COLORACIONES

LUISA FERNANDA ARROYAVE YULIETH DE LEON CATALINA MARTINEZ CORTES

Informe

DORIS AMANDA Docente

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA L-6 am Medellin

METODOLOGIA Distribucion de los microorganismos:

Tomar muestra y hacer inoculacin de las diferentes muestras tomadas en las cajas petri y observar pasados 24-48 horas. Coloracion simple azul de metileno: Fijar diferentes muestras en el portaobjeto (con mechero), colorear con azul de metileno, dejar secar al aire libre y observar en 100x. Tincion negativa: Fijar diferentes muestras en el portaobjeto (con mechero), colorear con nigrosina, dejar secar al aire libre y observar en 100x. Coloracion Gram: Se fijan los microorganismos en el portaobjeto, se cubre con el cristal de violeta, dejar actuar, lavar y cubrir con solucin I2, Dejar actuar, lavar y decolorar con alcohol acetona, dejar actuar de 20 a 30`segundos, lavar, cubrir con safranina, dejar actuar y observar en el microscopio. Coloracion de esporas: Fijar bacterias y

RESULTADOS OBSERVACIONES Y ESQUEMAS Distribucion de los microorganismos: Coloracion Gram:

Coloracion simple azul de metileno:

Coloracion de esporas: se observaron Stafilococus aureas y Bacillu subtilus en estas se observan esporas de color verde y bacilos de color rosado; sin embargo hay mayor presencia de bacilos en Bacillus subtilus Tincin negativa: Se estudia la morfologa y el tamao de las bacterias, estas los M.O no se tien pero lo que sucede es que el fondo se colorea y estas se hacen visibles por que el fondo esta oscuro

Bacteria S. aureus E. colis B. cereus B. Subtilis

Teorica

Practica

ANALISIS Y CONCLUSION DE RESULTADOS: Distribucion de microorganismos: Al realizar el control del medio en la caja de petri esterilizada no se observo crecimiento microbiano ni cambio alguno debido a que la caja no se haba expuesto al medio. En la muestra tomada de la boca no esperbamos encontrar una proliferacin de bacterias ya que la saliva no es un medio de cultivo microbiano especialmente bueno; porque la saliva destruye las bacterias mediante una reaccin que involucra a los iones de cloruro y perxido de hidrogeno (agua oxigenada). Ademas no encontramos restos de comida presente en ella. La caja petri donde se inoculo la muestra tomada de la mesa, no esperbamos encontrar un cultivo de bacterias tan visibles (5 colonias: un grupo de bacterias estrechamente acumulados) ya que por ser una mesa de trabajo para las practicas de laboratorio de microbiologa, debera estar libre de estas, porque al finalizar una practica, se debe limpiar muy bien; lo que demuestra que el agua y el jabon no son fiables ya que no inhibe el crecimiento de microorganismos. La caja petri que se expuso al aire se esperaba encontrar mas microorganismos ( 1 colonia) ya que en el aire estn presentes muchos factores de contaminacin. Coloracion azul de metileno (AM): Cuando se tio la muestra de la mesa con azul de metileno se observo claramente en el objetivo 100x que la muestra presentaba cocos y bacilos pero se vieron mas bacilos porque fueron mas alargados, en la muestra de la boca y del aire tambin se observaron cocos y bacilos gracias a que el azul de metileno tie el interior de la celula. Tincion negativa: El colorante no reacciona propiamente con la celula solo con su medio externo gracias a esto se logra ver una forma mas definida y el tamao mas detallado, permitiendo que el microorganismo se observe brillante sobre un fondo oscuro. Coloracion gram y de esporas: La diferencia que se observa entre las gram + y gram - esta en la resistencia a la decoloracin, debido a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea.

Gracias a las propiedades del verde malaquita se permiti diferenciar entre las bacterias esporuladas de las no esporuladas.

CONCLUSIONES:
-

Se denominan bacterias Gram positivas a aquellas que retienen la tincin azul y bacterias Gram negativas a las que quedan decoloradas. Algunas bacterias van a presentar una mayor agrupacin y crecimiento ya que influye ciertas condiciones para su desarrollo como el pH, la temperatura, presin osmtica, los nutrientes, entre otros. Al realizar el control del medio en la caja petri esterilizada al pasar 48 h no se pudo apresiar ninguna muestra de crecimiento microbiano; no se observo cambio alguno debido a que la caja no se haba expuesto al medio. La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en microbiologa para la visualizacin de bacterias. La coloracin simple con azul de metileno y tincin negativa al colorar las bacterias nos permite ver su morfologa ms fcilmente y as poder identificarlas. Pudimos observar que casi todas las especies de bacterias dieron gram positivo y solo la E. coli dio gram negativo.

PREGUNTAS:
1. CONSISTENCIA:

o o

Medios slidos: Su proporcin de Agar es1.5 al 2%. Medios semislidos: Son medios intermedios entre los medios lquidos y slidos, su proporcin de Agar suele ser suele ser inferior al 0.5%, pero siempre suele presentar cierta cantidad que le proporcione una consistencia semislida. Medios lquidos o caldos: No contiene Agar y su composicin (adems de agua) suele contener al menos una fuente de carbono, sales minerales, y a veces segn las caractersticas de medio, factores de crecimiento, vitaminas, peptonas, aminocidos, entre otros.

2. Un medio de cultivo consiste en un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir (bajo condiciones favorables de pH y temperatura) el crecimiento de microorganismos, clulas o incluso pequeas plantas. Segn qu se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados, al prepararse podemos encontrarlos en estado slido, semislido y lquido. El objetivo ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificacin, multiplicacin... 3. Colorante menos importante La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer una tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al trmino del protocolo, las Gram positivas se vern azul-violceas y las Gram negativas, se vern rosas (si no se hizo la tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina). 4. Nombres bacterias

Staphylococcus aureus (S. aureus)

Escherichia coli ( E. colis)

Bacillus cereus (B. cereus)

Bacillus subtilis (B. subtilis)