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UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA I

Recopilado por: Cristina Luca Mora Arango Elkin Galeano Jaramillo Edison Osorio Durango

Medelln, Marzo de 2013

PROGRAMA DEL CURSO DE LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA I 2013

Objetivo general: reconocer y evaluar los parmetros de calidad aplicados a las materias primas de origen natural con inters farmacutico.

Temas del curso: Unidad 1. INTRODUCCIN. Presentacin del curso, normas de seguridad en el laboratorio (3 horas).

Unidad 2. RECONOCIMIENTO DE LA FLORA MEDICINAL. Reconocimiento de las diferentes especies de plantas medicinales que se encuentran en el entorno del Campus Universitario o en el Huerto de plantas medicinales del Jardn Botnico (3 horas).

Unidad 3. MANEJO DE LA INFORMACIN BIBLIOGRFICA EN FARMACOGNOSIA. Bsqueda bibliogrfica en bases de datos especializadas. Normas para reportar adecuadamente las referencias bibliogrficas (3 horas).

Unidad 4. RECONOCIMIENTO DE LA MORFOLOGA VEGETAL. Reconocimiento de la morfologa vegetal y tejidos internos en placas de coleccin previamente preparadas. Reconocimiento morfolgico externo de plantas

medicinales aprobadas en Colombia (6 horas). Unidad 5. RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS PRIMARIOS DE INTERS EN


FARMACOGNOSIA.

Reconocimiento de compuestos pertenecientes al metabolismo primario (grnulos de almidn, aleurona y aceites fijos) mediante pruebas qumicas de coloracin y anlisis microscpico de las estructuras, de acuerdo con la informacin reportada en las Farmacopeas oficiales (3 horas).

Unidad 6. IDENTIFICACIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS. Reconocimiento mediante pruebas qumicas de compuestos fenlicos, terpnicos y nitrogenados en muestras vegetales conocidas (6 horas). Unidad 7. ANLISIS MICROSCPICO DE MATERIAL VEGETAL. Reconocimiento de elementos de valor diagnstico en el material vegetal (cristales de oxalato de calcio, grnulos de polen, pelos epidrmicos, vasos lignificados, estomas), de acuerdo con la informacin reportada en las Farmacopeas oficiales (3 horas).

Unidad 8. RECONOCIMIENTO DE ADULTERACIONES Y/O FALSIFICACIONES EN EL


MATERIAL VEGETAL.

Aplicacin

de

ensayos

fsicos

(organolpticos-macroscpicos),

anlisis

microscpico (identificacin de elementos de valor diagnstico) y pruebas qumicas de coloracin en la identificacin de adulteraciones y/o falsificaciones en el material vegetal (3 horas). Unidad 9. PRCTICA ESPECIAL. Seleccin de una planta medicinal, consulta bibliogrfica, presentacin previa y ejecucin del esquema de trabajo experimental para la aplicacin de los procedimientos experimentales que permitan el reconocimiento de la morfologa de plantas medicinales, anlisis microscpico e identificacin de metabolitos primarios y secundarios (18 horas).

PRESENTACIN

El Manual de Prcticas de Laboratorio de Farmacognosia I incluye la revisin y actualizacin de las prcticas experimentales contenidas en el Manual de Laboratorio de Farmacognosia preparado por las profesoras Luz Mariela Sorza y Gloria Amparo Valencia (2000) y en el Manual de Prcticas de Laboratorio de Farmacognosia y Fitoqumica recopilado y revisado por los profesores Alejandro Martnez, Gloria Amparo Valencia, Nora Jimnez, Monica Mesa y Elkin Galeano. En la presente actualizacin se incluye el desarrollo de nuevas prcticas experimentales que hacen parte del programa acadmico de Laboratorio de Farmacognosia I y estn dirigidas hacia la identificacin de los diferentes factores involucrados en la produccin de drogas y aplicacin de pruebas especficas para el control de calidad de materia prima de origen natural.

CONTENIDO Pg. Programa de laboratorio de Faramacognosia I .. Prctica No 2. Prctica No 3. Prctica No 4. Prctica No 5. Reconocimiento de la flora medicinal ..
Manejo de la informacin bibliogrfica en farmacognosia ................................ 2 6 7

Reconocimiento de la morfologa vegetal 8


Reconocimiento de metabolitos primarios de inters en farmacognosia ...................................................................... 16

Prctica No 6. Prctica No 7. Prctica No 8.

Reconocimiento de metabolitos secundarios.

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Anlisis microscpico de material vegetal ... 28


Reconocimiento de adulteraciones y/o falsificaciones en el material vegetal 40

Prctica No 2

RECONOCIMIENTO DE LA FLORA MEDICINAL

OBJETIVO Reconocimiento de los ejemplares vegetales cultivados en el huerto de plantas medicinales del Jardn Botnico y/o en la flora universitaria. METODOLOGA Para el desarrollo de esta prctica el estudiante en visita guiada a las instalaciones del huerto de plantas medicinales del Jardn Botnico recibir la informacin y capacitacin brindada por parte del profesor, relacionada con las caractersticas botnicas y la actividad teraputica de las plantas medicinales. Una vez recibida la capacitacin el estudiante proceder a la presentacin del respectivo informe que debe contener una tabla en la que se incluyan las plantas observadas con el nombre cientfico, nombre comn, uso teraputico, droga aprobada y una breve descripcin botnica.

CONSULTA Consultar sobre las 10 especies de plantas medicinales de mayor comercializacin en Colombia, sus condiciones de cultivo y el uso teraputico aprobado por el INVIMA.

BIBLIOGRAFA DE CONSULTA

FONNEGRA G. Ramiro, JIMNEZ R. Silvia Luz. Plantas Medicinales Aprobadas en Colombia. Editorial Universidad de Antioquia. Segunda edicin. 2006.

Ministerio de Proteccin Social. Vademecum Colombiano de Plantas Medicinales . Colombia. MPS. 2008.

Prctica No 3

MANEJO DE LA INFORMACIN BIBLIOGRFICA EN FARMACOGNOSIA

OBJETIVOS
Capacitar al estudiante el manejo de las bases de datos documentales y la informacin consignada en la Biblioteca Central. Explicar de manera prctica los modelos de bsqueda de informacin aplicada a los temas de farmacognosia y plantas medicinales. Aprender a reportar adecuadamente las referencias bibliogrficas.

METODOLOGA
Para el desarrollo de esta prctica el estudiante en visita guiada a las instalaciones de la biblioteca central recibir la informacin y capacitacin sobre manejo de bases de datos documentales por parte de los profesores encargados.

Una vez recibida la capacitacin el estudiante debe hacer entrega de un informe con el siguiente contenido:

1. Consultar la monografa de una planta medicinal asignada por el profesor, teniendo en cuenta los siguientes aspectos: nombre cientfico, descripcin botnica, descripcin microscpica, uso teraputico aprobado, droga aprobada, reacciones adversas, advertencias y contraindicaciones. Esta informacin se encuentra en las farmacopeas oficiales y textos de referencia en farmacognosia.

2. Aplicar los conocimientos sobre la forma adecuada de reportar libros, artculos de revistas y documentos electrnicos en cada uno de los informes de laboratorio.

Prctica No 4

RECONOCIMIENTO DE LA MORFOLOGA VEGETAL

OBJETIVOS Identificar los tejidos internos de las plantas monocotiledneas y dicotiledneas, realizando observacin microscpica sobre cortes

histolgicos previamente preparados de races, tallos y hojas. Aplicar los criterios para clasificar las plantas en monocotiledneas y dicotiledneas a partir del anlisis de las caractersticas de morfologa externa de las races, tallos, hojas y flores. MARCO TERICO La morfologa vegetal es la parte de la botnica que estudia las formas y estructuras de las diferentes partes del cuerpo de la planta teniendo en cuenta aspectos histolgicos y fisiolgicos en el proceso de modificacin y transformacin de las plantas.

Para estudiar la estructura interna de un rgano, generalmente se realizan cortes transversales y se utilizan colorantes para diferenciar los tejidos.

Raz Es el rgano generalmente subterrneo en las plantas, en general las funciones del sistema radical son: absorcin y conduccin de sustancias, sostn y fijacin de la planta, almacenamiento de sustancias, reproduccin vegetativa en algunas especies.

Raz de plantas dicotiledneas: En el corte transversal de la raz de una planta dicotilednea a nivel de la zona pilfera, se pueden identificar los siguientes tejidos: 1. Epidermis: capa de una clula de espesor en la parte externa de la raz, no posee cutcula.

2. Crtex: grupo de tejidos que ocupa el mayor volumen de la raz, el cual est comformado por: exodermis, parnquima cortical y endodermis.

2.1. Exodermis: clulas parenquimticas subepidrmicas que se asemejan a la endodermis.

2.2. Parnquima cortical: clulas de pared celular delgada, especializadas en el almacenamiento de sustancias.

2.3. Endodermis: capa de clulas prismticas que rodean el cilindro central, se pueden identificar las clulas que hacen parte de las bandas de Caspary y las clulas de paso. 3. Estela: corresponde al cilindro central del cuerpo primario de la raz y est conformada por el periciclo, los tejidos vasculares primarios y el cambium vascular

3.1. Periciclo: tejido parenquimtico de una o varias clulas de espesor ubicado inmediatamente despus de la endodermis hacia el centro de la raz, en el proceso de diferenciacin, a partir de estas clulas se originan las races laterales de la planta.

3.2. Tejidos vasculares primarios: constituidos por clulas del xilema y del floema.

3.3. Cambium vascular: tejido meristemtico de varias clulas de espesor con paredes delgadas que bordean el xilema y lo separan del floema.

En la figura 1, se presenta un corte transversal de una raz dicotilednea a nivel de la zona pilfera, deben identificar los diferentes tejidos de acuerdo con la informacin anterior.

Figura 1. Fotografa del corte transversal a nivel de la zona pilfera de la raz de una planta dicotilednea en la que se observa el tejido parenquimtico y los diferentes tejidos que conforman el cilindro central.

Raz de plantas monocotiledneas: En el corte transversal de la raz de una planta monocotilednea a nivel de la zona pilfera, se pueden identificar los mismos tejidos presentes en las dicotiledneas a excepcin del cambium vascular. El xilema en las races de las plantas monocotiledneas posee muchos brazos y en el cilindro central se puede observar una porcin de tejido parenquimtico que conforma la mdula.

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A continuacin en la figura 2, se observa el corte transversal de una raz monocotilednea a nivel de la zona pilfera, con el fin de que se identifiquen los tejidos correspondientes.

Figura 2. Fotografa del corte transversal a nivel de la zona pilfera de la raz de una planta monocotilednea. Se observan las diferencias en cuanto a la disposicin del xilema y floema al interior del cilindro central.

Tallo El tallo es el rgano de la planta generalmente areo que desempea las siguientes funciones: produce y sostiene ramas y flores, conduce sustancias a travs del xilema y el floema. Tallo de plantas dicotiledneas: En el corte transversal del tallo de una planta dicotilednea se pueden identificar los siguientes tejidos, desde la parte externa hasta la ms interna: 1. Epidermis: primera capa de una sola clula de espesor cubierta por una cutcula impermeable de cutina.

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2. Crtex: est conformado por los tejidos comprendidos entre la epidermis y la parte ms externa del haz vascular como colnquima, parnquima cortical, clornquima, esclernquima. 3. Estela: es la parte central del tallo, conformada por los tejidos vasculares, el cambium vascular y la mdula.

3.1. Tejidos vasculares: estructuras ovaladas conocidas como haces vasculares conformadas por esclernquima, floema (elementos del tubo criboso y clulas compaeras), cambium vascular y xilema (elementos del vaso, traqueidas y fibras del xilema).

3.2. Mdula: regin central constituida por tejido parenquimtico.

En la figura 3 se presenta el corte transversal del tallo de una planta dicotilednea, en el cual se deben identificar los principales tejidos.

Figura 3. Fotografa del corte transversal del tallo de una planta dicotilednea en la que se identifica de manera representativa el tejido colnquima, los haces vasculares y la mdula.

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En el corte transversal del tallo de una planta monocotilednea, en general se observan los mismos tejidos que en el tallo de una planta dicotilednea, con la diferencia de que en estos tallos el tejido esclerenquimtico se presenta internamente a la epidermis y los haces vasculares se encuentran dispersos en el tejido parenquimtico y estn rodeados por una vaina de esclernquima que le proporciona mayor resistencia a la planta. A continuacin se presenta la imagen para identificar los principales tejidos.

Figura 4. Fotografa del corte transversal del tallo de una planta monocotilednea en la que se observa el tejido esclernquima y la distribucin de los haces vasculares.

Hoja La hoja es el rgano vegetativo de la planta, generalmente en forma laminar que tiene como funcin principal el proceso de la fotosntesis, respiracin, transpiracin y gutacin.

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En el corte transversal de una hoja se observan los siguientes tejidos:

1. Epidermis: capa de clulas que protege la hoja ubicadas en la superficie del haz y del envs, recubierta por una cutcula impermeable. En la epidermis se pueden identificar clulas epidrmicas comunes, clulas de guarda (oclusivas) y clulas adyacentes (subsidiarias).

2. Mesfilo: es el tejido ms abundante de la hoja, en el cual se realiza la fotosntesis y est conformado por parnquima en empalizada y parnquima esponjoso.

2. 1. Parnquima en empalizada: una o dos capas de clulas cilndricas ubicadas en la parte superior de la hoja, presentan gran cantidad de cloroplastos.

2.2. Parnquima esponjoso: formado por clulas esfricas y clulas de forma irregular que se distribuyen dejando espacios intercelulares denominados meatos o cmaras subestomticas.

3. Nervaduras: son la continuacin del xilema y el floema del tallo. En un corte transversal de la hoja, en cada nervadura se observa el haz vascular con el xilema hacia el haz y el floema hacia el envs.

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Figura 5. Fotografa del corte transversal de la hoja. Se observa el tejido epidrmico, las clulas del mesfilo y los tejidos vasculares de las nervaduras.

METODOLOGA Para el desarrollo de la prctica se divide el estudio en:


1. Aspectos correspondientes al anlisis de la morfologa interna (histologa).

El profesor pondr a disposicin de los estudiantes una serie de placas previamente preparadas en las cuales deben identificar utilizando el microscopio las estructuras y tejidos internos presentes en las races, tallos y hojas de plantas monocotiledneas y dicotiledneas. El estudiante debe identificar y dibujar las estructuras claramente diferenciadas en cada uno de los cortes observados e incluir el anlisis de resultados en el informe.
2. Aspectos correspondientes al anlisis de la morfologa externa

(cuerpo de la planta).

De acuerdo con las caractersticas morfolgicas externas observadas en las plantas asignadas, realizar la clasificacin y consignar la informacin

correspondiente en formato de tabla, incluyendo los siguientes aspectos para cada una de ellas: nombre comn, nombre cientfico, anlisis de las hojas: complejidad, filotaxia, caractersticas del peciolo y de las nervaduras; clasificacin del tallo: herbceo, leoso; clasificacin de la raz: fibrosa, pivotante; nmero de verticilos florales y clasificacin de acuerdo con las caractersticas externas en monocotiledneas o dicotiledneas. CONSULTA Consultar la clasificacin de las races, tallos y hojas de acuerdo con las caractersticas de su morfologa externa. BIBLIOGRAFA URIBE lvarez Frank. Botnica General. Editorial Universidad de Antioquia. Segunda edicin. 1991.
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Prctica No 5

RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS PRIMARIOS DE INTERS EN FARMACOGNOSIA

OBJETIVOS Aprender a identificar microscpicamente sustancias caractersticas de plantas, formadas por molculas pertenecientes al metabolismo primario. Identificar la presencia de almidn en diferentes fuentes vegetales mediante reacciones qumicas y pruebas microscpicas. Identificar microscpicamente la presencia de grnulos de aleuronas en diferentes fuentes vegetales. Identificar microscpicamente la presencia de grnulos de aceites fijos en diferentes fuentes vegetales.

MARCO TERICO El metabolismo primario es el grupo de procesos metablicos esenciales vitales para los organismos vivos, estos procesos estn asociados a 4 grandes grupos de reacciones anablicas/catablicas: 1. Metabolismo de los carbohidratos: Los carbohidratos, tambin llamados hidratos de carbono glcidos, son un grupo de molculas formadas principalmente por carbono, oxgeno e hidrgeno. Algunos micro-organismos tienen la capacidad de bio-sintetizar carbohidratos conteniendo azufre, fosforo y nitrgenos en sus estructuras.

Clasificacin de los carbohidratos: consultar y complementar el siguiente diagrama.

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El almidn: Est formado por unidades de glucosa y se encuentra en los cereales como maz, arroz y trigo, y en tubrculos como papas, ame y yuca. Frecuentemente se encuentra formado en un 25% por amilosa y un 75% por amilopectina. A continuacin se presentan las estructuras qumicas de dos polisacridos de importancia en los vegetales: celulosa y almidn.
CH2OH H OH H H H OH CH2OH H O H H OH HO H OH H O H OH H H OH H O H OH H CH2OH CH2OH O H H H OH H O H OH H O O H OH CH2OH O H H H OH H H H H OH H H H CH2OH CH2OH O R O O OH H H O R

CH2OH H O H OH HO O H

OH

OH H

Celulosa

Almidn

Figura 6. Estructuras qumicas de la celulosa y el almidn.

2. Metabolismo de los lpidos: Los lpidos, son un grupo de cidos grasos no voltiles, qumicamente se encuentran generalmente como cadenas alifticas saturadas o insaturadas, en
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general lineales; solubles en solventes orgnicos apolares (como cloroformo, hexano), y son casi insolubles en agua. Los mamferos los acumulamos como grasas, los peces como ceras y en las plantas en forma de aceites. Los fosfolpidos y esteroles constituyen alrededor de la mitad de la masa de las membranas biolgicas.

Consultar y complementar el siguiente diagrama sobre la clasificacin de los lpidos:

A continuacin se presentan las estructuras qumicas de compuestos lipdicos de mayor importancia a nivel biolgico.
O

cido graso libre

OH

HO

Colesterol Triglecerido
O O O O O

Fosfolpido

O O O O

O P O HO N
+

Figura 7. Estructuras qumicas de los principales lpidos de importancia biolgica.


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3. Metabolismo de las protenas: Las protenas son biomleculas formadas bsicamente por carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno. Pueden adems contener azufre y en algunos tipos de protenas: fsforo, hierro, magnesio y cobre entre otros elementos. Pueden considerarse polmeros de unas de aminocidos unidos mediante enlaces peptdicos.

Consultar y complementar el siguiente diagrama sobre la clasificacin de las protenas:

A continuacin se encuentran las estructuras qumicas de tres aminocidos importantes en el metabolismo vegetal (Ala, Arg, His) y un modelo de la estructura secundaria de una protena.

O H C
3

NH OH HN

O N OH NH
2

O OH NH
2

NH

NH

N H

Alanina (Ala)

Arginina (Arg)

Histidina (His)

Figura 8. Estructuras qumicas de algunos aminocidos y estructura secundaria de una protena.

Aleuronas: las aleuronas, del griego aleuron que significa harina, son un grupo de grnulos proteicos presentes principalmente en las semillas de las plantas,
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localizado en la parte externa del endospermo y que tienen la funcin de ser material de reserva para el crecimiento del embrin, se encuentran principalmente en los cereales y algunas races. METODOLOGA

Material vegetal: Maz: _____________________ (nombre cientfico) Yuca: _____________________ Arroz: _____________________ Papa: _____________________

ANLISIS QUMICO: Cortar o rallar 15 g de material vegetal sin cscara y extraer con 10 ml de agua (sin calentar). Filtrar y realizar las siguientes reacciones por separado en tubos de ensayo: 2 ml almidn + lugol

_____________________________________________

2 ml almidn + 6 ml H20: Medir pH ____________________________________

ANLISIS MICROSCPICO: Tomar 1 gota de la solucin filtrada para los anlisis qumicos y observar al microscopio cada una de las muestras de almidn preparada (maz, yuca, papa y arroz). Almidn de papa: Se observa como grnulos pequeos circulares con hilum cntrico y grnulos grandes de forma elpticas con hilum excntrico. El tamao promedio de los grnulos es de 15 m con una desviacin estndar de 10 m;

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Almidn de maz: Se observa como grnulos irregulares y poligonales con hilum concntrico de forma mixta: se puede observar como un punto en forma de asterisco, una lnea o una cruz. El tamao promedio de los grnulos es de 12 m con una desviacin estndar de 6 m.

Almidn de yuca: Se observa como grnulos elpticos o redondeados, con hilum concntrico de forma puntual. El tamao promedio de los grnulos es de 10 m con una desviacin estndar de 5 m. Almidn de arroz: Se observa como grnulos polidricos y poligonales pequeos, en algunos casos formando agregados entre 2-150 unidades, con hilum concntrico de forma puntual difcil de observa al microscpio convencional. El tamao promedio de los grnulos es de 5 m con una desviacin estndar de 4 m. Muestras de plantas medicinales que contienen almidn: canela, ruibarbo, valeriana, ginseng, jengibre, regaliz. RESULTADOS

Almidn Anlisis Color Textura Olor Sabor Hilum papa maz arroz yuca Muestra

1. Deteccin de celulosa: Colocar 2 a 3 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos. Verter 1 2 gotas de solucin de cloruro de zinc yodado (Disolver 20 g de cloruro de zinc y 6.5 g de yoduro de potasio en 10.5 ml de agua), dejar reposar 2 minutos y agregar 1 gota de yodo (0.1 mol/L), dejar reposar 1 minuto,
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remover el exceso de reactivo con una tira de papel filtro y agregar 1 gota de H2SO4 60%. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio, las paredes de celulosa se observan en colores desde el azul al violeta. Muestras vegetales donde se pueden evidenciar las paredes de celulosa : eucalipto, canela, lino, sen, entre otras.

A continuacin se presentan las fotografas de las placas microscpicas de los montajes correspondientes para la observacin de celulosa en semillas de lino molidas.

Figura 9. Fotografa de las paredes de celulosa presentes en las semillas de lino.

2. Deteccin de granos de aleurona: Colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos. Verter 2 3 gotas de solucin de yodo/etanol. Los grnulos de aleurona se observan de color amarillo-caf o caf con un tamao promedio entre 10-20 m. Agregar luego unas 2 3 gotas de trinitrofenol en etanol y los granlos se tornarn amarillos.

Muestras de plantas medicinales que presentan grnulos de aleurona: lino, nuez moscada, ans estrellado.

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A continuacin se presentan las fotografas de las placas microscpicas de los montajes correspondientes para la observacin de celulosa de grnulos de aleurona presentes en semillas de lino molidas:

Figura 10. Fotografa de los grnulos de aleurona presentes en las semillas de lino.

Deteccin de lpidos y aceites esenciales: mezclar bien la muestra en polvo, colocar 2 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos. Verter 2 3 gotas de solucin de Sudan III y dejar actuar durante 2 3 minutos. Escurrir el lquido y lavar bien con alcohol 70 %. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio con los objetivos de 10x y 40x. Los lpidos aparecen como gotas de color rojo. Muestras vegetales para la deteccin de lpidos y aceites esenciales: lino, canela, eucalipto, jengibre.

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A continuacin se presentan las fotografas de las placas microscpicas de los montajes correspondientes para la observacin de aceites fijos presentes en semillas de lino molidas:

Figura 11. Fotografa de las gotas de aceite fijo presentes en las semillas de lino.

Consulta 1. Funciones biolgicas en la clula vegetal de los carbohidratos, lpidos y protenas. 2. Aplicaciones en Farmacognosia de los carbohidratos, lpidos y protenas. 3. Esquema de las reacciones realizadas en el laboratorio.

BIBLIOGRAFA Evans, W.C. Trease & Evans Pharmacognosy. Ed. Saunders. 16o Edicin. China. 2009.

HEINRICH M., BARNES J. Gibbons S., WILLIAMSON E. Fundamentals of Pharmacognosy and Phytotherapy. Ed. Churchill Livingstone. Spain. 2004.

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Prctica No 6

ANLISIS MICROSCPICO DE MATERIAL VEGETAL

OBJETIVO Reconocer elementos de valor diagnstico en el material vegetal: cristales de oxalato de calcio, grnulos de polen, pelos epidrmicos, vasos lignificados, estomas, de acuerdo con las monografas de plantas medicinales textos de referencia y farmacopeas oficiales.

MARCO TERICO El planteamiento sistemtico de la identificacin de drogas en polvo puede realizarse por varios caminos, sin embargo cuando se trata de drogas organizadas, todos los mtodos dependen del reconocimiento microscpico de los tipos celulares caractersticos: fibras tabicadas, pelos epidrmicos, tricomas; as como de los contenidos de las clulas: almidn, cristales de oxalato de calcio, grnulos de aleurona. Estas estructuras pueden considerarse como elementos de valor diagnstico porque resultan de gran valor para la identificacin del material vegetal como materia prima.

Existen reactivos especficos que permiten destacar cada una de las estructuras, para la observacin de los grnulos de almidn se realiza el montaje en agua y en solucin de lugol, los cristales de oxalato de calcio se observan con mayor facilidad en las placas de hidrato de cloral, mientras que el montaje con fluoroglucina y cido clorhdrico facilita la observacin de los tejidos lignificados.

Cuando se trata de una mezcla de drogas es imprescindible una mayor experiencia y prctica. Cuando se ha realizado un tanteo de la identificacin deben llevarse a cabo posteriores observaciones y ensayos qumicos confirmativos, la mayora de las drogas de farmacopea, poseen en la actualidad ensayos para su reconocimiento mediante cromatografa de capa fina (CCF).
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METODOLOGA Bajo la orientacin del profesor el estudiante proceder a realizar las siguientes actividades:

1. Ensayos preliminares para la identificacin de las caractersticas organolpticas del material vegetal para identificar el color, el olor y el sabor.

Color: es importante analizar el color del material vegetal, cuando se trata de races el color va desde blanco amarillento hasta pardo, en el caso de las cortezas, en general el color es castao y en el caso de hojas y flores, el color depende de la especie.

Olor: el olor se puede expresar como aromtico, ctrico, mentolado y cuando no es posible establecer comparacion, se describe como caracterstico.

Sabor: los sabores se pueden describir como: autnticos (amargo, dulce, cido, salado) o inspidos.

2. Preparacin de placas o montajes respectivos de las plantas medicinales secas y en polvo sobre porta objetos, utilizando segn el caso agua, hidrato de cloral y floroglucina. Recuerde colocar el cubreobjetos antes de la observacin.

Observacion de almidon: montar placa en agua, observar los diferentes grnulos y ensayar si se trata de almidn mediante la adicin de agua de yodo (Lugol), colocando 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos, verter 2 3 gotas de Solucin de Lugol diluida (1:5) en agua. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio a 10x y 40x. Los granos de almidn se colorean de azulviolceo intenso.

Observacin de tricomas epidermicos y oxalato de calcio : una solucin de hidrato de cloral (80 g de hidrato de cloral en 20 ml de agua) se utiliza como agente
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clarificante. Colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos y agregar de 2 -8 gotas que impregnen todo el material vegetal y calentar suavemente. El hidrato de clorar disuelve contenido celular y sustancias

extracelular (granos de almidn, granos de aleurona) y permite una mejor visualizacin de tejidos celulares como: pared celular, fibras, vasos, cristales de oxalato de calcio, tricomas, estomas y polen.

Observacin de lignina: colocar 2 a 3 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos y humedecer este material vegetal con una solucin alcohlica de floroglucina (1% en etanol del 90%) y dejarlo secar a temperatura ambiente. Agregar 1 gota de HCl concentrado, poner el cubreobjetos y observar los vasos lignificados en colores desde el rosado hasta el color rojo carmn. Observar la presencia de fibras, parnquima, esclereidas, pelos.

La informacin de los montajes anteriores puede complementarse mediante la aplicacin de otros ensayos que permiten la observacin de otros tejidos y estructuras como paredes de celulosa, granulos de aleurona y oleorresinas.

3. Observar las estructuras presentes en los ejemplares seleccionados de las plantas medicinales, identificar los elementos de valor diagnstico en cada una de las plantas y realizar el dibujo correspondiente.

CONSULTA El estudiante debe consultar las estructuras internas a nivel microscpico de las siguientes drogas en polvo: canela, ruibarbo, jengibre, regaliz, sen, digital, calndula y sauco.

BIBLIOGRAFA Gattuso M.A.,Gattuso S.J. Manual de procedimientos para el anlisis de drogas en polvo. Cooperacin Iberoamericana Ciencia y Tecnologa para el desarrollo. Universidad Nacional del Rosario. Argentina. 1999.
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Prctica No 7

RECONOCIMIENTO DE ADULTERACIONES Y/O FALSIFICACIONES EN EL MATERIAL VEGETAL

OBJETIVO Aplicar los ensayos fsicos (organolpticos-macroscpicos), anlisis

microscpico (identificacin de elementos de valor diagnstico) y pruebas qumicas de coloracin en la identificacin de adulteraciones y/o falsificaciones en el material vegetal. Identificar una muestra problema de material vegetal en polvo mediante sus caractersticas organolpticas, macro y microscpicas y pruebas qumicas. MARCO TERICO El material vegetal es clasificado de acuerdo a sus caractersticas sensoriales, macroscpicas y microscpicas. Un examen para determinar estas caractersticas es en primer paso establecer la identidad y el grado de pureza del material, para despus llevarse a cabo posteriores anlisis. Siempre que sea posible, patrones del material o muestras de calidad farmacopica debe de estar disponible como referencia.

Una inspeccin visual provee una simple y rpida medida para identificar el material, pureza y, posiblemente, calidad. Si una muestra es encontrada ser significativamente diferente, en trminos de color, consistencia, olor o textura, de las especificaciones, se considera una no conformidad de los requerimientos. Sin embargo, los juicios deben ser cautelosos con relacin al olor y la textura, debido a las diferencias que existen entre personas o por la misma persona a diferentes tiempos. Siendo entonces esta una habilidad sensorial que se afina con la experiencia.

La identificacin macroscpica de una planta medicinal est basada en la forma,

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tamao, color, caractersticas superficiales y textura. Sin embargo, mientras esas cualidades son juzgadas subjetivamente y sustituciones o adulteraciones pueden ser muy parecidas al material genuino, a menudo es necesario respaldarse en anlisis microscpicos y/o fisicoqumicos.

La inspeccin microscpica del material vegetal es indispensable por la identificacin del material en polvo, el material debe de ser tratado con reactivos qumicos. Los ensayos microscpicos se deben asociar con otros mtodos analticos para garantizar una completa identificacin, en los casos en los que la comparacin con material de referencia revela algunas caractersticas no descritas en los requerimientos, estos pueden ser atribuidos a material extrao, antes que un a un constituyente normal. METODOLOGA 1. Ensayos preliminares para la identificacin de las caractersticas organolpticas del material vegetal para identificar el color, el olor y el sabor.

2. Deteccin histoqumica de tejido vegetal y su contenido. Realizar las placas para la deteccin de celulosa, aleuronas, lpidos y aceites esenciales, las cuales se describieron en la prctica No 4 y las pruebas para la deteccin de almidn, oxalato de calcio y lignina descritas en la prctica No 6, complementar esta informacin si es necesario con el montaje de las siguientes placas:

Deteccin de concreciones de carbonato de calcio (cistolitos) y de cristales de oxalato de calcio: colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos. Verter 2 3 gotas de cido clorhdrico 2M, con la precaucin de que el reactivo est en contacto con todos los componentes del polvo. Colocar el cubreobjetos y observar inmediatamente al microscopio a 10x. La presencia de carbonato de calcio est indicada por la aparicin de burbujas. Los cristales de oxalato de calcio, que en general tardan ms tiempo en disolverse, no desprenden burbujas.
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Deteccin de lpidos y aceites esenciales: colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos. Verter 2 3 gotas de solucin de Sudan III (0.5 g Sudan III calentados a reflujo en etanol o isopropil alcohol) y dejar actuar durante 2 3 minutos. Escurrir el lquido y lavar bien con alcohol 70 %. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio a 10x y 40x. Los lpidos aparecen como gotas de color rojo.

Deteccin de taninos: colocar 2 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos y verter 2 3 gotas de solucin de cloruro frrico al 5 %. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio a 10x y 40x. La presencia de taninos se evidencia por la aparicin de masas oscuras de color pardo, azul o negro.

Deteccin de celulosa: Colocar 2 a 3 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos. Verter 1 2 gotas de solucin de cloruro de zinc yodado (disolver 20 g de cloruro de zinc y 6.5 g de yoduro de potasio en 10.5 mL de agua), dejar reposar 2 minutos y agregar 1 gota de yodo (0.1 mol/l), dejar reposar 1 minutos, remover el exceso de reactivo con una tira de papel filtro y agregar 1 gota de H2SO4 60%. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio, las paredes de celulosa se observan en colores desde el azul al violeta.

Procedimiento: combinar la solucin A, solucin B y la Solucin C y agregar 2.5 ml de HCl con agitacin (No filtrar). Colocar 2 a 10 mg de la droga en polvo sobre un portaobjetos y adicionar 2 3 gotas del reactivo y calentar suavemente. Cubrir con el cubreobjetos y observar los elementos lignificados de amarillo, sber de marrn, lpidos de color rojo y almidn de color azul -violeta.

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3. Pruebas qumicas rpidas

Solubilidad en agua: tomar en un tubo de ensayo aproximadamente un gramo de muestra, adicionar agua en cantidad suficiente para cubrir la muestra; mezclar y dejar en reposo durante 15 minutos. Al cabo de este tiempo observar concluir. Los extractos acuosos y jugos concentrados se disuelven casi completamente, y drogas como la goma arbiga, tragacanto y semillas de lino, ponen de manifiesto su naturaleza gomosa o mucilaginosa.

Presencia de carbonato de calcio: tomar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de la muestra y adicionar unas gotas de cido sulfrico diluido, si hay presencia de carbonato de calcio como adulterante, tiene lugar una efervescencia seguida de disolucin.

Presencia de aceites fijos y/o aceites esenciales: para la prueba de aceites fijos se debe comprimir una pequea cantidad de muestra en un pequeo trozo de papel kraft, si aparece una mancha oleosa que persiste luego de someterla a calentamiento a una temperatura de 50C, la muestra contiene aceite fijo. Ejemplo: semillas de lino y man.

Los aceites esenciales se reconocen por su olor aromtico y a la temperatura de 50C desaparece la mancha oleosa, la deteccin del aroma tambin se puede apreciar al calentar la muestra en el bao mara.

Prueba para saponinas, taninos y antraquinonas : en un tubo de ensayo tomar aproximadamente 0,5 g de muestra, adicionar aproximadamente 15 ml de agua, agitar durante un minuto. Si aparece espuma abundante sospechar la presencia de drogas que contienen saponinas, hervir suavemente y anotar si aparece desprendimiento de aceite esencial (por su olor aromtico). Filtrar y dividir el filtrado en tres tubos de ensayo, dos para la prueba de taninos y uno para la

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prueba de antraquinonas (5 ml). Realizar las pruebas de identificacin correspondientes de acuerdo con el procedimiento descrito en la prctica No. 7.

BIBLIOGRAFA WHO. Quality control methods for medicinal plant material. Geneva: WHO. 1998. ISBN 92 4 154510 0.

TREASE G.E., EVANS W.C. Tratado de Farmacognosia. Editorial Bailliere Tindall. 12a Edicin. Mexico. 1989.

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Prctica No 8

IDENTIFICACIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS

OBJETIVO Realizar pruebas qumicas rpidas de coloracin y precipitacin para la identificacin de compuestos fenlicos, terpnicos y nitrogenados en muestras vegetales conocidas. MARCO TERICO Los compuestos denominados metabolitos secundarios son subproductos de rutas metablicas normales que ocurren en ciertas especies, siendo particulares dentro de un grupo taxonmico, estado de vida o tejido presentando una distribucin restringida dentro del Reino Vegetal dando origen a la quimiotaxonoma. Su ocurrencia depende de condiciones externas tales como ataques de patgenos, depredadores, cambios trmicos o lumnicos, deficiencias nutricionales o presencia de otros organismos intra o interespecficos.

El

metabolismo

secundario

es

una

caracterstica

fundamental

de

la

especializacin, es decir que el compuesto resultante, puede no ser importante para la clula pero s para el organismo como un todo. Los metabolitos

secundarios pueden ser bioactivos, pero no jugar un papel esencial en los procesos fisiolgicos del organismo. Algunos metabolitos secundarios son residuos bioqumicos, es decir, productos de actividad enzimtica de sustratos no apropiados o productos de destoxificacin o de desecho que pueden ser de importancia para la supervivencia y la buena condicin de los organismos. Con pocas excepciones, los metabolitos secundarios pueden clasificados dentro de cinco grupos, de acuerdo con su base biosinttica: fenilpropanos, acetogeninas, terpenoides, esteroides y alcaloides.

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Reconocimiento de metabolitos: el reconocimiento de metabolitos secundarios se realiza por medio de pruebas fitoqumicas preliminares, las cuales son una prueba cualitativa de caracterizacin consistente en una reaccin qumica que produce alteracin rpida en la estructura molecular de un compuesto, por ejemplo, la modificacin de un grupo funcional, la apertura de un sistema anular, la formacin de un aducto o un complejo, lo cual genera como resultado una manifestacin sensible como el cambio de coloracin, la formacin de un precipitado o el desprendimiento de un gas, lo cual indica la presencia o ausencia de un metabolito secundario en particular.

1. Alcaloides: los alcaloides son sustancias bsicas que contienen nitrgeno en un anillo heterocclico, son derivados de aminocidos, presentan distribucin taxonmica limitada y se encuentran en plantas superiores como sales de un cido orgnico.

Figura 11. Estructura qumica de la nicotina

Atendiendo a su solubilidad, propiedad empleada para extraerlos y purificarlos, la base del alcaloide es soluble en solventes orgnicos y pueden formar sales solubles en solventes polares cuando se encuentra en cidos minerales diluidos. 2. Flavonoides: los flavonoides son compuestos polifenlicos con quince tomos de carbono, cuya estructura qumica consta de 2 anillos de benceno unidos por una cadena lineal de tres carbonos. El ncleo de los flavonoides se representa por el sistema C6 C3 C6.

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Figura 12. Estructura qumica de una catequina.

3. Cardiotnicos: las agliconas cardiotnicas qumicamente estan constituidas por el sistema esteroidal (ciclo pentano perhidrofenantreno) con los grupos metilos en las posiciones C18 y C-19, 7, un grupo hidroxilo en el carbono 3 y un anillo lactnico - insaturado de cuatro carbonos unido al carbono 17 del ncleo

esteroidal, como se observa en la estructura qumica de la digoxina que aparece a continuacin.

Figura 13. Estructura qumica de la digoxina.

Estos compuestos han presentado actividad estimulante sobre el msculo cardiaco, cuando estn en forma de glicsidos.

4. Saponinas: las saponinas son un grupo de glicsidos solubles en agua que tienen la propiedad de hemolizar la sangre y disminuir la tensin superficial del

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agua formando espuma abundante. Las saponinas por hidrlisis dan origen a las llamadas sapogeninas.

Figura 14. Estructura qumica de la diosgenina.

La sapogenina puede tener el sistema anular esteroidal o el de un triterpeno pentacclico. Los anillos E y F de la saponina estereoidal conforman el llamado sistema espirostanal. El enlace glicosdico siempre se forma con el oxigeno del carbono 3.

5. Cumarinas: las cumarinas son un grupo muy amplio de principios activos fenlicos y tienen en comn la estructura qumica de 1-benzopiran-2-ona. Se caracterizan porque presentan fluorescencia bajo la luz ultravioleta a 365 nm.

Figura 15. Ncleo qumico de las cumarinas.

Estructuralmente se clasifican en cumarinas simples, furanocumarinas y pironacumarinas.

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6. Taninos: los taninos son polmeros de polifenoles, sustancias con alto peso molecular, comprendido entre 500 a 3000 g/mol. Se consideran productos de excrecin de muchas plantas, involucrados como mecanismos de defensa de las mismas, contra organismos parsitos. Se clasifican en:

Taninos hidrosolubles o piroglicos: son steres fcilmente hidrolizables formados por una molcula de azcar (glucosa) unida a un nmero variable de molculas de cidos fenlicos (cido glico o su dmero, el cido elgico). Son comunes en plantas dicotiledneas.

Figura 16. Estructura qumica de los taninos hidrolizables.

Taninos no hidrosolubles condensados: tienen una estructura qumica similar a la de los flavonoides. Por hidrlisis generan azcar y cido elgico, algunos taninos condensados son conocidos como pro-antocianidinas porque por hidrlisis cida producen antocianidinas y leucoantocinidinas.

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Figura 17. Estructura qumica de los taninos no hidrolizables o proantocianidinas.

7. Esteroides: los esteroides son compuestos cuya estructura presenta el ncleo ciclopentano perhidrofenantreno, metilos en los carbonos 10 y 13 y un radical lineal en el carbono 17.

Figura 18. Estructura qumica del ergosterol.

Los esteroides son compuestos fundamentales en la estructura celular de animales, vegetales, hongos y bacterias. 8. Quinonas y antraquinonas: las quinonas son dicetonas cclicas insaturadas que por reduccin se convierten en polifenoles, siendo reversible esta reaccin. Las quinonas derivan su nombre del miembro ms simple de la serie: la pbenzoquinona obtenida en 1838 por Woskresensky, como producto de oxidacin

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del cido qunico. Las quinonas se pueden clasificar en benzoquinonas, naftoquinonas y antraquinonas (las ms numerosas).

Figura 19. Ncleo qumico de las antraquinonas.

9. Antocianinas: las antocianinas son pigmentos flavonoides que se comportan como indicadores cido base debido a la reaccin:

Figura 20. Reacciones qumicas de las antocianinas en diferente pH.

Estos pigmentos suelen presentarse en forma de glucsidos, lo que explica su solubilidad en agua y la fcil extraccin con solventes acuosos. Se encuentran en la savia de las plantas, y a menudo en forma de slidos amorfos o cristalinos en las hojas de tejido leoso y frutos. Su color esta algunas veces enmascarado por otros pigmentos vegetales como la clorofila.

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METODOLOGA Sobre el extracto de la planta seleccionada, el estudiante realizara pruebas qumicas de coloracin y/o precipitacin, para identificar la presencia del metabolito respectivo.

1. Reconocimiento de alcaloides Los alcaloides son bases nitrogenadas, las cuales pueden convertirse en sus respectivas sales mediante la adicin de un cido diluido y formar precipitados al reaccionar con los reactivos especficos para alcaloides. En esta prctica utilizaremos los reactivos de: Mayer y Dragendorff.

Obtencin del extracto: tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco macerar en un mortero y adicionar un volumen suficiente de cido clorhdrico al 5%, calentar al bao mara durante 10 minutos, enfriar y filtrar.

Prueba cualitativa: colocar en dos tubos de ensayo aproximadamente 0.5 ml del filtrado cido y agregar a uno de los tubos 2 gotas del reactivo de Dragendorff y al otro tubo 2 gotas del reactivo de Mayer. Si se observa turbidez o precipitado en ambos tubos se considera como prueba presuntiva de la presencia de alcaloides.

2. Reconocimiento de esteroides y/o triterpenoides Obtencin del extracto: en un beaker limpio y seco, tomar una pequea cantidad de material vegetal seco y molido, adicionar diclorometano en cantidad suficiente hasta que cubra la muestra (realice esta prueba bajo campana extractora de gases) agitar con varilla de vidrio para realizar una mejor extraccin, posteriormente filtrar sobre sulfato de sodio anhidro.

Prueba cualitativa (Ensayo de Lieberman Burchard): en un tubo de ensayo limpio y seco tomar 1 ml del filtrado orgnico y agregar por la pared del tubo 1 ml de anhdrido actico y con precaucin 1-2 gotas de cido sulfrico concentrado. La

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aparicin de coloraciones: verdes, azules, rojas o violeta es prueba positiva para esteroides y/o triterpenoides en la muestra.

3. Reconocimiento de saponinas Obtencin del extracto: tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco y macerar en un mortero, adicionar suficiente cantidad de agua que cubra la muestra, filtrar a travs de gasa.

Prueba cualitativa: pasar 4 ml del filtrado a un tubo de ensayo y agitar vigorosamente durante un minuto, si se forma abundante espuma que permanece estable durante 5 minutos es prueba presuntiva de la presencia de saponinas en la muestra.

4. Reconocimiento de compuestos fenlicos y taninos Obtencin del extracto: tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco, macerar en un mortero hidratando la muestra para facilitar el rompimiento de los tejidos, pasar la muestra completamente macerada a un beaker y adicionar cantidad suficiente de agua para cubrir la muestra, calentar en bao mara de 10 minutos y filtrar en caliente.

Prueba cualitativa: tomar 1 ml del filtrado en un tubo de ensayo y adicionar 2 gotas de solucin de tricloruro frrico (FeCl3 al 1%). La aparicin de un color verde, azul o negro es prueba positiva para compuestos fenlicos.

En un segundo tubo de ensayo tomar 1 ml del filtrado y agregar unas gotas de la solucin de gelatina-sal, si se presenta turbidez o formacin de precipitado es prueba presuntiva de la presencia de taninos en la muestra.

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5. Reconocimiento de flavonoides, leucoantocianidinas y cardiotnicos: Obtencin del extracto: macerar en un mortero aproximadamente 10 g del material vegetal finamente picado, adicionar suficiente cantidad de etanol, calentar al bao mara durante 5 minutos, enfriar y filtrar.

Prueba cualitativa para flavonoides (Ensayo de Shinoda): tomar un 1 ml del filtrado etanlico en un tubo de ensayo, agregar varias limaduras de magnesio y por la pared del tubo dejar caer lentamente HCl concentrado (37%). La aparicin de colores: naranja, rojo, violeta rosado, indican es prueba presuntiva de la presencia de flavonoides en el material vegetal.

Prueba cualitativa para leucoantocianidinas: tomar 2 ml del filtrado en un tubo de ensayo y adicionar 1 ml de cido clorhdrico concentrado (37%). Calentar en bao mara durante 15 minutos. La aparicin de coloraciones rojas es prueba presuntiva de la presencia de leucoantocianidinas en la muestra. Prueba para la deteccin de cardiotnicos y lactonas , insaturadas: adicionar 1 ml de filtrado en un tubo de ensayo y agregar 0.5 ml de reactivo de Kedde (mezclar 1 ml de solucin A con 1 ml de solucin B para preparar este reactivo antes de usarlo). La aparicin de coloraciones violetas o prpuras es prueba presuntiva de la existencia de cardiotnicos en la muestra.

6. Reconocimiento de quinonas Obtencin del extracto: pesar 0,5 g de material vegetal en polvo en un beaker de 100 ml, adicionar 20 ml de etanol al 95% y calentar en bao mara durante 5 minutos hasta ebullicin, filtrar en caliente,

Hidrlisis: tomar 5 ml del filtrado y adicionar 3 ml de H 2SO4 al 10%, calentar en bao mara durante 15 minutos hasta ebullicin, enfriar la muestra.

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Extraccin con tolueno: adicionar 5 ml de tolueno al extracto previamente hidrolizado, agitar suavemente sin emulsionar, utilizando la cabina de extraccin.

Prueba cualitativa: tomar 2 ml de la fase orgnica en un segundo tubo de ensayo, adicionar 1 ml de la solucin previamente preparada de hidrxido de sodio al 5% en amonaco al 2%. La aparicin de un color rojo cereza en la capa acuosa indica presencia de quinonas en la muestra.

7. Reconocimiento de antocianinas Obtencin del extracto: en un erlenmeyer colocar 100 g de muestra fresca finamente desmenuzada, aadir 200 ml de agua, calentar a ebullicin durante 5 minutos y filtrar.

Prueba cualitativa: adicionar 2 ml del filtrado en un tubo de ensayo y aadir 1 ml de NaOH diluido. Observar la coloracin formada.

En otro tubo de ensayo adicionar 2 ml del filtrado y aadir 6 gotas de algn cido mineral diluido (HCl H2SO4 al 10%). Observar la coloracin formada. Las antocianinas se reconocen por producir diferentes color es a diferentes pH.

8. Reconocimiento de cumarinas En un tubo de ensayo grande adicionar 1 g de material vegetal fresco y macerado y agregar cantidad suficiente de etanol comercial hasta cubrir la muestra. Con un trozo de papel filtro blanco cubrir la boca del tubo de ensayo y sujetarlo con pinzas o una banda elstica. Agregarle unas gotas de NaOH diluido en el papel filtro y calentar hasta ebullicin durante 5 minutos, posteriormente enfriar y retirar el papel filtro. Observar bajo luz ultravioleta a 365 nm la aparicin de una coloracin fluorescente que puede ser: verde, amarilla o roja.

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CONSULTA Consultar las reacciones qumicas que se presentan en cada una de las pruebas de identificacin de metabolitos secundarios. BIBLIOGRAFA DOMNGUEZ X.A. Mtodos de investigacin Fitoqumica. Ed.Limusa. Mxico. 1973.

Arango A. Gabriel J., Quijano T. Jairo. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Marcha Fitoqumica Semicuantitativa. Universidad de Antioquia. Medelln.

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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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(5). KUKLINSKI Claudia. Farmacognosia. Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de origen natural. Ed. Omega. Barcelona. 2000.

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(10). WHO. Quality control methods for medicinal plant material. Geneva: WHO. 1998. ISBN 92 4 154510 0.
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