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XVI, N 3, 308 - 314, 2006

ESTANDARIZACIN DE LA DETECCIN DEL GLICOMACROPPTIDO POR PAGE-SDS COMO NDICE DE ADULTERACIN DE LECHE
Standardization Of Glycomacropeptide Detection with SDS-PAGE as a Milk Adulteration Index
Luz Mila Galindo-Amaya, Emiro Valbuena-Colmenares y Evelin Rojas-Villarroel Departamento de Qumica, Facultad de Humanidades y Educacin. Unidad de Investigacin en Ciencia y Tecnologa de Alimentos, Facultad de Ciencias Veterinarias, Apartado 15252. Universidad del Zulia. Maracaibo, Venezuela. E-mail: evalbuena@luz.edu.ve


RESUMEN
La electroforesis en gel de poliacrilamida dodecilsulfato de sodio (PAGE-SDS) se ha utilizado ampliamente para separar protenas nativas y desnaturalizadas. En algunos pases esta tcnica ha sido til para detectar adulteracin de leche con suero de quesera, prctica que resulta fraudulenta segn la normativa legal vigente. La presencia del glicomacropptido (GMP) que es liberado al suero por accin de la renina sobre la k-casena durante la elaboracin del queso, en muestras de leche, constituye un marcador de este tipo de adulteracin. En este trabajo se estandariz la deteccin de este pptido como ndice de adulteracin de leche pasteurizada, mediante aislamiento del GMP por precipitacin secuencial con cido tricloroactico (ATC) al 24 y 50%; tratamiento con etanol-ter y resuspensin en buffer Tris-HCl 0,05 M, EDTA 1 mM, pH 7,2 a partir de muestras de suero dulce, suero cido, leche cruda recin ordeada, mezclas suero:leche, leches pasteurizadas y en polvo comercializadas en la regin. Los precipitados fueron analizados por PAGE-SDS y el GMP se evidenci como un trmero de 20,9 kDa en muestras de suero dulce y mezclas de suero leche (1, 5, 10 y 50%), pero ausente en muestras de suero cido y leche cruda fresca. El anlisis de quince muestras de leche pasteurizada (marcas A, B, C, D y E) revel la presencia del GMP en diez de ellas correspondientes a las marcas A, B, C y E; sin embargo en cinco muestras de leche en polvo (marcas F, G, H, I y K) este pptido no fue observado. Los resultados obtenidos demuestran que la deteccin del GMP por PAGE-SDS en leche, representa un parmetro especfico y sensible para detectar porcentajes de adulteracin con suero, a niveles tan bajos como 1%, algo que no

puede ser revelado con la evaluacin de los parmetros fsico-qumicos de la leche. Palabras clave: Adulteracin de leche, suero, GMP, PAGESDS.

ABSTRACT
The poliacrylamide gel electrophoresis sodium dodecylsulfate (PAGE-SDS) has been extensively used to separate native and denaturalized proteins. In various countries this has been useful to detect milk adulteration with whey, which is a fraud according to the current legal standards. The presence of glicomacropeptide (GMP) constitutes a marker of adulteration. It is released to the serum due to the hydrolysis of k-casein peptide catalyzed by rennin incheese elaboration. In this work, the GMP detection was standardized as a pasteurized milk adulteration index, by means of GMP isolation with sequential precipitation in trichloroacetic acid at 24% and 50%, treatment with ethanol-ether and resuspention in buffer Tris-HCl 0.05 M, EDTA 1 mM, pH 7.2 from sweet whey, acid whey, recently drawn raw milk, mixtures of whey: milk; pasteurized milk and powder milk locally commercialized. Precipitates were analyzed by SDS-PAGE and GMP was evidenced as a trimer of 20.8 kDa in samples of sweet whey, and mixtures of whey: milk (1, 5, 10 and 50%), but absent in samples of acid whey and drawn raw milk. Analysis of fifteen samples of pasteurized milk (brands A, B, C, D and E) revealed the presence of GMP in ten of them, corresponding to brands A, B, C and E. Nevertheless after analyzing five samples of powder milk (brands F, G, H, I y K) this peptide was not observed. The results obtained demonstrate that investigation of GMP by SDS-PAGE in milk, constitute a sensible and specific parameter to detect milk

Recibido: 02 / 06 / 2005. Aceptado: 20 / 02 / 2006.

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adulteration with whey, to levels as low as 1%, something that can not be revealed only with the evaluation of the physical-chemical parameters of milk. Key words: Milk adulteration, whey, GMP, SDS-PAGE.

zantes; tratamientos trmicos inadecuados que alteran la conformacin nativa de las protenas; adicin de suero dulce, entre otros [3, 6]. Estas adulteraciones ocurren en cualquier etapa de la produccin como en el transporte o en el procesamiento de la misma, y con stas se persigue aumentar los volmenes de leche, a fin de incrementar las ganancias. El suero dulce es el subproducto lcteo que se separa de la cuajada durante el proceso de fabricacin de quesos frescos. Se obtiene por coagulacin enzimtica de la leche, por accin de la enzima quimosina, la cual hidroliza la kappa (k)-casena de la leche a nivel del enlace Phe-Met (105-106), produciendo dos fragmentos: una porcin hidroflica, de carcter cido, constituida por 64 aminocidos, llamada glicomacropptido (GMP), la cual se mantiene en solucin en el suero, y la otra porcin es hidrofbica, de carcter bsico, compuesta por 105 aminocidos, llamada paracasena-k, la cual queda retenida en el cogulo [16, 21, 22]. Diversas investigaciones a nivel mundial [17, 18] han evidenciado la presencia del GMP en muestras de leche. Esto constituye un indicador de adulteracin de la leche cruda con fines comerciales, representando un fraude para el consumidor o el industrial, pero significa un aumento en los volmenes de ganancia para quien lo practica, ya que este suero tiene un costo muy bajo comparado con el precio de la leche. Esta prctica se hace posible debido a que el suero es un componente natural de la leche y, por lo tanto, sus propiedades coligativas son similares, lo cual hace casi imperceptible su presencia cuando ste ha sido agregado a la leche. Hasta ahora se han desarrollado varios mtodos para detectar la adulteracin de la leche por agregado de suero, diferencindose stos por su sensibilidad y versatilidad de los equipos empleados en el anlisis [6, 17, 18]. El aislamiento del GMP mediante precipitacin con cido tricloroactico (ATC) seguido por electroforesis en gel de poliacrilamida dodecilsulfato de sodio (PAGE-SDS) ha sido ampliamente utilizado para detectar la presencia del GMP en leches procesadas para consumo humano [4, 9, 17, 18]. Con el fin de detectar la presencia del GMP como marcador de adulteracin de leche con suero dulce, en el presente trabajo se plante estandarizar la extraccin y deteccin de este pptido mediante precipitacin con ATC y PAGE-SDS, respectivamente.

INTRODUCCIN
La leche es un producto alimenticio de gran importancia por sus propiedades nutritivas y alto valor biolgico. En Venezuela se producen aproximadamente 1.400.000.000 litros de leche por ao, siendo el estado Zulia el de mayor produccin, con ms de 550 millones de litros, los cuales se destinan a la elaboracin de diferentes productos lcteos, entre ellos la leche pasteurizada, leche en polvo, quesos y otros productos lcteos que forman parte de la dieta del venezolano [2, 11]. La leche pasteurizada es el principal producto lcteo fluido que se consume en Venezuela. Los elementos constitutivos de mayor importancia en la leche de las diferentes especies de mamferos son las protenas, las cuales estn presentes a nivel de 3,2% de este alimento. El 80% de estas protenas son casenas y el 20% restante est representado por las protenas sricas b-lactoglobulina, a-lactoalbmina, albmina del suero bovino, euglobulina, pseudoglobulina, mucinas, protenas de la membrana del glbulo graso, otras albminas, as como numerosas enzimas [22]. Las casenas son un grupo de protenas que contienen fsforo y son especficas de la leche, en donde se encuentran casi siempre en forma de micelas y precipitan a un pH de 4,6. Se conocen seis tipos de casenas: a s1 (alfa s1), a s2 (alfa s2), b (beta), g (gamma), k (kappa) y l (lambda) [22]. La casena k tiene propiedades fsico-qumicas nicas, si se compara con las otras protenas de la leche. Algunas de estas propiedades son: insensibilidad a precipitacin por iones calcio, por lo que se mantiene soluble en soluciones de calcio con concentraciones que precipitan a todas las dems casenas; efecto estabilizador sobre las otras casenas cuando el calcio est presente en la suspensin; sufren hidrlisis por quimosina en un enlace peptdico especfico, lo que resulta en la desestabilizacin de las micelas y la formacin de precipitados; adems, es la nica de las casenas que contiene residuos de cistena y glcidos en su estructura [19]. Debido a su condicin de alimento perecedero y al gran riesgo de prdida en lo econmico que esto significa, la calidad de la leche se ve afectada en ciertos aspectos, tales como el microbiolgico a causa de la falta de higiene y el fisicoqumico a causa de adulteraciones, con las consiguientes consecuencias de ndole nutricional, econmica y legal [2, 6, 20]. Entre las adulteraciones ms frecuentes que se hacen a la leche, se pueden mencionar: adicin de sustancias qumicas no permitidas por la legislacin venezolana como la adicin de agua y cloruros; adicin de preservativos o neutrali-

MATERIALES Y MTODOS
Obtencin de las muestras Se us leche cruda recin ordeada (leche cruda fresca) libre de suero, como control negativo, proveniente de una finca ubicada en el municipio Machiques de Perij, estado Zulia. El suero dulce lquido se incluy como control positivo, obtenido de una industria quesera del municipio Jess Enrique Losada, estado Zulia. Se utiliz suero cido como control negativo, el 309

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cual fue obtenido mediante coagulacin cida de leche cruda fresca con cido actico al 30%. Se prepararon mezclas de suero dulce-leche y de suero dulce-agua en las siguientes proporciones 1; 5; 10; y 80 (%V/V). El suero utilizado para preparar las mezclas con leche fue previamente calentado a 80C por 10 minutos para eliminar cualquier actividad residual de la quimosina en el suero [4, 5]. Extraccin del GMP La extraccin del GMP se realiz siguiendo la metodologa de Olieman y col. [15] con algunas modificaciones: A 50 mL de muestra (leche cruda fresca, suero dulce, suero cido, mezclas de suero-leche y mezclas de suero-agua), se agregaron lentamente y bajo agitacin constante durante 2 minutos, 25 mL de una solucin de ATC al 24%. Esta mezcla se dej en reposo a temperatura ambiente durante 60 minutos. Luego de este tiempo se separ el precipitado (casenas) del sobrenadante (protenas sricas) por filtracin, utilizando papel Whatman 42. A 30 mL del filtrado se aadi 8 mL de una solucin de ATC al 50%, y se dej en reposo bajo refrigeracin (4-6C) durante 60 minutos. La suspensin resultante se centrifug en Centrfuga Sorvall, rotor SS-34, a 7.000 r.p.m. entre 4 y 6C durante 10 minutos. El sobrenadante obtenido se descart y el precipitado se lav 2 veces con 10 mL de una mezcla de etanol-ter 1:1 y luego se centrfug bajo las condiciones de la centrifugacin anterior. El sobrenadante fue descartado y los tubos se escurrieron sobre papel absorbente para eliminar los excesos de la mezcla de lavado. El precipitado final se resuspendi en 300 L de Buffer TRIS-HCl 0,05 M; EDTA 1mM, pH 7,2 y se guard bajo congelacin a 20C hasta su uso. Electroforesis en gel de poliacrilamida dodecilsulfato de sodio (PAGE-SDS) Las muestras resultantes de la precipitacin con ATC fueron analizados por PAGE-SDS, usando el sistema buffer discontinuo de Laemmli [8]. En este sistema las protenas son desnaturalizadas por calentamiento en buffer que contiene SDS y b-mercaptoetanol como agente reductor [10]. Las electroforesis fueron realizadas en una cmara Mini-PROTEAN III, BIO-RAD, a voltaje constante de 200 V, con una corriente que oscil entre 85 y 35 mA, usando geles de apilamiento y separacin al 4% y 15% de acrilamida, respectivamente. La corrida se realiz utilizando buffer tris-glicina pH 8,3 durante un tiempo de 35 a 40 minutos. En todas las corridas se incluy un marcador de amplio rango de masa molecular de BIO-RAD (contiene miosina, b-galactosidasa, fosforilasa b, albmina srica bovina, ovoalbmina, anhidrasa carbnica, inhibidor de tripsina, lisozima y aprotinina). La visualizacin de las bandas de protenas se realiz mediante tincin de los geles con azul de Coomasie R-250 0,2% en metanol: cido actico: agua (25: 10: 85) a temperatura ambiente, por un tiempo mnimo de 6 horas seguida por 310

decoloracin en una solucin de metanol: cido actico: agua (25: 10: 85). La masa molecular de las protenas separadas en el gel se calcul a partir de una curva de calibracin construida al graficar el logaritmo de la masa molecular de los marcadores, contra la movilidad relativa (Rf) de los mismos. Aplicando la ecuacin de los mnimos cuadrados al valor de Rf de la banda de inters, se calcul la masa molecular aparente del GMP.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Deteccin del GMP en PAGE-SDS Con el propsito de reconocer la banda correspondiente al GMP, se analiz en un mismo gel el perfil electrofortico de leche cruda fresca; suero cido (control negativo) y suero dulce (control positivo) antes y despus de tratamiento con cido tricloroactico (FIG. 1). Se observan en las lneas 3, 5 y 7 el perfil de protenas de leche autentica, suero cido y suero dulce, respectivamente. previo al tratamiento con ATC. En la muestra de leche se observa una zona muy coloreada y extensa entre 30 y 40 kDa, que se corresponde a la zona de las casenas, mientras que en las muestras de suero, las bandas de protenas que predominan son de 19 kDa y 13,5 kDa, correspondientes al monmero de b-lactoglobulina y a-lactoalbmina, respectivamente. En las lneas 4, 6 y 8 se observan las mismas muestras despus de su tratamiento con ATC. La diferencia evidente entre el perfil de protenas en estas tres lneas est dada por una banda con masa molecular aparente de 20,9 kDa presente en la lnea 8 que tambin est presente en el suero dulce (lnea 7). El tratamiento con ATC permite precipitar el GMP, por lo tanto, en el PAGE-SDS de la leche cruda y el suero cido (que no contienen el glicomacropptido) tratados con este cido, como era de esperarse, no se observa ninguna banda que se corresponda con el GMP. Por otro lado, si comparamos el perfil de protenas del suero cido (lnea 5) y del suero dulce (lnea 7) podemos notar que son prcticamente idnticos a excepcin de la banda de 20,9 kDa. Esta observacin sugiere que esta banda corresponde al GMP. Se ha sealado que el monmero de GMP tiene una masa molecular de 6,8 kDa sin considerar la porcin glucdica; adems se ha reportado que este forma agregados a pH neutro y que la masa molecular del agregado depende del pH en el cual se encuentre [7, 22]. El GMP presente en suero de leche bovina se ha observado en su forma agregada cuando se analiza por cromatografa en gel [14] o por electroforesis [13]. El mecanismo de agregacin se desconoce, y tampoco est claro por qu el agregado de GMP no se disocia en los geles en presencia de SDS. Se ha referido que el SDS se une a la porcin peptdica de una molcula de GMP y evita las interacciones hidrofbicas con otras molculas de GMP; sin embargo, las cadenas gluc-

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dicas de las diferentes molculas de GMP pueden interactuar a travs de enlaces por puentes de hidrgeno, lo cual trae como resultado masas moleculares mayores de 18.000 Da, para este pptido en PAGE-SDS. Adems, la afinidad del SDS por el GMP es muy dbil como para disociar el trmero de GMP, lo que puede contribuir al predominio de las formas agregadas en presencia de SDS [12]. Tambin se ha sealado que a nivel de la leche, la b-lactoglobulina y la casena-k, pueden formar enlaces por efecto del tratamiento trmico y eventualmente esto pueda bloquear la unin de la porcin peptdica del GMP y el SDS [12]. La obtencin en este estudio de una banda de 20,9 kDa en el precipitado de ATC del suero dulce, probablemente representa una forma agregada (trmero) de este pptido, lo que se corresponde con lo reportado en investigaciones previas acerca del GMP donde pocas veces se ha observado su forma monomrica. En tal sentido, varios investigadores han analizado la estructura del GMP, utilizando diversos mtodos de extraccin, purificacin y caracterizacin, encontrando que en PAGE-SDS, el GMP de suero dulce se presenta como 2 bandas con masas moleculares de 20.740 Da (26,1%) y 18.380 Da (73,9%) [1, 4]. La heterogeneidad estructural del GMP, debida a la variacin en su composicin glucdica, determina que los valores de masas moleculares reportados para el GMP, dependan en gran medida del tipo de extraccin realizada y del mtodo utilizado para la deteccin del mismo [1, 18]. Con la finalidad de observar un aumento gradual de la banda de 20,9 kDa, correspondiente al GMP, en funcin del grado de adulteracin sistemtica de leche cruda fresca con suero dulce, se realizaron corridas electroforticas de mezclas suero: leche. En la FIG. 2 se muestra el patrn de protenas de las mezclas suero:leche tratadas con ATC para extraer el GMP. Se puede apreciar en este gel que existe un aumento gradual de la banda de 20,9 kDa del GMP, proporcional a la concentracin de suero en cada mezcla. En tal sentido, si se comparan las lneas 4, 5, 6, y 7 de esta figura, se observa que la intensidad de esta banda se incrementa en la medida que la proporcin de suero en la mezcla aumenta en 1; 5; 10 y 50%, respectivamente. Los resultados de este gel evidencian que efectivamente la banda de 20,9 kDa corresponde al GMP ya que est ausente en la lnea 3 donde se aplic leche cruda fresca tratada con ATC, mientras que en las lneas 8 y 9 est claramente presente en muestras de suero dulce tratado con ATC. De manera complementaria y paralela a este ensayo, se realizaron mezclas de suero: agua en proporciones anlogas a las mezclas de suero: leche, encontrndose iguales resultados: una relacin proporcional de la banda del GMP en la medida que la concentracin de suero en la mezcla fue mayor (resultados no mostrados).

2
200.000 Da 97.400 Da 66.200 Da 45.000 Da 31.000 Da 21.500 Da 14.400 Da 6.500 Da

En las lneas se observan: 2: Estndar de Bio-Rad (8 L); 3 y 4: Leche cruda fresca sin tratar (3 L) y tratada (40 L); 5 y 6: Suero cido sin tratar (3 L) y tratado (40 L); 7 y 8: Suero dulce sin tratar (3 L).y tratado (10 L); respectivamente con ATC.

FIGURA 1. PERFIL DE PROTENAS DE LECHE, SUERO CIDO Y SUERO DULCE POR PAGE-SDS / MILK, ACID WHEY
AND SWEET WHEY PROTEIN PROFILE BY SDS-PAGE.

2
200.000 Da 97.400 Da 66.200 Da 45.000 Da 31.000 Da 21.500 Da 14.400 Da 6.500 Da

Se observa en las lneas: 2: Estndar de Bio-Rad (8 L) 3: Leche cruda fresca (20 L).4, 5, 6 y 7: Mezclas de suero-leche 1, 5, 10 y 50 % respectivamente (20 L). 8 y 9: Suero dulce 100 % (10 y 5 L respectivamente).

FIGURA 2. PERFIL DE PROTENAS EN MEZCLAS DE SUERO:LECHE POR PAGE-SDS / PROTEIN PROFILE IN WHEY: MILK
MIXTURES BY SDS-PAGE.

El GMP como ndice de adulteracin de leche Quince (15) muestras de leche pasteurizada (marcas A, B, C, D y E) y cinco (5) de leche en polvo (marcas F, G, H, I y J) fueron sometidas a tratamiento con ATC y analizadas por PAGE-SDS a fin de evaluar la eficiencia del mtodo en la deteccin de adulteracin de leche por suero dulce. La TABLA I resume los resultados obtenidos con la leche pasteurizada. En diez muestras de las marcas A, C, D y E se evidenci la banda 311

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de 21,9 kDa del GMP, mientras que la leche de marca D no mostr presencia del GMP. Tomando como referencia los resultados descritos en la FIG. 2, se estim el porcentaje de adulteracin en las muestras de leche donde se evidenci la presencia del GMP. En tal sentido, la leche B se correspondi con 1%; las marcas A y C con 10% y la marca E mostr un poco ms del 50% de adulteracin (TABLA I). En las marcas F, G, H, I y J correspondientes a leche en polvo, no se evidenci la banda del GMP, para ninguno de los casos, por lo que se presume que estas leches estaban libres de adulteracin por suero. Parmetros fisicoqumicos de las leches analizadas En la TABLA II se muestran los valores promedio de los parmetros fisicoqumicos de las leches pasteurizadas A, B, C, D, E analizadas en este trabajo y leche cruda fresca, comparados con los valores establecidos por la normativa legal vigente

venezolana [3] para leche pasteurizada. Se observa en dicha tabla que la leche de la marca E, la cual mostr el mayor grado de adulteracin, presenta valores de protenas totales, grasa, slidos totales y otros parmetros fisicoqumicos, inferiores al resto de las marcas estudiadas e inferior al valor establecido en la norma, lo cual fue producto de una evidente dilucin de sta al apreciarse la disminucin de su punto crioscpico. Estos resultados se correlacionan con los observados por Fara y Boscn [6] y Briez y col. [2] quienes encontraron que leches adulteradas sistemticamente con suero de quesera en porcentajes de 10 y 15%, mostraban valores de protenas totales (2,95 y 2,85%, respectivamente) inferiores a los establecidos en la normativa legal vigente. Por otro lado, la leche comercial E tambin exhibe porcentaje relativamente bajo de casenas (1,6%) en comparacin con las otras marcas comerciales (alrededor de 2,5%); similar a lo encontrado por Fara y Boscn [6] quienes describen valo-

TABLA I PRESENCIA DEL GLICOMACROPPTIDO (GMP) EN 5 MARCAS DE LECHE PASTEURIZADA / PRESENCE

OF GLICOMACROPEPTIDE (GMP) IN FIVE BRANDS OF PASTEURIZED MILK

Marca A

n 3

Muestra/Presencia de GMP 1/+ 2/+ 3/+ 1/+ 2/+ 3/ 1/+ 2/ 3/+ 1/ 2/ 3/ 1/+ 2/+ 3/+

% de muestras adulteradas 100

% estimado de suero aadido 5

66,6

10

66,6

10

100

50

TABLA II VALORES PROMEDIO DE LOS PARMETROS FISICOQUMICOS DE LA LECHE PASTEURIZADA / AVERAGE VALUES OF THE
PHYSICAL CHEMICAL PARAMETERS OF PASTEURIZED MILK

Parmetro A Protenas totales (%) Casena (%) Protena srica (%) Grasa (%) Slidos totales (%) Acidez (mL NaOH 0,1N) Punto de congelacin (H bajo cero) 312 3,36 2,50 0,86 3,60 12,0 17,0 0,545

Marca de leche pasteurizada B 3,36 2,50 0,86 3,70 12,0 18,0 0,525 C 3,50 2,70 0,80 3,40 12,6 15,0 0,535 D 3,25 2,50 0,754 3,10 11,9 18,0 0,538 E 2,15 1,6 0,55 2,30 9,7 15,0 0,513

Leche cruda 3,75 2,50 1,25 4,00 13,0 19,0 0,531

Norma COVENIN 3,00 3,20 12,0 15,0-19,0 0,540-0,555

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res de 1,99 y 1,85% de casena para las muestras previamente adulteradas con 10 y 15% de suero respectivamente; esto es, probablemente, consecuencia de la dilucin de las casenas con el agregado de suero. El porcentaje de protena srica, obtenidos por diferencia entre las protenas totales y las casenas, fueron similares (alrededor de 0.8%) para las marcas A, B, C, y D, mientras que la leche de la marca E, mostr un valor relativamente menor (0,55%), en comparacin al valor resultante en la leche cruda fresca (1,25%). Este se corresponde con el bajo valor obtenido para las protenas totales para esta marca de leche. Estos hallazgos, en correlacin con los resultados de Fara y Boscan [6] y Briez y col. [2] sealan que muestras de leche adulteradas con suero entre 1 y 10% no pueden ser detectadas al evaluar nicamente los parmetros fsico-qumicos de las mismas. De este modo, las leches A, B y C se mostraron qumicamente adecuadas al comparar sus valores con los de la norma y numricamente no difieren con respecto a los de la leche de la marca D la cual aparentemente no mostr adulteracin; esto apunta a que la deteccin del GMP por PAGESDS, constituye un parmetro especfico y sensible como marcador de la adulteracin de leche con suero.

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CONCLUSIONES
Las condiciones de extraccin y corrida en PAGE-SDS utilizados en este trabajo sealan que el GMP se evidencia como una banda de 20,9 kDa que representa probablemente una forma trimrica de este pptido. Los resultados obtenidos indican que la investigacin del GMP en leche, representa un parmetro especfico y sensible para detectar grados de adulteracin de leche con suero, desde un 1%: lo que no puede ser revelado al analizar los parmetros fsico-qumicos de la leche. La presencia del GMP en cuatro marcas de leche pasteurizada que se expenden en el municipio Maracaibo analizadas en este trabajo, revela adulteracin por suero; sin embargo ste constituy slo un estudio descriptivo el cul amerita en futuras investigaciones, realizar un estudio ms completo a fin evaluar la calidad de la leche pasteurizada que se expende en la regin.

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AGRADECIMIENTO
Los autores quieren expresar su agradecimiento al Parque Tecnolgico Universitario (PTU) por el apoyo y financiamiento de esta investigacin, as como tambin a la Unidad de Investigaciones Ofidiolgicas de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad del Zulia.

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Estandarizacin de la deteccin del glicomacropptido como ndice de adulteracin de leche / Galindo-Amaya, L. y col. __________________

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