Qu es la insulina?

Es una hormona constituida por 51 aminocidos. La misma es segregada por las clulas Beta de los islotes de Langerhans del pncreas, en forma de precursor inactivo (proinsulina), el cual es procesado en el Aparato de Golgi donde es modificada, generando la forma activa, insulina. La insulina es una hormona que controla el nivel de glucosa en la sangre. Las personas con diabetes pueden no tener suficiente insulina o no ser capaces de usarla correctamente. Por lo tanto, el azcar se acumula en la sangre y fluye hacia la orina, saliendo del cuerpo sin que haya sido usada. De esta manera, el organismo de quien padece diabetes se ve privado de utilizar los carbohidratos como fuente de energa, ya sea por la ausencia o poca actividad de la insulina, impidiendo que las clulas empleen los carbohidratos para su procesamiento como fuente energtica. En personas que no padecen diabetes, con cada comida, las clulas Beta liberan insulina con el fin de metabolizar el azcar o la glucosa obtenida de los alimentos. En personas con Diabetes tipo 1, el pncreas no produce ms insulina; por lo cual necesitan disparos de insulina para metabolizar la glucosa de los alimentos. Las personas con diabetes tipo 2 producen insulina, pero sus organismos no responden tan bien como debe ser. Por lo tanto, las personas que padecen diabetes tipo 2 necesitan medicacin oral y a veces disparos de insulina. Existen distintas clases de insulinas. La mismas se difieren entre s segn cmo estn desarrolladas y producidas, cmo se procesan en el organismo, y su precio al consumidor. La insulina que se utiliza para el tratamiento de la Diabetes puede ser de origen animal, provenientes del cerdo o la vaca; o es producida en los laboratorios para ser exactamente igual a la Insulina humana mediante ingeniera gentica. Hay cuatro tipos fundamentales de insulina, basados en: La rapidez de su accin (arranque) El tiempo en donde su actividad sea ms fuerte (hora de su pico) El lapso de tiempo que mantiene su actividad en el organismo (duracin) La insulina de accin rpida (Lispro, L) ingresa a la sangre en los primeros 15 minutos despus de la inyeccin. Su pico se produce ms tarde entre 30 y 90 minutos y se puede mantener a lo largo de aproximadamente 5 horas. La insulina de accin corta (regular, R) usualmente ingresa a la sangre en los primeros 30 minutos despus de la inyeccin. Su pico es alcanzado entre 2 y 4 horas ms tarde y permanece en la sangre por aproximadamente 4 a 8 horas. La insulina de accin intermedia (NPH, N y lenta, L) ingresa a la sangre 2 a 6 horas despus de la inyeccin. Tienen las dos insulinas un pico de 4 a 14 horas ms tarde y permanecen en la sangre por aproximadamente 14 a 20 horas. La insulina de accin prolongada (ultralenta, U) se toma de 6 a 14 horas para iniciar su accin. Ella no tiene pico de accin o es un pico muy corto entre 10 a 16 horas despus de la inyeccin. Permanece en la sangre entre 20 y 24 horas. Algunas insulinas pueden ser administradas en forma combinada; segn indicacin del profesional tratante.

La era de las insulinas producidas por ingeniera gentica Este tipo de insulinas se producen por medio de ingeniera gentica empleando tcnicas de ADN recombinante. El gen para la insulina, se introduce en clulas distintas a donde es producida en la naturaleza (en las clulas Beta del pncreas). Comnmente se emplean bacterias

(siendo la ms usada Escherichia coli ) o levaduras, usando un plsmido o vector. Mediante control de las condiciones de crecimiento de estos microorganismos, los mismos pueden reproducirse en grandes cantidades y producir abundante cantidad de insulina recombinante a un precio relativamente bajo. De esta manera las insulinas de origen animal prcticamente han desaparecido del mercado dando lugar a las insulinas recombinantes, constituyendo actualmente el 93 % de la demanda mundial. La insulina fue el primer producto, derivado de la tecnologa de ADN recombinante, comercializado para salud humana. Despus de su comercializacin por la compaa Eli Lilly en Estados Unidos de Amrica en 1982, la insulina humana recombinante ha reempla zado gradualmente a la insulina animal, siendo actualmente el tratamiento ms frecuente elegido en pacientes con diabetes insulinodependientes con requerimientos de insulina. Adems, se han desarrollado distintos mecanismos de penetracin de la insulina al organismo, de modo de procurar una mejor calidad de vida a quienes necesitan del suministro exgeno de la misma, evitando su introduccin al organismo por inyeccin. Algunas de estos avances consisten en el desarrollo de insulina cuya va de entrada al organismo es la inhalacin, o preparaciones en cpsulas que contienen en su interior insulina, protegiendo a la molcula de la accin de los jugos gstricos que haban impedido histricamente su administracin oral. Esta ltima, desarrollada por cientficos de la India en el ao 2004.

Insulinas producida por plantas y animales transgnicas Otra manera de produccin de insulinas mediante ingeniera gentica es el uso de plantas o animales como productor a gran escala. En tal sentido, la empresa canadiense de biotecnologa SemBioSys Genetics, ha desarrollado una planta transgnica que produce insulina. La hormona se obtiene de cultivos de crtamo, una planta oleaginosa que se ha modificado genticamente con el gen humano productor de insulina. Los primeros ensayos con animales han demostrado que la hormona fabricada a partir de esta planta es equivalente, desde el punto de vista qumico, estructural y funcional, a la insulina humana farmacutica. Las pruebas tambin confirman que la insulina producida en crtamo es fisiolgicamente equivalente a la hormona humana, por lo que podra ser empleada para tratar a personas con diabetes tipo 1. Se estima que si los prximos ensayos son positivos, este tipo de insulina producida por plantas transgnicas podra estar en el mercado en tres aos; siendo el primer frmaco que se obtiene de una planta modificada genticamente que este en el mercado. SemBioSys Genetics cuenta con cultivos de este tipo en Canad, Estados Unidos, Mxico y Chile. Los investigadores afirman que el uso de plantas transgnicas permitira reducir los costes de produccin de insulina en ms de un 40% y acelerar su fabricacin. En el caso de la insulina obtenida en animales transgnicos, ha sido obtenida recientemente empleando cabras y ganado vacuno; producindose en la leche de los mismos. Es de destacar que la obtencin de insulina humana en la leche de vaca ha sido desarrollada por el laboratorio de Bio Sidus de la Argentina, y que slo hay dos multinacionales farmacuticas que producen la insulina a partir de leche, empleando cabras. Este tipo de investigacin y de desarrollo biotecnolgico posiciona a la Argentina en un nivel muy privilegiado en la biotecnologa a nivel internacional; estimndose que el medicamento podra estar en el mercado en pocos aos. Estos animales transgnicos son portadores del gen de la insulina de manera inocua, expresndose en el tejido mamario. En caso del desarrollo biotecnolgico de la empresa Bio Sidus, las terneras denominadas Patagonia I, II, III y IV nacieron entre Febrero y Marzo de 2007. Son terneras de Raza Jersey que poseen en su material gentico el gen del precursor de Insulina humana. Una vez que hayan

alcanzado su madurez sexual sern estimuladas para estudiar los niveles de este precursor en su leche. La leche con el precursor de insulina humana es slo una etapa intermedia del proceso de produccin. El paso siguiente a partir de la obtencin de dicho precursor ser la optimizacin del proceso de aislamiento y purificacin, a escala industrial, de la insulina humana a partir de leche bovina. La glndula mamaria es un biorreactor de alta productividad pues constituye un tejido especializado para la eficiente produccin de protenas. Aprovechando esta capacidad, mediante el uso de herramientas de biologa molecular, es posible colocar la informacin gentica de una protena humana para que sea producida en altas cantidades en la leche. Para ello, el gen del precursor de insulina humana fue programado para que slo se active en las glndulas mamarias del animal. Esta estrategia gentica permite que un gen, que se encuentra presente en todas las clulas de un organismo, se muestre activo o encendido solamente en un tejido predeterminado y no en otro. Para evitar los posibles efectos que la insulina pudiese ocasionar sobre la fisiologa de los animales transgnicos, se dise un precursor modificado, inactivo en los bovinos, para que luego de obtenido en la leche se pudiese recuperar su forma farmacutica activa. En este modelo, a partir del precursor de la insulina humana presente en la leche de bovinos, el cual consiste en el agregado de un pequeo fragmento de protena a la molcula de insulina humana que le cambia su estructura espacial y la hace inactiva en el animal. De esta manera, el proceso productivo consistir en la obtencin del precursor en la leche, su procesamiento molecular para la obtencin de la molcula activa y su purificacin final para la obtencin del producto farmacutico. Es as como la glndula mamaria de estos animales se convierte en un verdadero biorreactor especfico y de alta productividad. Exhaustivas pruebas de seguridad y eficacia permitirn, durante ese perodo, cumplimentar con todos los requisitos regulatorios indispensables para obtener la aprobacin del producto por la autoridad competente. Ser entonces que se habrn logrado las condiciones necesarias para llevar al mercado farmacutico un nuevo producto de aplicacin en medicina humana.

Beneficios de la produccin de insulina en plantas y animales transgnicos El tratamiento con insulina, al igual que otros basados en la accin de protenas con baja actividad especfica, como la hormona de crecimiento humana o los anticuerpos monoclonales, requieren un sistema de produccin de alta escala para poder abastecer la demanda de los mismos a un costo razonable. Para ser efectivo, el tratamiento con insulina requiere su administracin cotidiana, lo que significa un muy elevado costo para el paciente y para todo el sistema de salud. Esta estrategia de produccin ofrece sustanciales mejoras en los rendimientos finales, sobre todo cuando se la compara con aquellos sistemas desarrollados en bacterias o clulas en cultivo. Tomando el ejemplo de Bio Sidus, la obtencin de estos nuevos animales transgnicos representa un gran avance en los planes de investigacin y desarrollo de esta empresa donde han trabajado ms de 50 cientficos en el proyecto, y resalta su alta capacidad cientfica y tecnolgica, ubicndola entre las mejores empresas innovadoras a nivel mundial. Debemos mencionar que slo en Argentina se consume por ao unos 200 kilos de insulina, muchos de los cuales provienen del exterior. Este tambo farmacutico permitir una alterna tiva tecnolgica de alta productividad y bajo costo para abastecer esta enorme y creciente demanda, segn explic el director ej ecutivo de Bio Sidus, Dr.Marcelo Criscuolo.

La diabetes del tipo 2, caracterizada por una respuesta deficiente a la insulina, es una enfermedad que ha tomado caractersticas epidmicas y est relacionada con aspectos genticos as como tambin con el sedentarismo y la alimentacin inadecuada. Cabe destacar que el 75% de la poblacin diabtica mundial se localiza en los pases en desarrollo. Si bien estos pacientes comienzan con otros tipos de tratamientos finalmente una importante proporcin debe adoptar la administracin de insulina en etapas avanzadas de la enfermedad. Existen en la actualidad en el mundo cerca de 200 millones de personas que sufren diabetes de las cuales el 85% corresponde a la del tipo 2. Las proyecciones epidemiolgicas nos dicen que esta cifra tender a duplicarse en los prximos quince aos. La alta incidencia de esta enfermedad sobre la poblacin, alrededor del 6%, y la complejidad de las afecciones crnicas que este trastorno metablico genera, hablan de su enorme importancia sanitaria y econmica. Entre un 10 y un 20% de las personas mayores de sesenta aos son diabticos, lo que les genera complicaciones a nivel cardiovascular, neurolgico, renal, oftalmolgico e infectolgico. De ah la importancia de un precoz diagnstico y de un rpido establecimiento del tratamiento crnico adecuado. En Argentina, por ejemplo, existen ms de un milln y medio de pacientes diabticos. Su tratamiento produce un gran impacto econmico en los pacientes y en los sistemas de salud por tratarse de un tratamiento crnico de un producto de considerable valor. La obtencin de insulina humana recombinante mediante mtodos ms eficientes como los que aporta la tecnologa de plantas y animales transgnicos permitir abaratar los costos de produccin sin detrimento de la calidad del producto.

Proceso de elaboracin de la cerveza

Germinacin de la malta El grano de cebada, seleccionado, limpiado y humedecido, se extiende en una gran sala llamada cmara de germinacin, la cual esta acondicionada a 18-20C. Enseguida con ayuda del Galland, (aparato formado por dos cilindros, uno metlico exterior y otro interior giratorio de tela metlica) en donde caen las semillas desde una tolva; por un eje interior sale una corriente de aire hmedo. El proceso dura de ocho a nueve das y se interrumpe con una corriente de aire a 25C que deseca los granos (malta verde. Enseguida se tuestan en hornos especiales entre 100 y 200C y se muelen hasta reducirlos a harina. Maceracin Transformacin del almidn en azcar fermentable, que se realiza entre 60 y 70C mediante la diastasa y dura unas 3 horas. El agua caliente se aade a las cubas que tienen agitadores en las que est la harina de malta. Hirviendo el lquido se detiene la accin enzimtica, y las protenas indeseables coagulan y precipitan. Se filtra en una cuba decantadora (lauter), provista de doble fondo agujereado, o bien en filtros prensa. El filtrado, llamado mosto, se hierve en grandes depsitos, en donde se adiciona la cantidad precisa de lpulo. Se filtra, se enfra y airea. Fermentacin Se introducen levaduras que se clasifican en: 1) altas: formadas por cultivos de Saccharomyces cerevisiae, que suben a la parte posterior del tanque de fermentacin (cervezas "ale"). El proceso empieza alrededor de los 9C; la temperatura asciende unos pocos grados en la fermentacin tumultuosa, y finalmente desciende alrededor de 5C en el enfriamiento. Al cabo de unos das comienza la fermentacin lenta, que dura de quince a veinte das, segn la fbrica y el tipo de cerveza. 2) bajas: formadas por cultivos de S. Carlsbergensis, que se depositan en la parte inferior, con temperaturas entre 15 y 20C (cervezas "Lager"). Maduracin Este proceso consiste en dejar reposar el lquido en tanques especiales durante algunos meses. Se adicionan agentes antioxidantes, cido sulfuroso o cido ascrbico, para evitar el cambio de gusto. A veces se filtra con ayuda de agentes clarificantes. Envasado El contenido de anhdrido carbnico se regula en el tanque embotellador. El envasado de la cerveza se realiza en botellas, botes, cubas o barriles, generalmente se pasteuriza. La cantidad de alcohol oscila del 2 al 6%. Gracias al envasado la cerveza llega a su hogar con las mayores garantias de conservacin, sabor y cuerpo. El trmino cerveza es una expresin genrica para designar al producto originalmente obtenido por fermentacin de un e xtracto acuoso de malta, que abarca tanto lo que en la Gran Bretaa se denomina ale, una bebida a la que se aade lpulo, con o sin adicin de otras fuentes de carbohidratos, fabricada con levaduras altas, como a aquellas otras bebidas de malta a las que se aade lpulo y son fermentadas con levaduras bajas. Su produccin se basa en procesos biotecnolgicos que incluyen la germinacin de la cebada para producir malta, la maceracin de adjuntos cerveceros ricos en almidn con enzimas generadas durante el malteo con la posterior aromatizacin del mosto dulce con lpulo (Humulus lupulus) y, finalmente, con la fermentacin del mosto aromatizado con levadura.

La qumica y transformaciones que ocurren durante estos procesos y a travs del almacenamiento de la cerveza son de importancia primordial para la industria. El proceso de malteado se puede definir como la germinacin del grano bajo condiciones controladas con el objetivo de generar la mxima actividad enzimtica o diastsica posible. La malta rica en alfa y beta amilasas convierte al almidn de los adjuntos cerveceros en azcares fermentables y dextrinas durante la etapa de maceracin. Los primeros son transformados por la levadura para producir etanol y una gama de compuestos que afectan las propiedades organolpticas y los segundos son los responsables de impartir cuerpo o viscosidad a la cerveza. Tambin se generan importantes proteasas que degradan a las protenas en alfa amino nitrgeno, substrato esencial para la actividad de la levadura y formacin de algunos compuestos saborizantes, entre los que destacan los alcoholes de fusel.

Para lograr producir cervezas ligeras o con menor contenido de caloras, es necesario romper a las dextrinas con enzimas comerciales como la amiloglucosidasa. Tambin la industria utiliza glucanasas para decrementar la viscosidad de los mostos y mejorar su tasa de filtracin. El lpulo imparte el sabor tpico a la cerveza debido a su contenido de aceites esenciales y resinas amargas. Adems, contiene taninos y compuestos fenlicos los cuales coayudan en el proceso de clarificacin. El sabor amargo caracterstico de la cerveza proviene de dos compuestos clasificados como resinas: las humulonas o cidos alfa y las lupulonas o cidos beta.

Las levaduras bajas son aquellas que al final de la fermentacin se van al fondo del tanque de fermentacin y fueron empleadas por primera vez en Baviera. Estas se utilizan para producir las cervezas llamadas lagers, palabra alemana que significa guarda o permanencia en bodega. Adems, existen las llamadas weissbier, weizenbier, fabricadas con una mezcla de cebada y centeno malteados, sin lpulo, que se fermentan con levaduras bajas y las cuales se suelen beber con rajas de limn o zumo de fruta; por ltimo, hay las cervezas nativas africanas, fabricadas con sorgo o mijo malteados. En estas cervezas no se hierven los mostos, ni se aromatiza con lpulo y se fermentan con cultivos naturales lcticos y con levadura. Con sabor acdico, se sirven o consumen sin clarificar y en pleno proceso fermentativo.

Las levaduras Saccharomyces carlsbergis y S. cerevisiae de cervecera se clasifican de acuerdo con su modo de accin. S. carlsbergis es una levadura de fondo que no suele formar esporas, se adapta bien a la fermentacin lenta a bajas temperaturas y es la preferida para elaborar cerveza tipo lager. La levadura de S. cerevisiae produce una fuerte fermentacin a temperatura elevada y tiende a flotar en la superficie. Es preferida para la elaboracin de cerveza tipo pilsner.

Fabricacin de cerveza

Para la fabricacin de cerveza tipo lager se utilizan cuatro grandes ingredientes y cuatro grandes procesos. Todos los procesos son clasificados como biotecnolgicos. Los ingredientes cerveceros son: cebada malteada, adjuntos cerveceros, lpulo y levadura. Los cuatro grandes pasos de preparacin de cerveza son: malteado, maceracin, aromatizacin y fermentacin. La fabricacin de cerveza supone bsicamente:

* Remojo, germinacin y secado de la cebada para obtener malta diastsica. Este proceso demora por lo general de cuatro a cinco das. Las maltas tostadas se utilizan para fabricar cervezas oscuras.

* Trituracin de la cebada malteada a travs de molinos de rodillos para obtener harina gruesa.

* Mezclado de la malta, adjuntos cerveceros con agua en un tanque de maceracin. Aqu se estimula a los enzimas de la malta para que solubilicen al endospermo de la malta molida y a los carbohidratos del o de los adjuntos cerveceros. Este proceso se realiza bajo un perfil gradual y controlado de incremento en temperatura.

* Separacin mediante filtracin del extracto acuoso, denominado mosto dulce, de los slidos agotados (bagazo o masilla).

* Hervido del mosto con lpulo, con lo que se desnaturalizan las enzimas, se esteriliza el mosto y se coagulan algunas protenas que causan turbidez. El lpulo imparte al mosto sus caractersticas aromticas propias cambiando su denominacin a mosto aromatizado.

* Clarificacin, enfriamiento y aereacin del mosto aromatizado, de manera que se convierta en un medio ideal para la fermentacin y el crecimiento de las levaduras.

* Fermentacin del mosto con las levaduras de manera que gran parte de la maltosa, glucosa y maltotriosas (carbohidratos fermentescibles) se conviertan en alcohol y dixido de carbono. Otros metabolitos de las levaduras contribuyen al aroma y al bouquet caracterstico de la cerveza. La fermentacin se realiza a temperaturas inferiores a 15C.

* Maduracin, guarda y clarificacin de la cerveza. Modificacin del aroma y bouquet y manutencin de la calidad de la cerveza.

* Envasado, generalmente tras haberla pasterizado por filtracin o mediante tratamiento trmico. Alternativamente, se puede envasar en recipientes de pequeo tamao como botellas o latas y pasterizarla post-envasado.

Desde hace algunas dcadas se han venido realizado una infinidad de estudios biotecnolgicos relacionados con la mejora en la calidad de la cerveza, y en los cuales se han estudiado desde aspectos como son la seleccin de la malta como materia prima, mejoras en el proceso de fermentacin, mejoras genticas en cepas de levadura y estabilidad del producto obtenido tanto en almacenamiento como en distribucin, entre los cuales en la produccin de la cerveza estn:

* Seleccin y conocimiento de los cultivares de cebadas que cumplan con el porcentaje de germinacin deseado (85%), prdida de materia seca (< 7%) y principalmente produccin de enzimas diastsicas o degradadoras de almidn. Es sumamente deseable conocer el tiempo exacto de liberacin de las fitohormonas (cido giberlico; cido abscico) que desencadenan el evento fisiolgico de la germinacin y, por lo tanto, la formacin de los enzimas necesarias (amilasas) para obtener la cantidad necesaria de azcares fermentescibles.

* Bsqueda de condiciones ptimas en procesos de remojo, germinacin y secado que se requieren para el malteo de la cebada. * Uso de enzimas ajenas a la malta para la produccin de cervezas ligeras y ms claras. El uso de la amiloglucosidasa y B glucanasas es ampliamente practicado hoy en da. Las B glucanasas son utilizadas con los propsitos de clarificacin de cerveza y coadyuvante del importante paso de filtracin del mosto (cuello de botella del proceso industrial).

* Combinacin de diferentes tipos de lpulos para impartir diferentes tipos de sabor y color a las cervezas.

* Cepas de levaduras genticamente modificadas para produccin de espuma controlada y sabor especial.

No slo deben tomarse en cuenta las condiciones de malteo, tambin se han estudiado aspectos importantes como son parmetros de control de tiempo de coccin, calidad de agua empleada, adjuntos y mejoras en el proceso de filtracin .

Investigacin biotecnolgica del proceso cervecero en el Tec de Monterrey

Estudios realizados en los laboratorios del Tec han demostrado la factibilidad de producir cervezas tipo lager utilizando malta de sorgo y grits cerveceros de sorgo ceroso o regulares. Las cervezas obtenidas tienen propiedades fisicoqumicas y organolpticas similares a las cervezas regulares. En cuanto a materias primas, se ha estudiado el empleo de otros cereales en la elaboracin de cerveza tanto para la produccin de malta como en forma de adjuntos cerveceros. Uno de ellos es el sorgo, que ya se emplea en Africa para elaborar las denominadas cervezas nativas o kaffir. El uso potencial en la industria cervecera de este cereal en Mxico es por un lado para obtencin de malta y por el otro, como adjunto o sucedneo cervecero. Entre los recientes trabajos de investigacin realizados en el Centro de Biotecnologa relacionados sobre este aspecto se puede mencionar:

A. Seleccin y optimizacin de los parmetros para la produccin de malta de sorgo en lugar de malta de cebada (1).

B. Produccin de adjuntos cerveceros y mostos dulces a partir de diferentes tipos de sorgo (2).

C. La relacin de sustratos con los principales productos de fermentacin como etanol, alcoholes superiores y aminonitrgeno libre fermentando mostos con adjuntos 100% de sorgo en una fermentacin tipo lager (3-4).

D. Establecimiento de metodologas analticas para el estudio de la evolucin de productos de oxidacin provenientes del lpulo, mediante anlisis por microextraccin en fase slida y espacio libre de cabeza con cromatografa de gases-FID (5).

El primero de ellos se realiz con el objetivo de comparar el poder diastsico de algunos genotipos de sorgos con el de cebadas

malteras comerciales. Se concluy que algunos tipos de sorgos, como el Dorado, tienen aproximadamente el 70% del poder diastsico de la malta de cebada. Las ventajas de utilizar sorgo son: materia prima ms barata y de ms fcil adquisicin, su proceso de malteo se realiza a ms altas temperaturas y, por consiguiente, es ms rpido. Se tiene que recordar que el sorgo es un cultivo de regiones ridas y ampliamente diseminado en el territorio nacional por lo que en la actualidad ocupa el segundo lugar en produccin, solamente superado por el maz. Las desventajas del sorgo son que pierde ms materia seca durante la germinacin o malteo, el mosto presenta mayor dificultad para ser filtrado o separado de la masilla debido a que carece de las glumas, no responde a las aplicaciones de giberelinas y solamente algunos genotipos llegan a tener 70% o ms del poder diastsico de las maltas comerciales de cebada.

La segunda y tercera investigacin contribuyen a la bsqueda de nuevas materias primas y al conocimiento de la evolucin de las fermentaciones tipo lager, utilizando un sustrato alternativo que contiene adjuntos 100% de grits de sorgo. Para este caso especfico se desarrollaron procesos de decorticacin y molienda de sorgos de endospermo regular y ceroso para la obtencin de grits cerveceros. La utilizacin de grits de sorgo ceroso favorece la extraccin de los mostos, su calidad en trminos de color y filtracin indudablemente repercute directamente en el costo. Esto se debe a que todos los adjuntos cerveceros (v.gr. almidn de maz, cebada, grits de maz, grits de arroz) utilizados por la industria son ms costosos que el de sorgo. El uso potencial del sorgo en la industria cervecera de Mxico, tanto para el malteo como su utilizacin como adjunto, es importante porque reducira las importaciones de la cebada y, por otro lado, es ms barato incidiendo fuertemente en los costos de produccin. Lo anterior es debido a que su cultivo se da fcilmente en cantidad aun en regiones con sequa, como en Mxico.

En estas investigaciones se implementaron metodologas que permiten llevar a cabo el proceso en un biorreactor diseado con un estricto control y monitoreo de la temperatura, la evolucin de los azcares y la conversin de ellos en etanol, dixido de carbono, de alcoholes superiores que se producen y que derivan del metabolismo de aminocidos. El sabor y aroma producidos durante la fermentacin dependen principalmente del tipo de cepa, su velocidad de crecimiento y replicacin, temperatura de fermentacin, composicin del mosto, nivel de oxgeno presente, concentracin de inoculo y la geometra del fermentador. Se han identificado cerca de 400 diferentes compuestos en la cerveza que obviamente afectan su aroma y sabor. Dentro de los compuestos voltiles estn el etanol y los alcoholes superiores, como el isoamlico, amlico, isobutanol, propanol y alcohol fenetlico. Tambin se encuentran aldehdos, steres y cidos orgnicos.

Los ltimos trabajos de investigacin (4-5) se han enfocado a la estabilidad o vida til de la cerveza que por cierto est condicionada a numerosos factores, pero principalmente vienen impuestas por la estabilidad del aroma, la tendencia al desarrollo de turbidez y la estabilidad microbiolgica. El factor ms importante lo constituye el oxgeno disuelto, porque afecta a los tres aspectos debindose mantener en valores reducidos (por debajo de 0.3 ppm). Una de las materias primas que contribuyen grandemente al sabor de la cerveza es el lpulo, el cual contiene alfa cidos que son susceptibles de oxidacin. En este estudio (5) se determin la naturaleza de los compuestos de oxidacin provenientes del lpulo y si ellos se encuentran presentes en cerveza oxidada. Ello se pudo verificar estableciendo un mtodo sensible por microextraccin en fase slida y cromatografa gaseosa-FID comparado con el anlisis de voltiles de espacio de cabeza GC-FID. Lo anterior es de una aplicacin inmediata para llevar a cabo un control de los puntos crticos en las materias primas, de proceso, en el envasado y almacenamiento del producto y detectar los orgenes del sabor oxidado de la cerveza.

El vino, un producto biotecnolgico milenario

La elaboracin de vino es antigua, pero las bodegas imponen nuevas tendencias basadas en tecnologas biolgicas para optimizar el proceso y mejorar el producto final. La palabra biotecnologa suele asociarse con procesos modernos y, en ocasiones, de difcil comprensin. Sin embargo, la biotecnologa es antigua como la humanidad. El empleo de seres vivos para la obtencin de productos de consumo humano lleva miles de aos de historia. Uno de estos procesos de la biotecnologa tradicional es la elaboracin de bebidas alcohlicas, como el vino. Actualmente, la biotecnologa moderna aporta novedades que mejoran la produccin enolgica y la calidad del producto final.

Levaduras en la industria del vino

La vitivinicultura tiene unos 4000 aos. Desde que los egipcios y babilonios cultivaron vides e hicieron vinos por primera vez, la industria enolgica y sus productos tuvieron, y tienen hasta hoy, gran importancia social, econmica y cultural. En la actualidad, la produccin enolgica no solo deleita el paladar de millones de personas, sino que los viedos y bodegas se han convertido en un atractivo turstico mundial.

En sus comienzos, los hombres recolectaban uva para su consumo y, al almacenarla, se formaba espontneamente esta bebida espirituosa. En aquellas pocas no se conocan las transformaciones biolgicas detrs de la produccin del vino. Hoy se sabe que el proceso principal por el cual se transforma el mosto de la uva en vino es la fermentacin alcohlica, que consiste en la transformacin de los azcares contenidos en la uva, en alcohol etlico y dixido de carbono. Las responsables de esta transformacin son las levaduras, hongos microscpicos adheridos al hollejo de la uva. Al nutrirse de los frutos, las levaduras liberan sus productos que el hombre aprovecha para su beneficio. El uso de seres vivos para la obtencin de un producto til es lo que define a un proceso como biotecnolgico.

Elaboracin de vino
Aunque los entendidos en materia vnica son capaces de apreciar las ms sutiles variaciones, y los sistemas de produccin y las uvas difieren de un lugar a otro, la produccin de los diferentes vinos consta de las mismas etapas bsicas: Estrujado o prensado: obtencin del lquido de la uva o mosto que, luego, es enviado a tanques donde se producir la fermentacin. Fermentacin alcohlica: se realiza en cubas o tanques construidos con roble, cemento, piedra o metal. Consta de una primera etapa aerbica (en presencia de oxgeno) que favorece el crecimiento de las levaduras, y otra etapa, una vez consumido el oxgeno, cuando comienza la fermentacin en condiciones anaerbicas. Separacin del vino y Clarificacin: el vino es separado del sedimento que contiene levaduras y precipitados orgnicos, para ser almacenado a una temperatura menor (en bodega) para el proceso de aejado. Maduracin. El vino madura en toneles, donde ocurren cambios qumicos complejos que mejoran el sabor y el aroma, adems de generarse compuestos que ayudan a su conservacin y estabilizacin. Embotellado. El vino es embotellado para mayor aejamiento o para su venta.

Nuevas tecnologas en la produccin de vinos

La revolucin provocada en los ltimos 30 aos por el desarrollo de las tcnicas de ingeniera gentica, ha abierto muchas opciones para el control de los procesos biotecnolgicos. Estos avances permiten hoy la utilizacin de diversas herramientas moleculares y organismos genticamente modificados en el proceso de fabricacin de vinos. La levadura vnica ms importante es Saccharomyces cerevisiae. Sin embargo, cuando la uva llega a la bodega tras la vendimia , muchas otras especies de levaduras estn presentes, adems de hongos filamentosos, bacterias y virus, y normalmente, en mayor nmero que Saccharomyces cerevisiae, explica Jos-Vicente Gil Ponce del Departamento de Biotecnologa de los Alimentos del Consejo Superior de Investigaciones Cientficas, en Valencia, Espaa. En su documento, La nueva biotecnologa enolgica, el investigador explica que tambin las cambiantes condiciones meteorolgicas provocan una gran variabilidad de la calidad y cantidad de levaduras presentes en la uva durante las sucesivas campaas. Este problema puede solventarse aadiendo al mosto un cultivo iniciador de levadura seleccionada que, de esta form a, d lugar a una fermentacin homognea ao tras ao, aconseja el experto. Para saber si la inoculacin es exitosa y la levadura aadida produce la fermentacin esperada, hoy en da se pueden emplear mtodos moleculares para analizar el material gentico (ADN) de las levaduras, conocer su estabilidad y detectar si se producen cambios que puedan afectar el producto. Estas tcnicas brindan resultados rpidos, fiables y relativamente econmicos, importantes cuando se manejan grandes volmenes de cultivo.

Levaduras mejoradas genticamente

Otra de las mejoras en la elaboracin de vinos se est dando por el uso de enzimas (catalizadores o aceleradores biolgicos) y organismos genticamente modificados en estos procesos. La modificacin gentica se aplica tanto a las levaduras como a la vid, un proceso an en etapa experimental. En la vid, se ha logrado introducir genes para producir plantas transgnicas resistentes a ciertas enfermedades vricas y fngicas.

Sin embargo, el mayor avance se ha obtenido mediante el empleo de levaduras recombinantes en la elaboracin del vino. En bas e al conocimiento de los mecanismos de adaptacin a estrs de las levaduras vnicas y a la identificacin de los genes implicados en ellos es posible disear estrategias de manipulacin gentica para conseguir una mejor respuesta a las condiciones que comprometen la eficiencia de las levaduras, detalla la profesora Emilia Matallana, directora del grupo de Biotecnologa de Levaduras Vnicas de la Universidad de Valencia. Frente a estos cambios, el profesor Jos Vicente Gil Ponce seala, La tcnica del ADN recombinante ha cambiado en pocos aos el panorama de la biotecnologa, y ha posibilitado hazaas impensables hace unas cuantas dcadas. Sin embargo, advierte el especialista, no se debe lanzar el mensaje de que ahora todo es posible. En la medida en que avance la ciencia y el conocimi ento bsico podremos abordar la mejora gentica de los organismos y, desde este punto de vista, estamos en los comienzos, pues an es inmensa nuestra ignorancia. La separacin de las soluciones acuosas diluidas de etanol (EtOH) ha sido un proceso bastante estudiado y probado industrialmente. Sin embargo, la necesidad de obtener alcohol deshidratado con el fin de ser usado como aditivo oxigenante de la gasolina, ha impuesto una serie de retos a la industria y a los centros de investigacin, a fin de reducir los costos energticos de la recuperacin de EtOH cumpliendo los correspondientes estndares de calidad. Adicionalmente, el impacto ambiental que presentan algunas tecnologas tradicionales de separacin ha hecho que la investigacin sobre esquemas alternativos y no convencionales sea mucho ms intensa (Montoya et al., 2005). De otro lado, la diversidad de alternativas tecnolgicas para la produccin de alcohol carburante ha hecho crucial el anlisis del proceso global, a la par del diseo y desarrollo de cada una de las operaciones que lo componen. Dentro de las nuevas tendencias de investigacin y desarrollo en esta rea se cuenta la integracin del proceso con miras a develar las muy complejas interacciones entre las diferentes etapas del proceso productivo (Lynd, 1996). El desarrollo de procesos integrados permitir una reduccin sustancial de los costos de produccin y el incremento de la competitividad del bioetanol frente a la gasolina. De otro lado, la integracin de procesos es una condicin indispensable para optimizar el proceso de produccin de etanol, de tal manera que se consideren como objetivos no slo la minimizacin de los costos productivos o la maximizacin de diferentes indicadores financieros, sino tambin el mejoramiento de los ndices de desempeo ambiental de este proceso. Procesos de Separacin La separacin y recuperacin del alcohol etlico producido a partir de diferentes materias primas se hace prcticamente de la misma manera. La concentracin de alcohol en los caldos de cultivo resultantes de los procesos de fermentacin oscila entre 2,5 y 10% (p/p), por lo que es necesario concentrar el etanol hasta valores mayores a 99% (p/p) y obtener as alcohol anhidro (deshidratado), que es el utilizado en calidad de aditivo para la gasolina, ya que la presencia de agua en el EtOH puede conllevar a fallas durante la combustin en el motor (Wyman, 1994). La primera etapa para la obtencin de alcohol anhidro es la destilacin convencional que eleva la concentracin de EtOH en el caldo hasta un 45-50% (p/p). Luego se puede obtener un destilado con una concentracin de 90-92% (p/p) mediante una columna de rectificacin (Wooley et al., 1999b). Debido a las propiedades fsico-qumicas de las mezclas alcohol-agua, es imposible retirar completamente el agua a presin atmosfrica como consecuencia de la formacin de una mezcla azeotrpica que implica la obtencin de mezclas con un mximo de 95,6% en peso de EtOH, por lo que son necesarios procesos de separacin no convencionales. Entre los procesos de separacin no convencionales se cuenta la destilacin a bajas presiones, la destilacin azeotrpica, la destilacin extractiva, la adsorcin y la pervaporacin. La destilacin a vaco hace uso del cambio en el equilibrio de fases a presiones inferiores a la atmosfrica, lo que conlleva a la desaparicin del azetropo por debajo de los 6kPa. Pero para obtener un producto de alta pureza es necesario utilizar torres con gran nmero de etapas (por encima de 40) y con altas relaciones de reflujo, con elevados costos de capital y energticos debido al mantenimiento del vaco en columnas con gran cantidad de platos (Montoya et al., 2005). En su lugar se emplea la destilacin azeotrpica consistente en la adicin de un tercer componente a la mezcla etanol-agua que forma nuevos azetropos que facilitan la separacin en esquemas tecnolgicos que involucran dos o tres columnas de destilacin. Entre las sustancias (llamadas arrastradores) que se agregan a las mezclas de etanol-agua resultantes del proceso de obtencin de alcohol se utiliza principalmente el benceno, aunque tambin el tolueno y el n-pentano. El proceso consiste de una columna de deshidratacin (columna azeotrpica) que se alimenta con una mezcla de cerca de 90% de alcohol. A esta columna se le agrega en el plato superior el benceno, mientras de la parte inferior se retira alcohol anhidro con una concentracin de agua menor al 1%. El

vapor de salida de la parte superior de la columna, con una composicin igual o cercana a la del azetropo ternario, se condensa y lleva a un separador en donde la fraccin rica en agua se alimenta a una pequea columna de lavado (columna despojadora) para la regeneracin del arrastrador, mientras la otra fraccin se recircula como reflujo a la parte superior de la columna azeotrpica (Chianese y Zinnamosca, 1990). Sin embargo el uso de benceno no es deseable debido a sus propiedades carcinognicas, por lo que se ha propuesto la destilacin extractiva, en donde la tercera sustancia que se agrega (denominada disolvente) modifica la volatilidad relativa de los componentes de la mezcla etanol-agua sin formar nuevos azetropos, facilitando as la separacin. El disolvente debe ser de baja volatilidad para que su separacin en la segunda torre de destilacin, donde se recupera, sea mucho ms fcil. Como disolvente se ha usado tradicionalmente etilenglicol, pero los costos energticos son mayores comparados con la destilacin azeotrpica con benceno. Meirelles et al. (1992) indican que bajo condiciones de operacin especficas, la destilacin extractiva para la obtencin de EtOH anhidro puede ser competitiva energticamente en comparacin con la destilacin azeotrpica, lo cual ha sido corroborado por Montoya et al. (2005) mediante simulacin. En aos recientes se ha estudiado el empleo de agentes extractivos salinos como el acetato de potasio para emplearlos en procesos de destilacin extractiva. En este caso, la recuperacin del disolvente se realiza por evaporacin y secado por aspersin para la recuperacin de la sal (Ligero y Ravagnani, 2003). Adems de sales inorgnicas, se est estudiando el empleo de polmeros hiper-ramificados como poliesteramida y poliglicerol hiper-ramificado para la separacin de mezclas etanol-agua, ya que exhiben una gran eficiencia y sus caractersticas se pueden escoger a voluntad (Seiler et al., 2003). La adsorcin es otra de las operaciones unitarias usadas en la industria para la deshidratacin del EtOH. Preliminarmente se propuso el uso de granos de maz rotos como material adsorbente, en vista de su capacidad para atrapar el agua en soluciones acuosas de EtOH (Tanaka y Otten, 1987). Sin embargo, la tecnologa que ms se ha desarrollado en la industria del alcohol carburante y que ha venido reemplazando a la destilacin azeotrpica ha sido la adsorcin de agua con tamices moleculares. Estos tamices son materiales granulares rgidos de forma esfrica o cilndrica elaborados a partir de aluminosilicatos de potasio. La molcula de agua tiene un dimetro menor que el de los caminos intersticiales de los tamices, mientras que la de EtOH no; adems, el agua se adsorbe en la superficie interna de los tamices, lo que los hace muy adecuados para la separacin de las mezclas etanol-agua resultantes de la destilacin convencional (Madson y Monceaux, 1995). Tambin se ha desarrollado la aplicacin de membranas para la concentracin de soluciones de etanol, o an para su deshidratacin. En primera instancia se propuso la smosis inversa (Leeper y Tsao, 1987), pero fue la pervaporacin la que impuls la introduccin de las membranas en la industria del alcohol carburante. La pervaporacin (evaporacin a travs de membranas) es una operacin basada en la separacin de dos componentes mediante una membrana selectiva bajo un gradiente de presin. Se emplean membranas que, como las compuestas de polivinil alcohol, presentan una alta selectividad al favorecer el paso de agua a travs de ellas y un alto poder de retencin para varios solventes orgnicos. El agua transferida a travs de la membrana conforma el permeado, mientras el EtOH se concentra en el retenido (Figura 1). La fuerza impulsora de la pervaporacin se mantiene gracias a la aplicacin de vaco del lado del permeado. Con esta tecnologa es posible obtener soluciones de EtOH por encima de su composicin azeotrpica. La pervaporacin ofrece varias ventajas con respecto a la destilacin azeotrpica o extractiva, toda vez que el producto no posee trazas de arrastrador o disolvente, las unidades de pervaporacin son compactas y no requieren de mucho espacio comparado con las altas torres de destilacin azeotrpica (Sander y Soukup, 1988). Ms recientemente se ha propuesto otra operacin de separacin por membranas para la deshidratacin de EtOH, la permeacin de vapor, la cual ha sido mucho menos estudiada que la pervaporacin. Este proceso tiene el mismo principio de la pervaporacin con la diferencia de que la corriente de alimentacin es gaseosa (Figura 1), lo cual hace que el flujo de materia en la permeacin de vapor sea mayor ya que la fuerza impulsora se ve menos afectada por la polarizacin por concentracin y por la disminucin de la diferencia de presiones parciales (Jansen et al., 1992).

Otro enfoque propuesto para la separacin del EtOH es el empleo de la extraccin con fluidos supercrticos, que se basa en la gran capacidad de solubilizacin de un fluido a temperatura y presin superiores a las de su punto crtico lquido-vapor. De esta manera se utilizan las ventajas tanto de la destilacin como de la extraccin lquida con la mejora adicional de que pequeos cambios en temperatura y/o presin en la regin crtica causan grandes cambios en la densidad del solvente y por lo tanto en su poder de disolucin (Snchez y Cardona, 2004). Budich y Brunner (2003) han utilizando CO2 supercrtico (333,2 K y 10 MPa) en contracorriente para la recuperacin de etanol de mezclas acuosas, siendo regenerado el disolvente mediante un sistema de destilacin multietapa y obteniendo una concentracin de etanol en el extracto de 99,5% en peso. Aspectos Ambientales Las vinazas, el material residual obtenido despus de la destilacin del EtOH a partir del mosto fermentado, contiene tanto material soluble como suspendido y tiene altos valores de demanda biolgica de O2 (DBO5= 30000-60000mgL-1), que es una medida, junto con la demanda qumica de O2 (DQO), del contenido de materia orgnica en un efluente. En una destilera tpica se pueden producir ms de 20L de vinazas ligeras por cada litro de EtOH obtenido, por lo que antes de su vertimiento es necesario someter este efluente a un costoso tratamiento. Para minimizar estos costos, se recicla una porcin de las vinazas ligeras las cuales constituyen la fraccin lquida de las vinazas despus de tamizarlas o centrifugarlas. Estas vinazas ligeras recicladas se usan para reemplazar un porcentaje del agua usada durante la maceracin (hidrlisis) de los cereales cuando se obtiene alcohol a partir de almidn (Chin e Ingledew, 1994). Las vinazas obtenidas cuando se usan melazas de caa como materia prima y que son centrifugadas para recuperar los slidos orgnicos, especialmente las levaduras, retienen hasta un 1,1% de potasio y 3,1% de cenizas. Estas vinazas son transportadas por camiones para irrigar las plantaciones de caa hasta donde sea viable econmicamente. Las vinazas ayudan a la formacin de un buffer inicial del suelo con Ca y Mg, lo que eleva el pH, mejoran las propiedades fsicas del suelo y aumentan la retencin de agua y sales. Entre las desventajas del uso de vinazas se encuentran los olores fuertes, la invasin de insectos, aumentos de la acidez del suelo, la lixiviacin de sales, la putrescibilidad, la deficiencia de Mn y la inhibicin de la germinacin de las semillas (Olgun et al., 1995; Navarro et al., 2000; Nguyen, 2003). Las vinazas con altos valores de DBO o DQO son tratadas por digestin anaerobia, en donde se lleva a cabo la transformacin de la materia orgnica por un cultivo mixto de bacterias de tal manera que la DBO se reduce y los lodos resultantes se pueden disponer ms fcilmente. Se ha reportado una reduccin de la DQO del 97% para vinazas de maz en un reactor anaerbico de manto de lodos de flujo ascendente (UASB por sus siglas en ingls), as como la reduccin del 94% de la DQO soluble de vinazas de caa. Para vinazas del proceso que emplea almidn de trigo se han hecho estudios a nivel de planta piloto que muestran una reduccin del 89-92% de la DQO (Nguyen, 2003). Alternativamente las vinazas se pueden incinerar, lo que ofrece un retorno positivo de energa, as como la recuperacin de minerales. Antes de su incineracin, las vinazas se concentran por evaporacin hasta cerca del 50-60% en slidos en evaporadores de 4 5 efectos. La combustin de las vinazas ofrece la energa necesaria para este proceso de concentracin. Las cenizas de la incineracin tienen cerca de un 30-40% de K2O y 2-3% de P2O5, lo que las convierte en fertilizante luego de su dilucin en agua y su neutralizacin con cido sulfrico (Olgun et al., 1995; Nguyen, 2003). La produccin de alcohol a partir de residuos lignocelulsicos tambin genera grandes cantidades de aguas residuales. Se estima que en el proceso de obtencin de EtOH a partir de biomasa se generan 15L de aguas residuales por litro de EtOH producido. Entre muchas opciones, se propone una digestin anaerbica seguida de un tratamiento aerbico, combinada con una evaporacin o incineracin de las aguas residuales de la conversin enzimtica (Merrick, 1998). El vertimiento de aguas residuales no es el nico factor generador de impactos ambientales durante la produccin de alcohol carburante, por lo que es necesaria la evaluacin global de los efectos que tiene la produccin de este biocombustible sobre el medio ambiente en general. En Brasil se realiz un estudio integral de los aspectos ecolgicos, econmicos y sociales de la produccin de EtOH, incluyendo la fase agrcola y la industrial a travs de la evaluacin de la eficiencia ambiental del proceso. Los resultados mostraron que ninguna de las tres plantas estudiadas alcanz el nivel establecido de eficiencia ambiental (Borrero et al., 2003). Por su parte, Prakash et al. (1998) propusieron un indicador llamado figura de mrito, el cual expresa la razn entre el rendimiento neto de energa de un combustible y las emisiones de CO2 producidas por ese combustible. Para la produccin de EtOH anhidro a partir de caa en India se determin un rendimiento neto de energa cercano a 2. A travs de la metodologa de anlisis del ciclo de vida (LCA por sus siglas en ingls), se han cuantificado los beneficios ambientales de utilizar para la obtencin de EtOH el exceso de bagazo de los ingenios azucareros. Ello permitira la reduccin de emisiones y el menor consumo de combustibles fsiles, la disminucin en el agotamiento de los recursos naturales, la reduccin de la toxicidad para el hombre y el menor aporte de gases con efecto invernadero (Kadam, 2002). Para la evaluacin ambiental de diferentes diagramas de proceso, la Agencia de Proteccin Ambiental de los EEUU ha desarrollado el algoritmo de reduccin de residuos (algoritmo WAR), que se basa en la determinacin del impacto ambiental potencial de un diagrama de proceso dado a travs del

anlisis de ocho indicadores ambientales (Cardona et al., 2004). Cardona et al. (2005) evaluaron mediante este algoritmo el desempeo ambiental de varias alternativas para la produccin de EtOH a partir de diferentes materias primas de dos tipos: biomasa lignocelulsica (material herbceo, astillas de madera, bagazo de caa y papel residual) y almidn (maz, trigo, yuca). Los resultados obtenidos mostraron un menor impacto para los procesos a partir de almidn debido a que los procesos a partir de biomasa involucran una etapa de pretratamiento donde se utilizan cidos, los cuales tienden a aumentar el impacto ambiental potencial (PEI por sus siglas en ingls); igualmente se mostr la conveniencia ambiental del uso de tamices moleculares frente a la destilacin azeotrpica con benceno. Debido a la gran cantidad y diversidad de enfoques metodolgicos que dificulta el uso y valoracin de los distintos indicadores ambientales, es necesaria la unificacin de los diferentes criterios de evaluacin ambiental. Esta dificultad impone algunas restricciones al momento de optimizar diferentes alternativas de proceso, en especial cuando se persigue la optimizacin de una funcin multiobjetivo que considere adems de los indicadores tecno-econmicos, ndices de desempeo ambiental de las diferentes configuraciones propuestas. Integracin de Procesos Debido a la gran cantidad de tecnologas existentes y no completamente desarrolladas para la obtencin de alcohol, en especial a partir de biomasa lignocelulsica, se hace necesario aplicar las herramientas de integracin de procesos, las cuales buscan la integracin de todas las operaciones involucradas en la produccin de EtOH, la evaluacin y optimizacin de las diferentes configuraciones de procesos y la diversificacin de productos. Lo anterior posibilita el desarrollo de bioprocesos integrados que combinen, por ejemplo, diferentes etapas en una sola unidad. Adicionalmente, la sntesis de procesos se encamina hacia la generacin de diferentes diagramas de proceso que puedan convertirse en alternativas viables para la obtencin de un producto en particular. La sntesis de procesos puede aportar las herramientas necesarias para, en forma preliminar, descartar las opciones con menos perspectivas teniendo en cuenta nuevos procedimientos, esquemas y alternativas que se planteen en la etapa de diseo, en especial aquellos que involucran diferentes grados de integracin. Las reglas heursticas, potenciadas con un enfoque sistmico del proceso global, son fundamentales para este fin. La simulacin es esencial en esta etapa para evaluar gran cantidad de diagramas de procesos alternativos. Gulati et al. (1996) enfatizaron las posibilidades de integrar a las plantas de obtencin de EtOH a partir de maz, lneas de produccin que empleen fibra de maz como materia prima. Estos autores consideran que con 80% de eficiencia en la hidrlisis y fermentacin de hexosas y un 70% para las pentosas, se podra obtener un aumento del rendimiento de EtOH de 0,22gal/saco de maz, siendo el mximo posible de 0,3gal/saco de maz. Cabe destacar el proceso modelo a partir de biomasa que comprende una hidrlisis previa de la materia prima con cido diluido, seguida de la sacarificacin y co-fermentacin simultneas, as como la produccin de celulasas microbianas y la combustin de lignina para la obtencin de la energa necesaria para la planta (Wooley et al., 1999b). El costo de produccin de 1L de EtOH por este proceso se calcula en US$1,50 mientras que a partir de maz es de US$0,88 (McAloon et al., 2000). Cardona y Snchez (2004) simularon diversos esquemas tecnolgicos considerando variaciones en las etapas de pretratamiento e hidrlisis, fermentacin, separacin y tratamiento de efluentes. Se hizo nfasis en las posibilidades de integrar varios procesos en una sola unidad y se emplearon los gastos energticos para la comparacin de los esquemas propuestos. Los resultados demostraron que el diagrama ms apropiado debe incluir la sacarificacin y co-fermentacin simultneas, la destilacin acoplada con la pervaporacin y un reciclaje de aguas residuales para usarlas como agua de proceso. Este anlisis se complement con la evaluacin de costos de capital y de operacin para diferentes materias primas que requieren de tecnologas diferentes de procesamiento (Cardona et al., 2005). Los resultados arrojaron menores costos para el proceso a partir de almidn debido a la mayor complejidad del proceso a partir de biomasa y a que este ltimo proceso no est totalmente desarrollado. Integracin reaccin-reaccin La sntesis de procesos ha recibido un gran impulso con la intensificacin de los procesos mediante su simultaneidad o acoplamiento (conjugacin). Al llevar a cabo la integracin de varias operaciones en una misma unidad, aumentan las posibilidades de mejorar el desempeo del proceso global. Los procesos simultneos, que se llevan a cabo en una misma unidad, permiten una intensificacin mutua y el desarrollo de esquemas tecnolgicos ms compactos. Partiendo del proceso no integrado de hidrlisis y fermentacin separadas (SHF por sus siglas en ingls) se pueden formular varios tipos de integracin reaccin-reaccin. Entre los primeros esfuerzos de integracin se cuenta la co-fermentacin o cultivo mixto de diferentes especies de microorganismos compatibles para asegurar la completa asimilacin de todos los azcares de la biomasa lignocelulsica liberados durante su pretratamiento e hidrlisis. Se ha propuesto el empleo de cultivos mixtos de levaduras que asimilen tanto hexosas como pentosas, pero surge el problema de que los microorganismos que utilizan hexosas crecen ms rpido y su conversin a EtOH es ms elevada (Snchez y

Cardona, 2005). Laplace et al. (1993) emplearon un mutante de Saccharomyces cerevisiae con capacidad respiratoria deficiente, cultivado junto con Pichia stipitis en cultivos por lotes y continuos en condiciones limitadas de O2, obteniendo para este ltimo caso la conversin del 100% de glucosa y del 69% de xilosa a una tasa de dilucin de 0,02h-1. En las Figuras 2 y 3 se ilustran las diferentes posibilidades de integracin reaccin-reaccin para el proceso de obtencin de EtOH tanto a partir de almidn como de biomasa lignocelulsica. Uno de los mayores hitos en la integracin reaccin-reaccin en el proceso de produccin de EtOH a partir no solo de biomasa, sino de almidn, es la implementacin y desarrollo de la sacarificacin y fermentacin simultneas (SSF por sus siglas en ingls), en donde se combinan en una unidad la etapa de degradacin enzimtica de la celulosa o del almidn y la fermentacin de la glucosa obtenida de la hidrlisis de estos polisacridos. La clave del proceso de SSF a partir de biomasa lignocelulsica es su habilidad para convertir rpidamente los azcares en EtOH tan pronto como se forman, disminuyendo su acumulacin en el medio. Por cuanto los azcares (glucosa, celobiosa) son mucho ms inhibitorios para el proceso de conversin que el EtOH, la SSF puede alcanzar mayores velocidades, rendimientos y concentraciones en comparacin con la SHF (Wyman et al., 1992). En el proceso de SSF a partir de biomasa las levaduras metabolizan simultneamente la glucosa en etanol in situ durante la sacarificacin (Gauss, 1976), pero aun no se han construido plantas comerciales a nivel industrial. Desde que se realizaron las primeras experiencias con la SSF de biomasa, los tiempos del proceso por lotes han disminuido de 14 das requeridos para la conversin del 70% de la celulosa en EtOH con una concentracin final de 20gL-1 de alcohol, hasta 3-7 das para alcanzar conversiones de 90-95% con una concentracin de 40-50 gL-1 de EtOH (Wyman, 1994). La tecnologa SSF fue asimilada para la produccin industrial de EtOH a partir de almidn, obtenindose rendimientos altos y sostenibles del orden de 2,75gal/saco de maz (Madson y Monceaux, 1995).

Otra alternativa para aumentar la conversin de biomasa consiste en incluir la fermentacin de pentosas en la SSF, lo que se ha denominado sacarificacin y co-fermentacin simultneas (SSCF por sus siglas en ingls; Figura 3). En este proceso se basa la

tecnologa diseada como proceso modelo para la produccin de alcohol carburante a partir de astillas de madera (Wooley et al., 1999a). En este diseo se plantea la utilizacin de Zymomonas mobilis recombinante con una conversin de glucosa en EtOH del 92% y de xilosa en EtOH del 85%. Se contempla que la SSCF se lleve a cabo en forma continua con un tiempo de residencia de 7 das a 30C para todo el sistema de fermentadores en cascada. La culminacin lgica de la integracin reaccin-reaccin para la produccin de EtOH es la conversin microbiana directa (DMC por sus siglas en ingls). La clave del proceso DMC para el procesamiento de la biomasa lignocelulsica (Figura 3), es que una sola comunidad microbiana es empleada tanto para la produccin de celulasas como para la fermentacin. Lynd (1996) seala que en este caso no se requiere dedicar gastos de capital o de operacin para la produccin de enzimas dentro del proceso, lo mismo que no se desva parte del sustrato para la produccin de celulasas, adems de que los sistemas enzimticos y los de fermentacin son enteramente compatibles. Segn sus proyecciones, la reduccin de los costos de produccin por un esquema avanzado que incluya la DMC, es 3 veces mayor que la reduccin relacionada con la economa de escala del proceso y 10 veces mayor que la asociada con un menor costo de la materia prima. Esta disminucin en los costos se dara por cuenta de una reduccin de ms de 8 veces en los costos de la conversin biolgica. Wyman (1994) seala que en la mayora de estudios sobre DMC se emplea la bacteria C. thermocellum para la produccin de enzimas, la hidrlisis de celulosa y la fermentacin de la glucosa, mientras la co-fermentacin con C. thermosaccharolyticum permite la conversin simultnea en etanol de las pentosas formadas en la hidrlisis de la hemicelulosa. La principal dificultad reside en la formacin de subproductos como el cido actico, lo que limita los rendimientos alcanzados. Adems, la tolerancia al EtOH por parte de estas bacterias es reducida. La integracin de procesos de reaccin-reaccin ha recibido un impulso con el desarrollo de microorganismos modificados por ingeniera gentica (recombinantes) que hagan posible la asimilacin ms completa de las materias primas utilizadas en la produccin de bioetanol. Cuando se utilizan cepas recombinantes para asimilar ms sustratos o formar nuevos productos, se est integrando a nivel celular e inclusive molecular una serie de transformaciones qumicas muy complejas que permite la realizacin a nivel macroscpico de varios procesos qumicos en una misma unidad. A travs de esta tecnologa, se han "construido" cepas de levadura amilolticas, lo que permite disear procesos de obtencin de alcohol excluyendo las etapas de licuefaccin y sacarificacin con enzimas exgenas, y utilizar solo la levadura para la transformacin biolgica (proceso DMC), como se esquematiza en la Figura 2. Los ahorros que se podran obtener al escalar comercialmente este proceso compensaran con creces la menor velocidad de crecimiento y los mayores tiempos de fermentacin. Se han desarrollado cepas de S. cerevisiae a las cuales se les ha introducido un plsmido que le confiere la capacidad de expresar los genes que codifican la a-amilasa de la bacteria Bacillus subtilis y la glucoamilasa del hongo Aspergillus awamori, adquiriendo as la habilidad de convertir directamente el almidn en EtOH. Con estas levaduras, lgen et al. (2002) reportaron mayores concentraciones de EtOH producido en cultivos por lotes alimentados (47,5gL-1) que en cultivos por lotes (15,6gL-1). En el caso de la fermentacin de biomasa lignocelulsica, la ingeniera gentica ha contribuido con microorganismos capaces de utilizar este tipo de materiales. Para abordar este reto existen dos enfoques principales (Aristodou y Penttil, 2000; Chotani et al., 2000). El primero consiste en modificar microorganismos de modo que pueden asimilar un amplio espectro de sustratos; por ejemplo, a aquellos organismos que son buenos etanolgenos como las levaduras y Z. mobilis, introducirles las vas metablicas para utilizar la xilosa o la arabinosa. El otro enfoque se centra en modificar microorganismos que tengan buena habilidad para convertir compuestos intermediarios claves como el piruvato en EtOH; para ello se emplean organismos como E. coli, capaces de asimilar hexosas y pentosas, y se le introducen genes para que convierta el piruvato en EtOH. Integracin reaccin-separacin Entre las variantes utilizadas para la integracin reaccin-separacin en la produccin de bioetanol se cuenta la operacin de fermentadores continuos acoplados con un sistema de pervaporacin, en el que se logra retirar continuamente el alcohol producido por los microorganismos, reduciendo a su vez la inhibicin natural de las clulas por altas concentraciones de EtOH ( Figura 4). De esta manera se logran mayores productividades y se aumenta la concentracin de las soluciones acuosas de EtOH a ser separadas, con el consiguiente ahorro energtico. OBrien et al. (2000) utilizaron herramientas de simulacin para evaluar los costos del proceso de obtencin de alcohol carburante mediante fermentacin por lotes, destilacin y deshidratacin, comparndolos con los del proceso en el que la fermentacin continua se integr con la pervaporacin antes de la destilacin y la deshidratacin. La fermentacin acoplada a la pervaporacin se simul con base en datos experimentales de ensayos de ms 200h empleando membranas comerciales de polidimetilsiloxano. Las simulaciones arrojaron costos ligeramente mayores para el proceso con pervaporacin debido a los costos de las membranas y de capital. Sin embargo, los costos de la fermentacin se redujeron en un 75% y los de la destilacin disminuyeron significativamente. La simulacin se constituye as en una herramienta poderosa para la evaluacin de alternativas. Snchez et al. (2005) modelaron el proceso de SSF de biomasa lignocelulsica acoplado a una unidad de pervaporacin, analizando el comportamiento del proceso tanto por lotes como continuo. La remocin del EtOH a travs de una unidad de pervaporacin permiti reducir el efecto de la inhibicin del crecimiento celular por la acumulacin de alcohol en el medio, mientras la SSF posibilit la reduccin de la inhibicin por glucosa y celobiosa que experimentan las enzimas durante el proceso de hidrlisis de la celulosa. Este tipo de integracin reaccin-reaccin-separacin demostr la posibilidad de alcanzar

productividades elevadas para el proceso continuo, as como la obtencin de un permeado con una concentracin mayor de EtOH en comparacin con la del caldo, lo que a su vez reduce los costos energticos en la destilacin subsiguiente.

Un enfoque razonable para aumentar la productividad del proceso de fermentacin alcohlica es la remocin del producto que causa la inhibicin mediante un agente extractivo biocompatible (solvente), al migrar el EtOH a la fase del solvente. Este proceso se denomina fermentacin extractiva y combina la extraccin lquido-lquido con el cultivo de microorganismos. Gyamerah y Glover (1996) escogieron como solvente el n-dodecanol por su alta selectividad hacia el EtOH y no ser txico para los microorganismos. Gutirrez et al. (2005) modelaron el proceso de fermentacin extractiva por lotes de biomasa lignocelulsica, acoplando las ecuaciones de la cintica del proceso biolgico con los modelos de equilibrio lquido-lquido. El esquema tecnolgico simulado incluy un biorreactor con agitacin en donde la fase del solvente se dispersa en la fase acuosa donde se desarrollan las clulas. De este biorreactor se retira continuamente caldo de cultivo, incluyendo el solvente. Los microorganismos se separan del caldo por membranas y son devueltos al fermentador. El caldo libre de clulas es enviado a un decantador donde ocurre la separacin de la fase acuosa, que tambin se devuelve al fermentador, y de la fase del solvente enriquecida con EtOH. Luego el solvente es separado del EtOH mediante evaporacin instantnea y recirculado al biorreactor ( Figura 5). El anlisis realizado, que involucr la comparacin energtica de este proceso con esquemas convencionales, demostr la posibilidad de disminuir el consumo de energa e incrementar la productividad.

Integracin separacin-separacin Las tcnicas de integracin separacin-separacin han ido de la mano con el desarrollo de las diferentes operaciones unitarias involucradas y de los nuevos enfoques de intensificacin de procesos. Montoya et al. (2005) simularon los esquemas de deshidratacin de EtOH, complementada con la evaluacin de los costos energticos y de capital. Con base en la termodinmica topolgica, se llev a cabo la sntesis del tren de destilacin y la valoracin de la separabilidad de los diferentes componentes involucrados en los caldos de cultivo de donde se recupera el EtOH. Por mtodos cortos se lograron definir las especificaciones necesarias para simular el esquema de separacin de EtOH acoplado al proceso de SSF de almidn, que fue utilizado como sistema modelo, empleando simuladores comerciales. Los resultados mostraron que aunque la deshidratacin con tamices moleculares incurre en elevados costos por la complejidad del sistema de automatizacin y control que implica el manejo alternado de diferentes regmenes de presin, este mtodo de deshidratacin presenta los menores costos de operacin de los esquemas analizados Gros et al. (1998) describieron la sntesis de procesos para la deshidratacin de alcohol etlico mediante propano en condiciones cercanas a las supercrticas. Con este fin se utiliz un software especial para la simulacin secuencial de las principales unidades del proceso: extractores multietapa de alta presin, columnas de destilacin y separadores multifsicos de evaporacin instantnea. Utilizando un algoritmo de optimizacin integrado a la simulacin del esquema, se analizaron tres configuraciones usando como funcin objetivo el consumo energtico. Los resultados mostraron que el esquema de recompresin del vapor con enfriamiento del extracto y eliminacin del agua y la preconcentracin de la alimentacin son alternativas competitivas en comparacin con la destilacin azeotrpica. Cabe destacar la aplicacin de la tecnologa de membranas para la integracin de diferentes esquemas de separacin y purificacin de EtOH. Mediante estudios en planta piloto se ha logrado la integracin del proceso de destilacin de alcohol con la pervaporacin, el cual ha dado buenos resultados en trminos de ahorro de energa debido a los bajos costos de operacin de la pervaporacin y al alto rendimiento de etanol deshidratado (Tsuyomoto y Meares, 1997). La comparacin entre la destilacin azeotrpica usando benceno y el sistema de pervaporacin utilizando mltiples mdulos de membranas ha arrojado que a una misma tasa de produccin de etanol e idntica calidad del producto (99% p/p), los costos energticos son aproximadamente 1/5 de los correspondientes para la destilacin azeotrpica. Integracin energtica Los tipos de integracin descritos se refieren a la integracin de corrientes materiales, ya sea para su transformacin o para la separacin de sus componentes. Sin embargo, es posible la integracin energtica de las diferentes etapas para la obtencin de alcohol carburante. Esta integracin busca la mejor utilizacin de los flujos de energa (calor, energa mecnica o elctrica) generados y consumidos dentro del proceso con el fin de reducir el consumo de fuentes externas de energa, como la electricidad y los combustibles fsiles utilizados para la generacin de vapor, as como disminuir el consumo de agua de enfriamiento. Uno de los enfoques ms aplicados para la integracin trmica en la industria de procesos, en especial en la petroqumica, lo constituye la tecnologa pinch (literalmente pellizco o pizca, indicando una aproximacin muy pequea). Esta tecnologa suministra las herramientas necesarias para disear la red de intercambiadores de calor y de servicios de una planta. Durante el diseo preliminar de esta red, la tecnologa permite obtener los mejores valores de muchos parmetros del proceso, como los tipos de servicios y sus especificaciones, el nmero mnimo de unidades de intercambio de calor y sus reas de transferencia, y la estimacin de los costos de capital y de operacin de dichas unidades. Estos valores se obtienen sin necesidad de realizar un diseo detallado de la topologa de la red de intercambiadores de calor y solo se requiere conocer los datos trmicos de las corrientes de proceso (Shenoy, 1985). La

integracin trmica de procesos se ha perfilado como una de las directrices de la integracin de procesos que ms puede aportar en la sntesis de esquemas tecnolgicos de diversa ndole (Ros et al., 2004). Para el caso de la obtencin de alcohol a partir de melazas se ha simulado y optimizado el diagrama de proceso a travs de su integracin trmica, hacindose nfasis en el esquema de separacin de alcohol por destilacin (Sobocan y Glavic, 2000). Grisales et al. (2005) emplearon el enfoque de la integracin trmica para el anlisis de las etapas de fermentacin, destilacin y evaporacin del proceso de obtencin de alcohol carburante a partir de biomasa lignocelulsica que utiliza la destilacin azeotrpica para la deshidratacin del EtOH. A travs de una representacin grfica de los requerimientos de energa del proceso, se identificaron las posibilidades de intercambio de calor entre las corrientes fras y calientes, empleando las reglas de la tecnologa pinch. Esta metodologa permiti disear una red de intercambiadores de calor diferente a la del diagrama de proceso original, con reduccin en los fluidos de servicios (vapor y agua de enfriamiento) y la consiguiente disminucin en los costos de operacin. Conclusiones El desarrollo de la industria de produccin de alcohol carburante demuestra que an falta resolver complejos problemas tcnicos que influyen sobre los indicadores econmicos del proceso global, as como sobre su desempeo ambiental. El costo creciente de la energa, el diseo de procesos ms intensivos y compactos, y la preocupacin creciente por el medio ambiente, han hecho surgir la necesidad de emplear enfoques nuevos para el diseo y operacin de procesos de obtencin de bioetanol. Conceptos como sostenibilidad y amigabilidad ambiental van ahora de la mano con los tradicionales indicadores tecno-econmicos utilizados para valorar los procesos productivos. La diversificacin del portafolio energtico de los pases a travs de la produccin y consumo masivo de bioetanol tiene serias y profundas consecuencias sobre sus economas y, en particular, sobre la de sus comunidades rurales. Los tres tipos principales de materia prima utilizados para obtener etanol corresponden a recursos con los que prcticamente todos los pases cuentan. Virtualmente todas las regiones pobladas del mundo disponen de grandes cantidades de biomasa lignocelulsica representada no solo en cultivos de plantas herbceas o de madera, sino en una gran diversidad de residuos forestales, agroindustriales, industriales y urbanos. Prcticamente, cada pas puede producir su propio biocombustible. De esta manera, la materia prima para la obtencin de etanol est "descentralizada" y no coincide con los centros de suministro de combustibles fsiles. Lo anterior hace que la dependencia energtica de los pases con respecto al petrleo pueda disminuir considerablemente, y los indicadores de desarrollo humano pueden mejorar desde dos puntos de vista: la creacin de nuevos empleos y la reduccin de emisiones de gases con efecto invernadero. Los costos de produccin del bioetanol son mayores que los de los combustibles fsiles, particularmente en el caso del etanol que se pudiera producir a partir de biomasa, pero durante los ltimos dos aos los precios del petrleo han subido sostenidamente. Los precios de la gasolina y de otros derivados del petrleo tienen un subsidio que pagamos todos los contribuyentes y que no necesariamente se hace efectivo en las gasolineras. Este "subsidio" est destinado a compensar la inversin que hacen los gobiernos, el sector privado, las compaas transnacionales y los grupos de inters en general, para mantener el status quo de las relaciones internacionales caracterizadas por desbalances comerciales, dependencia tecnolgica, flujos de capital hacia los centros de desarrollo econmico, polticas migratorias restrictivas, deterioro del medio ambiente y alianzas militares que eventualmente adelantan operaciones militares a escala local y global. Lgicamente, tambin pagamos las consecuencias de las medidas que se toman para "compensar" este estado de cosas: inestabilidad social y, desafortunadamente, terrorismo. Se plantea pues el reto de la reduccin de los costos de produccin de etanol. En la bsqueda de la solucin la integracin de procesos es clave para la generacin, diseo, anlisis e implementacin de tecnologas que mejoren los indicadores del proceso global o que impliquen una reconversin de los bioprocesos empleados. La intensificacin de los procesos a travs de la integracin entre diferentes etapas (reaccin-reaccin, reaccin-separacin, etc.) y la implementacin de procesos de bioconversin directa de la materia prima en alcohol, de la mano de la tecnologa de obtencin de microorganismos recombinantes, se constituyen en la llave para abrir la puerta de la competitividad del etanol como alcohol carburante frente a los combustibles fsiles.