UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE PESQUERA Departamento de Acuicultura e Industrias Pesqueras

Curso: Tema: Profesora: Grupo: Mesa:

Microbiologa Pesquera Equipos y materiales del laboratorio de microbiologa Nancy Martnez Ordinola A* 3

Fecha de realizacin: 02 de abril del 2013 Fecha de entrega: 14 de abril del 2013

alumno:

Ramos Herencia, Jorge Andr

20090432

I.

INTRODUCCION

La microbiologa es la ciencia encargada del estudio de los microorganismos, seres vivos pequeos (de mikros "pequeo", bios, "vida" y logos, "estudio"), tambin conocidos como microbios. Es la rama de la biologa dedicada a estudiar los organismos que son slo visibles a travs del microscopio: organismos procariontes y eucariontes simples. Son considerados microbios todos los seres vivos microscpicos, estos pueden estar constituidos por una sola clula (unicelulares), as como pequeos agregados celulares formados por clulas equivalentes (sin diferenciacin celular); estos pueden ser eucariotas (clulas con ncleo) tales como hongos y protistas, procariotas (clulas sin ncleo definido) como las bacterias]. Sin embargo la microbiologa tradicional se ha ocupado especialmente de los microorganismos patgenos entre bacterias, virus y hongos, dejando a otros microorganismos en manos de la parasitologa y otras categoras de la biologa. Los laboratorios microbiolgicos constituyen medio ambientes de trabajo especiales, generalmente nicos, que pueden presentar riesgos de enfermedades infecciosas identificables para las personas que se encuentren en dichos laboratorios. Es por ello que la primera prctica realizada nos concentramos exclusivamente en el reconocimiento de materiales y equipos de laboratorio. Para poder estar familiarizados con dichos materiales, usarlos y manejarlos con gran facilidad y aprender a ser ms cuidadosos con ellos. En el informe presente se describe ciertos materiales identificados en el laboratorio, es decir los materiales y equipos que ms se utilizar en los prximos laboratorios, sin embargo existen materiales de los cuales ya hemos hecho uso en cursos anteriores y de los cuales ya tenemos conocimiento de su uso.

II.

OBJETIVO:

Reconocer y aprender el manejo de los materiales y equipos ms comnmente usados en el laboratorio de microbiologa.

III.

MATERIALES Y EQUIPOS:

Autoclave Estufa de cultivo Estufa de esterilizacin Centrfuga

Balanza Bao mara Microscopio Tubos de ensayo Placas petri Erlenmeyer y matraces Probeta

IV.

REVISION BIBLIOGRAFICA

Algunos de los instrumentos ms utilizados en los laboratorios, son elaborados de vidrio resistente a altas temperaturas, por su alto contenido de dixido de silicio, bajo lcali, xido brico y vestigios de otros xidos, lo que condiciona su escaso coeficiente de dilatacin, teniendo una gran aplicacin en la fabricacin de materiales de laboratorio, uno de los ms conocidos es .el vidrio PYREX. As como los elaborados de distintos metales pesados como platino, mercurio, aluminio, cobre que les otorgan caractersticas como buenos conductores del calor o porque al medio ambiente son muy manejables sin alterar su composicin.

Autoclave:
Es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C. Una temperatura de 121 C (una atmsfera de sobrepresin) con un tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos formadores de esporas. Aparato provisto de una llave y manmetro para regular la presin y temperatura que deseemos utilizar. El vapor por s solo no es esterilizante. Se somete en el interior a una presin mayor que la atmosfrica, que aumenta la temperatura del vapor, siendo de esta forma como se consigue la destruccin de todos los microorganismos. Este vapor saturado debe estar sometido a una temperatura determinada y durante un tiempo necesario. El vapor penetra en la cmara de esterilizacin y alcanza cierta presin: la deseada. Este vapor se condensa por contacto con los materiales fros. Esta condensacin libera calor humedeciendo y calentando simultneamente cada material. Por ello es necesario que no haya aire en el autoclave, lo que se consigue succionando este por medio de un sistema de vaco e introduciendo el vapor de forma muy rpida, para as forzar la salida del aire.

Del tiempo, temperatura y presin usadas en la esterilizacin depende el xito alcanzado. Generalmente los datos presin y temperatura son fijados, y el nico factor que se vara es el tiempo. Los materiales necesitan diferentes tiempos de esterilizacin dependiendo de su textura, porosidad, y otras caractersticas propias de cada material.

Estufa u Horno de esterilizacin:

Para esterilizar por intermedio del aire caliente es necesario colocar los objetos en aparatos especiales llamados ESTUFAS. Y llevar el aire interior a una temperatura entre 150 y 190 C. Uno de los primeros aparatos utilizados para este fin fue el horno de Pasteur, que luego se sustituy por estufas de aire caliente. Estas constan de una doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia elctrica circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperaturas variables, siendo la ms aconsejadas 170 C para el instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores. Se mantiene una temperatura estable mediante termostatos de metal denominados de par bimetlico, consistente en dos metales de distinto coeficiente de dilatacin. Cuando uno se dilata, el otro no lo hace y se arquea. Uno de los extremos de ste dispositivo se halla en contacto con un interruptor que corta la alimentacin de la resistencia calefactora.

Bao Mara:
Este equipo tiene una salida de aire presentan un termostato que regula la temperatura del agua presenta un piso para colocar los materiales que se desea.

Centrfuga:
Se utiliza en la separacin de slidos suspendidos en lquidos. Hay centrfugas de tamao y velocidades variables, la velocidad, se mide en revoluciones por minuto, La velocidad a la cual sedimentaran las partculas en un lquido dependen de varios factores:

Tamao de la partcula. El peso de la partcula. La viscosidad del lquido. La fuerza gravitacional.

Tubos de Ensayo:

Se emplean como recipientes de medios de cultivo. Deben ser de vidrio neutro, paredes gruesas y equilibradas, de preferencia sin rebordes para facilitar el taponamiento.

Placas Petri:
Cajas cilndricas, se emplean como recipientes de medios de cultivo para el cultivo y aislamiento de microorganismos. Las ms usadas son las de 10, 15 20 mm x 100 mm.

Erlenmeyer:
Recipientes de forma cnica y cuello corto, volumtricos tiles para la preparacin y almacenamiento de soluciones, colorantes, reactivos, medios de cultivos, etc.

Probeta:
Recipientes graduados de forma cilndrica y capacidad variable, con base para la esterilidad. Generalmente se encuentran graduadas.

 Esptula de Drigalsky

Es una herramienta que consiste en una lmina plana de metal con agarradera o mango similar a un cuchillo con punta roma. Segn su uso, En qumica, Es uno de los materiales de laboratorio. Se utiliza para tomar pequeas cantidades de compuestos reactivos que son bsicamente polvo. Se suele clasificar dentro del material de metal y es comn encontrar en recetas tcnicas el trmino punta de esptula para referirse a esa cantidad aproximadamente.

Mechero Bunsen

Un mechero o quemador Bunsen es un instrumento utilizado en laboratorios cientficos para calentar o esterilizar muestras o reactivos qumicos. Fue inventado por Robert Bunsen en 1857 y provee una transmisin muy rpida de calor intenso en el laboratorio. Es un quemador de gas del tipo de premezcla y la llama es el producto de la combustin de una mezcla de aire y gas. El quemador tiene una base pesada en la que se introduce el suministro de gas. De all parte un tubo vertical por el que el gas fluye atravesando un pequeo agujero en el fondo de tubo. Algunas perforaciones en los laterales del tubo permiten la entrada de aire en el flujo de gas (gracias al efecto Venturi) proporcionando una mezcla inflamable a la salida de los gases en la parte superior del tubo donde se produce la combustin, muy eficaz para la qumica avanzada.

Microscopio

El principio del microscopio ptico es el mismo que el de la lupa. Pero, en este caso, se logran mayores aumentos gracias a la utilizacin de dos lentes: el objetivo y el ocular. En un microscopio hay habitualmente ms de un objetivo, con el fin de poder observar una misma muestra con distintos grados de ampliacin.

CUESTIONARIO N 1

1. Qu es esterilizacin? Esterilizacin es la eliminacin de toda forma de vida de un medio o material. Es un proceso de destruccin de los microorganismos, sean cuales sean sus caractersticas, siendo lo mismo que sean patgenos o no y que estn sobre el material dentro de l. Esto es llevado a cabo generalmente por medios fsicos, por ejemplo: filtracin, o por muerte de los organismos por calor; tambin por productos qumicos u otra va. Esta definicin excluye por lo tanto cualquier tcnica que resulte solamente en un dao a los microorganismos o atenuacin de la actividad de cualquier tipo. Se sabe que los agentes esterilizantes provocan prdida de la viabilidad en los microorganismos (fsicos y qumicos) y una separacin de stos de la sustancia lquida (filtracin).

2. Describir las principales formas de esterilizacin. Material y equipo. Las formas/mtodos de esterilizacin pueden ser de 3 tipos: a. Por destruccin total de microorganismos b. Por muerte o inactivacin c. Por eliminacin con medios fsicos. Por destruccin total se entiende un proceso muy violento, que casi siempre implica calentamiento apreciable del material, como ocurre con la aplicacin de una llama, que es lo que se hace en el laboratorio cuando flameamos las bocas de tubo de ensayo o erlenmeyers. Otra manera de destruir contaminantes es con el uso de poderosos agentes oxidantes. Por supuesto sta metodologa, aunque es efectiva, est muy restringida en su empleo.

La muerte o inactivacin significa la eliminacin de microorganismos sin que exista necesariamente desintegracin de las clulas. Se puede efectuar por calentamiento, seco o hmedo, por radiaciones o por agentes qumicos. El calor hmedo, generalmente en forma de vapor bajo presin, es muy til y de gran valor en la esterilizacin en el laboratorio, que se efecta en autoclave, o en la industria cuando se esterilizan los medios de cultivo y los equipos de fermentacin. En el caso de los autoclaves, se pueden alcanzar presiones de 1 a 3 atmsferas.

En escala grande el equipo de produccin es esterilizado con vapor saturado bajo presin, y la presin requerida debe ser alcanzada en todas las partes del equipo y el aire debe ser purgado totalmente del sistema (como ocurre tambin en el caso de los autoclaves) porque la transferencia de calor disminuye mucho en ese caso. Despus de la esterilizacin se mantienen las condiciones aspticas, haciendo pasar vapor por las vlvulas y sellos. La eliminacin fsica est restringida a la esterilizacin de gases lquidos, y es fundamentalmente llevada a cabo por filtracin mediante filtros absolutos o filtros fibrosos. Los filtros absolutos son de materiales cermicos, de vidrio o de metal sinterizado con poros tan pequeos que la penetracin de los microorganismos no es posible. Los filtros fibrosos no son absolutos y el material filtrante puede ser lana de vidrio, amianto y esteres de celulosa, siendo las fibras de un dimetro variable de 0.5 a 15 micrones.

Todos los son distinto del calor. protenas, las procesos

Calor microorganismos susceptibles, en grado, a la accin El calor provoca desnaturalizacin de fusin y desorganizacin de membranas y/o oxidativos irreversibles en los microorganismos. efectividad del calor mtodo de esterilizacin de: Temperatura Tiempo exposicin

La como depende

de

 Calor Hmedo El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones:

El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (DNA, RNA, protenas, etc) son producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto, reacciones inversas podran daar a la clula a causa de la produccin de productos txicos. Adems, las estructuras secundarias y terciarias de las protenas se estabilizan mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos por el agua a altas temperaturas. El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Por lo que, los materiales hmedos conducen el calor mucho ms rpidamente que los materiales secos debido a la energa liberada durante la condensacin.

El autoclave es el artefacto que se utiliza en los laboratorios para esterilizar por el mtodo de calor hmedo. Ventajas:

Rpido calentamiento y penetracin Destruccin de bacterias y esporas tiempo No deja residuos txicos Hay un bajo deterioro del material Econmico

en corto

expuesto

Desventajas: No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.

Calor Seco El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusin de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra ms lentamente que el vapor de agua en materiales porosos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja. Esto se debe a que las protenas se estabilizan mediante

uniones puente de hidrgeno intramoleculares que son ms difciles de romper por el calor seco. La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin. Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no pueden ser esterilizados a ms de 160C. Ventajas:

No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas: Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

Dentro de los compuestos qumicos podemos encontrar agentes esterilizantes, desinfectantes y antispticos. La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan.
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Concentracin: vara con el tipo de agente y de microorganismo, pues una misma concentracin del agente puede producir un efecto diferente en distintos microorganismos. Tiempo: los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo. pH: afecta tanto a los microorganismos como a los agentes qumicos. El aumento de pH por encima de 7 incrementa la carga negativa de los microorganismos afectando la concentracin del agente sobre la clula. El pH determina el grado de disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a menor disociacin mayor permeabilidad y mayor efectividad.

Aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, lo que provoca modificacin irreversible de enzimas e inhibicin de la actividad enzimtica (Adicin nucleoflica de grupos -NH2 y -SH). Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Destruyen esporas. El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo en fro. El formaldehido como gas se utiliza para descontaminar edificios, ambientes, etc. El formaldehdo gaseoso se obtiene por calentamiento del para formaldehido (OH (CH2O)n-H), lo que produce las despolimerizacin de este compuesto y la liberacin de formaldehdo. El formaldehido tiene la desventaja de ser muy irritante y perder actividad en ambientes refrigerados.

Perxido de Hidrgeno: Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres. Actualmente, el perxido de hidrgeno gaseoso se est utilizando como desinfectante de superficies o descontaminante de gabinetes biolgicos debido a que no posee las propiedades txicas y cancerigenas del xido de etileno y formaldehido.

 BIBLIOGRAFIA

http://www.microbiologia.com.ar/

Pgina web revisada el da: 10 de abril del 2013, a horas: 7:30 pm.

http://www.biologia.edu.ar/microind/esterilizaci %C3%B3n.htm Monografa redactada por los doctores Rodolfo Ertola, Osvaldo Yantorno y Carlos Mignone, Programa Regional de Desarrollo Cientfico y Tecnolgico de la OEA Pgina web revisada el da: 9 de abril del 2013, a horas:5:20 pm.

http://www.monografias.com/trabajos24/esterilizacion-laboratorio/esterilizacionlaboratorio.shtml Pgina web revisada el da: 9 de abril del 2013, a horas: 3:50 pm.

Esterilizacin (Reportes). Disponible en: www.esterilizar.com Pgina web revisada el da: 9 de abril del 2013, a horas: 3: 30 pm.