Clula

Captulo 1

1 HISTRICO

J na Antiguidade, Aristteles (cerca de 384-322 a.C.) dizia que todos os animais e plantas, por mais complexos que fossem, eram constitudos de poucos elementos que se repetiam. Ele se referia a estruturas macroscpicas, como as razes, as folhas e as flores das plantas e os rgos dos animais. A inveno de lentes de aumento e a sua combinao no microscpio (do grego mikros, pequeno, e skopein, ver, olhar) no sculo XVII permitiu uma maior compreenso dos constituintes dos organismos. Robert Hooke, em 1665, usando esse microscpio rudimentar para analisar a cortia, denominou os compartimentos observados de clula (cell no ingls, do latim cella, que significa compartimento, espao vazio). O microscopista holands Antoni van Leeuwenhoek (1632-1723) foi o primeiro a registrar clulas livres, apresentando, em 1676, a Royal Society of London desenhos de animlculos visualizados no esperma humano (o termo espermatozoide s foi cunhado em 1827). Robert Brown, em 1833, descobriu um elemento esfrico no centro de uma clula, o qual, em analogia ao caroo de um fruto, deu o nome de ncleo. Em 1838, Schleiden formulou o princpio de que todos os vegetais so compostos de clulas e, em 1839, Schwann estendeu esse princpio para os animais. Assim, foi estabelecida a teoria celular, que afirma que a clula a menor unidade de vida.
2 CONCEITO

A clula a menor unidade estrutural e funcional dos organismos. Unidade estrutural porque as clulas constituem os tecidos, e unidade funcional porque so capazes de exercer as funes bsicas da vida, como metabolismo, respirao e reproduo.
3 CLASSIFICAO

O critrio usado para classificar as clulas a presena ou no de um envoltrio nuclear delimitando o material gentico. As clulas so classificadas em procariontes e eucariontes (do grego pro, primeiro, eu, verdadeiro e karion, ncleo). Os procariontes so as clulas que no possuem envoltrio nuclear delimitando o material gentico. o caso das bactrias (Reino Monera). As clulas eucariontes possuem envoltrio nuclear, formando um ncleo verdadeiro. Essas clulas so encontradas nos demais organismos: protozorios, fungos, plantas e animais (Reinos Protista, Fungi, Plantae e Animalia). O citoplasma dos eucariontes, diferente daquele dos procariontes, subdividido em compartimentos. A compartimentalizao aumenta a eficincia metablica, o que permite que as clulas eucariontes atinjam maior tamanho sem prejuzo das suas funes. Alm de no possuirem envoltrio nuclear e organelas membranosas, os procariontes no tm citoesqueleto e, portanto, no ocorre o transporte de vesculas envolvidas na entrada (endocitose) e na sada (exocitose) de substncias. A presena de envoltrio nuclear nos eucariontes protege o DNA do movimento do citoesqueleto e permite a separao da transcrio do DNA que ocorre no ncleo e da traduo do RNA no citoplasma. O Quadro 1.1 resume as principais caractersticas diferenciais entre procariontes e eucariontes.
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Quadro 1.1 - Quadro comparativo entre procariontes e eucariontes: Procariontes Envoltrio extracelular: cpsula e parede bacteriana (protenas e glicosaminoglicanos) Abundncia de molculas de lipopolissacardeo na membrana plasmtica, que conferem proteo como a resistncia s enzimas hidrolticas e aos sais biliares das bactrias entricas Ausncia de organelas membranosas Molculas da cadeia respiratria presentes na membrana interna da membrana plasmtica Eucariontes Envoltrio extracelular: glicoclix (glicoprotenas, glicolipdios, proteoglicanas e glicosaminoglicanos) ou parede celular (celulose e pectina) Membrana plasmtica constituda por fosfolipdios, colesterol, glicolipdios, glicoprotenas e proteoglicanas Presena de organelas membranosas Molculas da cadeia respiratria membrana interna das mitocndrias situadas na

Nucleoide: ausncia de envoltrio nuclear, DNA Ncleo: presena de envoltrio nuclear, molculas de circular, no associado a protenas histnicas e que DNA lineares, associadas a histonas e que se no se condensa em cromossomos condensam em cromossomos no momento da diviso Presena de filamentos circulares extracromossmicos (plasmdeos) Ribossomos livres No h separao entre os processos de duplicao de DNA (replicao), sntese de RNA a partir do DNA (transcrio) e sntese de protenas a partir do RNA (traduo) Ausncia de citoesqueleto No realizam endocitose e exocitose Frequentemente partem da superfcie prolongamentos filamentosos: os flagelos e as fmbrias. Os flagelos so estruturas rgidas, constitudas por trs espirais da polimerizao da protena flagelina e com um gancho na ponta. Serve para a movimentao da bactria ao encontro de nutrientes ou afastando-se de substncias txicas. As fmbrias so mais curtas e mais finas que os flagelos e promovem a aderncia das bactrias s clulas hospedeiras ou a transferncia de DNA entre duas bactrias durante a conjugao de DNA No h plasmdeos Ribossomos livres endoplasmtico ou associados ao retculo

H separao entre os processos de replicao e transcrio, que ocorrem no ncleo, e a traduo que acontece no citoplasma Presena de citoesqueleto Realizam endocitose e exocitose No h fmbrias e, naquelas clulas com flagelo, a sua constituio envolve a polimerizao da protena tubulina

A transio de clulas procariticas a eucariticas ocorreu a 1,5 bilhes de anos atrs. As clulas eucariticas devem ter surgido um bilho de anos depois dos procariontes.
4 A MICROSCOPIA COMO MTODO DE ESTUDO

As lentes do microscpio foram feitas tentando-se evitar ao mximo aberraes ou defeitos na imagem. Na ordem crescente de perfeio ptica, tm-se objetivas acromticas, planacromticas e planapocromticas. As objetivas trazem inscries que especificam suas caractersticas: Ex: Plan 40/ 0,65 / 0,17 sendo: Plan - objetiva planacromtica; 40 - aumento de 40x; 0,65 - valor da abertura numrica; - ptica infinita, o que permite que o comprimento do tubo (a distncia da rosca da objetiva at a ocular) seja modificado pelo acoplamento de acessrios, como cmara fotogrfica ou cmara CCD para monitor. Antigamente, com a ptica comum, o tubo era de 160mm, a distncia onde a imagem era formada na ocular; 0,17 - espessura em milmetros da lamnula que deve ser usada sobre a lmina. As oculares tambm variam no aumento que fornecem. O aumento mais usado o de 10x. Atualmente as oculares so de campo amplo, permitindo um maior campo de viso. 4.2 Ampliao, poder de resoluo e profundidade de foco

Os microscpios permitem a observao da clula e da sua estrutura pelo aumento proporcionado atravs das suas lentes. 4.1 Constituintes do microscpio de luz O microscpio de luz composto por uma parte ptica, que amplia o objeto visualizado, uma parte mecnica, que serve de suporte, e uma fonte de iluminao, que consiste na luz comum, o que justifica o seu nome. A parte ptica constituda por trs sistemas de lentes: o condensador, as objetivas e as oculares. O condensador concentra a luz e a projeta como um cone sobre o objeto em estudo. A luz passa por ele e penetra na objetiva. A objetiva projeta uma imagem aumentada do objeto em direo ocular, a qual amplia a imagem recebida e a projeta para a retina do observador. As objetivas permitem diferentes aumentos do objeto, podendo ser, por exemplo, de 5, 10, 20, 40 e 100x. Elas tambm diferem na qualidade da imagem em termos de nitidez, o que dado pela sua abertura numrica. A abertura numrica est relacionada com o ngulo do cone de luz captado pela objetiva e com o ndice de refrao da substncia interposta entre o objeto e a lente objetiva. Nas objetivas de 5 a 40x, o ar esta substncia, mas, na objetiva de 100x, o leo de imerso deve ser colocado entre a lmina e a objetiva, por isso essa objetiva tambm denominada objetiva de imerso. Esse leo tem um ndice de refrao maior que o do ar, o que aumenta a abertura numrica, melhorando a nitidez da imagem.

A ampliao do objeto igual ao aumento da objetiva multiplicado pelo aumento da ocular. Entretanto no basta ter um aumento da imagem, deve haver uma nitidez em seus detalhes, o que dado pelo poder de resoluo das objetivas. Resoluo a menor distncia para que duas partculas sejam visualizadas como objetos separados. O poder de resoluo influenciado pelo comprimento de onda da luz empregada e pela abertura numrica da objetiva e da lente condensadora. O limite de resoluo do microscpio de luz, com as melhores lentes e nas melhores condies, de
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0,2m (1m = 1mm/1000, isto , um micrmetro corresponde a um milsimo de milmetro). A profundidade de foco permite que estruturas em diferentes planos sejam focalizadas. Ela aumentada, fechando o diafragma, o que corta os raios luminosos mais perifricos, que so mais defeituosos. 4.3 Preparo do material Para a formao da imagem ao microscpio de luz, o material biolgico deve ser fino o suficiente para a luz atravess-lo. Podem ser realizados esfregaos de sangue e smen, por exemplo. A gota do material espalhada na lmina com o auxlio de uma outra lmina posicionada em ngulo de 45. Clulas obtidas por raspagem da mucosa oral ou do colo uterino, no exame de Papanicolaou, so espalhadas na lmina com a prpria esptula da coleta. rgos ou parte destes, no entanto, devem ser cortados em fatias bem finas. Para a obteno de cortes histolgicos, o primeiro passo fixar o material coletado para evitar a sua deteriorao. Fixadores bastante usados so o formol (ou paraformaldedo), o glutaraldedo e misturas fixadoras, como o lquido de Bouin, que preparado com formol, cido actico e cido pcrico, onde cada substncia tem uma qualidade e corrige o defeito da outra. O objetivo do fixador o de preservar a morfologia e a composio qumica do tecido, o que conseguido atravs da formao de pontes cruzadas entre as molculas do fixador e as protenas do tecido. O material biolgico deve ser endurecido para ser cortado, o que conseguido incluindo-o em uma substncia que se solidifica depois de penetr-lo, como, por exemplo, a parafina. Para isso o rgo ou um pedao deste, aps a fixao, deve ser desidratado em uma srie alcolica de concentrao crescente e em xilol, impregnado por parafina lquida (a parafina na estufa a 50oC lquida) e finalmente colocado em um molde (uma caixinha de papel, por exemplo), com mais parafina lquida. Como essa ltima etapa feita fora da estufa, temperatura ambiente, a parafina solidifica-se, formando um bloco.

Esse bloco cortado em um aparelho especial, o micrtomo, que permite cortes muito finos como 7 m e at menos de espessura. Os cortes so dispostos em lminas de vidro. Como os tecidos so geralmente incolores, os histologistas inventaram solues corantes que tm afinidades diferentes para certas organelas e estruturas, possibilitando a sua localizao. Para o material ser corado, a parafina deve ser dissolvida, o que obtido colocando a lmina em xilol, e o tecido precisa ser hidratado, j que esses corantes so solveis em gua. A hidratao conseguida passando a lmina em uma srie alcolica decrescente e em gua. A lmina ento mergulhada nos corantes. Uma tcnica de colorao muito usada a hematoxilina e eosina (HE). A hematoxilina um corante de cor roxa, rico em cargas positivas (corante catinico), e a eosina um corante rosa, rico em cargas negativas (corante aninico). As cargas positivas da hematoxilina ligam-se a cargas negativas do tecido, como os grupos fosfato (-PO42-) dos cidos nucleicos, o que faz com que o ncleo da clula fique corado em roxo. As cargas negativas da eosina ligamse a cargas positivas do tecido, como os radicais amino (-NH3+) das protenas bsicas do citoplasma, tornando-o rosa. A despeito da definio atual em qumica para base e cido (base a substncia capaz de aceitar prtons, e cido aquela que doa prtons), tradicionalmente os corantes catinicos so referidos como bsicos, e os aninicos, como cidos. Nesse caso, corante bsico aquele capaz de formar uma ligao salina com grupos carregados negativamente no tecido, enquanto o corante cido forma um sal com grupos positivos do tecido (denominao de uso semelhante ao do cido nucleico). As regies do tecido coradas pela hematoxilina so ditas basfilas pela afinidade ao corante bsico, enquanto aquelas coradas pela eosina so ditas acidfilas ou eosinfilas. Alm da hematoxilina, so corantes bsicos (ou seja, catinicos) comumente usados o azul de metileno, o azul de toluidina e a fucsina bsica. Outros exemplos de corantes cidos (aninicos) so o
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xylidine ponceau, o sirius red, o fast green, o orange G e a floxina. H tcnicas de colorao que evidenciam componentes especficos da clula (citoqumica ou histoqumica). Por exemplo, a reao de Feulgen cora de vermelho magenta o ncleo. O Sudan utilizado para marcar a presena de lipdios na clula; os cortes so feitos sob congelamento, e o preparo da lmina no envolve o uso de lcoois para no dissolver a gordura. O Alcian blue cora glicosaminoglicanos (acares ricos em carga negativa). O PAS (de periodic acid - Schiff) utilizado para corar glicdios e glicoprotenas. Essas substncias so coradas de vermelho magenta, devido ao corante fucsina bsica utilizado no preparo do reativo de Shiff. Para uma maior durabilidade do preparado, ele desidratado em uma srie alcolica crescente e em xilol, e uma lamnula colada sobre a lmina com blsamo-do-Canad sinttico. Agora o material est pronto para ser observado ao microscpio de luz. 4.4 Como usar o microscpio de luz retirar a capa do microscpio e guard-la; verificar se a objetiva de menor aumento (5x) est no caminho ptico, isto , na direo do orifcio da platina (comear sempre com essa objetiva); colocar a lmina com a lamnula voltada para cima sobre a platina, encaixada no chariot (carro em francs); ligar a fonte luminosa e regular a intensidade da iluminao; deslocando o chariot com os seus parafusos, fazer coincidir o material biolgico com o centro do orifcio da platina; focalizar o material com o parafuso macromtrico e depois com o parafuso micromtrico; ajustar a distncia interpupilar, aumentando ou diminuindo a distncia entre as oculares; ajustar a dioptria, regulando o foco com o parafuso micromtrico olhando somente pela ocular fixa, depois, com esse olho fechado e o outro aberto, posicionado na ocular regulvel, ajustar o foco girando o anel presente no corpo dessa ocular; para observar em aumentos maiores, trocar a objetiva de 5x para a de 10x girando o revlver e

ajustar o foco com o micromtrico; nesse aumento, regular a trajetria dos raios luminosos para se obter uma excelente imagem. Essa tcnica foi proposta por August Khler, em 1893 e por isso referida como iluminao de Khler. Ela consiste em fechar o diafragma de campo luminoso (situado na fonte de iluminao), o que resulta em um ponto de luz; regular a altura do condensador, mexendo o parafuso do condensador at o ponto de luz ser visvel como um hexgono com as bordas ntidas (a posio correta do condensador prxima lmina); centralizar o hexgono, movimentando os parafusos de centralizao do condensador; abrir o diafragma de campo at as bordas do hexgono coincidirem com o limite do campo do microscpio (hexgono inscrito) e centralizar novamente, se necessrio; abrir o diafragma de campo luminoso o suficiente para as bordas do hexgono no serem mais vistas (hexgono circunscrito), no deve ser aberto em demasia para evitar um excesso de luz no tubo, o que prejudicaria a qualidade da imagem; retirar a ocular fixa, olhar pelo tubo e regular a abertura do diafragma do condensador com a sua alavanca de modo a ter 2/3 do campo iluminados (ou posicionar a alavanca do diafragma do condensador conforme a abertura numrica especificada em cada objetiva); se a luz estiver muito fraca ou forte, ajust-la no boto que regula a intensidade de luz. Pouca luz confere uma colorao amarelada imagem, e luz em excesso pode prejudicar a viso; se um aumento de 40x for desejado, girar o revlver posicionando essa objetiva no caminho ptico e ajustar o foco com o micromtrico; se um aumento de 100x for necessrio, girar o revlver de maneira que a objetiva de 40x saia do caminho ptico, mas a de 100x no entre, pingar uma gota de leo de imerso sobre o preparado e colocar a objetiva de 100x no caminho ptico. Ajustar o foco com o micromtrico. Ao terminar o uso da objetiva de 100x, girar o revlver trocando a objetiva de 100x pela de 5x (nunca pela de 40x que encostar no leo). Limpar o leo da objetiva de 100x e da lmina com algodo umedecido em lcool; se a objetiva de 100x no for usada, aps a observao com a objetiva de 40x, retornar a colocar a
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objetiva de 10x e posteriormente a de 5x no caminho ptico para retirar a lmina; guardar a lmina na caixa, no devido lugar; diminuir a intensidade luminosa e desligar o interruptor; cobrir o microscpio com a sua capa. 4.5 Outros tipos de microscopia O microscpio de luz pode conter recursos que permitem uma observao diferenciada. A microscopia de polarizao emprega um feixe de luz polarizada que permite estudar certos aspectos da organizao molecular do tecido. A luz torna-se polarizada atravs de um filtro polarizador posionado logo abaixo do condensador. Outro filtro (o analisador) colocado entre as objetivas e as oculares verifica o efeito das estruturas do tecido sobre o feixe polarizado. O plano de polarizao do analisador perpendicular direo de vibrao da luz polarizada e a absorve, tendo-se um campo escuro. Se, ao atravessar um objeto, a luz polarizada desviada, de maneira que o plano de luz no fique mais perpendicular ao do analisador, uma imagem brilhante do objeto se forma. Esse o caso de estruturas cristalinas ou constitudas por molculas alongadas e paralelas, que dividem o feixe de luz em dois. Um feixe absorvido pelo analisador, mas o outro, perpendicular ao polarizador, atravessa o analisador e formar a imagem. Essas estruturas so ditas anisotrpicas ou birrefringentes, pois apresentam dois ndices de refrao diferentes. As estruturas isotrpicas no so vistas, pois no desviam o plano de polarizao da luz, e o feixe que passa pelo polarizador chega inalterado ao analisador, onde retido. A microscopia de contraste de fase permite observar clulas vivas, sem colorao. Quanto maior a densidade de um corpo, maior o ndice de refrao e menor a velocidade da luz que o atravessa. Como as estruturas celulares tm ndices diferentes, do origem a diferenas de fase entre as ondas luminosas emergentes. Dispositivos colocados na lente

condensadora e nas objetivas transformam essas diferenas de fase em diferenas de amplitude, resultando uma variao na intensidade luminosa percebida pelo contraste claro e escuro. Na microscopia de fluorescncia, a radiao ultravioleta usada como radiao excitadora. Ela permite localizar constituintes celulares fluorescentes ou combinados com corantes fluorescentes diretamente ou atravs de anticorpos (imunocitoqumica). Na microscopia confocal, um raio laser varre todos os pontos do plano focal do material biolgico. A luz emitida pela preparao atravessa um pequeno orifcio e forma uma imagem bidimensional. A srie de imagens de diferentes planos focais utilizada para reconstruir uma imagem tridimensional do objeto em um computador. O microscpio eletrnico de transmisso um equipamento diferente do microscpio de luz: um feixe de eltrons atravessa o objeto (por isso, a sua denominao), o que permite maior poder de resoluo que a luz devido ao seu menor comprimento de onda. O limite de resoluo do microscpio eletrnico de 1nm. Um nanmetro um milsimo de micrmetro (1nm = 1m/1000) ou um milionsimo de milmetro. Consegue-se um aumento 200 vezes maior do que aquele com o microscpio de luz e assim a visualizao de organelas e de componentes, cujo tamanho est abaixo do limite de resoluo do microscpio de luz. O aquecimento de um filamento de tungstnio (catodo) emite eltrons, os quais so acelerados devido a uma diferena de potencial entre 60 e 120kV entre o catodo e o anodo, que uma placa metlica perfurada por onde passam os eltrons. Lentes (bobinas) eletromagnticas concentram o feixe. A lente condensadora focaliza o feixe no plano do objeto; a lente objetiva forma uma imagem do objeto, e as lentes projetoras ampliam a imagem, projetando-a sobre uma tela fluorescente (o ecran), um negativo fotogrfico ou uma cmara CCD para captura. O aumento da imagem resultado da multiplicao entre o aumento da lente objetiva e o
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aumento das lentes projetoras, sendo que muda conforme a fora do campo magntico. Como os eltrons so desviados facilmente pelo objeto, os cortes devem ser muito finos, com 20 a 100nm. Para tanto o material deve ser includo em resinas muito mais duras do que a parafina, como o Epon, a Araldite ou o Spur, e cortado com navalha de vidro ou diamante em um ultramicrtomo. Os eltrons so desviados por pores do objeto que contm tomos de elevado peso molecular. Essas regies so eletrodensas e ficam escuras. As regies claras so ditas eletrolcidas. Para aumentar o contraste impregna-se os cortes de tecido com metais pesados como o smio (tetrxido de smio), o chumbo (citrato de chumbo) e o urnio (acetato de uranila). Cortes de 1m (semifinos) podem ser efetuados para serem observados ao microscpio de luz. Os cortes so dispostos em lminas de vidro e corados geralmente com pararrosanilina e azul de toluidina. As estruturas celulares so melhor visualizadas nesses cortes do que naqueles de parafina. No microscpio eletrnico de varredura (scanning electron microscope), os eltrons no atravessam o objeto. A preparao recoberta por uma camada delgada de metal pesado (por exemplo, ouro) e bombardeada com feixe de eltrons muito estreitos (10nm de dimetro), que varrem o material linearmente. Os eltrons refletidos so captados por detectores especiais que geram um sinal eltrico, que transferido para um tubo de televiso. O poder de resoluo de apenas 10nm, mas a nitidez da profundidade da imagem de at 10 vezes maior quela obtida com o microscpio de luz. Na criofratura (freeze-fracture), o fragmento do tecido congelado em temperatura muito baixa e fraturado com uma lmina de metal. A gua do tecido sublimada, deixando a superfcie da fratura desidratada e apresentando relevos e depresses correspondentes s diversas estruturas dos tecidos. Faz-se uma rplica de sua superfcie pela deposio de uma camada de carbono e de metal pesado (platina ou ouro). A deposio oblqua, resultando em um sombreamento que d uma ideia tridimensional. O

tecido destrudo por uma substncia que no ataca a rplica, como cido forte ou hipoclorito de sdio. A rplica colocada em uma tela de cobre e observada ao microscpio eletrnico de transmisso.
5 MORFOLOGIA CELULAR

A forma da clula determinada por trs fatores: presses externas, citoesqueleto e acmulo de produtos de reserva ou secreo. Quando a presso sobre a superfcie apical predominante, a largura e o comprimento da clula so maiores que a sua altura, a clula dita pavimentosa (Figura 1.1). Quando ela sofre presses de igual intensidade em todos os lados, a sua altura igual sua largura e ao seu comprimento, e denominada cbica (Figura 1.1). Quando as presses sobre as faces laterais so predominantes, a altura da clula maior que a sua largura e o seu comprimento, a clula colunar, cilndrica ou prismtica (Figura 1.2).

Figura 1.1 - Imagem obtida ao microscpio de luz de clulas pavimentosas ( ) de um vaso sanguneo e de clulas cbicas ( ) de um tbulo renal. HE. 1.373x.

Essas diferentes formas esto relacionadas com a funo das clulas. As clulas pavimentosas facilitam a passagem de substncias como ocorre com as clulas dos vasos sanguneos (endotlio). As clulas cbicas e as clulas colunares tm a sua altura aumentada pela presena de um maior nmero de organelas para exercer atividade de transporte com gasto de energia, de sntese e de secreo.
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O ncleo geralmente reflete a morfologia da clula, pois seu maior eixo paralelo ao eixo longitudinal da clula. Como frequentemente no se veem os limites das clulas (a membrana plasmtica muito fina e no visvel ao microscpio de luz), pode-se ter uma ideia da forma da clula pelo ncleo. Isso no vlido para clulas que retm seus produtos de secreo, porque o ncleo fica comprimido por essas substncias. o caso da clula caliciforme do intestino, que sintetiza e armazena glicoprotenas (Figura 1.2), e da clula adiposa, que acumula gordura (Figura 1.3).

H clulas com forma irregular, como, por exemplo, os neurnios piramidais do crebro e os astrcitos que, devido aos seus prolongamentos, exibem um aspecto estrelado (Figuras 1.4 e 1.5).

Figura 1.2 - Fotomicrografia de clulas colunares e de clulas caliciformes ( ) no intestino. M - microvilos. HE. 1.373x.

Figura 1.4 - Neurnios piramidais do crebro. Impregnao pela prata. 550x.

Figura 1.5 - Astrcito. Impregnao pela prata. 1.510x. 6 COMPONENTES CELULARES Figura 1.3 - Clula adiposa. HE. 1.373x. 8

6.1 Membrana celular e citoesqueleto 6.1.1 Constituio da membrana celular Delimitando a clula, h a membrana celular (ou plasmtica), que mede 7,5nm e, portanto, no visvel ao microscpio de luz. Ela se apresenta ao microscpio eletrnico como uma estrutura trilaminar: duas linhas escuras separadas por uma linha central clara, o que designada unidade de membrana (Figura 1.6).

hidrocarbonadas da cauda dos outros lipdios. Essa interao diminui a permeabilidade da bicamada a pequenas molculas solveis em gua. Por outro lado, o colesterol, pelo seu rpido movimento entre as camadas (flip-flop), d flexibilidade membrana, permitindo mudanas na forma da clula. As protenas esto arranjadas assimetricamente nas duas camadas de lipdios, podendo estar na superfcie, fazendo contato com as pores polares dos lipdios (protenas perifricas) ou inseridas na bicamada lipdica (protenas integrais). As protenas de membrana podem servir como poros ou carreadores, permitindo a passagem de substncias, ou como receptores de hormnios e outras molculas que influenciam o funcionamento celular. Os receptores geralmente correspondem poro oligossacardica das glicoprotenas e dos glicolipdios. A poro glicdica das glicoprotenas, dos glicolipdios e das proteoglicanas da membrana plasmtica constitui o glicoclix (Figura 1.7).

Figura 1.6 - Imagem obtida ao microscpio eletrnico de transmisso de clulas germinativas vizinhas, mostrando a membrana plasmtica com sua aparncia trilaminar, denominada unidade de membrana ( ). 15.000x.

A membrana celular uma bicamada lipdica, com protenas, glicoprotenas, glicolipdos e proteoglicanas inseridas. Esse arranjo recebeu o nome de modelo mosaico fluido. Os fosfolipdios so o principal componente da bicamada lipdica. Eles so anfipticos, ou seja, exibem uma poro polar (hidroflica), a cabea, e uma poro apolar (hidrofbica), a cauda, que corresponde a duas grandes cadeias de cidos graxos. Por isso, em meio aquoso, organizam-se em duas camadas com a poro hidrofbica voltada para o interior e a poro hidroflica para o exterior. Enquanto membrana, estabilidade interao do os fosfolipdios conferem fluidez o colesterol responsvel pela mecnica da bicamada, devido seu anel esteroide com as regies

Figura 1.7 - Eletromicrografia da superfcie de uma clula, onde o glicoclix (G) visvel. M microvilos. 13.500x.

As proteoglicanas consistem em um eixo central proteico com glicosaminoglicanos ligados, tendo um aspecto semelhante a um cepilho (escovinha de lavar tubo de ensaio).
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Os glicosaminoglicanos so acares no ramificados, compostos por duas unidades que se repetem: um aminoacar (N-acetilglicosamina ou Nacetilgalactosamina), geralmente sulfatado (-OSO3-), e um cido urnico, que apresenta um grupo carboxila (-COO-). O glicoclix tem 10 a 50nm de espessura e carga negativa por causa dos grupos sulfato e carboxila das cadeias glicdicas. Ele retm partculas na superfcie celular, protege a clula de danos qumicos e fsicos, permite o reconhecimento e a adeso das clulas e responsvel pela caracterizao imunolgica, j que as cadeias glicdicas so antgenos. 6.1.2 Transporte celular Molculas pequenas e apolares, como, por exemplo, O2, N2 e benzeno, e molculas pequenas, polares e no carregadas, como H2O, CO2, etanol, ureia e glicerol, atravessam rapidamente a membrana por difuso simples, deslizando entre as molculas de lipdios a favor do gradiente de concentrao. Molculas carregadas, como ons, aminocidos e nucleotdeos, e molculas no carregadas maiores, como a glicose e a sacarose, precisam da intermediao de protenas da membrana para o transporte. Quando esse transporte a favor do gradiente eletroqumico denominado difuso facilitada. Como a difuso simples e a difuso facilitada no envolvem o dispndio de energia, so consideradas situaes de transporte passivo. O transporte de substncias pelas protenas transportadoras contra um gradiente eletroqumico envolve a quebra de ATP e denominado transporte ativo. o caso do transporte de Na+ e K+ pela Na+/K+ - ATPase (ou bomba de Na+ e K+). As protenas transportadoras podem realizar os seguintes tipos de transporte: uniporte, quando um nico soluto transportado de um lado da membrana para outro; simporte, quando o transporte de um soluto depende do transporte de um segundo na

mesma direo, e antiporte, quando o transporte de um soluto leva ao transporte de um outro na direo oposta. Por exemplo, a glicose entra na clula do intestino por carreadores localizados na superfcie apical em um sistema de transporte simporte com Na+. Ela passa para o fluido extracelular, de onde vai para o sangue, por carreadores nas superfcies laterais e basal que realizam difuso facilitada de modo uniporte. O gradiente de Na+ que dirige o transporte da glicose mantido pela Na+/K+-ATPase na membrana plasmtica basolateral. Essa protena mantm a concentrao interna de Na+ baixa. Para isso, faz um transporte antiporte: h a sada de trs Na + da clula e a entrada de dois K+. A entrada de substncias na clula com a invaginao da membrana plasmtica em vesculas denominada endocitose, enquanto a sada de substncias pela fuso de vesculas membrana a exocitose. Conforme o tamanho do material endocitado, tem-se a pinocitose ou a fagocitose. A pinocitose a ingesto de fluido e solutos atravs de pequenas vesculas (menores que 150nm) formadas a partir da depresso da membrana (micropinocitose) ou de uma projeo em onda da membrana que circunda o material (macropinocitose) (Figura 1.8). As vesculas so chamadas endossomos. A fagocitose a ingesto de partculas maiores, tais como micro-organismos ou fragmentos celulares, atravs de grandes vesculas (maiores que 250nm). Essas vesculas so os fagossomos. 6.1.3 Funes da membrana celular A membrana celular uma barreira seletiva passagem de molculas solveis em gua, capaz de controlar a entrada e a sada de metablitos. A permeabilidade seletiva da membrana devida hidrofobicidade dos componentes lipdicos e do carter dos seus canais proteicos. A membrana gera diferenas nas concentraes inicas entre o interior e o exterior da clula, criando
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um gradiente, cuja energia potencial utilizada para dirigir vrios processos de transporte, conduzir sinais eltricos e produzir ATP. Ela serve ainda como suporte estrutural para enzimas e receptores e permite a interao entre as clulas e a fixao da clula matriz extracelular. 6.1.4 Constituio do citoesqueleto O citoesqueleto uma complexa rede de filamentos proteicos: os filamentos de actina, os filamentos intermedirios, os filamentos de miosina e os microtbulos (Figura 1.9). Os filamentos de actina (5 a 9nm de dimetro) so resultantes da polimerizao da protena actina G (G globular). Esto por todo o citoplasma, mas so mais concentrados na periferia. Na regio apical da clula, fazem parte da trama terminal, onde permitem o transporte de vesculas na endocitose e na exocitose e participam na adeso das clulas. Sustentam os microvilos e os estereoclios, especializaes da superfcie celular. Posicionam macromolculas, como o RNAm e complexos enzimticos. So importantes para a migrao celular durante o desenvolvimento embrionrio ou em cultura e constituem o anel contrtil, responsvel pela citocinese. Os filamentos intermedirios (10nm de dimetro) so formados pelas protenas fibrosas citoqueratina, vimentina, desmina, protena cida fibrilar glial ou neurofilamentos, conforme o tipo celular. So bastante resistentes e esto envolvidos na manuteno da forma da clula e no posicionamento de organelas. A citoqueratina est presente somente nas clulas epiteliais, mas uma famlia grande com cerca de 30 tipos. As citoqueratinas da maioria das clulas epiteliais so molculas pequenas, enquanto a citoqueratina das clulas superficiais da pele e dos seus anexos, como os cabelos e as unhas, so molculas grandes, conferindo resistncia trao e ao atrito. Os filamentos de citoqueratina podem se agrupar em feixes, os tonofilamentos, que contribuem para a adeso das clulas.

Figura 1.8 - Nesse capilar, observam-se os processos de endocitose: micropinocitose ( ) e macropinocitose ( ). H hemcia. 19.800x.

Figura 1.9 - Eletromicrografia do citoplasma de neurnio, onde se observa o citoesqueleto entre as organelas. 11

A vimentina encontrada nas clulas epiteliais que revestem os vasos sanguneos (clulas endoteliais) e naquelas que revestem as cavidades (clulas mesoteliais) e, por terem a mesma origem embriolgica, tambm nas clulas do tecido conjuntivo. Ela forma uma rede em volta do ncleo, mantendo sua posio na clula. A desmina encontrada nas clulas musculares. A protena cida fibrilar glial (GFAP de glial fibrillary acidic protein) est presente nos astrcitos, e os neurofilamentos, nos neurnios. Os filamentos de miosina (15nm de dimetro) esto presentes nas clulas musculares, onde pela sua espessura so tambm denominados filamentos espessos (ou grossos) ao passo que os filamentos de actina so os filamentos finos. O deslizamento entre esses filamentos promove a contrao muscular. Os microtbulos (25nm de dimetro) so estruturas cilndricas, ocas, constitudas por 13 protofilamentos com as protenas globulares e tubulinas. Esto localizados mais internamente na clula. Mantm a forma da clula; posicionam organelas, como o retculo endoplasmtico, o complexo de Golgi e os lisossomos, e permitem o deslocamento das vesculas, das organelas e dos cromossomos. Constituem os centrolos como um arranjo de nove triplas perifricas de microtbulos. Os microtbulos originam-se no centro organizador de microtbulos (MTOC), onde h um par de centrolos envoltos em uma matriz de tubulinas. Nas clulas epiteliais, centrolos posicionados prximo superfcie servem de base para formar o axonema (nove duplas perifricas e um par central de microtbulos), que a estrutura interna dos clios e do flagelo (Figura 1.10). A mdia de vida dos microtbulos de cerca de 10 minutos. H protenas que se associam aos filamentos e aos microtbulos, possibilitando ou inibindo a sua polimerizao e promovendo a sua interao com outros componentes da clula ou com a matriz extracelular.

Figura 1.10 - Incio da formao do flagelo a partir do centrolo distal da clula germinativa. 63.000x.

A miosina-I (ou minimiosina), por exemplo, desloca as vesculas ao longo dos filamentos de actina; a miosina-II interage com os filamentos de actina no anel contrtil para realizar a citocinese ou, no msculo, para promover a contrao, e as dinenas e as cinesinas movimentam vesculas e organelas ao longo dos microtbulos (as dinenas em direo ao centro da clula e as cinesinas para a periferia). 6.1.5 Junes celulares So especializaes da membrana plasmtica nas faces laterais das clulas que selam o espao intercelular, promovem a coeso ou possibilitam a passagem de substncias de uma clula para outra. So ainda especializaes da superfcie basal das clulas que permitem a adeso matriz extracelular subjacente. Utilizando a clula epitelial do intestino como exemplo, identificam-se as seguintes estruturas: znula de ocluso (ou juno tight; do ingls, estreita), que formada pelas protenas transmembranas claudinas e ocludinas (do latim
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claudere e occludere, que significam fechar) localizadas em uma faixa circular (por isso, o termo zonula, diminutivo do latim zona, cinta) na poro mais apical das superfcies laterais da clula (Figura 1.11). As ocludinas interagem com as protenas ZO-1, ZO-2 e ZO-3 que esto no lado citoplasmtico. H ainda a cingulina que pode estar relacionada ancoragem dos filamentos de actina. As protenas transmembranas unem os folhetos externos das membranas celulares vizinhas, impedindo a passagem de substncias maiores que 1,5nm. Ento possvel a difuso de gua, ons e pequenas molculas. A permeabilidade da juno pode ser modulada. Por exemplo, a ativao de cotransportadores de Na + e nutrientes pela glicose e por certos aminocidos induz um aumento da permeabilidade da juno, possibilitando a entrada de nutrientes inclusive por entre as clulas epiteliais. As znulas de ocluso tambm impedem a migrao dos componentes da membrana plasmtica entre a superfcie apical e a superfcie basolateral da clula, confinando as protenas transportadoras. Por essas aes, elas permitem que o epitlio delimite compartimentos de composio qumica diferente. znula de adeso, que formada pelas glicoprotenas transmembranas E-caderinas (E de epitlio) situadas em uma faixa circular na clula imediatamente inferior znula de ocluso (Figura 1.11). Na presena de Ca2+, as E-caderinas ligam as membranas celulares vizinhas, mas permanece um espao de 15 a 25nm. Na face interna da membrana plasmtica, h as cateninas (-catenina, -catenina e -catenina ou placoglobina), a -actinina e a vinculina, que interconectam as E-caderinas aos filamentos de actina. Como j indicado no seu nome, essas znulas promovem a adeso das clulas. desmossomos: so estruturas em disco, com as protenas transmembranas desmoglenas e desmocolinas da famlia das caderinas, unindo as membranas celulares vizinhas na presena de Ca2+. Permanece um espao intercelular de 25nm. O lado citoplasmtico dessas protenas interage com as placoglobinas, que, por sua vez, se associam s desmoplaquinas e estas, aos tonofilamentos (Figura 1.11). Nas clulas no epiteliais, os filamentos

intermedirios ancorados aos desmossomos so de desmina ou vimentina ao invs de citoqueratina. Os desmossomos permitem a adeso das clulas (desmossomo significa corpo de conexo), conferindo estabilidade mecnica s clulas epiteliais sujeitas a foras de trao.
O pnfigo uma doena autoimune, em que o organismo produz anticorpos contra as desmoglenas, desfazendo os desmossomos. H a formao de bolhas nas membranas mucosas e na pele e perda do lquido tissular, o que pode levar morte.

junes comunicantes (ou juno gap; do ingls, fenda) (Figura 1.11): consistem em canais hidroflicos formados pelas protenas transmembranas conexinas. Seis conexinas arranjam-se circularmente resultando no conxon, que faz correspondncia com aquele de outra clula. A luz do canal produzido bastante estreita: tem 1,5nm de dimetro, permitindo a passagem de pequenas substncias, como ons, monossacardeos, aminocidos, nucleotdeos, vitaminas, alguns hormnios e os mediadores qumicos monofosfato de adenosina cclico (AMPc) e 1,4,5-trifosfato de inositol (IP3). Essas substncias so responsveis pela comunicao entre as clulas. As junes comunicantes so reguladas, abrindo-se quando o pH intracelular elevado ou quando a concentrao de Ca2+ baixa e fechando-se quando o pH diminui e o nvel de Ca2+ aumenta. interdigitaes: as superfcies laterais e basais das clulas vizinhas imbricam-se, aumentando o seu contato e reforando a sua adeso. So abundantes em clulas sujeitas trao, como as do epitlio da pele (Figura 1.11). hemidesmossomos: localizam-se na poro basal das clulas epiteliais e, como o nome sugere, parecem a metade de um desmossomo. So constitudos pelas protenas transmembranas integrinas, que se ligam laminina e ao colgeno do tipo IV da lmina basal. O lado citoplasmtico das integrinas associa-se a uma protena homloga desmoplaquina (BP230) e a outras protenas que formam uma placa no lado interno da clula, onde se inserem os tonofilamentos.
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Os hemidesmossomos possuem ainda o colgeno do tipo XVII, que tem uma regio transmembrana. Essas junes permitem a adeso da clula epitelial matriz extracelular subjacente. contatos focais: as protenas transmembranas integrinas promovem a interao da clula com a matriz extracelular e a migrao da clula. As integrinas ligam-se a protenas da matriz extracelular e, atravs da -actinina, da vinculina e da talina, a feixes de filamentos de actina no citoesqueleto.

6.2 Ncleo e ciclo celular Na maioria das clulas dos mamferos, o ncleo mede entre 5 e 10m. Ele contm o material gentico da clula, o cido desoxirribonucleico (DNA). O DNA est enrolado em protenas bsicas, as histonas, formando a cromatina, a qual, segundo o seu grau de condensao e sua expresso, classificada em eucromatina (difusa e transcrita) e heterocromatina (condensada e geralmente inativa). O ncleo delimitado pelo envoltrio nuclear (ou carioteca), constitudo por duas membranas separadas pelo espao perinuclear (Figura 1.12). Em vrios pontos, as membranas fundem-se em poros delimitados por complexos proteicos, os complexos de poro. Por eles, h o transporte de substncias entre o ncleo e o citoplasma. A membrana externa do envoltrio nuclear pode ser contnua a do retculo endoplasmtico e ter ribossomos associados. A membrana interna associada lmina nuclear, uma camada de filamentos intermedirios (as laminas), e cromatina associada. O nuclolo corresponde regio da cromatina com genes que codificam os componentes dos ribossomos (Figuras 1.12 e 1.13). Nos cromossomos humanos, h 10 regies organizadoras nucleolares (NOR), mas, na maioria das clulas, so encontrados de um a quatro nuclolos devido inativao ou fuso de alguns deles. Ao microscpio eletrnico, possvel distinguir, no nuclolo, uma regio fibrilar, com o DNA ribossmico (DNAr) sendo transcrito em RNAr, e uma regio granular, onde as molculas de RNAr sofrem o processamento final e se associam s protenas constituindo as subunidades ribossmicas (Figura 1.13). O ncleo est presente quando a clula encontrase na interfase do ciclo celular. Quando a clula se divide, a cromatina condensa-se em cromossomos e a carioteca desintegra-se. O ciclo celular consiste em duas etapas: a interfase e a mitose, entre as quais a clula se alterna de forma cclica.
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Figura 1.11 - Eletromicrografia de clulas vizinhas, onde se observam as junes celulares: znulas de ocluso e de adeso (ZO/ZA), desmossomo (D), junes comunicantes (JC) e interdigitaes (In). O conjunto das znulas de ocluso e de adeso e dos desmossomos denominado complexo unitivo. 21.000x.

unidas pelo centrmero, constitudo por heterocromatina com sequncias de DNA especficas. Aderido a cada uma das faces externas do centrmero, h o cinetcoro, complexo proteico de estrutura discoide, ao qual se fixam os microtbulos do fuso mittico. Com a condensao da cromatina, os nuclolos desaparecem. Finalmente h a desintegrao do envoltrio nuclear em consequncia da fosforilao das laminas, o que rompe a lmina nuclear.

Figura 1.12 - Eletromicrografia de espermtide redonda, mostrando o ncleo com eucromatina (eu) e nuclolo bem desenvolvido ( ). possvel observar o envoltrio nuclear com sua membrana dupla ( ) apesar do acrossoma (a) recobrir parte do ncleo. 10.909x.

Figura 1.13 - Neste ncleo (N), distinguem-se os componentes do nuclolo: organizador nucleolar (on), pars fibrosa (pf) e pars granulosa (pg). 10.208x.

A interfase dividida em: G1, S e G2. Na fase G1, h o crescimento da clula com intensa sntese de RNA, protenas e outros componentes. Na fase S, h a sntese de DNA, que se duplica. Na fase G2, h um crescimento posterior que tambm atua como perodo de segurana, onde verificado se o DNA foi duplicado de forma correta. Na mitose (fase M), a clula divide-se em duas, e o material gentico duplicado na interfase repartido entre as clulas-filhas. A mitose pode ser subdividida em quatro fases: prfase, metfase, anfase e telfase. Na prfase, h a condensao da cromatina em cromossomos (Figura 1.14). Como ocorreu a duplicao do DNA na interfase, cada cromossomo possui duas cromtides. As cromtides-irms esto

Na metfase, os cromossomos, ligados aos microtbulos do fuso, migram para o equador da clula (Figura 1.14). Na anfase, h a separao das cromtides-irms e a sua migrao para os polos da clula (Figura 1.15). Na telfase, h a descondensao dos cromossomos em cromatina, com reaparecimento do nuclolo. Com a defosforilao das laminas, a carioteca refeita. A citocinese inicia na anfase e termina na telfase, originando duas clulas-filhas, iguais clula-me.

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pareamento dos cromossomos-homlogos (sinapse). No paquteno, ocorre a troca de segmentos entre os cromossomos-homlogos (recombinao gnica ou crossing-over). No diplteno, os cromossomoshomlogos tentam se separar, mas ficam unidos nos locais onde ocorreu o crossing-over (quiasmas). Na diacinese, h o desaparecimento dos quiasmas, do nuclolo e da carioteca; h a formao do fuso, e os cromossomos comeam a se movimentar em direo ao equador da clula. Na metfase, h a disposio dos cromossomoshomlogos no equador da clula. Na anfase, os cromossomos-homlogos separam-se e migram para os polos opostos da clula. Na telfase, h a descondensao dos cromossomos, mas eles no atingem o grau de descondensao da interfase. A carioteca pode ou no se formar. Com a citocinese, so formadas duas clulas-filhas, com metade do nmero de cromossomos da clula-me, mas cada cromossomo apresenta duas cromtides. A segunda meiose assemelha-se mitose. A prfase mais curta e mais simples do que a prfase da primeira meiose. Nela ocorre a condensao da cromatina em cromossomos e o desaparecimento do nuclolo e da carioteca. Na metfase, os cromossomos dispem-se no equador da clula. Na anfase, as cromtides-irms separam-se e migram para os polos opostos da clula. Na telfase, h a descondensao dos cromossomos, a reorganizao do envoltrio nuclear e a citocinese das clulas em outras duas clulas-filhas, agora realmente haploides, tanto ao que se refere ao nmero de cromossomos como quantidade de DNA. 6.3 Retculo endoplasmtico e ribossomos O retculo endoplasmtico constitudo por um sistema de membranas em forma de tbulos e cisternas. Se os ribossomos esto associados, o retculo endoplasmtico dito retculo endoplasmtico rugoso (RER) (Figura 1.16). Se no houver ribossomos, designado retculo endoplasmtico liso (REL) (Figura 1.17).
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Figura 1.14 - Fotomicrografia de clulas em interfase (i) e em mitose: prfase (p) e metfase (m). Raiz de cebola. Hematoxilina frrica. 1.373x.

Figura 1.15 - Alm da clula em interfase (i), h uma clula em anfase (a). Raiz de cebola. Hematoxilina frrica.1.373x.

As clulas germinativas so ainda capazes de se dividir por meiose, derivando clulas-filhas haploides. A meiose consiste de duas etapas de divises, antecedidas somente por uma etapa de duplicao do DNA. Na primeira meiose, a prfase bastante longa e complexa, sendo subdividida nos seguintes estgios: leptteno, zigteno, paquteno, diplteno e diacinese. No leptteno, os cromossomos esto associados ao envoltrio nuclear, o que permite o pareamento dos cromossomos-homlogos. No zigteno, h o

Figura 1.16 - Retculo endoplasmtico rugoso. 22.000x.

Figura 1.18 - O neurnio da medula espinhal exibe caractersticas de clula sintetizadora de protenas: ncleo claro devido cromatina frouxa, nuclolo proeminente ( ) e grnulos basfilos (substncia de Nissl) no citoplasma, referentes ao retculo endoplasmtico rugoso e aos ribossomos. Cromatina sexual ( ). HE. 1.045x. Figura 1.17 - Retculo endoplasmtico liso. 13.000x.

Os ribossomos so responsveis pela sntese de protenas. Clulas que produzem bastante protenas possuem nuclolo bem desenvolvido e uma grande quantidade de ribossomos. Os ribossomos ficam livres no citoplasma quando sintetizam protenas do citosol, do ncleo, das mitocndrias e dos peroxissomos. Formam grupos em forma de crculos, espirais ou rosetas, denominados polirribossomos ou polissomos. Quando as protenas so destinadas para as demais organelas, para a membrana celular ou para o exterior, os ribossomos esto associados ao retculo endoplasmtico, como caso dos neurnios (Figura 1.18) e das clulas acinosas pancreticas. Enzimas do REL esto envolvidas na sntese de lipdios, inclusive dos fosfolipdios da membrana celular e dos hormnios. O REL acidfilo, e, por isso, a abundncia nessa organela membranosa confere eosinofilia ao citoplasma das clulas sintetizadoras de hormnios esteroides, como as clulas da adrenal (Figura 1.19).
Figura 1.19 - Clulas da adrenal, cujo citoplasma eosinfilo se deve riqueza em REL para a sntese de hormnios esteroides. A vacuolizao resultado da perda das gotculas lipdicas no processamento histolgico. HE. 550x.

O REL ainda contm enzimas para o metabolismo do glicognio e para a detoxificao de drogas, lcool e compostos nocivos. 6.4 Complexo de Golgi

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 constitudo por um conjunto de cisternas achatadas e empilhadas e vesculas. A cisterna mais prxima ao RE designada face cis, enquanto a que se localiza na regio oposta a face trans (Figura 1.20).

A forma e o tamanho das mitocndrias variam: podem ser esfricas ou alongadas e medirem 0,2 a 1m de dimetro e 2 a 8m de comprimento. A mitocndria apresenta duas membranas, sendo que a membrana interna invagina-se nas cristas. O compartimento entre as duas membranas o espao intermembranoso (Figura 1.22).

Figura 1.20 - As cisternas do complexo de Golgi organizam-se em cis, mdia e trans. Antes da face cis do Golgi, h a rede Golgi cis, formada por sculos e tbulos interconectados que recebem vesculas do RE ( ) e, aps a face trans, h a rede Golgi trans, de onde saem as vesculas de secreo ( ). 33.333x.

Figura 1.21 - Clulas do epiddimo, cujo complexo de Golgi ( ) bem desenvolvido para a sntese de glicoprotenas. Impregnao pela prata com ncleo contracorado pelo Feulgen. 1.373x.

As protenas sintetizadas no RER vo para o complexo de Golgi, onde so acrescentados resduos de acares (glicosilao), sulfatadas ou convertidas em protenas ativas, como a insulina. Lipdios tambm so glicosilados e sulfatados nessa organela. O Golgi realiza tambm o empacotamento e a distribuio das macromolculas para a secreo, para a membrana plasmtica ou para outras organelas. O complexo de Golgi no se cora nos cortes histolgicos corados com HE, mas apresenta a capacidade de reduzir os sais dos metais, como, por exemplo, os de prata (Figura 1.21). 6.5 Mitocndrias

Figura 1.22 - Mitocndrias. 44.000x.

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A membrana mitocondrial externa possui protenas transmembranas, as porinas, que permitem a passagem de molculas hidrossolveis de at 10kD, o que faz com que o espao intermembranoso tenha um contedo semelhante ao citosol. Enzimas para a sntese e para a oxidao dos lipdios e a monoamino oxidase tambm esto presentes nessa membrana. A membrana mitocondrial interna bastante impermevel devido riqueza em cardiolipina, um fosfolipdio que exibe quatro cadeias de cidos graxos. H protenas transportadoras que permitem a passagem de molculas necessrias s reaes que ocorrem na matriz mitocondrial. Nessa membrana, encontram-se as cadeias respiratrias, constitudas por trs complexos enzimticos: o complexo da NADH-desidrogenase, o complexo do citocromo b-c1 e o complexo da citocromo oxidase. Esses complexos formam uma cadeia transportadora de eltrons e funcionam como bombas de H+, transportando-os da matriz mitocondrial para o espao intermembranoso. Assim, estabelecido um gradiente eletroqumico que fornece energia para produzir ATP atravs da ATP-sintetase tambm localizada na membrana mitocondrial interna. Limitada pela membrana interna, h a matriz mitocondrial, que contm o DNA mitocondrial, RNA, protenas e grnulos esfricos e eletrodensos, ricos em Ca2+. Na matriz, situam-se enzimas que participam da -oxidao dos cidos graxos e enzimas do ciclo do cido ctrico (ou ciclo de Krebs). As mitocndrias so abundantes nas clulas que demandam energia (Figura 1.23). Essas organelas produzem ATP atravs da oxidao de acares, aminocidos e cidos graxos. A glicose e os aminocidos so degradados no citoplasma a piruvato, o qual entra na mitocndria e convertido em acetilcoenzima A (acetil-CoA). A oxidao de cidos graxos em acetil-CoA ocorre na matriz mitocondrial. A acetil-CoA combina-se com o cido oxaloactico para formar cido ctrico, dando incio ao ciclo do cido ctrico. Nesse ciclo, CO2 produzido pelas reaes de descarboxilao e quatro pares de H + so removidos por reaes catalisadas por

desidrogenases. Os ons H+ reagem com oxignio para formar H2O. Em condies aerbicas, a gliclise extramitocondrial, o ciclo do cido ctrico e o sistema transportador de eltrons originam 36 molculas de ATP para cada molcula de glicose. Esse rendimento 12 vezes maior do que o obtido pela gliclise anaerbica.

Figura 1.23 - As mitocndrias (bastes azulados) so abundantes no tbulo distal do rim, onde ocorre transporte ativo de ons. Corte semifino corado com azul de toluidina. 1.922x.

6.6 Lisossomos So pequenas organelas (0,5m) contendo enzimas hidrolticas ativas em pH cido, capazes de degradar quase todos os tipos de macromolculas biolgicas, como, por exemplo, fosfatase cida, desoxirribonuclease cida, ribonuclease cida, catepsina, lipase e sulfatase. O material a ser digerido pode ser de origem endgena, como organelas velhas ou em desuso (por exemplo, REL aps ter se desenvolvido muito em resposta a uma droga), ou de origem exgena, como bactrias ou substncias estranhas fagocitadas por macrfagos (Figura 1.24).
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A catalase pode tambm utilizar o oxignio do perxido de hidrognio (transformando-o em gua) para oxidar diversos substratos, como o lcool e medicamentos, contribuindo para a detoxificao. Como as mitocndrias, os peroxissomos formamse pela fisso das organelas pr-existentes, com a importao das protenas do citosol e de fosfolipdios da membrana do retculo endoplasmtico. 6.8 Proteassomos So complexos de proteases que digerem as protenas marcadas com ubiquitina. Assim, so removidas as enzimas aps sua ao, protenas defeituosas e protenas codificadas por vrus, que seriam usadas para produzir novos vrus. O proteassomo tem a forma de um barril constitudo por quatro anis sobrepostos. Nas extremidades, h uma partcula reguladora com ATPase, capaz de reconhecer as protenas ligadas ubiquitina. A ubiquitina uma protena pequena altamente conservada na evoluo, ou seja, sua estrutura praticamente a mesma desde as bactrias at o ser humano. Ela se liga a um resduo de lisina da protena a ser degradada, e outras molculas de ubiquitina se prendem primeira. Esse complexo proteico reconhecido pela partcula reguladora. A protena desenrolada pela ATPase, com gasto de energia, e introduzida no proteassomo. Ela degradada em peptdeos de oito aminocidos, os quais so digeridos por enzimas do citoplasma ou tm outros destinos, como participar da resposta imune. As molculas de ubiquitina so liberadas pelas partculas reguladoras para serem usadas novamente.
7 QUESTIONRIO

Figura 1.24 - Eletromicrografia de macrfago rico em lisossomos (L). 6.286x.

Enzimas lisossmicas podem ser liberadas pelas clulas para realizar digesto extracelular, como o caso dos osteoclastos na remodelao do osso. 6.7 Peroxissomos So encontrados em quase todos os tipos celulares, mas so mais comuns nas clulas do fgado e do rim. So organelas esfricas, medindo 0,5 a 1,2m, com uma matriz granular fina e, em muitas espcies, com um cristaloide. Possuem enzimas que oxidam cidos graxos de cadeias longas, aminocidos e intermedirios dos cidos biliares. Quando da oxidao dos substratos orgnicos, h a retirada de tomos de hidrognio, que so combinados com o O2, produzindo H2O2 (perxido de hidrognio). Essa substncia oxidante prejudicial clula e logo degradada pela enzima catalase em gua e oxignio (2H2O2 2H2O + O2).

1) Qual o conceito de clula?

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2) Qual o critrio usado para classificar as clulas? Em que elas so classificadas? O que significa cada uma dessas denominaes? 3) Quais so os componentes do microscpio de luz e para que servem? 4) Qual o limite de resoluo do microscpio de luz? E do microscpio eletrnico de transmisso? 5) Quais so as etapas para a obteno dos cortes histolgicos? 6) O que so basofilia e acidofilia? 7) Qual a tcnica de colorao para glicdios e glicoprotenas? E para lipdios? 8) Como se realiza a iluminao de Khler? 9) D exemplos de formas de clulas e relacione com a atividade funcional. 10) Qual a constituio da membrana celular? 11) O que o glicoclix? 12) O que signfica protenas integrais e protenas perifricas? 13) Relacionando com os seus constituintes, qual a importncia da membrana celular? 13) Quais so as molculas que atravessam mais fcil e rapidamente a membrana? 14) Quais so os tipos de transporte pela membrana? 15) Como denominado o transporte envolvido com a entrada de material na clula? E aquele envolvido com a sada? 16) Compare pinocitose e fagocitose. 17) Quais so os componentes do citoesqueleto e como atuam? 18) Descreva as junes celulares segundo a sua constituio e funo. 19) O nuclolo uma organela membranosa? Do que ele constitudo? 20) Compare a mitose e a meiose, resumindo os acontecimentos de cada fase.

21) Descreva as organelas segundo a sua morfologia, funo e exemplo de clula onde so predominantes.
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