AISLAMIENTO DE LA CASENA DE LA LECHE

INTRODUCCIN La preparacin pura de una protena es esencial antes de determinar sus propiedades, estructura y composicin, por lo que es necesario aislarla y purificarla. Los mtodos de separacin de protenas aprovechan propiedades tales como la carga, tamao y solubilidad, que vara entre una y otra protena (Nelson y Cox, 2000). Cada protena tiene una composicin de aminocidos especfica que las hace diferentes unas de otras y, por lo tanto, su comportamiento en disoluciones tambin es diferente. Por lo general las protenas fibrosas son insolubles en agua y resisten a la degradacin enzimtica, sin embargo, con soluciones de cierta fuerza inica se pueden solubilizar. Las protenas globulares son relativamente ms solubles en agua y en soluciones de baja fuerza inica, aunque algunas coagulan cuando se calientan. Por otro lado, la composicin de aminocidos es tambin responsable del comportamiento de las protenas en diferentes condiciones de pH. As, al acidificar o alcalinizar una protena determinada, sta puede llegar a su punto isoelctrico, alcanzar una carga neta de cero y, por lo tanto, precipitar (Gonzales et al, 2009). La casena es una protena conjugada del tipo fosfoprotena que en su fase soluble se encuentra asociada al calcio (fosfato de calcio) en un complejo que se denomina caseingeno. Por lo cual es necesario llevar a cabo toda una serie de pasos para aislarla de la leche, y eliminar las grasas e hidratos de carbono que sta contiene. La casena se separa de la leche la cual tiene un pH aproximadamente de 7 por acidificacin llevando a la casena a su punto isoelctrico (de 4.6) donde se precipita (Segal y Ortega, 2005). OBJETIVO GENERAL Poner en prctica mtodos bioqumicos para la purificacin parcial de protenas, basados en sus propiedades de solubilidad.

OBJETIVOS PARTICULARES Aislar casena de la leche a partir de su punto isoelctrico. Familiarizar al alumno con el uso de la centrifuga.

HIPTESIS Si se utilizan los mtodos bioqumicos de manera precisa es posible tener un buen rendimiento en la extraccin de casena. MATERIAL Y MTODO En un vaso de precipitados de 250 ml se colocaron 100 ml de leche pura de vaca, a la cual, previamente, se elimin la mayor cantidad de grasa posible. A continuacin, se midi el pH de la leche y por medio de la acidificacin con HCl al 20% se llevo el pH de la misma hasta 4.0. Posteriormente se dej reposar alrededor de 15 minutos aproximadamente hasta observar grumos en la superficie. Inmediatamente despus, el precipitado se reparti en cuatro tubos de centrifuga; se centrifug durante 10 minutos a 2000 rpm. Al trmino de la centrifugacin se retiraron los tubos y se elimin el sobrenadante de la fase slida. Posteriormente, la fase slida se puso en un vaso de precipitados y se homogenizo con 20 ml de agua destilada, la solucin se coloc en un solo tubo de centrifuga y en otro tubo agua para equilibrar con un mismo peso, se dejo 10 minutos a 2000 rpm, con el objeto de eliminar el HCl. Posteriormente, se elimin el sobrenadante y a la fase solida se agregaron 10 ml de etanol, se homogeniz con una varilla de vidrio y al terminar se centrifug a 10 minutos a 2000rpm. De la misma manera, se elimin el sobrenadante y a la fase slida se le agregaron 5 ml de acido actico y 5ml de cetona, se homogeniz, al terminar se coloc en la centrifuga a 10 min a 2000 rpm.Por ltimo se elimin el sobrenadante y el precipitado se guard hasta que se secara; se peso el precipitado seco.

RESULTADOS Se obtuvieron 0.8 gramos de casena de 100 ml (equivalentes a 103 g si consideramos su densidad de 1,030 g/ml a 15C) de leche pura de vaca, por lo que se el rendimiento fue de 0.77% segn la siguiente frmula:

Rendimiento =

Peso seco de la casena g de leche utilizados

X 100%=

0.8 g 103 g

X 100% = 0.77 %

ANLISIS DE RESULTADOS El rendimiento de casena obtenido en esta prctica es muy bajo al rendimiento reportado en la literatura (30 g por litro, 3%), es probable que esto se deba a que no se dej que la casena precipitara completamente o, a la eliminacin del sobrenadante en cada una de las centrifugaciones, proceso en el cual se pudieron arrastrar cantidades considerables de protena junto el agua utilizada para eliminar el HCl. Cabe mencionar que la protena no se precipit a pH de 4.6, solamente se observaron pequeos grumos a pH de 4.0, fue entonces cuando se llevo a cabo la primera centrifugacin. Los solvente organicos voltiles se utilizaron para eliminar el resto de grasa de la casena. CONCLUSIN Es posible la purificacin parcial y el aislamiento de la casena de la leche, utilizando la poca solubilidad que esta protena tiene cuando se le lleva hasta su punto isoelctrico y la rapidez de sedimentacin de la misma al utilizar la centrifuga. No obstante, el rendimiento puede ser variado si se considera que los mtodos de purificacin son tambin variados.

BIBLIOGRAFA Gonzlez-Soto, E.; L. Bucio-Ortiz; P. Damin-Matzumura; F. Daz de LenSnchez; E. Corts-Barberena; L.J. Prez-Flores. (2009) Manual de bioqumica 1. 3 ed. Mxico. Nelson, D.L. y M.M. Cox (2000) Lehninger Principios de Bioqumica. 4 ed. Ed. Worth. EUA. Segal, C.A. K. y Gustabo Jesus Ortega L. G.J. ed. (2005) Manual de

prcticas. Biologa molecular de la celula I. UNAM. Publidisa, Mxico.