ODONTOGNESIS Lina Quintero, Erika Simanca, Desire Champsaur, Liliana Otero. Pontificia Universidad Javeriana.

La sealizacin reciproca epitelio-mesnquima acta para controlar el desarrollo del diente desde la iniciacin hasta la mineralizacin del germen dental 1 . Las primeras seales que inician este proceso, provienen del epitelio oral y de clulas derivadas de la cresta neural 2 . Seales epiteliales especficas inducen la expresin regional de diversos genes en las clulas ectomesenquimatosas del primer arco branquial 3 . El patrn del diente est determinado por la expresin regional de genes ectomesenquimales, pero esta expresin es producida en repuesta a las seales epiteliales. Adems, las recombinaciones regionales reciprocas de incisivos/molares llevadas a cabo antes de E10.5 demuestran que el epitelio determina el tipo del diente, pero despus de funcin . Usando la expresin de Barx1, Dlx2 y Dlx5 como marcadores proximales (molar presuntivo) y Msx1 como marcador distal (incisivo presuntivo) y como marcador de clulas ectomesenquimales mandibulares, se ha demostrado que antes de E11.5, la expresin de estos genes es dependiente de las seales provenientes del epitelio, pero a partir de E11.5, la expresin es independiente del epitelio. Entre E9.5E10.25, la respuesta de clulas del ectomesnquima a las seales del epitelio no tienen restriccin, y todas las clulas expresan Msx1, Dlx2, Dlx5 y Barx1 5 . Todas las clulas ectomesenquimales del arco mandibular son igualmente competentes para responder a Fgf8 y activar la expresin de Msx1, Barx1, Dlx2 o Dlx5, antes de E10.5, sin importar la posicin, esto sugiere que las clulas de la cresta neural, que pueblan el arco mandibular, no son preespecficas con respecto a la posicin proximodistal y el destino odontognico. Sin embargo, el factor Fgf8 parece tener propiedades de sealizacin que cambian entre E10 y E10.5 6 . La aparente falta de especificacin odontognica de clulas de la cresta neural, coincide con los resultados de experimentos que muestran que la identificacin de un diente, puede ser cambiada por medio de la inhibicin de las seales de Bmp y de Barx1, en el mesnquima presuntivo del incisivo en el estado E10 7 . Este hecho tambin se ve reflejado con los experimentos que muestran que los dientes pueden desarrollarse cuando se recombina el epitelio oral con el ectomesnquima no oral del arco mandibular, o con las clulas de la cresta neural no pertenecientes al primer arco branquial. Las clulas de la cresta neural no son preespecficas con respecto a su potencial odontognico. Es probable que todas las clulas de la con la apropiada cresta neural sean odontognicas cuando son presentadas
4

E10.5,

el

ectomesnquima es el responsable de esta

sealizacin instructiva, mas especficamente por aquellas producidas por el epitelio oral. Por otra parte las clulas de la cresta neural de la zona del rostro, tienen la capacidad de formar estructuras del maxilar inferior cuando son provistas de un ambiente permisivo en el arco branquial 8 . En ratones, el desarrollo del diente en el primordio maxilar est restringido a la formacin de molares (los incisivos se forman de los procesos nasales), los cuales deben ocluir con los correspondientes molares de la mandbula proximal. Los genes Dlx son diferencialmente expresados en el primordio ectomesenquimal maxilar y mandibular. Dlx1 y Dlx2 son expresados en el ectomesnquima proximal de ambos primordios mientras otros genes Dlx, como el Dlx3, Dlx5, y Dlx6 son predominantemente expresados en el primordio mandibular 9 . Las anormalidades craneofaciales de Dlx5 en ratones mutados, no incluyen ninguna estructura esqueltica derivada del ectomesnquima del arco maxilar consistente con la ausencia de la expresin de Dlx5 en el arco maxilar. A pesar de la coexpresion de las clulas ectomesenquimales tanto en el primordio maxilar como en el mandibular, la doble mutacin de Dlx1 y Dlx2 resulta en la ausencia del proceso de iniciacin de los molares maxilares, ya que los molares mandibulares se desarrollan normalmente. Similarmente, la mutacin del gen activin A, el cual es inicialmente expresado en partes del ectomesnquima que marcan la iniciacin de todos los dientes, resulta en el desarrollo normal de los molares maxilares, pero el desarrollo del resto de dientes es detenido en la etapa de casquete. Estos resultados indican algunas diferencias fundamentales entre el desarrollo temprano de los primordios molares maxilares y mandibulares, sin embargo estos hallazgos requieren ms investigacin 10 . Se ha encontrado que la expresin de Dlx2 y Dlx5 es regulada por seales epiteliales en el estado E10.25. Fgf8 es una de las molculas responsables de la expresin de estos genes. El epitelio maxilar y mandibular y Fgf8 exgeno pueden inducir la expresin de Dlx2 en el ectomesnquima maxilar y mandibular, pero no pueden inducir la expresin de Dlx5 en el ectomesnquima maxilar. Las clulas ectomesenquimales del maxilar superior son capaces de responder a las seales epiteliales y de expresar Dlx2, pero a las mismas seales. En E10.25, el epitelio maxilar es capaz de inducir la expresin de Dlx5 en el ectomesnquima mandibular, pero no puede hacerlo en el epitelio maxilar. Estos resultados implican que las clulas ectomesenquimales del primer arco branquial tienen propiedades intrnsecas relacionadas a su posicin rostro caudal. Adems las clulas ectomesenquimales maxilares se comportan de forma diferente a las clulas ectomesenquimales mandibulares, en su respuesta a las seales epiteliales. son incapaces de expresar Dlx5 en respuesta

Experimentos por recombinacin, muestran que el epitelio del primer arco branquial es nico ya que contiene seales instructivas para la odontogenesis, y que estas seales son capaces de llevar cualquier patrn informativo presente en las clulas de la cresta neural 11 . Las interacciones reciprocas entre el epitelio y el mesnquima controlan todos los pasos de la odontognesis. La morfognesis coronal, es decir, el nmero de cspides, su tamao y posicin, es especfico para cada molar. Los experimentos de reasociacin de tejidos, han mostrado que la morfognesis coronal esta controlada por el mesnquima dental. La histognesis epitelial inicia en el estadio de brote o botn dado que ya se pueden identificar morfolgicamente 2 tipos celulares. Las que estn en contacto con la membrana de base son elongadas, mientras que las clulas epiteliales internas son pequeas y redondas. En el estadio de casquete, esta histognesis epitelial se vuelve ms compleja: se diferencia el epitelio dental interno, el externo, el retculo estrellado y los ndulos primarios del esmalte. Los mecanismos moleculares que controlan esta histognesis epitelial implican interacciones clula a clula, clula a matriz celular as como molculas de sealizacin. En el estado de botn se adquiere nueva informacin posicional. Las clulas epiteliales adaptan su morfologa para estar con o sin contacto con una membrana basal, y cambian nuevamente en el estadio de casquete, cuando se localizan en las regiones del epitelio dental interno o externo. Este cambio tardo es controlado por el mesnquima, sugiriendo que las especificidades regionales pueden existir en el mesnquima. El mesnquima dental, as como las clulas mesenquimales en la semana 14 inducen la formacin de los ndulos primarios del esmalte, indicando que no se requiere una organizacin especfica en el mesnquima para esta formacin. Sin embargo, la proporcin de piezas multicspides es mucho mayor cuando las clulas epiteliales son reasociadas con mesnquimas intactos en lugar de reasociarlas con clulas mesenquimales solamente, lo que sugiere que la disociacin del mesnquima tiene consecuencias en la funcionalidad de los ndulos primarios del esmalte 12 . La posicin dental y la morfognesis dental son procesos que estn determinados genticamente. La morfognesis es el proceso por el cual la lmina dental genera un diente con caractersticas morfolgicas. La morfognesis dental envuelve diferentes etapas: 1. lamina dental, 2. brote, 3. casquete, 4. campana temprana, 5. campana tarda, 6. Folculo dentario 13 .

Alrededor de las seis semanas se produce la diferenciacin de la lmina dental, e inicia la odontognesis. La lmina epitelial o engrosamiento epitelial de la mucosa del estomodeo se invagina dentro del mesenquima subyacente, formando una cinta epitelial o lmina vestibular o bucal. En el extremo de la lmina dental se van formando engrosamientos esfricos o botones dentarios en respuesta a una condensacin del mesnquima adyacente 14 . Al finalizar la sexta semana los rebordes de los futuros maxilares superior e inferior son formaciones macizas, que no muestran subdivisiones en labios y encas. El maxilar inferior tiene osificacin mixta, yuxtaparacondral (cuerpo mandibular), el cual; aparece entre la sexta y la sptima semana, y la rama es endocondral (con aparicin entre la 12 y 13 semana). El maxilar superior comienza su osificacin al terminar la sexta semana, a partir de los puntos de osificacin situados por fuera de cartlago nasal, uno a nivel anterior denominado premaxilar y otro posterior denominado postmaxilar, el tipo de osificacin es intramembranosa 15 . El gen homeobox Msx-1 ha demostrado ser necesario para el desarrollo dental 16 . La expresin de Msx1 inicia en las clulas mesenquimales de la papila y del folculo dental. El gen Msx-1 tambin es necesario para el desarrollo del paladar 17 . En ratones transgnicos en los cuales se produce la mutacin de Msx-1, los descendientes nacen con paladar fisurado y anodoncia completa. El gen Msx-1 es expresado en clulas mesenquimales derivadas de la cresta neural, en el proceso facial, en el
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mesnquima alrededor

de

la

morfognesis

dental

en

las

extremidades . Se expresan Msx1 y Msx2 ampliamente en muchos rganos; particularmente en los sitios dnde hay interacciones epitelial-mesenquimales. Se expresan Msx1 y Msx2 fuertemente en las regiones craniofaciales en vas de desarrollo. La expresin de Msx2 es perceptible en la semana 7.5 del desarrollo embrionario humano. En la fase de desarrollo el germen del diente, Msx2 es perceptible en la lmina vestibular, el epitelio dental y el mesnquima 19 . Se ha demostrado la distribucin temprana de colgeno, fibronectina y tesnacina durante la morfognesis dental 20 . Al parecer la tesnacina juega un papel importante en las

interacciones de tejido que maneja el desarrollo temprano de rganos embrinicos y de los folculos dentales 21 . Esta glicoproteina esta asociada con la capacidad de diferenciacin de clulas formadoras de tejidos duros 22 . YY1 activa endgenamente la expresin del gen Msx2. BMP4 regula la expresin de Msx2 en el tejido embrinico y YY1 es el mediador de la actividad de BMP4. Las funciones de YY1 como un activador para el Msx2, y su regulacin independiente de la va BMP4, puede ser requerida durante la morfognesis temprana craneofacial y de las extremidades 23 .

Otros factores que estn involucrados en la diferenciacin celular esqueltica son el Cbfa1 (factor unido al ncleo), un gen maestro para el hueso. Cbfa1, Msx2 y Dlx5 funcionan tambin como controladores de la expresin de osteocalcina. 24 En contraste la expresin de Dlx1 y Dlx2 en el mesnquima del arco maxilar y mandibular, est restringida a las regiones donde se desarrollar el futuro molar. En la morfognesis dental, la expresin de Lhx 6 y Lhx7 es nica y est restringida al mesnquima de la cresta neural y al medio oral. Fgf8 induce la expresin de Lhx 6 y Lhx7, e induce la cascada de la iniciacin dental. BMP4 y Shh, estn relacionados con la posicin del germen dental. La expresin de Pax 9 es inducida por Fgf8 y represada por Bmp 4, Bmp4 es capaz de inducir Msx1. Msx1 est relacionado con la regin de incisivos, mientras Barx 1 con la de molares. Por otro lado mutaciones a nivel de Lef-1, Msx-1 y Pax-9 resultan en el bloqueo a nivel del estadio de campana. Muchos factores de transcripcin son expresados en el epitelio oral, entre estos se encuentran: Otlx2, Dlx2, Msx1, Msx2, Shh, Bmps, y Fgfs. La transicin entre la etapa de brote y la etapa de campana parece ser un paso critico en la morfognesis dental (E15-16) 25 , y marca la aparicin del desarrollo de la corona de los dientes. El sitio de la punta del diente donde se produce el comienzo del doblamiento del epitelio un centro de sealizacin que marca la formacin de los nudos del esmalte. La expresin restringida de las seales pertenecientes a las familias de las BMP, FGF, Hh, y Wnt han sido reportadas por jugar un papel importante en la formacin del nudo del esmalte. El nudo del esmalte tiene un papel regulador en la forma del diente y su induccin es un prerrequisito para que el diente avance a la etapa de campana. El nudo del esmalte es una estructura que desaparece por apoptosis, luego de su apoptosis en dientes con varias cspides, se forman nuevos nudos en el lugar donde van a aparecer las cspides, por lo cual podemos llamarlos primeros y segundos nudos del esmalte respectivamente 26 . Estos nudos secundarios expresan Fhf4 y son removidos por apoptosis como los primeros. La apoptosis de estos nudos est asociada con la expresin de BMP4 en la clula del nudo. Los nudos secundarios son la primera seal para los patrones cuspdeos. Fgf4 puede ser utilizado como un marcador cuspdeo, y expresin indica la aparicin de las cspides, que en ratones se observa hacia la etapa 15. Adems las seales moleculares que regulan la relativa posicin de las cspides se activan inmediatamente despus de la apoptosis de los nudos primarios. Mientras la Fgf1 y la p21 son molculas que se activan cuando comienza el desarrollo de las cspides, la expresin de Fgf4 se ve restringida en las puntas de las cspides. La expresin de p21 comienza su funcin alrededor del nudo del esmalte y se encuentra asociada al cese de la proliferacin celular y en compaa

de otras seales como la Fgf9 y la Shh, producen la diferenciacin de los ameloblastos. Se ha reportado, que el desarrollo del diente se ve afectado en la etapa de casquete si se produce la anulacin de los genes Left1, Msx1 y Pax9, mientras que los factores de trascripcin BMP, FGF y Wnt, son dependientes de las vas de sealizacin durante la formacin de la campana del diente. La protena BMP-4 es una buena candidata para la seal mesenquimal induciendo la transformacin desde la etapa de casquete a campana 27 . Particularmente, Las BMPs parecen jugar un mayor papel en la formacin peridica de patrones por medio de la inhibicin de sealizacin de de las FGFs 28 , por lo cual se ha llegado a la conclusin que Fgf4 funciona como un activador cuspdeo, mientras que las BMPs y posiblemente la Shh funcionan como inhibidoras, formacin. El mesnquima dental, as como las clulas mesenquimales de la semana 14 inducen la formacin de los ndulos primarios del esmalte, indicando que no se requiere organizacin especfica en el mesnquima para esto. Sin embargo, la proporcin de piezas multicspides es mayor cuando las clulas epiteliales son reasociadas con mesnquimas intactos en lugar de clulas mesenquimales solas, lo que sugiere que la disasociacin del mesnquima tiene consecuencias en la funcionalidad de los ndulos primarios del esmalte. Es una caracterstica del desarrollo dental humano que al principio se presente un tejido blando bien definido el cual va a guiar la forma primaria del primordio dental. La proliferacin de ste primordio gua a alteraciones en su forma. En el estadio de campana, el primordio de tejido blando sirve de patrn para la posterior deposicin de matriz y la formacin de tejido duro. Durante el desarrollo, este patrn altera la forma y secrecin de la matriz determinando la forma del diente en formacin, as como la proliferacin de los tejidos blandos 29 . La identidad dental en la zona de incisivos es regulada por la expresin de Msx1 y Msx 2 en el ectomesnquima. En la zona de molares los genes Dlx1, 2, 3 y 5; y el gen Barx1 se encuentran presentes en el ectomesnquima. Los ratones que Si el gen Barx1 no se presentan alteraciones en Dlx 1 y Msx 2 presentan alteraciones en la formacin de los molares, pero los incisivos se encuentran normales. expresa en el ectomesnquima distal, los incisivos se desarrollan como molares. Bmp2, 4 y 7; Shh y Fgf4 contribuyen a la formacin del esmalte y actan como un centro de sealizacin; Bmp4 y Runx2, se encuentran en el mesnquima condensado y se presentan en unin con el activin beta A en coexpresin con el Pax9. Cuando no se presenta el gen Msx2 no se forman los dientes. Estos hallazgos explican porque la actividad gentica y la sealizacin guan los patrones regulando la distancia entre las cspides en

diferenciales de crecimiento, y sugieren que genes podran estar asociados en las alteraciones que ocurren en la forma durante la transicin del estadio de botn al de campana. Por otra parte, en el primordio dental de los incisivos humanos se observa un mayor dimetro meso-distal que vestibular. Cuando un incisivo alcanza el borde incisal, deben existir regiones de crecimiento especfico y otras reas donde ocurre un crecimiento sobrenatural a nivel del epitelio interno del esmalte. Posteriormente, la forma del primordio dental se encuentra largamente determinada por la proliferacin de tejido blando; la proliferacin y secrecin de matriz para la formacin de los tejidos duros contribuye a la formacin final de los dientes. La formacin de los tejidos duros inicia con la deposicin de dentina despus de un proceso de induccin recproco para las clulas formativas. Los genes Fgf1 y TgfB se encuentran implicados en la diferenciacin de los odontoblastos. Los genes Bmp2, 4 y 7; Shh, Fgf4, Fgf9 y Wnt10b, se encuentran en el esmalte secundario y actan como centros de sealizacin para la proliferacin diferencial y apoptosis en las regiones de los bordes las cspides durante el desarrollo dental en los ratones. En humanos, la mineralizacin inicial de la matriz de los dientes comienza a nivel especfico de las cspides; por lo tanto, la actividad secretoria de los ameloblastos es regulado diferencialmente y esto se asocia a los diferentes tamaos que pueden presentar dichas cspides. En el epitelio interno del esmalte, se desarrolla un patrn cambiante de proliferacin y apoptosis controlado por el esmalte secundario. Estos eventos determinan directamente la forma final del manto del esmalte y las superficies de oclusin funcional de cada diente 30 , 31 . Despus de la formacin completa del esmalte, el epitelio de Hertwig sirve como patrn para la deposicin de dentina sobre las races de los dientes. Sin embargo en que forma acta la vaina epitelial de Hertwig para desarrollar una, dos y hasta cinco races, es un hecho que an no ha podido ser establecido 32 . La odontognesis es un proceso complejo que involucra la participacin e interaccin de muchos genes, en diferentes etapas del desarrollo. La investigacin en esta rea avanza vertiginosamente, sin embargo todava permanecen sin aclarar algunos procesos que ocurren durante la morfodiferenciacin dental. BIBLIOGRAFA
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