AULA N13 Gentica Bacteriana (continuao) e Elementos mveis de DNA

Sumrio da aula:
Plasmdeos Bacterianos Definio e propriedades Plasmdeos conjugativos (Factor F) e no conjugativos; Mobilizao plasmdica Caracterizao de plasmdeos Transposes Definio e propriedades Mecanismo de transposio Tipos de transposes

Depois do que foi visto na aula 12, continuamos com a gentica bacteriana, e vamos dar agora ateno a dois elementos que se revestem de grande importncia para a variabilidade gentica nas bactrias: os Plasmdeos Bacterianos e os Transposes.

Plasmdeos Bacterianos
Um Plasmdeo uma pequena molcula de DNA de dupla-cadeia que existe nas bactrias, e que pode existir de forma independente do cromossoma bacteriano, ou seja, pode no fazer parte dele (ser extracromossomal), ou pode estar inserido nele. Um Plasmdeo codifica para a sua prpria replicao, e consegue efectuar a sua manuteno em clulas em diviso. Eles tm tamanho varivel, num intervalo que se estende dos 3000 pares de bases [3 Kb (Kb = quilo-bases, subentendido que o DNA de dupla cadeia e que cada base tem o seu par)] at aos 400 000 pares de bases (400 Kb). Os plasmdeos classificam-se de acordo com vrias caractersticas, nomeadamente: Consoante a forma, so circulares (como os que existem em Enterobactrias), ou lineares (como os que se encontram em gneros como Streptomyces, e Borrelia); So conjugativos [se codificarem para um pili sexual (so tra+, de transferncia+)], ou so no conjugativos (tra-). Os plasmdeos tm vrios sistemas de controlo, que podem actuar ao nvel: Da replicao

 estudado Factor

Do nmero de cpias Da Partio ou manuteno de possivelmente Fertilidade o ou

O plasmdeo conjugativo mais bem Plasmdeo F (tambm chamado de simplesmente de Factor F), mostrado na figura 13.1. O Factor F um plasmdeo que contm sequncias IS (Integration Sequences = Sequncias de Integrao) que so importantes para a integrao do plasmdeo no cromossoma; contm genes que codificam para a sua replicao (rep genes) e uma origem de replicao, que onde comea a replicao do plasmdeo; transferncia contm do genes que (tra Fig 13.1 Factor F; contm: Sequncias de Integrao (IS3 e IS2); genes que codificam para a sua replicao (rep genes); uma origem de replicao (oriV), genes que codificam para a transferncia do plasmdeo (tra genes) uma origem de transferncia (oriT ). A seta indica em que sentido ocorre a transferncia do plasmdeo: os genes que codificam para a sua replicao sero os primeiros a chegar bactria receptora (de todos os que esto indicados). codificam informao necessria plasmdeo genes), bem como uma origem de transferncia (oriT ). Existem vrios tipos de plasmdeos bacterianos como se mostra na tabela 13.1 (ver pgina seguinte). De todos os plasmdeos os que de a so maior mencionados importncia so: os do tipo P.R, ou Factores de resistncia, os quais conferem resistncia a antibiticos ( e alguns so conjugativos!); os Plasmdeos de Virulncia, que codificam factores de virulncia (como por exemplo toxinas)

 Plasmdeos Metablicos, que permitem s bactrias degradar outros compostos, tais como compostos aromticos (ex.: tolueno), pesticidas ou acares, entre outros.
Tabela 13.1 Tipos de Plasmdeos Bacterianos (smbolos (I), (II) e * ver fundo da tabela) Tipo Representante (Kb) N cpias Hospedeiro Propriedades Conjugativo, P. R (I) RP4 54 1-3 Pseudomonas e Enterobactrias resistncia Amp, Km, Nm, Tc* Resistncia a R1 80 1-3 Bacilos Gram Staphylococcu s aureus Mycobacteriu m fortuitum E. coli E. coli Agrobacterium temefasciens Pseudomonas Pseudomonas putida Rhizobium Amp, Km, Su, Cm, Sm* Resistncia Gm, Tc, Km* ?? Colicina E1 Produo de enterotoxina Induo de tumores Degradao da cnfora Degradao do tolueno Fixao do azoto, simbiose (I) (II) tambm chamados de Factores R de resistncia a antibiticos Transportam genes que codificam para colicinas Sm =

pSH6 P. Crptico P. Col (II) P. Virulncia pAL5000 ColE1 Ent(P307) Ti P. metablicos CAM TOL

21 5 9 83 200 230 75 1-3 10 - 30

sym

* Abreviaturas dos antibiticos Amp = Ampicilina; Km = Kanamicina; Nm = Neomicina; Tc = Tetraciclina; Su = Sulfonamidas; Cm = Cloranfenicol; Estreptomicina; Gm = Gentamicina;

Plasmdeos compatveis e Plasmdeos incompatveis

Existem plasmdeos que, apesar de serem diferentes, tm sistemas de regulao iguais. Por causa disto, se uma bactria conseguir englobar no seu interior 2 plasmdeos cujos sistemas de regulao sejam iguais, quando ela se voltar a dividir, as clulas filhas no conseguiro ficar cada uma com uma cpia dos dois plasmdeos: uma clula fica com um dos plasmdeos, e a outra clula fica com o outro. Diz-se ento que estes plasmdeos so incompatveis. Com plasmdeos compatveis, passa-se o contrrio: se temos dois plasmdeos compatveis na mesma bactria, como os seus sistemas de regulao so diferentes, as clulas filhas da bactria em questo ficam, cada uma, com uma cpia de cada plasmdeo. Estas ideias conseguem-se entender melhor se se observar a figura 13.2.

Fig. 13.2 Plasmdeos Incompatveis tm sistemas de regulao iguais, e no podem ser passados os dois para cada clula filha cada clula filha fica com um deles. Plasmdeos compatveis tm sistemas de regulao diferentes e cada clula filha recebe uma cpia de cada um dos plasmdeos.

Mobilizao Plasmdica

O que a figura 13.3 pretende mostrar que os plasmdeos no conjugativos podem ser mobilizados, isto , podem ser transferidos para outras bactrias, em conjunto com plasmdeos conjugativos. Portanto, possvel que ocorra transferncia de um plasmdeo no conjugativo (o qual no codifica pili sexual nenhum) entre bactrias. Para isso acontecer, preciso que os plasmdeos, tanto o conjugativo, como o no conjugativo, tenham uma origem de transferncia igual. Nesse caso, a endonuclease consegue efectuar o corte nas duas oriTs, e cada plasmdeo sofre replicao rollingcircle, sendo que a bactria receptora fica com uma cpia de cada plasmdeo. O plasmdeo conjugativo, mobilizou o plasmdeo no conjugativo.

Fig. 13.3 Mobilizao Plasmdica O Plasmdeo P2 conjugativo, e mobiliza o plasmdeo P3 (no conjugativo), permitindo a sua transferncia para outra bactria. Isto acontece, porque as oriTs de cada plasmdeo so iguais.

Como detectar plasmdeos?

Dado que os plasmdeos tm tantas propriedades, conveniente conseguir detect-los. Uma forma de detectar plasmdeos pelo mtodo fenotpico (fig. 13.4 ver pg. seguinte). Este mtodo envolve duas bactrias fenotipicamente diferentes: uma a dadora (tem um plasmdeo conjugativo), e a outra a receptora (no tem plasmdeos). Tem que se efectuar uma conjugao entre elas, e depois fazer os transconjugantes crescerem em vrios meios de cultura, de acordo com as propriedades do plasmdeo, e da bactria receptora. O que se encontra representado na fig 13.4 apenas um exemplo do que se pode fazer: tendo uma bactria dadora, com um plasmdeo que confere resistncia a vrios antibiticos (Ampicilina, Kanamicina e Cloranfenicol) e uma bactria receptora que consegue crescer em meio com estreptomicina, primeiro, faz-se uma cultura da bactria dadora, num meio apropriado, e contam-se as colnias, de modo a saber-se o n de UFCs (Unidades Formadoras de Colnias). Depois efectua-se a conjugao notar que no caso considerado, todos os transconjugantes podero crescer em meio com estreptomicina, mas dependendo da presena dos genes de resistncia no plasmdeo, podem no crescer em meio com um dos antibiticos mencionados: por isto que se apresentam depois as combinaes possveis dos transconjugantes: podem resistir aos trs antibiticos se os genes estiverem todos no plasmdeo; s a dois se um dos genes estiver no cromossoma bacteriano ou num plasmdeo no conjugativo com oriT diferente do conjugativo, ou s a um antibitico, com as respectivas combinaes de localizaes possveis para os outros dois genes (2 no cromossoma, 2 num plasmdeo no conjugativo com oriT diferente da do conjugativo [pode at haver 2 plasmdeos no
conjugativos com oriT diferentes da do conjugativo!] , ou um em cada lado). Por fim faz-se

os transconjugantes crescerem em vrios meios cada um contendo um antibitico para o qual o plasmdeo confere resistncia. No caso considerado, os transconjugantes foram capazes de se desenvolverem em todos os meios, pelo que se deduz que os genes de resistncia esto todos no plasmdeo. Claro que isto no parece ter grande utilidade, pois j sabamos de antemo que a bactria dadora tinha o plasmdeo. Mas se imaginarmos que apenas sabamos que a suposta dadora era resistente aos antibiticos isto no significa que ela tenha o plasmdeo, pode apenas ter genes no cromossoma, que confiram a resistncia, ou o caso pode ser outro (plasmdeo no conjugativo) - e que o receptor no tinha genes que conferissem resistncia aos antibiticos cuja resistncia conferida pelo plasmdeo, isto

plasmdeo conjugativo, e s havendo conjugao com a bactria dadora que a

permitiria detectar a presena do plasmdeo, pois para que haja conjugao preciso um

tambm permite calcular a frequncia de conjugao, pela expresso que a seguir se

receptora poderia ganhar resistncia a um, dois ou trs antibiticos . Este mtodo

apresenta:

Fig. 13.4 Mtodo Fenotpico, para deteco de plasmdeos Neste caso temos um exemplo em que se pesquisa a presena de plasmdeos que conferem resistncia aos antibiticos Ampicilina, Kanamicina e Cloranfenicol (Amp, Kan e Cmp respectivamente) numa espcie de bactrias. Para haver conjugao preciso que haja um plasmdeo conjugativo. O plasmdeo em causa poder ser o responsvel pela resistncia da bactria aos antibiticos mencionados. Se for o responsvel, possvel fazer culturas de transconjugante em meios de cultura com os antibiticos, dependendo dos genes presentes no plasmdeo. Este mtodo permite verificar se a resistncia ao antibitico conferida ou no por um plasmdeo conjugatvo. ATENO: pode acontecer que, o transconjugante no consiga crescer em nenhum dos meios com antibitico, o que significa que a resistncia no devida a plasmdeos conjugativos. Isso no significa que a bactria supostamente dadora no tenha plasmdeos: ela pode ter plasmdeos no conjugativos que sejam a base da resistncia; por outro lado, ela pode ter plasmdeos conjugativos que no so os responsveis pela resistncia. Por isso, nunca se pode dizer que no houve conjugao, porque no se tem certezas acerca disso.
Freq.Conjugao = UFC / ml de transconjugante UFC / ml de Dador

Acabmos de ver que o mtodo fenotpico s permite detectar plasmdeos conjugativos, porque faz uso de uma conjugao. Mas no se consegue detectar plasmdeos no conjugativos com este mtodo. Por isso, outra forma tem que ser empregue para detectar esses plasmdeos. Os plasmdeos no conjugativos podem ser detectados isolando-os da bactria. Isso faz-se com recurso a mtodos bioqumicos, como a electroforese. A electroforese mais til nesse sentido quando j se usou o mtodo

Fig. 13.5 Isolamento de plasmdeos em bactrias Gram negativas Para isolar bactrias Gram -, preciso usar um tampo de lise (constitudo por EDTA, lisozima e SDS) de modo a remover as membranas interna e externa (SDS resolve), e o peptidoglicano (lisozima faz isso), sendo ainda preciso inactivar DNAases retirando-lhes os cofactores (pelo EDTA), e por fim necessrio separar os plasmdeos dos detritos resultantes do processo (tais como o DNA cromossomal a soluo salina concentrada permite que se faa isto) que no nos interessam. S depois que se pode efectuar a electroforese em gel de agarose, e aps estar feita pode-se visualizar os produtos de separao sobre uma luz UV. Vrias formas de plasmdeos podem ser observadas, de acordo com a sua mobilidade no gel: os mais volumosos so os que esto sob a forma relaxada, e tm menor mobilidade. Os menos volumosos so os que esto sob a forma superenrolada, sendo os que apresentam maior mobilidade. Os plasmdeos lineares tm mobilidade intermdia, porque tm volumes intermdios, apesar de a representao no realar isso. NOTA: para se visualizar os plasmdeos sobre uma luz UV, preciso adicionar ao gel Brometo de Etdio. fenotpico e cujo resultado foi negativo. Sem usar o mtodo fenotpico, a electroforese permite o isolamento de plasmdeos conjugativos e no conjugativos, ou seja, no tem selectividade para um tipo em particular. A Fig 13.5 ilustra o que se faz para se isolar um plasmdeo de uma bactria Gram - . Deve-se notar que o procedimento de extraco de plasmdeos de bactrias Gram - igual ao usado para extrair plasmdeos de bactrias Gram +, porque a constituio da parede celular um pouco diferente entre cada um dos tipos, mas as substncias que a formam so basicamente as mesmas. Para Gram -, usa-se um tampo de lise (EDTA, Lisozima, SDS) e uma soluo salina concentrada

porque preciso remover a membrana externa em primeiro lugar, depois o peptidoglicano e de seguida a membrana interna. Aps se ter feito isto, faz-se uma centrifugao para separar o DNA plasmdico de outros constituintes celulares (tais como o DNA cromossomal ). A electroforese ir depois permitir distinguir entre vrias formas plasmdicas, pois a separao feita por tamanho; ento quanto maior o tamanho do plasmdeo, menor ser a sua mobilidade no gel (se se mantiver a voltagem!). Os plasmdeos podem ser circulares ou lineares, mas podem ainda encontrar-se de forma relaxada ou superenrolada. A forma superenrolada a que ocupa menos espao, pelo que ser a que tem maior mobilidade, e portanto, ser a que se encontra mais prxima do plo positivo (recordar que o DNA est carregado negativamente, por ter muitos grupos fosfato). A forma relaxada a que ocupa maior volume, sendo a que tem menos mobilidade, e logo, aquela que se encontra mais longe do plo positivo. A forma linear ocupa um volume intermdio em relao ao da forma superenrolada e da forma relaxada, pelo que tem uma mobilidade intermdia.

Transposes
Transposes so elementos genticos (pedaos de DNA) que conseguem mover-se e integrar-se em diferentes locais no mesmo cromossoma, ou em cromossomas diferentes, como representado na figura 13.6. Tal movimento transposio, e chamado tem de papel

importante na gerao de novas combinaes genticas, isto , contribuem para a variabilidade gentica. Os transposes carregam genes necessrios para a transposio, e por vezes outros genes tambm. Existem pelo menos trs tipos de transposes, conforme se observa na Fig. 13.7 (ver prxima pg.): Fig. 13.6 Os transposes so pedaos de DNA que conseguem mover-se e serem integrados em diferentes locais do mesmo cromossoma, ou entre cromossomas diferentes.

Sequncias de Insero (Insertion Sequences IS) (Fig. 13.7 a))

Estes so os transposes mais simples, e so compostos apenas de genes que codificam para a enzima absolutamente necessria transposio - a transposase delimitados por sendo repeties Fig. 13.7 Os diversos tipos de transposes Sequncias de Insero: so compostas por Repeties invertidas que delimitam os genes da transposase. Transposes Compostos: pensa-se que sejam formados pela associao entre duas ISs e um segmento central contendo um gene que confere certas caractersticas como resistncia a antibiticos logo tero a seguinte estrutura: RI, gene da transposase, RI, gene X, RI, gene de transposase , RI. (no est representado) Transposes Replicativos: so compostos pelos mesmos constituintes que uma IS, ou que um transposo composto, mas tm tambm um gene que codifica para uma resolvase. DR Direct repeats ver fig. 13.9 a)

invertidas, ou seja, sequncias de nucletidos que se forem lidas de 5 Para 3 em ambas as cadeias, so iguais (isto est representado na Fig. 13.8). A transposase reconhece as repeties invertidas, as quais variam entre cada tipo de IS. A tabela 13.2, d exemplos de vrios tipos de ISs e das suas propriedades (prx. pg.) Transposes compostos (Fig. 13.7 b))

Um transposo composto chamado de composto porque so constitudos por genes necessrios transposio, e por outros genes, tais como genes que conferem resistncia

Fig. 13.8 Estrutura de uma sequncia de Insero (IS) Uma sequncia de insero tem duas Repeties Invertidas (RI) a delimitar um gene que codifica uma transposase. Veja-se como as sequncias das RIs so iguais quando lidas no sentido apontado pelas setas (5 3 em ambas as cadeias, e viceversa).

Tabela 13.2 Propriedades de Sequncias de Insero selecionadas. Sequncia de Insero IS1 IS2 IS3 IS4 IS5 Tamanho (bp) 768 1327 1400 1428 1195 Repetio Invertida (bp) 23 41 38 18 16 Alvo (bp) 9 ou 8 5 34 11 ou 12 4 N de cpias em E. coli 6 10 4 13 56 12 10 - 11

a antibiticos, cada um deles sendo delimitado por repeties invertidas. Pensa-se que transposes compostos formam-se a partir da associao entre vrias sequncias de insero se associam com um segmento central de DNA contendo um ou mais genes. Os nomes dos transposes compostos comeam com o prefixo Tn. Algumas propriedades de transposes compostos so apresentadas na tabela 13.3. Notese que nem todos os transposes compostos tem genes que conferem resistncia a antibiticos (ex: Tn2901). Tabela 13.3 Propriedades de Transposes Compostos seleccionados
Transposo Composto Tn3 Tn501 Tn951 Tn5 Tn9 Tn10 Tn903 Tn1681 Tn2901 Comprimento (bp) 4957 8200 16500 5700 2500 9300 3100 2061 11000 Repeties Invertidas (bp) 38 38 desconhecido IS50 IS1 IS10 IS903 IS1 IS1 Mdulo terminal Marcadores genticos Resistncia Ampicilina Resistncia ao mercrio Utilizao de lactose Resistncia Kanamicina Resistncia ao Cloranfenicol Resistncia Tetraciclina Resistncia Kanamicina Enterotoxina HS (Heat Stable) Biosntese de Arginina

Transposes Replicativos (Fig. 13.7 c))

Um transposo replicativo pode ter a constituio de uma sequncia de insero, ou pode ter a constituio de um transposo composto mais tem tambm um gene que codifica para uma enzima a resolvase.

Mecanismos de transposio
Os transposes movem-se de um lado para o outro segundo dois mecanismos: Transposio conservativa / Transposio simples ( o mesmo) Os transposes que se movimentam segundo este modelo so as IS e os transposes compostos. Os replicativos no se deslocam por este modelo. Neste modelo, a transposase reconhece as Repeties Invertidas e corta em ambas as extremidades o transposo, retirando-o do seu local original. Ela carrega-o at ao novo local, reconhece depois a sequncia alvo, clivando o DNA no mesmo local da sequncia em cada uma das cadeias, insere o transposo no local e ocorre no fim a duplicao da sequncia alvo. Isto d origem ao que se chama de Direct Repeats na figura 13.7. O transposo move-se assim de um lado para o outro, de um modo que pode ser comparado aos comandos de Cut & Paste (cortar & colar) que se usam quando se trabalha em programas do Office, como o Word (Control + X, Control + V). A ideia ilustrada na Fig. 13.9 a). (ver prx. pg.). O transposo Tn10 desloca-se desta forma. Transposio replicativa

A Fig. 13.9 b) mostra o que ocorre. Este tipo de transposio necessita da enzima resolvase pelo que s os transposes replicativos se movem desta forma. Neste modelo,

Fig. 13.9 Modelos de transposio Transposio Conservativa / Transposio simples (Cortar & Colar) Transposio Replicativa (Copiar & Colar)

a transposase faz logo todos os cortes no transposo e na sequncia alvo, mas f-los de forma a no clivar totalmente o transposo (deixa um extremidade de cada cadeia ligada). Posto isto, cada uma das extremidades do transposo e do alvo so ligados, formando um cointegrado (cointegrate). Uma DNA polimerase preenche as lacunas e uma DNA ligase sela-as. Agora, para resolver o problema de se ter ficado com uma molcula de DNA maior a qual possui dois segmentos iguais de DNA (constitudos pelo transposo e pela sequncia alvo duplicada), precisa a enzima resolvase, a qual cataliza a recombinao entre os dois transposes. Isto permite obter duas estruturas separadas, cada uma com uma cpia do transposo, mas s uma com as sequncias alvo duplicadas (note-se que a recombinao mencionada no leva a uma maior variabilidade gentica, porque os genes em causa so iguais, como dever ser bvio). Comparando mais uma vez com comandos usados em programas do Office, este modelo semelhante ao Copy & Paste (Copiar & Colar) (Control + C, Control + V). O Transposo Tn3 um dos que se consegue deslocar desta forma.

Efeitos da Transposio
Aps o que foi estudado acerca da transposio, pode-se antever que ela pode produzir muitos efeitos ao nvel do genoma bacteriano. Certos transposes podem provocar mutaes knock out, isto , podem induzir a perda do gene, por provocarem alteraes na estrutura do mesmo. Alguns transposes carregam codes stop ou sequncias de terminao, que quando inseridos em genes bloqueia a sua traduo ou a sua transcrio, respectivamente. Tal como pode haver transposes com codes stop ou sequncias de terminao, tambm pode haver transposes que carreguem promotores que activam os genes portanto os transposes podem activar ou silenciar genes. Os transposes tambm podem estar na origem de vrios tipos de rearranjos de DNA, nomeadamente deleco, duplicao/amplificao ou inverso (Fig. 13.10). Um dos maiores impactos que os transposes podem ter a evoluo conter dos plasmdeos: os plasmdeos podem muitas sequncias alvo pelo que os 13.10 Rearranjos de DNA provocados por transposes: a) Deleco; b)Amplificao; c) Inverso.

transposes movem-se frequentemente entre plasmdeos. Um plasmdeo pode ento acumular vrios transposes e pode ento conferir multiresistncias, isto , resistncia a vrios antibiticos de uma s vez, criando srios problemas no que toca ao combate a microorganismos. Um destes plasmdeos mostrado na Fig. 13.11 (ver prxima pg.). Naturalmente, medida que o plasmdeo evolui, ou seja, acumula transposes, ele aumenta de tamanho

Existe ainda um outro tipo especial de transposes, que foram descobertos em bactrias Gram +, que so chamados de transposes conjugativos. O transposo conjugativo no gera uma duplicao da sequncia alvo em que se insere, nem se consegue replicar de forma autnoma, mas tem genes de transferncia que lhe permitem

Fig. 13.12 Representao simplificada da transposio conjugativa, e exemplos de transposes conjugativos.

Fig. 13.11 Um plasmdeo de resistncia mltipla contendo o transposo composto Tn3 O transposo Tn3 um transposo composto (e tambm replicativo tem um gene que codifica para uma resolvase), contm um gene que confere resistncia Ampicilina (Amp) o gene bla, que codifica para uma lactamase. As setas por baixo do transposo indicam o sentido de transcrio dos genes. O transposo Tn3 est por sua vez inserido no transposo Tn4, que contm mais genes de resistncia (resistncia estreptomicina [Sm] e resistncia s sulfonamidas [Su]). O plasmdeo tambm carrega genes de resistncia Kanamicina (Km) e ao Cloranfenicol (Cm). A regio RTF codifica protenas que so necessrias replicao e transferncia do plasmdeo. que sofra exciso do cromossoma do dador e seja transferido por conjugao para o receptor, onde ele se integra aleatoriamente no cromossoma, deixando uma cpia de si mesmo no dador (ver Fig. 13.12 na prx. pg). Um exemplo destes transposes o transposo Tn916 de Enterococcus faecalis, que se consegue transferir pelo processo de

transposio conjugativa para outras bactrias que no necessitam de ser outra E. faecalis. O Tn916 transporta genes de resistncia para a tetraciclina, o que permite que a resistncia se alastre pelas espcies com as quais a bactria E. faecalis entre em contacto. Outro exemplo de transposes deste tipo o Tn5253 de Streptococcus pneumoniae. O ltimo tipo de elementos que conseguem contribuir de alguma forma para a variabilidade gentica so os integres. Os integres so tambm elementos mveis de DNA que contm um gene que codifica para uma integrase, e uma sequncia att (de attachment) (Fig. 13.13). Os integres conseguem ligar cassettes de genes (elementos genticos que podem existir como DNA no replicativo circular, mas que normalmente so lineares, fazendo parte de transposes, plasmdeos ou cromossomas bacterianos) que tenham tambm uma sequncia att. A integrase e dado de consegue que as Fig. 13.13 O integro tem um gene que codifica para uma integrase (int), e um stio att, que permite a incorporao de cassetes de genes (x e y), catalizada pela integrase. integrar as cassetes de genes no integro, cassettes genes

normalmente transportam um ou dois genes, elas podem contribuir para o

desenvolvimento de resistncias, caso os genes transportados sejam dos que conferem resistncias (obviamente). Como foi possvel ver atravs destas aulas, o material gentico bacteriano no esttico, muito pelo contrrio: extrememente dinmico, e pode at variar muito entre estirpes da mesma espcie, graas a entidades como plasmdeos, por exemplo. Tais factos so demonstrados atravs do microorganismo mais famoso deles todos, a Escherichia coli, cujo genoma pode variar de 1 000 000 de pares de bases (1 Mb), at 4,5 ou 5,5 Mb, nmeros estes que so altamente discrepantes, e que portanto corroboram as afirmaes feitas logo no incio deste pargrafo.

Bibliografia usada para a aula 13: Slides das tericas e apontamentos foi o que serviu de base para a aula Prescott, Harley, and Kleins Microbiology, 7th edition no tem muito sobre plasmdeos, no contexto da aula, mas tem sobre transposes http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi? highlight=transposition,conjugative&rid=mmed.section.468&WebEnv=0vddYG2JM9k m6rVgFPvW0mmUgGChGr4V_R3PHXAbfxdg2YOVYeHfzamliHOzwXlQqBfAdaQo uRa7YB%40264316FD8206E140_0016SID&WebEnvRq=1#477 transposio conjugativa