UNIVERSIDADE PAULISTA- UNIP

Relatrio Cintica Enzimtica

Nomes: Alexandre A. Fittipaldi Isadora Vitti Felo Marcia Aparecida Vieira Rafaela de Souza Pereira Sabrina G. Colomera Ferreira Silas Gomes

R.A. B401IH-8 B30761-7 B27AIB-9 B39DJE-5 B075AE-0 B08EED-8

BAURU - SP

RELATRIO AULA PRTICA CINTICA ENZIMTICA

Introduo

Na aula prtica realizada no dia 08/04/2013, foi realizado experimentos utilizando a enzima invertase (sacarase), onde essa enzima foi obtida a partir de levedo (fermento de po ou Saccharomyces cerevisiae). Essa enzima catalisa a hidrlise do acar da cana (sacarose). A sacarose invertida em glicose + frutose por invertase. Durante a explicao e introduo da prtica do dia, foi explicado pela professora que atravs da reao obtida entre o cido 3,5 dinitrosaliclico (DNS) e os aucares redutores (glicose e frutose) observaria-se a gerao de complexos de colorao alaranjada, ou seja quanto mais laranja mais presena de glicose. A proposta para a presente prtica, seria de apresentar tambm como se comportaria a enzima em vrios nveis de pH.

Apresentao dos Itens do Relatrio

1) Apresentar as tabelas completas

TABELA III TUBO TAMPO (mL) 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 ENZIMA (mL) 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 SACAROSE (mL) ZERO 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 [SCAROSE] INTENSIDADE (mM) DE COLORAO ZERO 20 40 60 80 100 120 Amarelo claro Amarelo escuro Laranja claro Laranja intenso Laranja escuro Marrom claro Marrom

1 2 3 4 5 6 7

Aps adicionar a soluo de enzimas e serem incubadas por 10 minutos colocarmos 1 ml de DNS em cada tubo, observamos que as coloraes foram alternadas aps ter sofrido aumento de temperatura em banho maria por 5 minutos.

TABELA IV TUBOS 1 2 3 4 5 pH DO TAMPO 2 3 4,7 7 10 INTENSIDADE DE COR Laranja (Tubo quebrou durante experimento) Laranja Amarelo escuro (erro de pH) Laranja

Notou-se que no tubo de n 4 houve colorao diferenciada, onde foi realizado testes pela professora e chegou-se a concluso de que ocorreu erro de preparao no tampo, ou seja erro no pH.

TABELA V TUBOS 1 2 3 4 5 TEMPERATURA (C) 0 25 40 60 100 INTENSIDADE DE COR Amarelo Claro Amarelo Escuro Laranja Claro Laranja Escuro Amarelo Claro

No foi possvel, pois ocorreu erro durante a execuo do experimento pelo motivo de

aps ter trabalhado com as enzimas na temperatura proposta, colocou-se o DNS e introduzimos os tubos em banho maria por 5 minutos. Logo aps o tempo proposto para o experimento, observou-se que no houve nenhum tipo de reao, onde logo aps comeamos a fazer um check list e notamos que o erro estava em no ter deixado a enzima agir por 10 minutos e que aps colocarmos os tubos no banho maria havamos matado as enzimas, ou seja no houve catlise enzimtica.

2) Qual procedimento foi utilizado para impedir a continuidade da ao de catlise enzimtica, para que fosse possvel fazer a dosagem de produtos formados? Resposta: Foi utilizado o aquecimento.

3) Por que de se esperar um aumento na velocidade inicial da reao como aumento na concentrao de enzima, como observados nos resultados do exerccio 1? Resposta: Porque a enzima est em baixa concentrao em tampo com alta concentrao, onde aps ser adicionado maior quantidade de enzima e diminuda a concentrao (quantidade) de tampo, ocorre o aumento da catlise enzimtica.

4) Explique por que no ocorre um aumento significativo da velocidade inicial da reao, aps determinada concentrao de substrato. Resposta: Por que com o aumento do substrato, as enzimas que esto atuando esto ocupadas em outros substratos, ou seja existe a necessidade de elevar a quantidade de enzimas para que a velocidade de reao aumente. (Quanto mais substrato, mais enzima necessrio para realizao da catalise)

5) Qual a regio de pH timo para esta enzima? De que forma o pH influi sobre a atividade da enzima? Resposta: O melhor pH para essa enzima pH 4,7.

6) Por que a elevao de temperatura at cerca de 60C provoca um aumento da velocidade da reao, enquanto que acima desta temperatura verifica-se uma diminuio abrupta da velocidade? Resposta: A influncia da temperatura sobre a cintica da catlise enzimtica comumente dividida em duas fases distintas: a primeira, em que, aumentos de temperatura levam a aumentos de velocidade de reao, pelo simples fato de aumentar energia cintica e a entropia das molculas presentes no meio reacional. Esse efeito pode ser observado num intervalo de temperatura compatvel com a manuteno da estrutura espacial da enzima. Temperaturas mais altas levam a desnaturao da enzima por alterarem as ligaes qumicas que mantm a estabilidade da molcula e a estrutura

tridimensional. Se a temperatura fornecida for capaz de romper as ligaes hidrognio, estas que so relativamente resistentes ao calor, desencadeiam-se uma seqncia de alteraes estruturais, levando a enzima a um novo estado conformacional ou a um estado sem estrutura definida. A temperatura que provoca a desnaturao da enzima, geralmente, est pouco acima da temperatura tima da mesma. Contudo, pode-se afirmar que boa parte da mesma foi desnaturada, evidenciando que 60C j ultrapassou a temperatura tima da invertase.