02 - Instrumentacion Microscopia Optica

2.
Instrumentacin de microscopa ptica
2. Instrumentacin de microscopa ptica
Lentes
Lentes
Diferente curvatura
Lentes
Diferente curvatura
Lentes
Diferente curvatura
Lentes
Diferente ndice de refraccin
Lentes
Diferente ndice de refraccin
Lentes
Distancia focal: El punto de convergencia de los rayos refractados cuando los rayos incidentes provienen de una fuente tan lejana que pueden considerarse paralelos entre s.
Distancia focal
Lentes positivas (convergentes)

Biconvexa Plano-convexa Menisco
Lentes negativas (cncavas)

Bicncava Plano-cncava Menisco

Divergen los rayos de luz

Distancia focal
Aberraciones de las lentes

ABERRACIN: Imperfeccin de un sistema ptico que produce una imagen defectuosa, deficiente en nitidez o en su semejanza al objeto.
Tipos de aberraciones
Aberraciones geomtricas
Aberraciones cromticas
Aberracin esfrica Astigmatismo Coma Distorsin Curvatura de campo
De posicin De magnitud
Aberracin esfrica
Los rayos que atraviesan la lente cerca de sus extremos convergen en un punto ms cercano a la lente que los que cruzan por el centro.
Aberracin esfrica
Causas:
Daos en el objetivo, grasa de los dedos y restos de aceite de inmersin en la lente frontal del objetivo. Cubreobjetos de espesor o ndice de refraccin inadecuado. Longitud de tubo incorrecta. Medio de montaje inadecuado. Espesor excesivo de la muestra.
Aberracin esfrica
Correccin:
Combinacin de lentes convergentes y divergentes con aberraciones esfricas opuestas. Insertando diafragmas fijos en el objetivo reduciendo el campo visual a la regin central de la imagen.
Astigmatismo
Las lneas verticales y horizontales se enfocan en dos puntos distintos del eje ptico.
Punto de enfoque de las lneas verticales
Punto de enfoque de las lneas horizontales
Punto objeto
Coma
Diferentes zonas circulares concntricas de la lente proporcionan aumentos distintos a una imagen desplazada del eje.
Imagen
Punto objeto
Distorsin
La imagen aparece deformada a causa de un incremento o descenso gradual desde el centro hasta el contorno. Las lneas rectas aparecen curvadas. Se produce en lentes a las que se les pone un diafragma.
Imagen normal
Distorsin de cojn
Distorsin de barril
Curvatura de campo
La lente enfoca una superficie plana del objeto como si fuese esfrica. Cuando estn enfocados los bordes del objeto no lo est el centro y al revs. El centro y los lmites de la imagen se enfocan a distancias distintas.
Aberracin cromtica de posicin

Los distintos colores o longitudes de onda de la luz se enfocan a diferentes distancias de la lente. La imagen aparece rodeada de anillos con variedad de colores segn el enfoque.
azul < verde < rojo
Aberracin cromtica de magnitud

Los rayos de luz de un determinado color se proyectan con ms aumentos que los rayos de luz de otro color.
Aberracin cromtica
CORRECCIN: Utilizar una fuente de luz monocromtica. Introducir un sistema de filtros que solo dejen pasar unas pocas longitudes de onda. Sustituir la lente simple por un doblete de lentes combinando distintos tipos con los ndices de refraccin y dispersin adecuados.
Descripcin del microscopio ptico

Partes mecnicas: Son las partes y dispositivos que tienen la misin de soportar los componentes pticos a la vez que facilitan las manipulaciones y el uso del instrumento.

Tubo (binocular) Revlver Platina Movimiento (foco) Pie Columna o brazo

Objetivo:

Objetivo:
Es el sistema ptico convergente colocado el el extremo correspondiente al objeto. La lente o conjunto de lentes que se sitan ms cerca de la preparacin. Su finalidad es formar una imagen real de ste que ser observada a travs de un ocular o recogida en una pantalla.

Objetivo: Sus principales caractersticas son
Aumento Apertura numrica
Descripcin del microscopio ptico: objetivo
Distancia de trabajo: La distancia entre la lente frontal del objetivo y la muestra cuando sta est enfocada.
Objetivo
Distancia de trabajo (WD) Muestra
ngulo de apertura: Es el formado por los rayos extremos que intervienen en la imagen.
Objetivo
Muestra
Apertura numrica: Es una medida de la capacidad para recoger la luz y resolver detalles pequeos a una distancia objeto fija. Apertura numrica, A.N. = n x sen
n es el ndice de refraccin del medio es el semingulo de apertura

Apertura numrica:
Expresa el dimetro del haz luminoso que puede recoger el objetivo. Se entiende que cuantos ms rayos procedentes del objeto entren en la lente para formar la imagen mejor ser la calidad de sta, as como su definicin.

Apertura numrica: A.N. = n x sen
Se puede aumentar . Pero llegar al mximo terico de 90 se ve limitado en la prctica. Se puede aumentar n. Mediante lquidos de inmersin.
Aumento til: Es la relacin entre el tamao de la imagen y el tamao del objeto.

Hay un mnimo para que se puedan resolver los detalles que est en torno a 500 veces la A.N. Hay un mximo ms all del cual no se obtiene ms resolucin ni ms informacin y est en torno a 1000 veces la A.N., son aumentos vacos.
Poder de resolucin: El inverso de la mnima distancia entre dos puntos que todava se entienden como separados, d. Se define en relacin a la A.N. y a . d = 0,61 / A.N.

Tipos de objetivos segn las correcciones:
Acromticos: corregida la a. cromtica para rojo y azul, y la esfrica para verde. Semiapocromticos (fluorita): corregida la a. cromtica y esfrica para 2 3 colores. Apocromticos: correccin cromtica y esfrica para 4 ms colores. De campo plano: curvatura de campo muy corregida.

Tipos de objetivos segn las correcciones:
A. esfrica Acromticos 1 color A. cromtica 2 color 2 color 2 3 colores 2 4 colores 4 5 colores Curv. campo no s no s s
Plan-acromticos 1 color Fluorita Plan-fluorita Plan-apocromt. 2 3 colores 3 4 colores 3 4 colores

Indicaciones en el exterior de los objetivos:
Fabricante Correcciones Aumentos ptica corregida a infinito Sin cubreobjetos Apertura numrica Distancia de trabajo

Longitud de tubo: ptica corregida a infinito (ICS)
tubo

Longitud de tubo: ptica corregida a infinito (ICS)
La distancia imagen se sita en el infinito, es decir, los rayos de luz que salen del objetivo son tan paralelos que parece que la imagen se forme en el infinito. Se coloca estratgicamente una lente de tubo dentro del cuerpo del tubo entre el objetivo y el ocular para producir la imagen intermedia.
Descripcin del microscopio ptico: (ICS)

ptica corregida a infinito
objeto ocular
objetivo
lente intermedia
ptica finita
objeto ocular
objetivo

Sistemas de iluminacin:
Condensadora Fuentes de iluminacin

Condensadora: Es el sistema ptico convergente situado antes de la platina encargado de iluminar adecuadamente el objeto para obtener el mximo rendimiento del objetivo.
Descripcin del m. ptico: condensadora

Cuando la A.N. de iluminacin es casi igual a la A.N. mxima del objetivo se disminuye el contraste. En las muestras de contraste alto con detalles diminutos se debera iluminar la A.N. por completo, pero si la muestra tiene poco contraste se debe disminuir el cono de iluminacin de la A.N. para impedir que la imagen quede borrosa debido al poco contraste.

Cuando la A.N. de iluminacin es casi igual a la A.N. mxima del objetivo se disminuye el contraste. En las muestras de contraste alto con detalles diminutos se debera iluminar la A.N. del objetivo por completo. Pero si la muestra tiene poco contraste se debe disminuir el cono de iluminacin de la A.N. del objetivo para impedir que la imagen quede borrosa debido al poco contraste.

El cono de luz que ilumina la A.N. de objetivo se controla por medio de un diafragma de iris. Si el diafragma est muy cerrado la imagen est demasiado contrastada y se pierde resolucin. Pero si est muy abierto la imagen sufre alteraciones a causa de la difraccin. La posicin correcta ser cerrar hasta aproximadamente 2/3 del campo de visin cuando se observa el plano focal posterior de la lente objetivo.

Fuentes de iluminacin:
Luz natural: ya no se usa Lmpara incandescente: la ms usada Lmpara de arco: iluminacin intensa y sin estructura Lmpara de descarga: vapor de mercurio

Tipos de iluminacin:
Iluminacin crtica Iluminacin de Khler

Iluminacin crtica: Se forma la imagen de la fuente luminosa sobre la imagen a observar, en el plano de la muestra.
Iluminacin muy brillante pero desigual con puntos de diferente brillo.

Iluminacin de Khler:
Se ilumina estricta y nicamente la parte observada del objeto. Proporciona una intensidad suficiente y uniforme.
Evita la luz parsita que se produce en las partes iluminadas y no observadas de la muestra.
Mantenimiento, limpieza y conservacin del microscopio ptico
Mantenimiento, limpieza y conservacin

Cualquier componente es INCREBLEMENTE CARO
Enemigos primordiales del microscopio:
Polvo Enemigo nmero 1!! Agua y humedad ambiental Grasa procedente de los dedos o del propio equipo Restos de medios de inmersin, medios de montaje y medios de cultivo Ambientes qumicamente agresivos Sol directo y fuentes de calor

Normas bsicas:
Cuando se hace mantenimiento de instrumentacin hay que invertir paciencia, no energa. Siempre es mejor prevenir que reparar. El microscopio ptico es un instrumento de precisin. Hay que trabajar sobre una superficie absolutamente limpia y con buena iluminacin. Usar la herramienta del tamao apropiado. No forzar nunca ningn elemento mecnico ni ptico cuando se procede a desmontar y montar. estable,
Cuando se retira cualquier elemento ptico o mecnico que deje abierto el camino ptico, es imprescindible cegar inmediatamente el hueco que queda libre con la ayuda de una tapa ciega, o bolsa de plstico y cinta adhesiva con el fin de evitar la entrada de polvo y suciedad. No dejar nunca los tubos oculares o alguna posicin del portaobjetivos vaco, colocar un tapn ciego. Cuando se desmonta un objetivo, mientras una mano lo desenrosca la otra lo sujeta. Cuando se monta un elemento ptico, no retirar la mano hasta que no tengamos la absoluta certeza de que ha quedado bien sujeto.
Est desaconsejado desarmar los elementos de los conjuntos pticos (ocular, objetivo, condensador, ) si no es absolutamente imprescindible, puesto que se pueden producir desajustes irreversibles en el posicionamiento de las lentes, ya que, en muchos casos, han sido centradas en fbrica por medio de banco ptico, y hacerlos reajustar es caro. Si se tuviera forzosamente que desarmar, es recomendable apuntar la posicin, el orden y la orientacin de todos los elementos pticos y de las respectivas piezas de sujecin.
Las pticas y dems piezas que se vayan desmontando hay que dejarlas en lugar seguro (cajas, estuches, ) para evitar que rueden y caigan al suelo, depositndolas en posicin vertical y con el extremo que queda en el interior del camino ptico protegido del polvo. Si hay que reparar cualquier elemento situado en la base del microscopio y para ello hay que tumbarlo o darle la vuelta, primero es necesario retirar todos los elementos que se sostienen por gravedad (filtros, oculares, ). En ningn caso tocar el interior de los caminos pticos con los dedos, puesto que stos suelen tener un tratamiento superficial de color negro mate, y cualquier huella de los dedos podra ocasionar brillos no deseados.
Evitar golpear la lente frontal de los objetivos contra la preparacin que se observa o contra cualquier otro objeto. Esto podra producir rayas o seales sobre la lente, fisuras en el cemento que fija la lente, e incluso su desplazamiento hacia atrs. Si se fisura el cemento se corre el riesgo de que entren lquidos como los medios de inmersin o de montaje. Los objetivos de inmersin hay que limpiarlos inmediatamente al finalizar la sesin de observacin.
Los restos de aceite o de otros medios de inmersin, adems de retener suciedad, pueden acabar introducindose por capilaridad entre la montura y la lente frontal del objetivo. Al acabar la observacin, limpiar el microscopio. Siempre que no se est utilizando el microscopio, debe estar completamente tapado por medio de una funda. Las fundas de plstico son un buen aliado para proteger los microscopios.

Electrnica, fuentes de alimentacin y sistemas de iluminacin: Retirar el polvo de las ranuras de ventilacin. -Soplando con una pera de goma -Aire o nitrgeno a presin -Aspiracin Ayudndose de un pincel limpio, seco y libre de grasa.

Limpieza de la lmpara: Alta temperatura, refrigeracin por aire = polvo adherido Dejar enfriar Guantes de algodn Retirar y limpiar con etanol Suciedad carbonizada, usar amonaco

Sustitucin de la lmpara: Respetar la duracin mxima de las lmparas de vapor de mercurio Se limpia antes de colocarla como si fuese una lmpara usada

Parte mecnica: Retirar el polvo superficial con un trapo fino. En caso de vertido accidental de medios de montaje lquidos o medios de inmersin, etc.
Absorber el lquido con papel Disolver y limpiar los restos con agua destilada Secar bien

Parte ptica: Retirar el polvo soplando con pera o nitrgeno o aire. Limpiar en hmedo con papel ptico o trapo suave humedecido en etanol, cristasol, isopropanol... con movimiento circular. Secar.
En aquellos microscopios en que trabajan varias personas la limpieza peridica de los oculares contribuye a minimizar el riesgo de contraer conjuntivitis. Las huellas, los restos de medios de inclusin o de montaje y el polvo presentes en el objetivo, sean del tipo que sean, ocasionan una prdida de resolucin y contraste debido a que dispersan la luz, dando la sensacin de que se tiene una aberracin de esfericidad elevada.

No usar nunca benceno, tolueno o xileno! Son disolventes altamente txicos y muy agresivos frente a pinturas y cemento de unin.

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Aumento til: Es la relacin entre el tamao de la imagen y el tamao del objeto.

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