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San Cristbal de las Casas, Chiapas a 26 de enero del 2009 Dra.

Carmen Pozo de la Tijera Direccin de Posgrado, Por este medio hacemos de su conocimiento la forma en la que las observaciones de los revisores externos del protocolo Estructura y flujo gentico de poblaciones de poblaciones de la mosca mexicana de la fruta (Anastrepha ludens Loew). Agradecemos las observaciones de los revisores y respondemos en azul a cada una de sus observaciones. Respuesta a los comentarios del Dr. Jos Luis Rangel 1. Antecedentes del proyecto (marco terico, sustento, justificacin). La propuesta presenta un marco terico adecuado, sin embargo este marco no esta conectado al problema que se aborda. Esto es, como se conecta el manejo diferencial de especies con una evaluacin gentica y demogrfica? No hay un sustento claro de literatura que ubique la controversia de un manejo diferencial en funcin de distinciones genticas y demogrficas. Al parecer el conocimiento gentico esta tomando tal "moda" que es justificable para todo, mas no se destacan las implicaciones en manejo. El objetivo no es demostrar que existen diferencias genticas por las diferentes estrategias de manejo, sino por el aislamiento o conexin que existe entre ellas. Sin embargo, es vlida la observacin ya que se menciona pero no se profundiza al respecto, se hacen algunas aclaraciones sobre el documento y en el transcurso del ao se espera aclarar este punto. 2. Objetivos y metas, claramente definidos y viables de lograrse en un ao de investigacin. Claro, aunque es necesario que las predicciones sean mas precisas. No es claro el concepto de poblacin cuando se considera a las poblaciones como estados. Y las predicciones no se pueden establecer por distancias ya que hay una variacin de distancias entre y dentro de los diferentes estados que se estn considerando como "poblaciones". Los individuos colectados por localidad se considerarn como una subpoblacin y la poblacin ser considerada como el total de localidades por estado. Sin embargo, esto ser definido en funcin de las localidades que se obtengan por estado, ya que si se obtienen individuos de una sola localidad por estado, sta localidad sera considerada como la poblacin total. Las distancias geogrficas sern estimadas como el total de kilmetros que separan a una localidad de colecta de la otra, la variacin de distancias entre las poblaciones es muy importante ya que se predice que a mayor distancia menor flujo gentico entre las poblaciones, por lo cual es una de las variables ms importantes para la prediccin. 3. Metodologa de la investigacin apropiada a los objetivos y factible de realizarse en un ao de investigacin.

Me parece adecuada. Aunque no estoy seguro de que le alcance el tiempo para hacer lo que se propone. 4. Calidad y relevancia cientfica del proyecto o impacto del mismo. Tomando en cuenta si los resultados del proyecto representarn una aportacin nueva a los conocimientos del rea. La propuesta es clara, aunque comente con anterioridad la falta de conectividad entre el fundamento terico y las implicaciones de manejo para este fundamento. Se proporcionaron argumentos que esperamos puedan ser suficientes, aunque reconocemos que no son exhaustivos. 5. Justificacin y pertinencia del presupuesto solicitado. No aplica

Respuesta a los comentarios del Dr. Eduardo Medinilla Le agradezco por la atencin prestada a este trabajo, por medio de la presente me permito responder y argumentar a sus comentarios, esperando poder seguir en comunicacin para cualquier observacin adicional que desee hacerme. 1. Los trabajos de Rodrigo Vernica y Rafael Cancino demostraron que hay mejor evidencia de flujo gnico mediante el anlisis por microsatlites que los ofrecidos por isoenzimas y eso preocupa por la magnitud de este estudio. Las isoenzimas han sido usadas para este tipo de estudios en Ceratitis capitata,(Villardi et al., 1990; Krafsur, 2005) obtenindose buenos resultados, sin embargo, tambin se consider la posibilidad de usar microsatlites, pero debido a que se estarn evaluando parmetros demogrficos en las instalaciones de la Planta Moscafrut en Metapa de Domnguez, Chiapas y a que el Laboratorio no cuenta con el equipo adecuado para realizar PCR, se opt por realizar anlisis electroforticos. 2. En los objetivos se menciona que se determinar la variacin fenotpica y en el mtodo no se encuentra aclarado este punto o como se va a desarrollar. Esto se corrigi en el escrito, ya que se pretende determinar parmetros de historia de vida. 3. La tasa intrnseca de crecimiento (r) depende directamente desde la seleccin del fruto por el tamao del ovopositor de la hembra, al hacerlo en medio de cultivo ser muy favorecida la reproduccin, por lo que yo recomendara hacerlo directo en los frutos ofreciendo las alternativas de los mismos frutos de los que fueron obtenidos en campo. La mejor opcin es la que se menciona, sin embargo, se eligi ponerlas en dieta porque el numero de moscas adulto que se obtienen de las muestras enviadas de campo es muy bajo, as se pretende que por medio de esferas de fucellerone la colecta de huevecillos sea ms eficiente. Con respecto a lo de microsatlites, si hubiese tiempo me gustara poder realizar esta evaluacin tambin, como algo adicional, ya que sera muy interesante comparar los

resultados obtenidos con ambas tcnicas. Me dar a la tarea de ver esta posibilidad con mi comit tutelar. Agradezco la atencin que preste a este documento.

Atentamente

Mayra Carolina Molina Nery Lorena Ruiz Montoya

Enero, 2009

Resumen Las moscas de la fruta estn consideradas dentro de los tres principales problemas de plagas para la agricultura nacional. Anastrepha ludens (Mosca Mexicana de la Fruta) dentro del gnero Anastrepha es la especie de mayor distribucin en Mxico. Hasta ahora no hay estudios con esta especie que describan su diversidad y estructura gentica a nivel nacional. En este estudio se describir la estructura gentica y se estimar indirectamente la tasa de flujo gentico (Nm), y su tasa intrnseca de crecimiento (r) de poblaciones de A. ludens ubicadas en distintos estados de la Repblica Mexicana. El conocimiento de los patrones de flujo gentico e historias de vida permitir dilucidar sobre la posibilidad de conexin o aislamiento entre poblaciones separadas geogrficamente por distancias considerables (60-80 km), que para fines de control podra implicar un manejo de poblaciones diferenciado. A travs del apoyo de la Campaa Nacional contra Moscas de la Fruta, se harn colectas de frutos infestados con larvas de A. ludens de las principales especies hospederas en los estados de Michoacn, Morelos, San Luis Potos, Nuevo Len, Durango y Nayarit. Se evaluarn parmetros demogrficos y se estimar la tasa intrnseca de crecimiento con la elaboracin de tablas de vida de A. ludens durante dos generaciones, los parmetros genticos se evaluarn mediante anlisis de electroforesis de los individuos adultos para machos y hembras por separado, esto permitir conocer a su vez si existe un patrn de flujo gentico (Nm, numero de organismos que se dispersan entre pares de poblaciones por generacin) entre las poblaciones estudiadas. Palabras clave: Demografa, Isoenzimas, Tephritidae, Variacin Gentica Introduccin Anastrepha ludens Loew (Mosca Mexicana de la Fruta) representa un problema fitosanitario en la actividad frutcola de mango (Mangifera indica) y naranja (Citrus cinensis) en Mxico. Se han registrado 30 especies del gnero Anastrepha (familia Tephritidae) en Mxico y A. ludens es la especie de mayor distribucin. Se le conocen 22 plantas hospederas naturales; la especie hospedera nativa es Sargentia greggii y Casimiroa edulis, ambos de la familia Rutacaeae. Mientras que en los hospederos adquiridos recientemente estn diversas especies o variedades cultivadas de los gneros Citrus (Rutaceae) y Mangifera (Anacardiaceae) (Hernndez-Ortz, 1992). En Mxico se ha establecido una Norma Oficial Mexicana NOM-023-1995 que establece

procedimientos de control de la mosca y para el transporte de fruta de una regin infestada a un rea libre de la plaga, adems de que es necesario cubrir ciertos requisitos fitosanitarios para poder trasladarla (SENASICA, 2008). En la Norma se establecen una serie de estrategias de combate de la mosca de la fruta, entre ellas estn medidas de tipo cultural y biolgico, resalta la Tcnica del Insecto Estril (TIE). Las medidas de control de tipo cultural son la recolecta de frutos despus de cada cosecha. Las de control biolgico se basan en la liberacin de parasitoides como Diachasmimorpha longicaudata. La Tcnica del Insecto Estril (TIE) consiste en la liberacin de insectos criados en laboratorio y esterilizados mediante irradiacin, para fomentar la cruza en campo con insectos de la misma especie pero silvestres y as evitar la progenie (Gutirrez, 2003). El diseo de mtodos de manejo de plagas efectivos requiere generar un amplio y profundo conocimiento sobre la biologa de la especie (Roderik, 1996). Dentro de este conocimiento est el determinar su diversidad gentica y su estructura poblacional. Se han dedicado esfuerzos para obtener conocimiento del ciclo de vida, preferencias de plantas hospederas y sobre un manejo integrado (Aluja, 1994, Aluja y Mangan, 2008). Hasta ahora no hay estudios con esta especie que describan su diversidad y estructura gentica. De especial inters es conocer la existencia de los patrones de flujo gentico y de los patrones de variacin en la historia de vida de poblaciones de A. ludens. El flujo gentico y parmetros de historia de vida pueden variar en funcin de factores ambientales, de la historia geogrfica del sitio ocupado y de los procesos macro y micro evolutivos (Carey, 1982; Krainacker et al., 1987; Prez, 1987; Celedonio et al., 1988; Liedo et al., 1992; Hendrichs, 1993; Sivinski, 1993; Vargas et al., 1997). El conocimiento de los patrones de flujo gentico e historias de vida permitir dilucidar sobre la posibilidad de conexin o aislamiento entre poblaciones separadas geogrficamente por distancias considerables (60-80 km), que para fines de control podra implicar un manejo de poblaciones dirigido. Las tasas y direccin del flujo gentico pueden proporcionar una estimacin de la capacidad de dispersin, especialmente del potencial para colonizar nuevas reas geogrficas, siempre y cuando est presente al menos una de las plantas hospederas. El origen geogrfico de nuevas infestaciones podra ser especificado lo que ayudara a tomar medidas preventivas o de control (Villardi et al., 1990; Krafsur, 2005). En este estudio se describir la estructura gentica y se estimar indirectamente la tasa de flujo gentico (Nm), y su tasa intrnseca de crecimiento (r) de poblaciones de A. ludens ubicadas en

distintos estados de la Repblica Mexicana. Se espera que esta informacin sea til en los programas de manejo de la mosca mexicana de la fruta. La influencia de los parmetros de historia de vida de A. ludens permitir reconocer posibles fuentes de variacin gentica dentro y entre poblaciones. La estimacin de r se estimar bajo condiciones estandarizadas de laboratorio. Antecedentes Importancia de Anastrepha ludens En Mxico en el ao de 1997, se cultivaron aproximadamente un milln 700 mil hectreas con 20 especies frutales de clima clido y semi-clido. Su produccin se destin al consumo en fresco o procesadas, tanto en el mercado nacional, como en el internacional o extranjero (SAGAR, 1998). Debido a la importancia de la fruticultura para Mxico en el marco econmico y ambiental, las moscas de la fruta estn consideradas dentro de los tres principales problemas de plagas para la agricultura nacional (Aluja, 1994). El norte de Sinaloa, todo el estado de Sonora, Chihuahua, Baja California Norte y Baja California Sur, estn catalogados como reas libres de mosca de la fruta. Existen reas catalogadas como de baja prevalencia de la plaga como ocurre en Aguascalientes, Durango, Nuevo Len, Sinaloa (centro y sur), Tamaulipas (norte y centro) y 48 municipios de Zacatecas. Las entidades en donde actualmente estn bajo control fitosanitario son Colima, Distrito Federal, Guerrero, Jalisco, Michoacn, Nayarit, San Luis Potos, Veracruz, Campeche, Chiapas, Guanajuato, Hidalgo, Estado de Mxico, Morelos, Oaxaca, Puebla, Quertaro, Quintana Roo, Tabasco, Tlaxcala y Yucatn (SENASICA, 2008). Distribucin y hospederos A. ludens es la especie de mayor distribucin en todo el pas. Fuera de Mxico se ha reportado en el sur de E.U.A. (Texas, Arizona y California), en Guatemala, Belice, Honduras, Nicaragua, El Salvador y Costa Rica (Hernndez-Ortz, 1992). Segn Hernndez-Ortz (1992) se han reportado 22 especies de plantas como hospederos de A. ludens en Mxico: Annona cherimola Annona reticulata Annona squamosa Casimiroa edulis Citrus aurantiifolia Citrus aurantium Citrus limetta Citrus maxima Citrus medica Citrus paradisi Citrus reticulata Citrus sinensis
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Cydonia oblonga Mammea americana Mangifera indica Mastichodendron capiri Estimadores de Flujo Gentico

Prunus persica Psidium guajava Punica granatum Sargentia gregii

Spondias purpurea Syzygium jambos

La gentica de poblaciones estudia la estructura, cantidad y distribucin de la variacin gentica dentro y entre poblaciones naturales, comnmente con base en las frecuencia allicas (Hart y Clark, 1997; Dobzhansky et al., 1977). La estructura gentica (frecuencias genotpicas y allicas) de una poblacin concreta, esta determinada por la historia evolutiva de esa poblacin y es consecuencia de las interacciones entre los cinco factores que ocasionan la evolucin de las poblaciones (cambios en las frecuencias allicas y genotpicas): mutacin, deriva gnica, seleccin, sistema de reproduccin y flujo gentico (Roderick, 1996). El flujo gentico se define como la transferencia de genes de una poblacin a otra. La transferencia en animales es bsicamente a travs de la dispersin de individuos de una poblacin a otra (Groom et al., 2006). El flujo gentico, determina en parte, hasta qu punto cada poblacin de una especie es una unidad evolutiva independiente. Si existe una alta tasa de flujo gentico entre las poblaciones entonces estas poblaciones evolucionan juntas. Pero si hay poco flujo gentico, cada poblacin evoluciona de forma independiente (Slatkin, 1994). Hay un nmero de factores que afectan el ritmo del flujo gentico entre poblaciones: entre los que destacan la capacidad de dispersin de los organismos, las condiciones ambientales de las reas que tienen que recorrer los organismos, la distancias geogrficas entre las poblaciones, entre otros (Groom et al., 2006). El efecto del flujo gentico puede llegar a ser tal, que puede disminuir la diferenciacin gentica que resulta de la seleccin natural o de la deriva gentica Slatkin, 1994). La estimacin del flujo gentico en animales puede efectuarse a travs de mtodos directos e indirectos. Las estimaciones directas se basan en el conocimiento de los patrones de dispersin (movimiento de individuos entre poblaciones), e incluye el reconocimiento de la fase en la historia de vida de la especie en la cual ocurre la dispersin. La estimacin directa tiene la desventaja de basarse en estudios limitados por la escala. Es difcil obtener informacin sobre dispersiones o movimiento de los individuos a largas distancias. Adicionalmente, los individuos que se dispersan podran no reproducirse dentro de la poblacin receptora y por lo tanto no hacer
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efectiva la transferencia de genes (Slatkin, 1985 y 1994). Las estimaciones indirectas se basan principalmente en el comportamiento de las frecuencias allicas que se obtienen usando algn tipo de marcador molecular. Dependiendo del marcador y de la forma de muestrear los alelos se puede identificar relaciones genticas parentales que sugieren el movimiento de genes entre poblaciones (Hedrick, 1997). Los modelos parten de la condicin de Equilibrio de HardyWeinberg (EHW) y cmo este equilibrio puede ser alterado por el flujo gentico. La desventaja es que dependen de los supuestos de EHW, que son tamao de poblacin grande, apareamiento aleatorio, nula tasa de mutacin, ausencia de seleccin, entre otros; y que slo el flujo altera el equilibrio. Estos supuestos pocas veces se cumplen (Slatkin, 1994) Para estimar el flujo gentico de manera indirecta se emplean los estadsticos F, los cuales asumen una poblacin homognea (T) y llega a ser subdividida (S) hasta el nivel de individuo (I). Dicho de otro modo reparte la variacin gentica a nivel de individuo, subpoblacin y poblacin total. Se trata de una estimacin de la probabilidad de que dos alelos sean idnticos por descendencia, por lo que tambin son estimadores de la endogamia a diferentes niveles jerrquicos Fst (subpoblacin), Fit (poblacin total), Fis, (individuos dentro de una poblacin). Estos estimadores estn interrelacionados por la siguiente funcin 1-Fit=(1-Fst)(1-Fis). Fst es especialmente importante ya que sugiere el nivel de diferenciacin entre poblaciones cuyo valor puede ser alterado por la tasa de flujo gentico (Hedrick, 1997; Slatkin, 1985). Estos estadsticos pueden ser expresados en trminos de las frecuencias allicas y frecuencias genotpicas observadas y esperadas (Hartl y Clarck, 1997; Hedrick, 1997). La Fst puede ser modificada por el nmero de individuos que se dispersa por generacin (Nm) de la siguiente forma Fst=1/(4Nm+1); y Nm puede ser interpretado como la tasa de flujo gentico que ocurre entre pares de poblaciones (Hedrick, 1997; Slatkin, 1994). En los estudios que se han hecho para estimar el flujo gentico usando mtodos indirectos se ha podido identificar los patrones de flujo gentico y las barreras o las condiciones que facilitan el flujo gentico. Estudios sobre flujo gentico en plantas (Lestani et al., 2005) y en insectos como en Stegomyia aegypti, mosquito vector de la fiebre amarilla (Su et al., 2003), se reconoci la existencia de barreras fsicas que impiden el flujo gentico entre poblaciones. En algunos casos el alto flujo gentico puede promover el mantenimiento de altos niveles de diversidad gentica en una especie. El flujo gentico implica un aporte constante de genes en una poblacin. Para el caso de especies plaga, presentar altos niveles de diversidad gentica puede ser en parte la razn de

porqu pueden superar las estrategias de control (Dvila et al., 2005). Los estudios de gentica de poblaciones con especies de Tephritidae muestran un intervalo amplio de polimorfiso (P) y diversidad gentica (H). Por ejemplo para Ceratitis capitata el polimorfismo va de 12.5 a 100% y la heterocigosidad entre H=0.005 y H= 0.186 (Huettel et al., 1980; Gasperi et al., 1986; Villardi et al., 1990). Los estudios genticos con poblaciones de A. ludens de Chiapas, han mostrado que existen considerables niveles de variacin gentica, cuyo mantenimiento puede estar relacionado con el hecho que se aplican diferentes mtodos de control y a que A. ludens usa diferentes especies de plantas (Vernica-Vallejo, 2006; Cancino, 2007). El hospedero promueve una diferenciacin gentica considerable entre poblaciones, especialmente de mango (Mangifera indica) y naranja (Citrus sinensis). Estas diferencias entre las poblaciones de acuerdo al hospedero disminuyen si existe alto flujo gentico. La alta disponibilidad de stos hospederos, especialmente en el Soconusco (Chiapas), puede facilitar el flujo gentico entre poblaciones (Vernica-Vallejo, 2006). As tambin, la estructura gentica en A. ludens con relacin a las distancias geogrficas, provoca que haya mayor flujo entre localidades ms cercanas que entre localidades ms alejadas, independientemente de la especie hospedera (Cancino, 2007). Parmetros demogrficos Algunos estudios con especies cercanas, como A. fraterculus, demuestran que los diferentes orgenes geogrficos pueden resultar en incompatibilidad sexual (Vera et al., 2006). Sin embargo esto no se ha observado en A. ludens (Orozco et al., 2007). En cuanto a los parmetros de historia de vida se han hecho estudios sobre la influencia que ejerce el tipo de hospedero en fecundidad, sobrevivencia, desarrollo larval y adulto, incluyendo tamao del cuerpo de especies de Tephritidae (Carey, 1982; Krainacker et al., 1987; Prez, 1987; Celedonio et al., 1988; Liedo et al., 1992; Hendrichs, 1993; Sivinski, 1993; Vargas et al., 1997). En Ceratitis capitata el hospedero en donde se desarrolla la larva afecta la sobrevivencia, fecundidad y fertilidad, en este estudio se pretende analizar si las poblaciones presentan diferencias en los parmetros antes mencionados, evaluados a travs de la estimacin de la tasa intrnseca de crecimiento (r) en condiciones estandarizadas de laboratorio y su relacin con un patrn de flujo gentico (Carey, 1982; Krainacker et al., 1987).

Pregunta de investigacin Cul es el nivel de variacin gentica y en caracteres de historia de vida entre y dentro de poblaciones de mosca mexicana de la fruta Anastrepha ludens (Loew) separadas por distancia geogrfica considerable (>60-80 km)? Hiptesis Se espera que todas las poblaciones muestren altos niveles de variacin, tanto en sus caracteres de historia de vida (CV>60%) como en la diversidad gentica (0.013<H<0.392). Suponemos que estos atributos le han permitido a A. ludens utilizar nuevos hospederos y ampliar su distribucin geogrfica. As mismo, se espera que la diferenciacin gentica y en historia de vida entre poblaciones se relacione con la distancia geogrfica, bajo el supuesto de que ocurre un bajo flujo gentico y un rgimen selectivo diferencial entre poblaciones. Objetivo general Determinar los niveles de variacin gentica y de parmetros de historia de vida de poblaciones de A. ludens de los estados de: Michoacn, Morelos, San Luis Potos, Nuevo Len, Durango y Nayarit. Objetivos especficos Estimar el nivel de diversidad gentica de seis poblaciones mexicanas de A. ludens Determinar el grado diferenciacin gentica de A. ludens y su asociacin con la distancia geogrfica. Determinar la tasa intrnseca de crecimiento (r) de poblaciones colectadas en seis estados de la Repblica Mexicana. Determinar si existe correlacin entre la variacin gentica y crecimiento. Materiales y Mtodos Sitios de colecta A travs del apoyo de la Campaa Nacional contra Moscas de la Fruta, se harn colectas en los la tasa intrnseca de una

estados de Michoacn, Morelos, San Luis Potos, Nuevo Len, Durango y Nayarit. Se colectar en las principales especies hospederas como son Mangifera indica (mango) y Citrus sinensis (naranja). Se colectar en dos localidades por cada Estado, esto durante los meses de septiembre 2008 a enero del 2009. Procesamiento de muestras Se elegirn los frutos en donde se encuentren larvas del 3er estadio. Estas larvas sern llevadas al laboratorio en donde se depositarn en vermiculita para estimular el paso de larva a pupa y la emergencia de adultos. Los adultos sern colocados en jaulas y a los 20 das se elegirn al azar 30 individuos adultos (15 machos y 15 hembras) por hospedero por localidad y sern almacenados individualmente en viales y a una temperatura de -70C hasta la realizacin de la electroforesis. 100 adultos (50 machos y 50 hembras) se usarn para la evaluacin de atributos demogrficos. Los individuos que se usarn para el anlisis de parmetros genticos sern tomados de los individuos en los que se evaluarn parmetros demogrficos, esto se har en los parentales, ya que para la progenie solo se evaluarn parmetros demogrficos. Parmetros demogrficos En laboratorio, los frutos se disectarn con el fin de recuperar las larvas. Las larvas se colocarn en vermiculita para que comiencen a pupar, a una temperatura de 26oC y HR de 70 a 80 %. Una vez que los adultos emerjan sern colocados en cinco jaulas (10 parejas por jaula) y se evaluarn atributos biolgicos como la eclosin mxima, duracin de cada estadio, y sobrevivencia de larvas. Las jaulas sern de 30 x 30 x 30cm, cubiertas con malla y una de las caras cubierta con tela de color blanco y luz fina para poder manipular el alimento de las moscas y los individuos colocados en ellas. A los 10 das de haber colocado los adultos en las jaulas (tiempo en el que alcanzan la madurez sexual), se les colocarn dispositivos para colectar los huevecillos. El dispositivo que se usar sern esferas de fucellerone (ver anexo). A las 24 hrs de colocado el dispositivo se har la colecta de huevecillos, se alinearn 100 huevecillos en cinco cajas petri para evaluar la fertilidad, o eclosin de huevecillos (esta lectura se har a los 7 das) y el resto sern usados para siembra, se colocarn en cajas petri con papel filtro y tela de organza negra, se mantendrn a 26C y 70 a 80% HR. Despus de 4 das se har la siembra. Las larvas recin emergidas sern sembradas en dieta (ver anexo) para su desarrollo. Cuando las larvas hayan madurado se recuperarn y sern colocadas en vermiculita para inducir pupacin. Se evaluar

eclosin mxima, sembrando 100 larvas por recipiente y contando el nmero de ellas que llegan a pupar. Una vez que se formen las pupas (lo que en promedio ocurre a los 14 das), las pupas sern tamizadas y colocadas en jaulas para la emergencia de adultos. Se har el conteo de adultos. Estas evaluaciones se harn durante dos generaciones. Con estos datos se harn tablas de vida para obtener la tasa intrnseca de crecimiento para cada poblacin (Stiling, 2002). Se harn anlisis de correlacin entre la variacin gentica y la tasa intrnseca de crecimiento (empleando el paquete estadstico SPSS v. 15.0). Parmetros genticos Para llevar a cabo el anlisis por electroforesis se har uso del Laboratorio de Gentica del rea de Sexado Gentico en la Planta Moscafrut, ubicada en Metapa de Domnguez, Chiapas. La estructura gentica se describir a travs del anlisis enzimtico utilizando la tcnica de electroforesis en acetatos de celulosa (Herbet y Beaton, 1994). La electroforesis es una tcnica rpida y sencilla que permite obtener estimaciones de las frecuencias gnicas y de la variacin gentica existente entre poblaciones. Es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de stas en un campo elctrico a travs de una matrz porosa, la cual finalmente las separa por tamaos moleculares. Cada individuo adulto de los parentales se macerar con 250 microlitros de una solucin extractora, y se centrifugar a 13 000 rpm (revoluciones por minuto) por 3 minutos y el sobrenadante se usar para la separacin de las enzimas por electroforesis. En las isoenzimas, las sustituciones de aminocidos que cambian la carga elctrica de la enzima son fciles de identificar por electroforesis en gel y esto constituye la base para el uso de las isoenzimas como marcadores moleculares. Se usarn acetatos de celulosa, previamente remojados durante 40 minutos en el buffer de corrimiento CAAMP (Herbet y Beaton, 1994). Los corrimientos se llevarn a cabo en condiciones de temperatura ambiente, a 50 V y 30 mA durante 2 horas y 30 minutos. Se revelarn 6 loci enzimticos: MDH, IDH, GOT, ME, GPI y 6PGDH. Se obtendrn las frecuencias genotpicas, allicas y el porcentaje de polimorfismos. Anlisis Se har uso del programa Tools For Genetic Populations Analisis (TFPGA) para obtener los parmetros descriptivos de la diversidad y estructura gentica, en los cuales se consideran

nicamente los loci con al menos dos alelos. Se obtendrn las frecuencias genotpicas y allicas, con estos datos se obtendr el porcentaje de polimorfismo, en una escala de 0 a 1, si el total de los loci son polimorficos (con dos o ms alelos) es igual a 1 y cuando la variacin gentica es nula igual a 0 (un solo alelo). Se calcular la heterocigosidad y el EHW (mediante una prueba de 2 ), la heterocigosidad esperada y observada de las poblaciones (conjunto de organismos que se colecten por hospedero por localidad y Estado). Para determinar el grado de similitud entre las poblaciones se usar un anlisis de agrupacin (UPGMA) con base en una matrz de distancias genticas de Nei (1972). La diferenciacin entre poblaciones y subpoblaciones se estimar a travs de los estadsticos Fs de Wright (Hedrick, 1997). Los anlisis se harn para hembras y machos por separado. El anlisis de Flujo Gentico entre poblaciones se har mediante la relacin Nm = (1/Fst -1)/4. Para estimar si el patrn de flujo gentico se debe al aislamiento por distancia se har una regresin de Nm (nmero de individuos que migran entre pares de poblaciones por generacin) contra la distancia geogrfica que hay entre pares de poblaciones (Hedrick, 1997).

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(Diptera:Tephritidae). Evolucin Biolgica. 4:107-118

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ANEXOS Esferas de oviposicin Pesar 30 gr de fucellerone Medir un litro de agua Mezclar hasta que quede homognea Calentar durante 30 min a punto de ebullicin (80C). Agregar un mililitro de colorante vegetal McCormick y mezclarlo bien. Vaciar el contenido en moldes para esferas de una pulgada de dimetro Dejar enfriar y separar del molde.

Cuadro 1. Ingredientes para dietas larvarias elaborada para A. ludens (Stevens, 1991) Ingredientes Polvo de olote Harina de maz Azcar Lev. Lake-States Ac.Ctrico Benzoato Nipagin Goma guar Agua g 90 26.5 46 35 2.2 2 1 0.5 296.8 % 18 5.3 9.2 7 0.44 0.4 .2 0.1 59.4

Cuadro 2. Alimento de los adultos Compuesto Azcar Proporcin 3

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Levadura hidrolizada enzimticamente

Componentes de Isoenzimas a usar en el anlisis electrofortico IDH Isocitrate Deshydrogenase ME Malate Dehydrogenase NADP MDH Malate Dehydrogenase 1.0 ml Tris HCl pH= 8.0 1.5 ml NAD 13 gotas Malic Substrate. 0.6 ml Tris HCl PH= 8.0 1.5 ml NADP 12 gotas Malic Substrate 2 gotas 5 gotas 5 gotas 2 ml MgCl2 MTT PMS Agar. 1.0 ml Tris HCl pH= 7.0 1.5 ml NADP GOT Aspartate Amiro Tranferasa GPI Glucose-6-Phosphate Isomerasa 1.0 ml Tris HCl Ph= 8.0 1.5 ml NAD 3 ml Solucion # 1 5 gotas Fast Blue BB. 2 ml Agar. 5 gotas MTT 5 gotas PMS 2 ml Agar.

1.5 gotas DL-Isocitric acid. 8 gotas MgCl2

12 gotas MTT 5 gotas 2 ml PMS Agar.

10 gotas Fructose-6-phosphate 5 gotas MTT 5 gotas PMS 20 microlitros G6PDH 2 ml Agar.

G6PDH 80 microlitros G6PDH 1 ml H2O.

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CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES 2008 Mes Procesamiento y almacenamiento de muestras Evaluacin de parmetros demogrficos. Evaluacin de parmetros genticos Procesamiento y anlisis de datos D E F . . M A M J 2009 J A S O N D

Revisiones de tesis

Lugar

Metapa de Domnguez, Chiapas.

San Cristbal de las Casas, Chiapas.

Resumen curricular Nombre: Mayra Carolina Molina Nery FORMACIN ACADMICA (A PARTIR DE LICENCIATURA) Carrera: Ingeniero Agrnomo Especialista en Parasitologa Agrcola Institucin: Universidad Autnoma Chapingo Nivel: Licenciatura Modalidad de graduacin: Tesis Ttulo de la tesis: Sintomatologa y Distribucin espacial de los virus asociados a chile (Capsicum annuum hbrido Lorca F1) bajo invernadero en Texcoco, Estado de Mxico. EXPERIENCIA EN PROYECTOS DE INVESTIGACIN (NO INCLUYENDO LA TESIS) Tipo de participacin (colaborador o responsable): colaborador Responsabilidades dentro del proyecto (no incluyendo su investigacin de tesis): montaje y medicin morfomtrica de pulgones. Nombre del proyecto: Adaptacin local de insectos fitfagos a sus especies hospederas, correlaciones y estructura gentica, en el municipio de San Cristbal de las Casas, Chiapas Investigador responsable: Lorena Ruz Montoya Institucin donde se desarroll: ECOSUR unidad San Cristbal Instancia financiadora: CONACyT Fechas de inicio y trmino: 1 de junio a 1 de diciembre del 2005. CONGRESOS Ponentes: Francisco Ponce Gonzlez Ao: Noviembre del 2003 Ttulo de la ponencia: ENFOQUES ACTUALES EN LA PARASITOLOGIA AGRCOLA Nombre y lugar del congreso: Semana de Parasitologa Agrcola, Universidad Autnoma Chapingo, Texcoco, Mxico. Ponentes: Amalia Prez Valdz Ao: Noviembre del 2005 Ttulo de la ponencia: COMO COMPETIR PROFESIONALMENTE EN EL MERCADO FITOSANITARIO E IMPACTO DEL CONTROL BIOLGICO DE PLAGAS. Nombre y lugar del congreso: Semana cientfica, cultural y deportiva de Parasitologa Agrcola, Universidad Autnoma Chapingo, Texcoco, Mxico.