TECNICO UNIVERSITARIO EN TECNOLOGIA DE LOS ALIMENTOS

MICROBIOLOG IA GENERAL
TRABAJO PRCTICO N1
PREPARACION DE MATERIALES Y MEDIOS DE CULTIVOS ESTERILIZACION CONTROL DE ESTERILIZACION

SALTA, 7 DE SEPTIEMBRE, 2012 ALUMNAS: ADRIANA DEL VALLE NIEVA TRABAJO PRCTICO DE LABORATORIO N1
INTRODUCCIN Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en forma slida. Usualmente para preparar un medio slido, se parte de un medio lquido al que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la slicagel. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en: Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos. Medios definidos o sintticos: son los medios que tienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigacin. De acuerdo al uso del medio de cultivo, stos se clasifican en: Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el nmero de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o ms sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepcin de los que se quieren cultivar. Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios slidos y estn diseados para el aislamiento de microorganismos especficos. Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningn tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos. Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes bsicos, o por simple rehidratacin de productos asequibles comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo deshidratados porque, adems de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles. Para su preparacin se deben tener en cuenta los siguientes aspectos: Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que suministren productos de calidad. Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica y fisicoqumica adecuada. Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o desmineralizada.

 Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilizacin. Nunca se deben exceder las condiciones sealadas por el fabricante. Medios de cultivo Solucin acuosa con las sustancias necesarias para que las clulas generen energa y realicen biosntesis Requerimientos nutricionales componentes del medio de cultivo: Fuente de energa Fuente de C, N, H, O Fuente de P, S, Ca, K Micronutrientes Factores de crecimiento Clasificacin de los medios de cultivo: Segn su naturaleza: Lquido Slido Semislido Segn su composicin: Medio definido-sinttico Medio indefinido-complejo Segn su uso: Medio mnimo Medio enriquecido Medio selectivo Medio dIierencial
AUTOCLAVE Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos. Equipo: Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que en la parte inferior recibe calor por combustin de gas o por una resistencia elctrica. La caldera se cierra en la parte superior por una tapa de bronce sujetada por bulones, mariposas o charnelas. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manmetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete (tambin llamado espita) y el tercero, para una vlvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte. Funcionamiento y mtodo para esterilizar adecuadamente en Autoclave: Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se disponen sobre una rejilla o canasta de metal. Se cierra asegurando la tapa, ajustando los bulones y se da calor, dejando abierta la vlvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y abundante. Se cierra la espita de vapor y se espera hasta que llegue a la temperatura adecuada. A partir de all se cuenta el tiempo de esterilizacin, luego del cual se debe esperar al descenso de la temperatura para abrir la espita de purga y la tapa del autoclave nuevamente.
Atmsferas Grados Centgrados

0 1/2 1 1 1/2 2

100 112 120 128 135

Este proceso de esterilizacin es el que mejor resultados d en microbiologa. El vapor de agua a fuerte presin acta a mayores temperaturas: Tiempos de esterilizacin en autoclave: Del tiempo, temperatura y presin usados en la esterilizacin depende el xito alcanzado. Generalmente los datos presin y temperatura son fijados, y el nico factor que se vara es el tiempo. Los materiales necesitan diferentes tiempos de esterilizacin dependiendo de su textura, porosidad, y otras caractersticas propias de cada material. Algunos materiales como el hule, necesitan poco tiempo, mientras otros como el metal quirrgico necesitan ms. Los siguientes datos han sido tomados para una temperatura de esterilizacin de 250F (121C) a 15-20 PSI. Guantes de Caucho (Hule) 15 minutos Sondas (base tejida) 15 minutos Sondas (ltex) 15 minutos Frascos de Vidrio, Cristalera en General 20 minutos Agua en frascos 20 minutos Jeringas de Vidrio 20 minutos Bandeja 30 minutos Equipo de transfusin 30 minutos Paquetes de maternidad 30 minutos Ropa 30 minutos Torundas 30 minutos Paquete quirrgico 45 minutos Instrumental de acero inoxidable 45 minutos *Cuando se esteriliza se deben hacer paquetes bien cerrados y bien ordenados, para que haya buena penetracin de vapor en el material. No incluir dentro del mismo paquete material con diferentes tiempos de esterilizacin. Ej. : Lencera y Vidrio. El mtodo utilizado para envolver los paquetes deber garantizar el mantenimiento de las condiciones de esterilidad de los materiales durante sualmacenamiento.

Como Cargar el Autoclave a) Se deben acomodar los bultos o paquetes de tal forma que haya una libre circulacin de vapor entre ellos (no tratar de llenar el autoclave hasta sobrecargarlo). b) Colocar de lado las botellas, frascos y cualquier clase de recipiente no poroso de material seco. Esto permite un pronto desplazamiento del aire y un rpido contacto del vapor con las superficies de las vasijas y su contenido. Tambin facilita el secado. c) Esterilizar los lquidos separndolos de otros materiales. d) Cuando se esterilizan lquidos, debe hacerse con los recipientes destapados. e) La cristalera deber esterilizarse colocando los recipientes boca abajo u horizontales (nunca con la boca hacia arriba). CAPTULO 4