dentinlise, mecanismo de reabsoro fisiolgica da dentina. A dentina apresenta uma rede organizada de microtbulos que se originam radialmente na polpa e terminam na juno amelodentinria. Esses canais alojam os processos odontoblsticos e os fluidos pulpares. As irritaes na dentina podem estimular a formao de dentina reparativa, tambm conhecida como dentina reacional ou terciria8 que se caracteriza por distoro do padro tubular e reteno de odontoblastos na matriz recm-formada 15 . Apesar de ter sido observada a reteno de odontoblastos na pr-dentina e a irregularidade dos tbulos da dentina de ratas hipotireideas, caractersticas da dentina reacional, havia tambm na dentina reas extensas de perda tubular, chegando algumas vezes a ocorrer dissoluo da matriz, caracterizando muito mais um quadro de necrose da dentina cuja gnese no pde ser estudada com as tcnicas utilizadas no presente estudo. As cries das superfcies de ocluso ocorrem por alteraes primrias do esmalte e da dentina (hipoplasia, hipomineralizao) e se desenvolvem pela ao de bactrias que se acumulam nas reas iniciais de perda tecidual. Com a progresso das cries, por expanso direta ou atravs dos tbulos dentinrios, bactrias podem atingir a polpa dentria, causando pulpite8,16. H pesquisas que demonstram que o hipotireoidismo aumenta a incidncia de crie por reduzir o fluxo de saliva, mas postula-se que esse no seja o nico mecanismo responsvel pela leso 4,6,18. No presente estudo, a necrose da dentina observada nos dentes molares das ratas hipotireideos

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poderia favorecer a instalao da crie. Mas, o esmalte no pde ser avaliado microscopicamente, pois o processo de descalcificao utilizado no permitiu, na maioria das vezes, a sua preservao. No se pode afastar a possibilidade de terem ocorrido alteraes no esmalte, baseando-se na ausncia de leses macroscpicas do esmalte e na ausncia de alteraes microscpicas nos ameloblastos. Assim, fica difcil inferir se as alteraes da dentina foram primrias ou secundrias a uma possvel alterao do esmalte. Mais estudos so necessrios para verificar a participao das alteraes dentinrias na gnese da crie do indivduo hipotireideo. Na maioria dos estudos, apesar do molar ser o dente de escolha por ter seu crescimento limitado semelhante ao dente humano, a escolha do dente incisivo para avaliao neste estudo deveu-se ao fato dele estar em constante atrito e apresentar crescimento ininterrupto no rato, postulando-se que seria mais susceptvel aos efeitos do hipo ou do hipertireoidismo. Mas, curiosamente as alteraes induzidas pelo hipotireoidismo nos dentes molares foram mais significativas quando comparadas aos incisivos. provvel que isso tenha ocorrido pelo fato do dente incisivo no rato estar em crescimento e desgaste constantes, havendo renovao contnua dos seus constituintes, reafirmando a importncia de se eleger o molar do rato no estudo dos efeitos das disfunes tireoidianas sobre o dente, principalmente a fim de se extrapolar seus resultados para o homem. Assim, a fim de extrair melhores respostas do efeito do hipertireoidismo sobre o dente aps a erupo, novos estudos devem ser realizados nos dentes molares de ratos, j que no presente estudo no foram observadas alteraes significativas nos dentes incisivos de ratas com hipertireoidismo induzido aps a erupo dentria.

CONCLUSO

Conclui-se que o hipertireoidismo altera a morfologia dentria quando induzido durante a erupo dos dentes molares, acelerando o desenvolvimento das razes dentrias, mas no altera o dente incisivo de ratas adultas. Conclui-se que o hipotireoidismo reduz a porcentagem de clulas da polpa dentria e a espessura da camada de odontoblastos, causando necrose da dentina e que seus efeitos so mais significativos nos dentes molares do que nos incisivos.

The dental histomorphometry of Wister rats with hyperthyroidism or hypothyroidism induced before or after

SUMMARY

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tooth eruption was studied in three experiments. Hyperthyroidism altered molar teeth morphology when induced during tooth eruption by increasing dental root development but did not alter adult incisor teeth. The effects of hypothyroidism were more significant in molars than incisor teeth. In spite of a decrease in the percentage of dental pulp cells and the thickness the odontoblast layer induced by hypothyroidism, there was an increase in the dentine layer with formation of reactionary dentine and necrosis. Key words: rat, teeth, hyperthyroidism, hypothyroidism

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Figura 1. Dente molar, rata controle. Vrias camadas de odontoblastos com ncleos volumosos e cromatina densa.

Figura 2. Dente molar, rata hipotireidea. Odontoblastos dispostos em uma nica camada com ncleos pequenos e com condensao da cromatina. (OB=osteoblastos, P=pr-dentina, D=dentina), 536, HE.

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Figura 3. Dente incisivo, rata controle. Dentina uniforme e pouco espessa.

Figura 4. Dente incisivo, rata hipotireidea. Dentina mais espessa e pr-dentina menos espessa quando comparada ao grupo-controle. (OB=osteoblastos, P=pr-dentina, D=dentina, E=esmalte), 268, HE.

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Figura 5. Dente molar, rata hipotireidea. Camada de odontoblastos delgada e descontnua e reteno de ncleos de odontoblastos na pr-dentina e dentina (setas).

Figura 6. Dente molar, rata hipotireidea. Dentina com ausncia de tbulos, reteno de ncleos de odontoblastos (seta) e necrose com desintegrao da dentina. (OB=osteoblastos, P=pr-dentina, D=dentina), 21, HE.

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