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DETERMIANCIÓN DE ETANOL

18 de abril de

2012

DETERMINACIÓN DE ETANOL POR MICRODIFUSIÓN POR ESPECTROFOTOMETRIA SEGÚN FELDSTEIN Y KLENDSHOJ

1. Introducción

Dentro de los tóxicos volátiles, los alcoholes Etanol y Metanol son sustancias de Importancia toxicológica dada su acción farmacológica depresora del sistema nervioso central (SNC) y el abuso creciente del consumo de bebidas alcohólicas. Esto último, presenta importancia médico - social debido a que los individuos alcoholizados pueden ser causa de trastornos y accidentes, de los cuales son imputables.

Las vías de penetración posibles de los alcoholes son la digestiva, la respiratoria, y la absorción a través de la piel. En el caso del etanol, la intoxicación más frecuente ocurre cuando el individuo ingiere cantidades excesivas de esta sustancia por el consumo de bebidas alcohólicas fermentadas y/o destiladas.

Los tipos de muestras generalmente usados para estas determinaciones son:

sangre (alcoholemia), orina, otros fluidos biológicos, vísceras, alimentos, etc.

Las muestras de sangre se obtienen por punción venosa, teniendo la precaución de no utilizar alcohol como antiséptico local ni otras soluciones constituidas por sustancias reductoras que puedan interferir en la determinación posterior. Se recomienda usar solución jabonosa o solución acuosa de cloruro mercúrico

0.05%.

La conservación de las muestras de sangre requiere el empleo de recipientes de plástico con cierre hermético (no usar tapones de goma) conteniendo fluoruro de sodio (anticoagulante y preservador) o bien oxalato y citrato (anticoagulante) y su almacenamiento refrigerado a T = 4ºC.

El fluoruro de sodio impide el desarrollo de microorganismos que pueden consumir o generar etanol. Los tapones de goma contienen vulcanizantes que son sustancias reductoras capaces de dar falsos positivos en los métodos químicos. El cierre hermético es necesario dado el carácter volátil del etanol y además, es importante que no exista cámara de aire en el recipiente de

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recolección de las muestras dado que el oxígeno presente podría oxidar al etanol y también para minimizar pérdidas por volatilización.

2. Marco teórico

El alcohol es la principal droga de consumo por parte de la sociedad. Dos tercios de todos los abusos de substancias están relacionadas con el alcohol. (Giannuzzi, 2006) El alcohol etílico es la sustancia psicoactiva de mayor consumo en el mundo. De acuerdo con el informe mundial sobre el consumo de drogas de la ONU del 2009, se estima que en el mundo cerca de 2.600 millones de personas lo consumen ya sea en forma ocasional, habitual, abusiva o adictiva. En Ecuador, se estima que el 80.7% de los estudiantes universitarios son consumidores habituales de alcohol etílico. El etanol es un alcohol de gran importancia toxicológica dada su acción farmacológica depresora del sistema nervioso central, que cuando se consume en forma continuada y frecuente produce efectos adversos agudos y crónicos en la salud humana. En intoxicación aguda se pueden presentar alteraciones en el sistema gastrointestinal, endocrino y en el equilibrio ácido básico. (uría2004)El consumo de etanol también se ha asociado con la presentación de varias alteraciones sociales como incremento en los índices de violencia intrafamiliar, violencia general, actos delictivos y accidentes de tránsito. (Epetto, 2002) Las vías de penetración posibles de los alcoholes son la digestiva, la respiratoria, y la absorción a través de la piel, es absorbido a partir de los 30 a 60 minutos y hasta 180 minutos, mediante un mecanismo de difusión pasiva, pasando al torrente sanguíneo. En ayunas, la absorción es más rápida en duodeno y yeyuno. Con el estómago lleno, la absorción se retarda. El alcohol, una vez en el torrente sanguíneo, pasa por el hígado, alcanzando su mayor concentración alrededor de los30 minutos en la circulación sistémica (Epetto 2002). Durante la absorción y la distribución se va produciendo también la biotransformación para luego producirse la biotransformación como tal y finalmente la eliminación. En el organismo, el alcohol sufre un proceso de oxidación, que se desarrolla exclusivamente en el hígado, transformándose el etanol en acetaldehído y posteriormente en acetato por medio de la cadena enzimática. Los metabolitos se excretan por vía pulmonar, vía urinaria, por la saliva y por la leche en época de lactancia. (Campos, 2005)Existen varios métodos para determinar la concentración de alcohol en un individuo como pruebas en sangre, orina y aliento, el utilizado en nuestra practica fue la determinación de alcohol en sangre por el método de microdifusión que se realiza en cámaras de Conway, las cualesposeen, en el compartimiento externo, muestra y agente liberador (CO3K2) y, en el interno, el agente atrapante Cr2O7K2 + H2SO4 0,01N. En este caso, se produce la captación y oxidación del etanol hacia ácido acético, forzándose la remoción completa del primer compuesto al cabo de un tiempo y temperatura previamente determinados, donde el dicromato, de color rojo anaranjado, oxida el etanol a acetaldehído y es reducido, a su vez, a cromo (III) ,de color verde ,para luego poder ser medida la absorbancia en un espectrofotómetro UV.(Giannuzzi ,2006 )

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3. Parte

Identificación y cuantificación de alcohol en nuestra muestra problema de sangre.

3.2. Reactivos

Carbonato de potasio 10%

Bicromato de potasio 0.1%

Ácido sulfúrico 50%

Base oleosa hidrosoluble

Agua destilada

3.3. Materiales

Frasco con la muestra problema

Pipetas

Tubos de ensayos

Cámara de Conway

Campana extracto de gases

Mecanismo de reacción

H C 3 OH
H C
3
OH

+ HO

O

Cr
Cr

O

OH

O H C 3 O Cr OH O
O
H C
3
O
Cr
OH
O

+

H O

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de reacción H C 3 OH + HO O Cr O OH O H C 3

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DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 Etanol acido crómico cromato acido de etilo
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18 de abril de
2012
Etanol
acido crómico
cromato acido de etilo
(Éster)
O
O
H C
H C
3
3
H C
3
O
Cr
OH
+
O
Cr
OH
O +
H 2 CrO 3
+
H 2
H O
2
O
O
H O
2
Acetaldehído
inestable
Luego:
H 2 CrO 3
+ H 2 CrO 4
HCrO 3
+
H O
2
OH
+ HCrO 3
CH 2 CHO
+
Cr 6+
H C
3
acetaldehído
estable
Ecuación química balanceada
H2SO4
H2O
K 2 CrO 7
[ H 2 Cr 2 O 7 ]
2H 2 CrO 4
Mezcla sulfocromica
inestable
acido crómico
TOMA DE MUESTRA
Se necesito a una persona de sexo femenino a la cual se le hizo beber una vaso
de vino , a los 30 minutos de ocurrido esto se extrae 2ml de sangre via
endovenosa la cual es llevada a un vial.
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DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 Técnica operatoria 1.-En la parte del compartimento externo

Técnica operatoria

1.-En la parte del compartimento externo de la cámara de conway se coloca 1 ml de sangre .

2.-En el compartimento interno se añade 2ml de solución sulfocromica

3.-se completa el borde de la base

4.- Agregar 1 ml de carbonato de potasio

5.- Tapar la cámara

6.-llevar a la estufa a 50° por 20 minutos

7.- retirar de la parte central una alícuota y completar con agua destilada hasta 2

ml

8.- tomar de esta nueva solución una alícuota de 0,1 ml y llevarlo a una fiola de 10ml y completar hasta el enrase

9.-Leer en el espectrofotómetro a 450 nm .

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Estándares Blanco 1 2 3 4 [Etan 5 10 15 20 ol mg/l] Abs 0.075
Estándares
Blanco
1
2
3
4
[Etan
5
10
15
20
ol
mg/l]
Abs
0.075 0.150
0.225
0.300 0.050
5 10 15 20 ol mg/l] Abs 0.075 0.150 0.225 0.300 0.050 MP = 0.048 UNMSM
5 10 15 20 ol mg/l] Abs 0.075 0.150 0.225 0.300 0.050 MP = 0.048 UNMSM
5 10 15 20 ol mg/l] Abs 0.075 0.150 0.225 0.300 0.050 MP = 0.048 UNMSM
5 10 15 20 ol mg/l] Abs 0.075 0.150 0.225 0.300 0.050 MP = 0.048 UNMSM
5 10 15 20 ol mg/l] Abs 0.075 0.150 0.225 0.300 0.050 MP = 0.048 UNMSM
5 10 15 20 ol mg/l] Abs 0.075 0.150 0.225 0.300 0.050 MP = 0.048 UNMSM

MP = 0.048

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Por regresión lineal

Y = BX + A

Donde B = 0.015 y A = 0

[

OH ] = [ 0.050 -0.048 ]

[

OH ] = 0.002

0.002 = 0.015X

X = 0.133 mg

0.133 ---------- 0.1 mL de SSC

X

---------- 2 mL de SSC

X

= 2.66 mg OH

2.66 mg OH --------------------------------- 1 mL de sangre

X

---------------------------------

1 L

X

= 2.66 g de OH/L de sangre

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DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012 4. Discusión La tasa de alcoholemia permitida en

4. Discusión

La tasa de alcoholemia permitida en sangre es por debajo de 0,5g/L. si tomamos este valor como referencia, esto quiere decir que la muestra de nuestro paciente se encuentra con los niveles ligeramente elevados de alcohol etílico, al sobrepasar esta escala con 0,27%. Durante años los estudios efectuados han demostrado que existe una relación directa entre la concentración de alcohol en la sangre y algunos factores que pueden alterar o dar falsos positivos, por ejemplo Petkovié (2005 ) nos dice , que para poder diagnosticar a una persona con intoxicación leve ,la concentración de alcohol en sangre debe estar entre 0,5-1 ,5g/L ,es importante saber que estos valores van a depender de la edad del sujeto, su historial de consumo de alcohol y grado de desarrollo de tolerancia para el consumo de alcohol ,también otros factores como las bajas temperaturas pueden favorecer la toxicidad del alcohol .Así mismo ,Campos(2005 ) manifiesta que la concentración de alcohol varía dependiendo del metabolismo de cada persona y la cantidad de fluido que se encuentre en su organismo ,es así que una persona que se encuentre ligeramente deshidratada la concentración de alcohol en su sangre será mucho más elevada ,es así que podría generar falsos positivos. Creemos que todos estos factores pueden ser los agentes causales de que en

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los resultados obtenidos con la muestra de la sangre resultaran positivos, además debemos tomar en cuenta que la muestra no fue tomada en el momento exacto de consumo de alcohol.

5. Conclusión

La concentración de alcohol en sangre se puede cuantificar por espectrofotometría.

La concentración de alcohol en sangre es 2.66 g/L

6. Cuestionario

1. ¿Indicar las dimensiones de la cámara de conway cell tanto en material de vidrio, porcelana y plástico y para que sirva?

(1)La cámara de conway es un aparato en forma de capsula de petri con tapa esmerilada. Concéntricamente tiene soldado un pequeño compartimiento circular de manera que queda un espacio pequeño interior y otro exterior. En la cámara exterior de pone un liquido que contiene un gas de tensión de vapor relativamente alta, y en el espacio interior un liquido que sea capaz de absorber este gas, con lo que el gas se difundirá desde el anillo exterior a la cámara interior sin que para ello sea preciso aplicar temperaturas elevadas.

(1)

La cámara de conway cell sirve para la microdifusion de la sangre y se utiliza en la determinación por microdifusion del metanol, etanol y monóxido de carbono en sangre. La cámara de conway sirve también para la microdifusion de otras muestras como orina que contengan un gas de tensión de vapor relativamente alta. (2,3).

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Las dimensiones de una cámara de conway

Foso

profundidad

de

4 mm.

Cámara

profundidad diámetro

es

son: 10 x
son:
10
x

60

mm.

Centro

de

profundidad

diámetro

es

4x 35 mm

60 mm. Centro de profundidad diámetro es 4x 35 mm UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág. 10
60 mm. Centro de profundidad diámetro es 4x 35 mm UNMSM |Farmacia y Bioquímica Pág. 10

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DETERMIANCIÓN DE ETANOL 18 de abril de 2012   Cámara Cámara de de conway conway de
 

Cámara

Cámara

de

de

conway

conway

de

Cámara Cámara de de conway conway de Bibliografía de 1. Métodos quilométricos y otros

Bibliografía

de

1. Métodos quilométricos y otros métodos volumétricos de análisis clínicos. Pagina web:

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%20de%20conway&f=false Visitado: 17/04/12

2. Determinación de monóxido de carbono por microdifusion por espectofotometria según Gettler y Freimuth. Página Web: http: //www.biol.u nlp.edu.ar/ toxicologia/ guiastp/guia_tp1/monoxido carbono.html. Visitado: 17/04/12

3. Impacto de la contaminación atmosférica en la salud. Página Web:

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