AMINOACIDOS 1.OBJETIVOS: Realizar algunas reacciones coloridas especficas para la identificacin de los aminocidos que constituyen a una protena.

Comprender la importancia de estas reacciones para distinguir las protenas. 2.INTRODUCCIN En este presente trabajo desarrollamos el tema de Reconocimiento deprotenas y para esto hemos realizado un trabajo de investigacin mediante elcual estamos exponiendo las diferentes formas de reconocer la presencia delas protenas en una sustancia (clara de huevo), las reacciones a utilizar, etc.Este informe en completo tambin contiene la experiencia en el laboratorio,imgenes de ella y algunos resultados que se peda en la realizacin deinforme y que se requera saber en cada experimentacin. Por su estructura peptdica y por la presencia de diferentes grupos de aminocidos en sus molculas, las protenas reaccionan con diversos agentes con los cuales forman productos coloreados. Reaccin de ninhidrina: La ninhidrina reacciona con aminocidos libres y con protenas, proteosas, peptonas y pptidos con formacin de color azul. Reaccin de biuret: Los dipeptidos no dan positiva esta reaccin pues para ella se requieren dos o ms enlaces peptdicos. Las protenas dan de color violeta purpureo. Reaccin xantoproteica: esta reaccin es positiva para aminocidos aromticos activados con produccin de nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados por adicin de lcalis. Reaccin de Milln: Cuando se agrega el reactivo de Milln a una solucin de protena, se forma en general primero un precipitado blanco que se vuelve rojo al calentarlo. La reaccin no es especfica de las protenas, pues la dan los fenoles en general. Como la tirosina es el nico aminocido fenlico en las protenas, la reaccin positiva indica su presencia en la protena. Reaccin del plomo para cistena: Los aminocidos azufrados como la metionina y la cistena se reconocen por la formacin de precipitados de sulfuro de plomo de color gris oscuro o negro que se forma cuando reacciona con acetato de plomo alcalino. 3.MARCO TEORICO

PROTEINAS: Son biomoleculas de gran tamao y peso molecular formadas por C, H, O, y N.Son macromolculas o polmeros de aminocidos. AMINOACIDOS Son molculas orgnicas que presentan grupo amino (- NH2) y un grupoacido carboxi8lico (- COOH).En disolucin los aminocidos forman iones dobles denominados (Zwitteriones)debido a sus grupos acido y base; adems, un aminocido, dependiendo delPH de la solucin, puede comportarse como acido o como base por esta raznse les denomina anftera. AMINOACIDOSNO ESENCIALES Listado de aminocidos y funcin de cada una de ellos: Los ocho esenciales Isoleucina: Es uno de los veinte aminocidos constituyentes de las protenas con una cadena ramificada de hidrocarburos con cuatro tomos de carbono como grupo lateral. Pertenece por tanto al grupo de aminocidos con cadenas laterales no polares (hidrfobos), y participa como promedio en 4,6 por ciento (en relacin con todos los aminocidos) de la composicin de las protenas. Al igual que la treonina, la isoleucina a diferencia de los dems aminocidos posee dos carbonos asimtricos. Su biosntesis tiene lugar a partir del piruvato(el producto final de la glicolisis), como ocurre con la valina y la leucina, los otros dos aminocidos con cadenas laterales no polares ramificadas. No puede ser sintetizada por los mamferos, por lo que es uno de los aminocidos esenciales. Funcin: Junto con la Leucina y la hormona del Crecimiento intervienen en la formacin y reparacin del tejido muscular.

Leucina: Funcin: Junto con la Isoleucina y la hormona del Crecimiento (HGH) interviene con la formacin y reparacin del tejido muscular.

Lisina: Funcin: Es uno de los ms importantes aminocidos porque, en asociacin con varios aminocidos ms, interviene en diversas funciones, incluyendo el crecimiento, reparacin de tejidos, anticuerpos del sistema inmunolgico y sntesis de hormonas.

Metionina: Funcin: Colabora en la sntesis de protenas y constituye el principal limitante en las protenas de la dieta. El aminocido limitante determina el porcentaje de alimento que va a utilizarse a nivel celular.

Fenilalanina: Funcin: Interviene en la produccin del Colgeno, fundamentalmente en la estructura de la piel y el tejido conectivo, y tambin en la formacin de diversas neurohormonas.

Triptfano: Funcin: Est inplicado en el crecimiento y en la produccin hormonal, especialmente en la funcin de las glndulas de secrecin adrenal. Tambin interviene en la sntesis de la serotonina, neurohormona involucrada en la relajacin y el sueo.

Treonina: Funcin: Junto con la con la Metionina y el cido Asprtico ayuda al hgado en sus funciones generales de desintoxicacin.

Valina: Funcin: Estimula el crecimiento y reparacin de los tejidos, el mantenimiento de diversos sistemas y balance de nitrgeno.

Los aminocidos no esenciales Alanina: Funcin: Interviene en el metabolismo de la glucosa. La glucosa es un carbohidrato simple que el organismo utiliza como fuente de energa.

Arginina: Funcin: Est implicada en la conservacin del equilibrio de nitrgeno y de dixido de carbono. Tambin tiene una gran importancia en la produccin de la hormona del Crecimiento, directamente involucrada en el crecimiento de los tejidos y msculos y en el mantenimiento y reparacin del sistema inmunologico.

Asparagina: Funcin: Interviene especficamente en los procesos metablicos del Sistema Nervioso Central (SNC).

Asprtico: Funcin: Es muy importante para la desintoxicacin del hgado y su correcto funcionamiento. El cido asprtico se combina con otros aminocidos formando molculas capaces de absorber toxinas del torrente sanguneo.

Citrulina: Funcin: Interviene especficamente eliminacin del amonaco. en la

Cistina: Funcin: Tambin interviene en la desintoxicacin, en combinacin con los aminocidos anteriores. La cistina es muy importante en la sntesis de la insulina y tambin en las reacciones de ciertas molculas a la insulina.

Cistena: Funcin: Junto con la cistina, la cistena est implicada en la desintoxicacin, principalmente como antagonista de los radicales libres. Tambin contribuye a mantener la salud de los cabellos por su elevado contenido de azufre.

Glutamina: Funcin: Nutriente cerebral e interviene especficamente en la utilizacin de la glucosa por el cerebro.

Glutamnico: Funcin: Tiene gran importancia en el funcionamiento del Sistema Nervioso Central y acta como estimulante del sistema inmunologico.

Glicina: Funcin: En combinacin con muchos otros aminocidos, es un componente de numerosos tejidos del organismo.

Histidina: Funcin: En combinacin con la hormona de crecimiento (HGH) y algunos aminocidos asociados, contribuyen al crecimiento y reparacin de los tejidos con un papel especficamente relacionado con el sistema cardio-vascular.

Serina: Funcin: Junto con algunos aminocidos mencionados, interviene en la desintoxicacin del organismo, crecimiento muscular, y metabolismo de grasas y cidos grasos.

Taurina: Funcin: Estimula la hormona del Crecimiento (HGH) en asociacin con otros aminocidos, est implicada en la regulacin de la presin sangunea, fortalece el msculo cardiaco y vigoriza el sistema nervioso.

Tirosina: Funcin: Es un neurotrasmisor directo y puede ser muy eficaz en el tratamiento de la depresin, en combinacin con otros aminocidos necesarios.

Ornitina: Funcin: Es especfico para la hormona del Crecimiento (HGH) en asociacin con otros aminocidos ya mencionados. Al combinarse con la arginina y con carnitina (que se sintetiza en el organismo, la ornitina tiene una importante funcin en el metabolismo del exceso de grasa corporal.

Prolina: Funcin: Est involucrada tambin en la produccin de colgeno y tiene gran importancia en la reparacin y mantenimiento del msculo y huesos.

4.GENERALIDADES Los aminoacidos proviene de la palabra griega proteicos que significa los primeros. Este nombre esta bien elegido. Entre otro los compuestos quimicos, ciertamente hay que considerar a las proteinas como las mas importantes, puesto que son las sustancias de la vida. Desdes el pumto de vista quimico, las proteinas son polimeros grandes. Osn poliamidas y los monomeros de los cuales se derivan son los acidos alfaaminocarboxilicos. Una sola molecula proteica contiene ciertos, e incluso miles de unidades de aminoacidos, que pueden ser de unos tipos diferentes. El numero de combinaciones distintas, es decir, el numero de moleculas proteicas diferentes que pueden existir en casi infinito. Es probable que se necesiten cecenas de miles de proteinas no es identico para un animal de tipo distinto. Su denominacion responde a la composicion general que presentan, en el que un grupo amino (-NH2) y otro carboxilo o acido (-COOH) se une a un carbono (C). Las otras dos valencias de ese carbono quedan saturadas con un atomo de hidrogenio (-H) y con un grupo quimico variable al que se le denomina radical (R).Presentan actividad optica que se manifiesta por la capacidad de desviar el plano de luz polarizada que qatraviesa una disolucion de aminoacidos y es debida a la simetria del carbono, ya que se halla (excepto en la glicina) a cuatro radicales diferentes. Esta propiedad hace clasificar a los aminoacidos de Dextrogiros (+) si se desvian el plano de luz polarizada hacia la derecha y Levogiros (-) si lo desvian hacia la izquierda. Los aminoacidos son compuestos solidos, incoloros, cristalizables. Presentan elevado punto de fusion (habitualmente por encima de los 200 C). Son soluble en agua y poco solubles en solventes organicos. Las proteinas conforman gran parte del cuerpo, lo que mantiene como la unidad que lo hace funcionar. Se las encuentra en todas las celula viva. Ellas son el material principal de la piel, los musculos, tendones, nervios y sangre; de enzimas anticuerpos y muchas hormonas (solo los acidos nucleicos que controlan la herencia pueden desafiar la posicion de las proteinas, ademas aquellos dirigen la sintesis de estos). Las plantas pueden sintetizar proteinas a partir del dioxido de carboono,agua y compuestos inogarnicos nitrogenados.

Funciones de los aminoacidos: CLASE DE PROTEINA Proteinas estructurales Enzimas Protienas de transporte Proteinas contractiles Proteinas protectoras Hormonas toxinas EJEMPLO Colagena ADN polimerasa Hemoglobina Actina, miosina Anticuerpos Insulina Venenos deviboras FUNCION DEL EJEMPLO Tejido conectivo (tendones, etc.) Replicar y reparar ADN Transportar O2 a las celulas Causa la concetracion de los musculos Forman un complejo con proteinas extraas Regula el metabolismo de la glucosa Incapacitar a los animales

5. MATERIALES Tubos de ensayo Beakers Baguetas Esptulas Cocinilla para bao Mara Gradillas Embudo Matraz de erlemenyer pipeta

Reactivos: HCl concentrado N-Butanol NaOH 10% HNO3 concentrado 5.CuSO4 5% Reactivo de Milln Pb (CH3COO)2 CuSO4 10% K3[Fe(CN)6] Reactivo de Ninhidrina

6.PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ENSAYO DE LAS PROTEINAS Y LOS AMIONOACIDOS Se han muchos ensayos tiles para la determinacin tanto cualitativa como cuantitativa de protenas, y su eleccin depende de la naturaleza de las sustancias y de los fines del ensayo. En trminos generales, se pueden dividir estos ensayos fsicos y qumicos. Los primeros se ejecutan cuando se trata de diferenciar especies de protenas en una mezcla y entonces son tiles los mtodos de ultra centrifugacin y electroforticos. De las mediciones de peso especifico y de ndice de refraccin se pueden deducir las concentraciones de protenas tanto en los lpidos orgnicos, como el suero y el plasma. Con frecuencia se emplean en este aspecto mtodos mas sencillos fundados en la solubilidad. Como el de Howe para la separacin de la albmina y la globulina.

A. PREPARACION DE UNA SOLUCION DE ALBMINA Perforar un huevo por un extremo, luego extraer la clara 45ml y agregar agua destilada hasta 4 veces su volumen inicial (180 ml),mezclar con la bagueta N=Na OH 40 gr___1lt___1N 240 gr___1lt___6N

mezclar con la bagueta, filtrar sobre el papel de filtro

Luego de estar filtrado la albumina realizar lo siguiente:

B. ENSAYO DE DESNATURALIZACION DE UNA PROTEINA Tomar 4 tubos de ensayo y agregar a cada uno de ellos 1 mL de albmina con la pipeta

y luego agregar: 1 Tubo 1 mL de HCL concentrado. SE PRECIPITADO, REACCIONO CAMBIO DE COLOR

2 Tubo 1mL de alcohol (Etanol)

NO HAY REACCION (tubo de color medio celeste)

3 Tubo 1 mL de NAOH concentrado.

NO HAY REACCION

4 Tubo someter a bao Mara y establecer la temperatura que provoca la desnaturalizacin (35-40) SI HUBO REACCION CAMBIO DE COLOR A 40C BLANQUESINO

A CONTINUACION LOS 4TUBOS

C. REACCIONES QUIMICAS DE RECONOCIMIENTO Reaccin Xantoproteica Agregar en dos tubos 1 ml de albumina

 A un tubo aadir 1 mL de albumina y luego agregar HNO3 2 gotas concentrado.

Someter a bao Mara constante hasta observar una coloracin amarillenta en 5 minutos

Repetir el ensayo con una solucin de Tirosina 2 ml + 1 ml de albumina

 Y luego a bao Mara se sedimento color blanquecino

Interprete lo que ocurre en esta reaccin qumica Reaccin de Biuret Tomar 2 mL de solucin de albumina y luego agregar 2 mL de una solucin de NAOH al 10% y luego aadir 2 a 3 gotas de una solucin de CuSO4. Interprete la reaccin qumica.

Los iones de cobre se completan con los electrones sin aparear del N de 2 enlaces peptdicos adyacentes.

Observar coloracin azul violceo y se dividi en 2 fases

REACCION DE NINHIDRINA En 3 tubos: Tubo 1: aadir 1 mL, de albumina y luego agregar 1mL, de reactivo de Ninhidrina 0.5% llevar a bao maria por un tiempo de 5 a 10 minutos.

Repetir el ensayo con soluciones de cualquier aminocido y observar Tubo 2: aadir 1 mL, de albumina y luego agregar 1mL, de reactivo de glicina llevar a bao maria por un tiempo de 5 a 10 minutos

 Tubo3: aadir 1 mL, de albumina y luego agregar 1mL, de reactivo de tirosina llevar a bao maria por un tiempo de 5 a 10 minutos Interprete la reaccin qumica

Los 3 tubos se lleva a bao Mara

Tubo1:morado en dos fases Tubo 2: azul Tubo 3: lila

REACTIVO DE MILLON En un tubo agregar 1mL de sol. Albumina y en otro tubo 1mL de sol. Tirosina y luego aadir a cada uno de ellos V gotas del reactivo del Milln, se calienta a bao maria y se observa el color. Cuando al ensayar de esta manera una protena se forma una coloracin rojo anaranjado, en la protena existe un resto de tirosina, Fenilalanina o Triptofano, sino el ensayo es negativo.

En el tubo 1 se puso de color salmon y el segundo tubo de color rojizo despues del bao maria Interprete la reaccin qumica.

Los compuestos mercricos en medio fuertemente acido (cido ntrico del reactivo) se condensa con el grupo fenlico tomando un compuesto de color rojizo.

REACCION FRENTE AL ACETATO DE PLOMO En 2 tubos de ensayo colocar 0.5 mL de solucin de acetato de plomo y luego aadir gotas de NAOH al 5% hasta disolucin del precipitado formado al principio. Luego aadir al primer tubo 0.5 mL de solucin de albumina y al segundo Cistena. Hervir las mezclas por uno a dos minutos y observar la formacin del precipitado.

CONCLUSIONES

Qu aminocidos se puede encontrar en la albmina de huevo? La ovoalbmina contiene aminocidos esenciales como : Leucina,isoleucina,lisina,fenilalanina,treonina,triptfanoyvalina

Pueba del biuret para enlaces peptdicos: La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminocidos. Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, de frmula:

Que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta caracterstica. Entre las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven por tanto para su identificacin, destaca la reaccin del Biuret. Desnaturalizacin de protenas: Se pudo observar que todas las muestras se coagularon, debido al gran tamao de sus molculas forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formndose cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados que al actuar sobre la protena la desordenan por destruccin de sus estructuras secundaria y terciaria.