Control de Calidad

Universidad Nacional Autnoma de Nicaragua Facultad de Ciencias Mdicas Departamento de Microbiologa y Parasitologa Carrera de Bioanlisis Clnico
Informe Final
Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana del Laboratorio de Microbiologa del Complejo Docente de la Salud, UNAN-Len en perodo de Agosto-Octubre 2012 Autores: Lester Ivn Gutirrez Prez Roberto Jos Herrera Garca Tutor: Dr. Erick Amaya. Profesor Titular Departamento de Microbiologa UNAN-Len Octubre, 2012
Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana
Dedicatoria
Agradecimientos
Palabras del Tutor
ndice
1. 2. 3. 4. 5. 5.1. 5.2. 5.3. 5.4. 5.5. 5.6. 5.6.1. 5.6.1.1. 5.6.1.1.1. 5.6.1.1.2. 5.6.1.1.3. 5.6.1.1.4. 5.6.1.1.5. 5.6.1.1.6. 5.6.1.2. 5.6.1.2.1. 5.6.1.2.2. 5.6.1.2.3. 5.6.1.2.4. 5.6.1.2.5. 5.6.1.3. 5.6.1.4. 5.6.1.5. 6. 6.1. Resumen .............................................................................................................................................. 1 Introduccin ......................................................................................................................................... 4 Planteamiento del problema ............................................................................................................. 6 Objetivos .............................................................................................................................................. 7 Marco Terico ..................................................................................................................................... 8 Control de calidad interno ............................................................................................................. 9 Aseguramiento de la calidad....................................................................................................... 10 Control de la documentacin ...................................................................................................... 10 Aseguramiento de la calidad (control externo) ........................................................................ 11 Control de equipos. ...................................................................................................................... 11 Control de calidad en los laboratorios de Bacteriologa ......................................................... 12 Control de calidad en las pruebas de susceptibilidad ......................................................... 13 Control de calidad ................................................................................................................. 13 Control de calidad del medio .......................................................................................... 14 pH ........................................................................................................................................ 14 Concentracin de cationes .............................................................................................. 14 Inculo ................................................................................................................................ 15 Incubacin.......................................................................................................................... 15 Sensidiscos ........................................................................................................................ 15 Aseguramiento de la calidad............................................................................................... 16 Toma y seleccin de la muestra..................................................................................... 16 Procesamiento de la muestra. ........................................................................................ 16 Medios y reactivos ............................................................................................................ 16 Equipos............................................................................................................................... 17 Personal ............................................................................................................................. 17 Sistema de calidad ............................................................................................................... 17 Evaluacin de la calidad ...................................................................................................... 17 Acciones correctivas ............................................................................................................ 18
Diseo metodolgico........................................................................................................................ 19 Test de la Calidad ......................................................................................................................... 20
Universidad Nacional Autnoma de Nicaragua UNAN-Len
Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana 6.1.1. 6.1.2. 6.1.3. 6.1.4. 6.1.5. 6.1.6. 6.1.7. 6.1.8. 6.1.9. 6.1.10. 6.2. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 12.1. 13. Control de calidad para el medio de cultivo. ........................................................................ 20 pH del medio de cultivo. .......................................................................................................... 20 Control de calidad en la concentracin de cationes. .......................................................... 20 Inculo. ....................................................................................................................................... 21 Incubacin. ................................................................................................................................ 21 Sensidiscos. .............................................................................................................................. 21 Cepas ......................................................................................................................................... 21 Refrigeradoras. ......................................................................................................................... 22 Balanzas. ................................................................................................................................... 22 Pipetas.................................................................................................................................... 22
Definicin de Variable. ................................................................................................................. 23 Resultados ......................................................................................................................................... 28 Discusin............................................................................................................................................ 36 Conclusiones ..................................................................................................................................... 37 Recomendaciones ........................................................................................................................ 38 Cronograma ................................................................................................................................... 39 Anexos............................................................................................................................................ 40 Test de la Calidad ..................................................................................................................... 40 Bibliografa ..................................................................................................................................... 44
1. Resumen
A finales del siglo XX, los mdicos crean que con el descubrimiento de la penicilina las enfermedades bacterianas eran completamente controladas, sin embargo, los grmenes patgenos desarrollan la resistencia a los antimicrobianos. Por tal razn hoy en dia es necesario contar con pruebas capaces de mostrar si una bacteria es resistente a determinado frmaco. El resultado de estas prueba es muy til para el tratamiento del paciente, para ello necesitamos que los resultados obtenidos sean confiables y vlidos. El control de calidad son tcnicas operacionales utilizadas para cumplir los requisitos de calidad y son fundamentales para aumentar la fiabilidad y la validez de los resultados proporcionar datos confiables a los usuarios de tal forma que puedan as contribuir al diagnstico y tratamiento de las diversas enfermedades
(2)
El control de calidad es un pilar sumamente importante y de estricto cumplimiento en todo laboratorio.
una buena implementacin de los ensayos y por consiguiente la generacin de resultados confiables.
Sin el control de calidad, los laboratorios clnicos no podran mantener un grado de eficacia y reproducibilidad de los resultados de manera confiable.
Observaciones de las cepas controles: Se solicit registro del control de calidad de las cepas de referencia para verificar los controles de calidad realizados anteriormente, pero los registros no fueron facilitados. Muchas de las cepas controles no estn bien identificadas (no tiene su respectivos cdigos ATCC y no cuenta con la primera fecha de utilizacin). Medios de cultivo (Cumplen un 80.4%) Ventajas:
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Mantienen registro de control. Se realiza la verificacin de esterilizacin. El medio de cultivo es reproducible. La prevalencia de crecimiento de microorganismos fastidioso es relativamente baja. Se brinda el suficiente tiempo de solidificacin del medio de cultivo.
Desventajas (Su debilidad mas grande es la falta de medicin de pH y la concentracin de cationes): No se realiza la medicin adecuada en la distribucin del agar en las placas No se utilizan un mechero adecuado No se mide el grosor de los medios de cultivo
Otras Observaciones: El rea de preparacin de los medios de cultivos no debera estar cerca del rea de desecho ya que aumenta el riesgo de contaminacin Utilizar un mechero apropiado que puede descontaminar adecuadamente el rea de trabajo (No existe mechero adecuado) Recomendaciones: Medir el grosor de los medios de cultivos. Realiza medicin de pH. Realizar medicin de las concentraciones de cationes.
Control de Calidad en las Cepas de Referencia.
Satisfactorio: 85.7% (12) No Satisfactorio: 14.3% (2) Total: 100% (14)
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Observaciones de las cepas controles: Se solicit registro del control de calidad de las cepas de referencia para verificar los controles de calidad realizados anteriormente, pero los registros no fueron facilitados. Muchas de las cepas controles no estn bien identificadas (no tiene su respectivos cdigos ATCC y no cuenta con la primera fecha de utilizacin).
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2. Introduccin
Hace 20 aos los mdicos de los pases industrializados crean que las enfermedades infecciosas eran una amenaza del pasado. Gracias a la industrializacin lleg la mejora del saneamiento, la vivienda y la nutricin, as como el desarrollo revolucionario de antimicrobianos de lucha contra las enfermedades natural (replicacin o conjugacin) (15).
(7,14)
. Los grmenes patgenos
desarrollan la resistencia a los antimicrobianos por un proceso denominado seleccin
El CLSI, anteriormente conocido como Comit Nacional de Estndares de Laboratorio Clnico (NCCLS), es una organizacin sin nes de lucro con miembros que representan mltiples disciplinas. Su misin es promover el desarrollo y el uso voluntario de estndares y guas consensuados de laboratorio.
Las tcnicas operacionales de control de la calidad son utilizadas para cumplir los requisitos de la calidad
(2)
.Las aplicaciones de estas tcnicas, son fundamentales para
aumentar la fiabilidad y la validez de los resultados. Todo laboratorio debe someterse a realizar controles de calidad estandarizados por organismos locales, nacionales o internacionales (2,4). La meta fundamental de los laboratorios clnicos es proporcionar datos confiables a los usuarios de tal forma que puedan as contribuir al diagnstico y tratamiento de las diversas enfermedades (2). El control de calidad es un pilar sumamente importante y de estricto cumplimiento en todo laboratorio. Al realizar un programa de control de calidad generar una buena implementacin de los ensayos y por consiguiente la generacin de resultados confiables. Dado que los resultados de los laboratorios clnicos son utilizados para el diagnstico y tratamiento del paciente, es necesario generar resultados fiables y
vlidos, los cuales se logran con una adecuada implementacin de un programa de control de calidad y un adecuado aseguramiento del mismo.
Es de gran importancia la realizacin de un control de calidad como parte del proceso de la garanta total de la calidad. Sin el control de calidad, los laboratorios clnicos no podran mantener un grado de eficacia y reproducibilidad de los resultados de manera confiable.
Esta investigacin pretende implementar el control de calidad en los ensayos utilizados para detecta resistencia antimicrobiana en el laboratorio de microbiologa del Complejo Docente de la Salud (CDS) del campus medico, UNAN-Len y de esta manera asegurar los resultados que se obtienen en este laboratorio.
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3. Planteamiento del problema
Los procesos implementados en las pruebas de resistencia antibacteriana del Laboratorio de Microbiologa de la UNAN-Len, cumplen con los estndares de control de la calidad?
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4. Objetivos
Objetivo General Verificar si los procesos implementados en las pruebas de resistencia antibacteriana del Laboratorio de Microbiologa de la UNAN-Len, cumplen con los estndares de control de la calidad. Objetivos Especficos Verificar el control de calidad aplicado las pruebas de resistencia antibacteriana mediante normas estipuladas. Mencionar las fortalezas y debilidades del control de calidad implementado por el Laboratorio de Microbiologa. Aplicar el control de la calidad en las pruebas de resistencia antibacteriana utilizando las normas establecidas por el CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute).
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5. Marco Terico
Las tcnicas operacionales de control de la calidad son utilizadas para cumplir los requisitos de la calidad
(2)
. Las cuales son fundamentales para aumentar la fiabilidad y

(2, 4)
la validez de los resultados
. Es necesario que el control realizado pueda identificar,
monitorear, evaluar y aprobar metodologas relativas al cuidado del paciente. En este contexto el control de calidad envuelve el monitoreo de los medios de cultivos, reactivos, instrumentos, procedimientos y el personal, para asegurar una adecuada prctica en el aislamiento, identificacin y caracterizacin de agentes etiolgicos y su correspondiente prueba de susceptibilidad como una gua de la terapia
(1, 17,18)
Un programa de control de calidad debe incluir un Manual de Procedimientos, validacin de metodologas y equipos, el desarrollo de ciclos de educacin continua, elementos de bioseguridad y una supervisin sobre los reportes generados
(1, 3, 4, 5)
.Esto
se refiere, a que los laboratorios deben hacer nfasis en la correcta valoracin de las pruebas de laboratorio, los agentes causales de enfermedades, la interpretacin correcta de las pruebas de susceptibilidad a los antibiticos, etc. (18). En el control de calidad de los laboratorios clnicos se diferencian dos tipos de actividades de control: el control interno, y el control externo de la calidad. El control de calidad interno tiene como funcin detectar errores aleatorios o sistemticos, a partir de la inclusin de muestras de resultado conocido en todos los ensayos realizados en el laboratorio, as como permitir o no la aprobacin tcnica de los resultados del ensayo controlado, seguimiento de los equipos y revisin. La revisin supone un anlisis detallado de cada uno de los pasos que sigue una muestra clnica en el laboratorio (revisin del proceso analtico) (2). El control externo de la calidad se usa para la intercomparacin entre los laboratorios; permite detectar errores aleatorios o sistemticos mediante la introduccin de muestras o productos para caracterizar o medir. Tambin nos permite intuir que determinados reactivos o equipos diagnsticos no son adecuados para el fin para el que se han comercializado (2).
Para mejorar la calidad de los laboratorios clnicos es necesario implementar un documento de las polticas y procedimientos, adems de la elaboracin del manual de calidad, en la que se deben tomar tres aspectos fundamentales: la fase pre-analtica, analtica y post-analtica. Un factor fundamental que siempre tiene que estar presente es el control de calidad, tanto interno como externo (1, 5). La fase pre-analtica est integrada por todos aquellos aspectos del proceso que tengan relacin con la calidad de los productos obtenidos (Toma de muestra, transporte, etc.) la fase analtica est relacionada con los procesos cuyo resultado har lugar a la interpretacin de los resultados. En la clusula 5.6.3 de la Norma International Standarization Organization (ISO) 15189:2003 menciona que se debe disear y realizar un programa de calibracin y verificacin de los sistemas de medicin para asegurar la veracidad de los resultados
(1, 2,3)
. Por tal razn el laboratorio debe participar en
programa de comparacin inter-laboratorios, as como mantener un programa de control de calidad interno que permita conocer si el proceso est bajo control y, de no ser as, permite tomar decisiones adecuadas para evitar repetir la muestra innecesariamente, o tomar nueva muestra en caso estrictamente necesario. La fase post-analtica conlleva a la revisin sistemtica de los resultados obtenidos, y por consiguiente al reporte final (1).
5.1. Control de calidad interno
El control interno de la calidad implica la inclusin de material de control, muy bien caracterizado (positiva o negativa) mediante ensayos previos, en las pruebas realizadas en los laboratorios
(6)
. Las muestras de control utilizadas son muestras de suero o
plasma estandarizado internacionales, nacionales o locales, que muestren rangos significativos. Los errores asociados a la tcnica pueden ser aleatorios o sistemticos. Los aleatorios son inevitables, pero pueden minimizarse mediante una adecuada preparacin y cumplimiento de los procedimientos normalizados de trabajo (PNT), mientras que los
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sistemticos pueden asociarse con la fiabilidad de un ensayo o indicar un deterioro de uno o ms de sus componentes (3).
5.2. Aseguramiento de la calidad
El laboratorio debe disponer de un programa documentado de control de calidad interno en el que se detallen las actividades que se van a realizar, la frecuencia de estas y las responsabilidades del personal en este tema
(6)
. Cuando un procedimiento de control de
calidad se detecte algn resultado anmalo hay que investigar las causas y una vez halladas llevar a cabo las secciones correctoras necesarias para eliminar la fuente de error y tomar medidas preventivas y sus resultados, as como las posibles acciones correctivas realizadas, deben registrarse indicando la persona que las ha llevado a cabo
(2, 4,13)
El factor ms importante para un elevado nivel de calidad de trabajo en el laboratorio microbiolgico es un personal altamente entrenado, que labore en un ambiente que promueva el trabajo en grupo y que se encuentre identificado con los objetivos del laboratorio y de su programa de aseguramiento de calidad. Para esto, se debe documentar que el personal haya completado los entrenamientos pre-analticos, analticos y post-analticos en forma competente y que est capacitado para efectuar el trabajo que se le encomienda. (13)
5.3. Control de la documentacin
El laboratorio debe disponer documentos donde se describan de tipo organizativo o tcnicos necesarios para implementar la norma UNE-EN-ISO (Una Norma Espaola, European Norm; International Standarization Organization) 15189:2007. Es importante establecer un sistema para controlar los documentos, de manera que las versiones actualizadas se encuentren disponibles en los puntos de uso, y se evite el uso de documentos obsoletos o no vlidos (1, 3, 5).
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El manual de procedimientos debe incluir todos los procedimientos analticos efectuados en el laboratorio de microbiologa clnica con el fin de garantizar que todo el personal de laboratorio realice dichos procedimientos de la misma forma. Los procesos de certificacin internacionales requieren que los manuales sean escritos en formatos especficos preestablecidos y que sean actualizados y revisados anualmente
(1,13)
La solicitud del anlisis, la manipulacin de las muestras, y el reporte de los resultados deben ser documentados a lo largo de todo el proceso a travs de procedimientos escritos que detallen la preparacin del paciente, la recoleccin, la rotulacin, la preservacin y el transporte
(13)
. Esta documentacin ha de conformar los registros de
laboratorio, al igual que los registros de control de calidad de reactivos, de medios de cultivo, de equipos y de sistemas comerciales miniaturizados y automatizados, as como los registros del personal de laboratorio (1, 2, 4, 5, 13).
5.4. Aseguramiento de la calidad (control externo)
La participacin en el programa de evaluacin externa de la calidad es un requisito fundamental, su fin es contrastar los resultados de laboratorio con otros laboratorios. Estos programas pueden estar organizados por los servicios de salud, las sociedades cientficas u otros organismos. Es recomendable analizar las muestras del programa dentro de la rutina del laboratorio como si fuera muestras clnicas, utilizando las mismas tcnicas y realizadas por el personal que intervendra en el procesamiento de este tipo de muestras. Los resultados emitidos por el organismo organizador deben revisarse dejando constancia de las conclusiones obtenidas. Si el resultado obtenido no es el adecuado habr que estudiar las causas y poner en marcha acciones correctivas
13,17) (5,
5.5. Control de equipos.
La calidad de un anlisis microbiolgico depende entre otros factores, del buen uso y funcionamiento de los equipos. El laboratorio debe contar los equipos necesarios para
la correcta ejecucin de los ensayos y disponer de un inventario actualizado de los equipos en uso. Cuando se recibe un equipo en el laboratorio hay que comprobar que cumple con las especificaciones previstas, adems de verificar la documentacin que acompae su estado. Antes de ponerlo en uso se debe realizar una validacin inicial o confirmacin a travs de evidencias objetivas de que los requerimientos para el uso o aplicacin propuestos se cumplen, despus de la validacin inicial se realizan pruebas de verificacin (comprobacin continua de un equipo para ver si cumple con las especificaciones) (1). La norma UNE-EN-ISO 15189:2007 exige que el laboratorio disponga de un programa de validacin, verificacin y mantenimiento para los equipos que puedan influir significativamente en los resultado del ensayo. Cada procedimiento debe quedar registrado y los registros deben mantenerse y estar fcilmente disponible durante la vida til del quipo (2).
5.6. Control de calidad en los laboratorios de Bacteriologa El control de calidad de un laboratorio de Bacteriologa clnica comprende el permanente monitoreo de medios de cultivo, equipos, procedimientos, personal. El laboratorio clnico de microbiologa, requiere para su correcto funcionamiento de un adecuado y constante control de calidad sobre todas las etapas en el recibo, manejo y reporte de especmenes clnicos(17, 18).Se debe hacer nfasis en la correcta valoracin de las pruebas de laboratorio, los agentes causales de enfermedades, el conocimiento de la flora normal, la taxonoma bacteriana y la interpretacin correcta de las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos principalmente los asociados a la resistencia bacteriana que es un fenmeno creciente caracterizado por una refractariedad parcial o total de los microorganismos al efecto del antibitico generado principalmente por el uso indiscriminado e irracional de stos y no slo por la presin evolutiva que se ejerce en el uso teraputico(16). Por ltimo, para que un plan de control de la calidad funcione y para que se logre el objetivo de obtener una mejora continua en la calidad de los servicios brindados por el laboratorio, se debe llegar a la conclusin de que esto tiene
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que ser un compromiso de todos, desde las autoridades ms altas, hasta los trabajadores con menos responsabilidades (18).
5.6.1. Control de calidad en las pruebas de susceptibilidad
La determinacin y reporte de la susceptibilidad antimicrobiana en los microorganismos de importancia en salud pblica es una de las principales funciones del laboratorio de microbiologa clnica, por esta razn es muy importante que el laboratorio cuente con un control de calidad interno y externo que garantice la calidad de los procedimientos y confiabilidad de los resultados informados a los pacientes (19, 20). Los laboratorios disponen de las normas y recomendaciones establecidas por el CLSI para implementar y estandarizar todos los procesos relacionados con el control de calidad de las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana. El principio del mtodo involucra el uso de una cantidad constante de antimicrobianos en un reservorio (discos de papel) aplicado sobre la superficie del agar en el cual se ha cultivado el microorganismo en cuestin. Se formar as por difusin, un gradiente de concentracin del antimicrobiano y la sensibilidad del microorganismo estar indicada por el tamao de la zona de inhibicin del crecimiento alrededor del reservorio. El dimetro obtenido depender no solo de la sensibilidad del microorganismo y la carga del disco, sino tambin del espesor de la capa del agar, su pH y composicin, de la capacidad de difusin de la droga en ese medio, la temperatura, la velocidad de duplicacin bacteriana, y el tamao y fase de crecimiento del inculo. Para que los resultados sean confiables los procedimientos debern ser controlados y estandarizados cuidadosamente (21)
5.6.1.1.
Control de calidad
Conjunto de acciones que se aplican en el laboratorio durante la ejecucin de cada prueba para asegurar que las mismas estn llevndose a cabo de la manera correcta.
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Para el control de calidad en las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana se debe tener en cuenta (19):
5.6.1.1.1.
Control de calidad del medio
Se recomienda el uso de Agar Mueller Hinton (19, 21): Altamente reproducible Bajo en inhibidores que afectan las tetraciclinas, sulfonamidas y
trimetorprimsulfametoxazol Permite el crecimiento de microorganismos no fastidiosos Debe tener una profundidad de 4mm
5.6.1.1.2.
pH
El pH del medio debe estar entre 7.2 y 7.4
(19,21)
a temperatura ambiente y debe
determinarse despus de su solidificacin. Si el pH es demasiado bajo, ciertas drogas (por ejemplo: Aminoglucsidos, quinolonas y macrlidos) parecern menos activas; mientras otras (tetraciclinas) parecern tener mayor actividad. Si el pH es demasiado alto se podran esperar los efectos opuestos. (21)
5.6.1.1.3.
Concentracin de cationes
Las variaciones de cationes divalentes, principalmente calcio y magnesio, afectar los resultados con aminoglicsidos, tetraciclina y colistina. Un contenido excesivo en
catin, reducir la zona de inhibicin, mientras que un escaso contenido en catin, puede dar un inaceptable aumento en el tamao de la zona. La cantidad de timina y timidina pueden afectar las sulfonamidas y trimetoprim dando falsa sensibilidad o falsa resistencia
(19, 21)
, produciendo as zonas ms pequeas, menos ntidas o sin halo lo
cual puede dar como resultado un informe de falsa resistencia.(21)

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5.6.1.1.4.
Inculo
Para estandarizar la densidad del inculo se usa una suspensin de sulfato de bario como estndar de turbidez oscuridad (19)
(21)
. Se debe utilizar un inoculo con una turbidez al 0.5 de la
escala de McFarland. Esta escala debe conservarse a temperatura ambiente y en
5.6.1.1.5.
Incubacin
La temperatura y tiempo de incubacin dependen del microorganismo a probar
(19)
hay
dos maneras de realizar la incubacin: primero como un mtodo directo de inoculacin a partir de colonia aislada que es alternativo del inculo puede ser realizado en solucin salina o caldo a partir de colonias seleccionadas de una placa de cultivo no selectivo de 18 a 24 horas de incubacin. Inmediatamente la suspensin debe ser ajustada a la escala 0,5 de Mc Farland. (21)
5.6.1.1.6.
Sensidiscos
En este proceso se debe tomar en cuenta lo siguiente
(19)
Los discos se deben almacenar a -8C en congelacin a -14C hasta su uso sobre todo en antibiticos que son lbiles como son los -lactmicos, imipenem, cefaclor y combinaciones con el acidoclavulnico.
Sacar los discos 2 horas antes de su uso para equilibrar su temperatura al ambiente. Utilizar discos con fecha de expiracin adecuada Almacenarlos con desecante
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5.6.1.2.
Aseguramiento de la calidad
Programa diseado para dar seguimiento y evaluar la calidad en el transcurso del proceso de cada prueba y en forma global en la totalidad del proceso, incluyendo la fase pre-analtica, analtica y post-analtica. Este concepto incluye entrenamiento y calificacin del personal, evaluacin de los reportes, rapidez y seguridad diagnstica, certificacin de los laboratorios, controles externos, etc. (2, 4,13, 19).
5.6.1.2.1.
Toma y seleccin de la muestra
Deben establecerse criterios para asegurar, que se obtiene la muestra ideal para la prueba que se va a realizar, que se obtiene de la manera correcta, que es transportada al laboratorio en el medio de transporte adecuado y que llega al laboratorio en el tiempo asignado (19).
5.6.1.2.2.
Procesamiento de la muestra.
El procesamiento optimiza la visualizacin y la recuperacin del patgeno. En los casos en que es apropiado se puede juzgar la calidad de la muestra
(19)
5.6.1.2.3.
Medios y reactivos
Se debe realizar regularmente el control de calidad de los medios y reactivos

(19)
.Aunque el agar M. Hinton es generalmente confiable para las pruebas de

(19, 21)
sensibilidad
, los resultados obtenidos con algunos lotes pueden, en ocasiones,
variar significativamente. Si un lote de medio no sustenta el adecuado crecimiento de los microorganismos probados, los halos obtenidos en las pruebas por difusin podran ser mayores quedando fuera de los lmites de control de calidad, conduciendo a resultados errneo (21).
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5.6.1.2.4.
Equipos
Todos los instrumentos utilizados en el laboratorio clnico, deben estar amparados por un programa de control de calidad y de mantenimiento preventivo, basados en las instrucciones del fabricante y los procedimientos establecidos. El chequeo peridico recomendado es importante para minimizar el dao o la necesidad de servicio y reparacin (19).
5.6.1.2.5.
Personal
El personal es el factor ms importante en la calidad del trabajo en el laboratorio de microbiologa. Este personal debe tener una dedicacin y actitud positiva hacia el trabajo, capacidad acadmica, actualizacin constante y contar con los elementos indispensables para su labor (19,24).
5.6.1.3.
Sistema de calidad
Programa que abarca toda la institucin para asegurar que todos los procedimientos relacionados con cualquier prueba estn de acuerdo con los criterios preestablecidos
(19, 20)
5.6.1.4.
Evaluacin de la calidad
Control de calidad interno: Consiste en supervisar diariamente los procedimientos y cada una de las pruebas realizadas en el laboratorio para cumplir con los requisitos de calidad, lo cual incluye la utilizacin de controles en las pruebas positivas y negativas en las pruebas (1, 2, 4,13, 19).
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Control de calidad externo: Los laboratorios de microbiologa deben participar en programas de evaluacin externa del desempeo. Estos programas miden la capacidad del laboratorio para identificar un microorganismo desconocido, pruebas utilizadas para el diagnstico etiolgico y sensibilidad a los antibiticos (1, 2, 4,13, 19).
5.6.1.5.
Acciones correctivas
Es la respuesta a un problema que se ha identificado a travs del control de calidad o de la garanta de la calidad (19,24). Los resultados pueden ser debidos a errores obvios como usar discos o cepas equivocadas, condiciones de incubacin incorrectas etc. Si al repetir la prueba, el resultado cae dentro del rango, entonces no se requiere acciones correctivas. Si no hay una razn obvia que justifique el resultado fuera de los rangos aceptables se debe tomar una accin correctiva inmediata (22,24).
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6. Diseo metodolgico
Tipo de Estudio: Descriptivo observacional de corte transversal. Sitio de estudio: Laboratorio de Microbiologa ubicado en el Complejo Docente de la Salud UNAN-Len, Nicaragua. rea de estudio: rea de Bacteriologa. Perodo de estudio: Agosto-Octubre 2012 Universo: Todos los procesos utilizados en las pruebas aplicadas a la resistencia antibacteriana. Procedimiento y recoleccin de la informacin: Para la llevar a cabo esta investigacin, lo primero que realizaremos es solicitar la autorizacin de la direccin encargada del Laboratorio de Microbiologa en el rea de Bacteriologa. Una vez obtenida la autorizacin procederemos a la recoleccin de la informacin en la que valoraremos los procesos llevados a cabo para la resistencia antibacteriana por medio de un Test de calidad contrastado al manual utilizado en el laboratorio. La valoracin ser de carcter observacional. Materiales: 1. Placas Petri 2. Medios de cultivos 3. Incubadora 4. Refrigeradora 5. Sensidiscos 6. Balanza 7. Pipetas 8. pH-metro
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6.1. Test de la Calidad La realizacin del test de control de calidad ser de acuerdo a las normas establecidas por el CLSI.
6.1.1. Control de calidad para el medio de cultivo. Utilizan Agar Mueller Hinton en la pruebas de sensibilidad: SI____NO____ El Agar utilizado es altamente reproducible: SI____NO____ El Agar con el que se trabaja es bajo en inhibidores: SI___NO____ Utilizan un Agar que permite el crecimiento de microrganismos no fastidiosos: SI___NO____ El cultivo realizado tiene un grosor de 4mm: SI____NO___ Determinan si los tamaos de los halos obtenidos con cada cepa estn dentro del intervalo esperado: SI___NO____ Incuban placas para mostrar su esterilidad: SI ___ TODAS____ Dejan las placas todo un da para verificar su esterilidad: SI___NO____ Mantienen registro de todas las placas con las que trabajan: SI___NO___ Utilizan platos y Agar que se encuentran en un adecuado tiempo de vigencia: SI___NO____ Revisan que las placas se encuentren en un buen estado fsico: SI___NO___
6.1.2. pH del medio de cultivo. Le miden el pH al medio de cultivo preparado: SI__NO___ El medio de cultivo con el que trabajan tiene un pH de 7.2 a 7.4: SI____NO____ SE DESCONOCE EL pH: ___
6.1.3. Control de calidad en la concentracin de cationes. Le miden los cationes a los medios de cultivos: SI__NO___ Las concentraciones de los cationes se encuentran en un estado ptimo para trabajar: SI____NO____ Se desconoce: ___ La concentracin de aniones estn bien calibradas segn la norma de la CLSI: SI____NO__ Se desconoce: ___
6.1.4. Inculo.
Se utiliza un inculo con una turbidez al 0.5 de la escala de McFarland:

SI___NO____ Esta escala se conserva a temperatura ambiente y en oscuridad: SI___NO____ Se dio un buen tiempo de inculo: SI___NO____
6.1.5. Incubacin. Se encuentra la incubadora en ptima temperatura de 37C para guardar un microrganismo en crecimiento: SI___NO____ Llevan un tiempo de control de incubacin del microrganismos: SI___NO____
6.1.6. Sensidiscos. Se encuentran en un buen lugar de almacenamiento: SI___NO____ Estn almacenados de -8C a 14C: SI___NO____ Se brinda un adecuado tiempo de reposo (1-2 horas) a los sensidiscos antes de usarse para que se equilibren a temperatura ambiente: SI___ NO___ Chequean la fecha de expiracin de los discos: SI___NO____ Utilizan discos con fecha de expiracin dentro del lmite: SI___NO___ Almacenan los discos con desecantes: SI___NO____ Se utilizaron discos auxiliares: SI___ NO___
6.1.7. Cepas Utilizan cepas de referencia: American Type Culture Colection (ATCC) en el control de calidad: SI___NO____ Seleccionan cepas en base en su susceptibilidad resistencia: SI___NO____ Son confiables las cepas utilizadas en el control de calidad. SI____NO___ Se utiliza un control de temperatura como termmetro certificado para calibrar y operar. SI___ NO____ Son almacenadas correctamente. SI___NO____
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6.1.8. Refrigeradoras. El refrigerador est trabajando a ptimas condiciones de temperatura. SI___NO____ Mantienen un control de temperatura constante. SI___ NO____ Tiene el refrigerador alguna hoja que especifique control de mantenimiento del mismo pegada en l. SI___NO____ Le dan mantenimiento frecuentemente al refrigerador. SI___NO____ Tiene el refrigerador indicaciones e instrucciones de advertencias del su uso adheridas a l. SI___ NO__
6.1.9. Balanzas. Qu tipo de balanza utilizan. ANALITICA____MECANICA____ AMBAS:_X_ Las balanzas que utilizan estn bien calibradas. SI___NO____ Las balanzas utilizan pesos estndares para calibrarlas. SI___NO____ Las balanzas cumplen con los requisitos de calibracin estndares.
SI___NO____
6.1.10.
Pipetas.
Las pipetas que utilizan se encuentran calibradas. SI___ NO____ El encargado hace buen uso del pipeteo para las muestras. SI___NO____ Utilizan lquidos que expulsan vapores con las pipetas. SI____NO___ (Acierto) Los matraces Erlenmeyer o aforados y precipitados lavados. SI___NO____ Los matraces Erlenmeyer o aforado son resistentes y adecuados a soportar altas temperaturas. SI___NO____ que utilizan estn bien
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6.2. Definicin de Variable. VARIABLE Utilizacin Agar Hinton. Reproducibilidad DEFINICIN FUENTE VALOR SI____ NO____
de Material utilizado para Entrevista Mueller preparar cultivo Propiedad prueba multiplicado de de una Entrevista ser Observacin medios de Observacin
SI____ NO____
Inhibidor
Retinen o minimizan la Entrevista accin de un Observacin
SI____ NO____
microorganismo Crecimiento Aumento de tamao de los microorganismos Grosor Engrosamiento adecuado del Agar en el medio de cultivo Halos Circulo que rodea un Observacin Sensidiscos muestra afectada Esterilidad Limpieza absoluta que Observacin evita el crecimiento de microorganismos deseados Verificar esterilidad Registro Datos guardados sobre Entrevista los cultivos realizados Observacin Comprobar la esterilidad Observacin SI____ NO____ SI____ NO____ no ALGUNAS____ TODAS____ el que rea SI____ NO____ Observacin Observacin SI____ NO____ SI____ NO____
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Vigencia
Periodo de tiempo en el Observacin que puede ser utilizado
SI____ NO____ SI____ NO____
Estado fsico
Estado de la estructura Observacin de las placas utilizadas
pH del medio
Grado alcalino medio
de
acidez
o Observacin
SI____ NO____
que tiene el
pH ptimo
Grado alcalino
de
acidez
o Observacin de
SI____ NO____
apropiado
trabajo para el medio Concentracin cationes Concentracin de cargar Entrevista positivas del cultivo Observacin SI____ NO____ SI____ NO____ SI____ NO____
Concentracin de Concentracin de cargar Entrevista aniones Inoculo negativas del cultivo Suspensin Observacin de Observacin
microorganismos que se trasmite a un medio de cultivo a travs de la inoculacin Temperatura Calor a temperatura Observacin adecuado
SI____ NO____
ambiente
para el crecimiento de los microorganismos Tiempo inculo de Tiempo adecuado y Observacin SI____ NO____
determinado que se le Entrevista da al cultivo de inoculo
Incubacin
tiempo comprendido para el crecimiento de un microorganismo
Observacin
SI____ NO____
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Control
Comprobar y llevar un Observacin registro de lo que se est realizando
SI____ NO____
Sensidiscos
Son discos de frmacos Observacin utilizados resistencia antimicrobiana. en la
SI____ NO____
Almacenamiento
Lugar apropiado guardar realizado el
para Observacin
SI____ NO____
trabajo
Reposo
Dejar equilibrando hasta Observacin alcanzar la temperatura ambiente
SI____ NO____
Chequear
Verificar con los
que
cumpla Observacin
SI____ NO____
estndares
planteados. Expiracin Fecha lmite del Observacin SI____ NO____ SI____ NO____
producto utilizado Desecantes sustancia que se usa Observacin para eliminar humedad del aire Auxiliares Mtodos secundarios Observacin Entrevista Observacin ya Entrevista Entrevista
SI____ NO____ SI____ NO____
utilizados de reemplazo Cepas referencia (ATCC) resistencia de Microorganismos recomendados
conocidos y utilizables Capacidad que tiene un Observacin organismo para Entrevista SI____ NO____
resistirse a un frmaco
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Confiabilidad
Confiar en un producto Observacin o microorganismo Entrevista
SI____ NO____
determinado
Termmetro
Instrumento para poder
utilizado Observacin medir la
SI____ NO____
temperatura Mantenimientos Chequeo del equipo Observacin SI____ NO____
para trabajar en optimas Entrevista condiciones Instrucciones Guas o indicaciones Observacin
SI____ NO____
para poder manipular el Entrevista aparato Balanza Instrumento utilizado Observacin
ANALITICA____ MECANICA____
para pesar cantidades Entrevista exactas Calibracin Procedimiento comparacin que entre de Observacin lo Entrevista un
SI____ NO____
indica
instrumento Peso estndares Objetos especficos con pesos Observacin utilizados Entrevista SI____ NO____
para la calibracin de balanzas Requisitos Condicin necesaria Observacin Entrevista SI____ NO____
para realizar un trabajo
Pipetas
Son instrumentos que Observacin se utilizan para obtener un volumen exacto
SI____ NO____
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Pipeteo muestra
de
la Forma en la que se Observacin realiza volumen obtencin de de una
SI____ NO____
muestra a trabajar
Lquidos
que Lquidos
con
que
al Observacin
SI____ NO____
expulsan vapores
estar en ebullicin o en forma natural
desprenden vapores Matraces Recipiente de cristal Observacin SI____ NO____
donde se mezclan las soluciones, sometidos temperaturas a son altas
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7. Resultados Tabla 1: Resultados del Test del control de calidad, Comparacin entre los procedimientos utilizados en el Laboratorio de Bacteriologa del Campus Mdico y las Normas Establecidas por el CLSI. Test de Calidad en Resistencia Antibacteriana Control en: Aciertos (n) Desaciertos (n) Preparacin del Medio 90.9% (10) 9.1% (1) de cultivo. pH y concentracin de 0% (0) 100% (5) Cationes Inculo e Incubacin Sensidiscos Cepas Refrigeradora Balanzas y pipetas Total 100% (5) 71.4% (5) 80%(4) 100% (5) 100% (8) 80.4% (37) 0% (0) 28.6% (2) 20%(1) 0% (0) 0% (0) 19.6% (9)
Total (n) 100% (11) 100% (5) 100% (5) 100% (7) 100% (5) 100% (5) 100% (8) 100% (46)
Grfico 1: Resultado del Test de Calidad. Aciertos y desaciertos en los procedimientos utilizados para la prueba de Susceptibilidad. Test de Calidad en Resistencia Antibacteriana
0.0% 100.0% 80.0% 60.0% 40.0% 20.0% 0.0% 0.0% 90.9% 100.0% 100.0% 71.4% 80.0% 9.1% 28.6% 20.0% 0.0% 0.0% 19.6%
100.0%
100.0% 80.4%
Desaciertos Aciertos
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Observaciones en la preparacin y utilizacin de los medios de cultivo: Para la preparacin de los medios de cultivos se mide la cantidad del agar en gramo en una balanza (analtica o mecnica) y posteriormente es diluida con solucin salina, antes de su distribucin del agar a las placas el laboratorista se asegura que el agar est a una temperatura adecuada (inferior a 45C) posterior a esto la distribucin se realiza en placas Petri descartables nuevas que se van a utilizar, su distribucin en las placas no es confiable ya que no se utilizan tcnicas de medicin para el volumen que se administra. Luego de la solidificacin del agar una cierta cantidad de medios de cultivos (de 3 a 5) son tomadas para incubacin y verificar la esterilidad, aunque algunas de estas son utilizadas sin haber finalizado la verificacin de esterilizacin, lo que conlleva a inseguridad del crecimiento bacteriano. La utilizacin de cada uno de los diferentes medios de cultivo (MacConkey, Agar Sangre, Salmonella-Shigella) depende de la bacteria a cultivar. El Agar Muller Hinton es utilizado adecuadamente correctamente en la resistencia antibacteriana. Se mantiene un registro diario de los diferentes medios de cultivo que se elaboran. Ventajas: Mantienen registro de control. Se realiza la verificacin de esterilizacin. El medio de cultivo es reproducible. La prevalencia de crecimiento de microorganismos fastidioso es
relativamente baja. Se brinda el suficiente tiempo de solidificacin del medio de cultivo.
Desventajas: No se realiza la medicin adecuada en la distribucin del agar en las placas No se utilizan un mechero adecuado No se mide el grosor de los medios de cultivo
Otras Observaciones:
El rea de preparacin de los medios de cultivos no debera estar cerca del rea de desecho ya que aumenta el riesgo de contaminacin Utilizar un mechero apropiado que puede descontaminar adecuadamente el rea de trabajo (No existe mechero adecuado)
Recomendaciones: Medir el grosor de los medios de cultivos. Realiza medicin de pH. Realizar medicin de las concentraciones de cationes.
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Control de Calidad en las Cepas de Referencia. Se realiz cultivo con las cepas controles utilizada en el laboratorio de bacteriologa. Muchas de cepas controles no tiene su respectiva identificacin (cdigo y fechas de inicio de utilizacin). Para la realizacin de nuestro control escogimos al azar doce cepas controles ATCC, las cuales se sometieron a un cultivo especfico (Agar Sangre, MacConkey y Salmonella-Shigella). S se observa crecimiento bacteriano, se confirma que las bacterias son viables y los medios de cultivos estn en perfecto estado. Las bacterias escogidas se cultivaron en medios de cultivo, se encubaron a 37C durante 24 horas, posterior a eso, los resultados obtenidos fueron los siguientes: Tabla 2: Control de calidad de las cepas de referencias utilizadas en el Laboratorio Tipo de Bacteria Cdigo Fechas de inicio Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli 25922 11775 -/-/7/11/2007 -/-/Medio de Cultivo MacConkey MacConkey MacConkey Satisfactorio Satisfactorio No Satisfactorio Klebsiella Salmonella 15189 12325 -/-/26/01/12 MacConkey SalmonellaShigella Salmonella 29934 -/-/MacConkey SalmonellaShigella Salmonella 9842 26/01/12 MacConkey SalmonellaShigella Shigella sonnei -/-/MacConkey No Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Resultados
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Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus Streptococcus B-
75925
25/01/12
Agar Sangre
Satisfactorio
25923
-/-/-
Agar Sangre
Satisfactorio
75923
26/01/12
Agar Sangre
Satisfactorio
01/03/12
Agar Sangre
Satisfactorio
Hemolitico del Grupo A Satisfactorio: 85.7% (12) No Satisfactorio: 14.3% (2) Total: 100% (14) Grafico 2: Viabilidad de las cepas de referencias utilizadas en el rea de Bacteriologa
Viabilidad de las Cepas Controles.

14%
86% Satisfactorias No Satisfactorias
n=16
Observaciones de las cepas controles: Se solicit registro del control de calidad de las cepas de referencia para verificar los controles de calidad realizados anteriormente, pero los registros no fueron facilitados. Muchas de las cepas controles no estn bien identificadas (no tiene su respectivos cdigos ATCC y no cuenta con la primera fecha de utilizacin).
Observaciones de la preparacin pruebas de Susceptibilidad: En la pruebas para la susceptibilidad utilizan el Agar Mller Hinton. Para la medicin del inculo de las cepas no se utiliza el instrumento apropiado para medir los 0.5 de turbidez de la escala de McFarland (Lo realizan de manera visual). La escala de referencia de la turbidez esta conservada de manera adecuada (en oscuridad y a temperatura ambiente); Los sensidiscos son utilizados de forma incorrecta segn las normas establecidas por el CLSI, ya que los sensidiscos deben de ser colocados a temperatura ambiente dos horas antes de su utilizacin, y el tiempo que le dan en el laboratorio es de 30 min. Posteriormente se le suministran los Sensidiscos y son incubados a 37C durante 24 horas. Al igual que en las cepas control se solicit un registro de control de calidad en las pruebas de susceptibilidad pero tampoco fueron facilitados. Recomendaciones: Brindarle el tiempo adecuado a los Sensidiscos antes de ser utilizados. Cambiar la referencia de la turbidez cada mes.
Control de Calidad en las Prueba de susceptibilidad: El manual del CLSI ofrece diversas cepas ATCC estandarizada para realizar un adecuando control de calidad. Para nuestro control de calidad se decidi trabajar con dos cepas control ATCC establecidas por el CLSI, estas cepas corresponden al Staphylococcus aureus 75925 y Escherichia coli 25922. Prueba de susceptibilidad de la cepa control de Staphylococcus Aureus 75925 Se realiz prueba de susceptibilidad de la cepa control de Staphylococcus Aureus 75925 primeramente fue cultivado en Agar sangre para su adecuado crecimiento y aislamiento, posteriormente se mont la cepa control en Agar Mller Hinton para realizar la prueba de susceptibilidad, para realizacin de esta prueba utilizamos los sensidiscos que comnmente utilizan en laboratorio y posteriormente los halos medidos serian comparados con los valores estandarizados por el CLSI.
Los sensiidiscos
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utilzados son detallados en la tabla 2. Luego de 24 horas de incubacin se observ que existi contaminacin en el medio. Por tal motivo no se pudieron medir los halos formados por los Sensidiscos. Por lo tanto no tuvimos xito en nuestro control utilizando el Staphylococcus aureus. Tabla 3: Sencidiscos utilizados para la prueba de susceptibilidad de
Staphylococcus Aureus 75925 Sensidiscos Vancomycin Ceftriaxone Ciprofloxacin Erythromycin Penicillin G Oxacillin Gentamicin Microgramos 30 30 10 15 10 unit 1 10 Abreviatura (VA) 30 (CRO) 30 (CIP) 10 (E) 15 (P) 10 (OX)1 (CN)10 Fecha 2012/07 2015/03 2014/10 2012/06* 2012/07* 2012/11 2015/05
*Fecha de expiracin caducada Recomendaciones Realizar prueba de susceptibilidad para corroborar si la cepa control se encuentra realmente contaminada. Utilizacin de una nueva cepa control de Staphylococcus aureus para el control de la susceptibilidad. Prueba de susceptibilidad de la cepa control de Escherichia coli 25922. Primeramente se cultiv y aisl la Escherichia coli 25922 en Agar MacConkey, posteriormente se realiz el inculo en relacin a la turbidez de la escala de McFarland para luego cultivarla en Agar Mller Hinton con los sensidiscos especficos. 24 horas despus de haber realizado el inoculo se observ que hubo un adecuado crecimiento, por dicha razn procedimos a medir los halos obtenidos por los frmacos utilizados. En la Tabla 3 se observan los sensidiscos y resultados obtenidos de la prueba de susceptibilidad de la Eschericia coli.
Tabla 4: Resultados de la sensibilidad a los antimicrobianos utilizados en la prueba de susceptibilidad de la Escherichia coli 25922. Sensidiscos Ciprofloxacin Gentamicin Ceftriaxone Trimetropin Amoxicilina Sextasidime Abreviatura (CIP) 10 (CN) 10 (CRO) 30 (TRI) (AMX) (SXT) 30 Halo medido 34 mm 20 mm 33 mm 29 mm 19 mm 25 mm Rango del Halo 30-40 mm 19-26 mm 24-35 mm 10 mm 18-24 mm 25-32 mm
Recomendaciones: Verificar susceptibilidad para Trimetropin
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8. Discusin
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9. Conclusiones
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10. Recomendaciones
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11. Cronograma
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12. Anexos
La realizacin del test de control de calidad ser de acuerdo a las normas establecidas por el CLSI.
12.1.
Test de la Calidad
Control de calidad para el medio de cultivo. Utilizan Agar Mueller Hinton en la pruebas de sensibilidad: SI_X__NO____ El Agar utilizado es altamente reproducible: SI_X__NO____ El Agar con el que se trabaja es bajo en inhibidores: SI_X_NO____ Utilizan un Agar que permite el crecimiento de microrganismos no fastidiosos: SI_X_NO____ El cultivo realizado tiene un grosor de 4mm: SI____NO_X_ Determinan si los tamaos de los halos obtenidos con cada cepa estn dentro del intervalo esperado: SI_X_NO____ Incuban placas para mostrar su esterilidad: SI _X_ TODAS____ Dejan las placas todo un da para verificar su esterilidad: SI_X_NO____ Mantienen registro de todas las placas con las que trabajan: SI_X_NO___ Utilizan platos y Agar que se encuentran en un adecuado tiempo de vigencia: SI_X_NO____ Revisan que las placas se encuentren en un buen estado fsico: SI_X_NO___ Aciertos: 10; Desaciertos: 1; Total: 11. pH del medio de cultivo. Le miden el pH al medio de cultivo preparado: SI__NO_X_ El medio de cultivo con el que trabajan tiene un pH de 7.2 a 7.4: SI____NO____ SE DESCONOCE EL pH: _X_ Aciertos: 0; Desaciertos: 2; Total: 2.
Control de calidad en la concentracin de cationes. Le miden los cationes a los medios de cultivos: SI__NO_X_ Las concentraciones de los cationes se encuentran en un estado ptimo para trabajar: SI____NO____ Se desconoce: _X_ La concentracin de aniones estn bien calibradas segn la norma de la CLSI: SI____NO__ Se desconoce: _X_ Aciertos: 0; Desaciertos: 3; Total: 3. Inculo. Se utiliza un inculo con una turbidez al 0.5 de la escala de McFarland: SI_X_NO____ Esta escala se conserva a temperatura ambiente y en oscuridad: SI_X_NO____ Se dio un buen tiempo de inculo: SI_X_NO____ Aciertos: 3; Desaciertos: 0; Total: 3. Incubacin. Se encuentra la incubadora en ptima temperatura de 37C para guardar un microrganismo en crecimiento: SI_X_NO____ Llevan un tiempo de control de incubacin del microrganismos: SI_X_NO____ Aciertos: 2; Desaciertos: 0; Total: 2. Sensidiscos. Se encuentran en un buen lugar de almacenamiento: SI_X_NO____ Estn almacenados de -8C a 14C: SI_X_NO____ Se brinda un adecuado tiempo de reposo (1-2 horas) a los sensidiscos antes de usarse para que se equilibren a temperatura ambiente: SI___ NO_X_ Chequean la fecha de expiracin de los discos: SI_X_NO____ Utilizan discos con fecha de expiracin dentro del lmite: SI___NO_X_ Almacenan los discos con desecantes: SI_X_NO____ Se utilizaron discos auxiliares: SI___ NO_X_ (Acierto)
Aciertos: 5; Desaciertos: 2; Total: 7. Cepas Utilizan cepas de referencia: American Type Culture Colection (ATCC) en el control de calidad: SI_X_NO____ Seleccionan cepas en base en su susceptibilidad resistencia: SI_X_NO____ Son confiables las cepas utilizadas en el control de calidad. SI____NO_X_ Se utiliza un control de temperatura como termmetro certificado para calibrar y operar. SI_X_ NO____ Son almacenadas correctamente. SI_X_NO____ Aciertos: 4; Desaciertos: 1; Total: 5. Refrigeradoras. El refrigerador est trabajando a ptimas condiciones de temperatura. SI_X_NO____ Mantienen un control de temperatura constante. SI_X_ NO____ Tiene el refrigerador alguna hoja que especifique control de mantenimiento del mismo pegada en l. SI_X_NO____ Le dan mantenimiento frecuentemente al refrigerador. SI_X_NO____ Tiene el refrigerador indicaciones e instrucciones de advertencias del su uso adheridas a l. SI_X_ NO__ Aciertos: 5; Desaciertos: 0; Total: 5.
Balanzas. Qu tipo de balanza utilizan. ANALITICA____MECANICA____ AMBAS:_X_ Las balanzas que utilizan estn bien calibradas. SI_X_NO____ Las balanzas utilizan pesos estndares para calibrarlas. SI_X_NO____ Las balanzas cumplen con los requisitos de calibracin estndares. SI_X_NO____ Aciertos: 4; Desaciertos: 0; Total: 4.
Pipetas. Las pipetas que utilizan se encuentran calibradas. SI_X_ NO____ El encargado hace buen uso del pipeteo para las muestras. SI_X_NO____ Utilizan lquidos que expulsan vapores con las pipetas. SI____NO_X_ (Acierto) Los matraces Erlenmeyer o aforados y precipitados que utilizan estn bien lavados. SI_X_NO____ Los matraces Erlenmeyer o aforado son resistentes y adecuados a soportar altas temperaturas. SI_X_NO____ Aciertos: 5; Desaciertos: 0; Total: 5.
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13. Bibliografa
1. Sierra Amor Rosa Isabel. El laboratorio y el control de calidad. Asociacin Mexicana de Bioqumica Clnica. 2006 2. Orta Mira N. y Guna Serrano M. Control de calidad en microbiologa molecular. 2008 3. M.D. Rojo. Enfermedades infecciosas y microbiologa clnica. 2010 4. Ministerio de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio en bioqumica clnica y el control de calidad. Managua, Nicaragua. 2005 5. Caballero J Eric. Manual de calidad de microbiologa clnica. Tecnologa Mdica Universidad de Panam 6. Farinati Zulema. Control de Calidad en Laboratorios Clnicos: Control Interno. 2009 7. Organizacin Mundial de la Salud Resistencia antimicrobiana: Una amenaza mundial Boletn Informativo OMS-OPS 8. OPS, OMS. Mesa redonda sobre la resistencia a los antimicrobianos. CD51/15, Rev. 1. Washington, D.C., EUA, septiembre del 2011 9. Norma internacional ISO 9001.Sistema de gestin de la calidad-requisitos. Suiza ISO 2000 10. Corso A. y Ceriana P. Control de calidad en bacteriologa y resistencia a los antimicrobianos: siete aos de experiencia en Amrica Latina. Rev PanamInfectol 2008;10 (4 Supl 1):S26-37 11. Alliance for the Prudent use of Antibiotics. Birth of a public surveillance system: PAHO combats the spread of antimicrobial resistance in Latin America. The APUA Newsletter 2006;24 12. OPS/OMS. Carta acuerdo entre la Administracin Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud (ANLIS) y la Organizacin Panamericana de la Salud/Organizacin Mundial de la Salud; 2007 (HDM/CD/147). 13. Rojas N., Chvez E., Garca F. Bacteriologa Diagnstica. Universidad de Costa Rica, Facultad de Microbiologa; 2006
14. Martin, G y Carmona, O. Prevencin de la resistencia bacteriana a antimicrobianos. aspectos farmacolgicos. Rev. Soc. Ven. Microbiol., ene. 2003, vol.23, no.1, p.55-59. ISSN 1315-2556. 15. Garca P. Resistencia bacteriana en Chile. Rev Chil Infect 2003; 20 (Supl 1): S11 - S23 16. Sussmann O; Mattos L; Restrepo A. Resistencia Bacteriana. Unidad de Infectologa, Hospital Universitario San Ignacio, Colombia 17. Hospital Dr. E. Torres G. Evaluacin del control de calidad interno en el laboratorio de bacteriologa. Laboratorio Microbiologa Hospital Dr. E. torres G. 18. Herrera M y Campos M. Control de la Calidad para un Laboratorio de
Microbiologa. Revista Mdica del Hospital Nacional de Nios / 40 (1) 2005 19. Grupo para el control de la resistencia bacteriana de Bogot (GREBO). Manual de Actualizacin en Resistencia Bacteriana y Normas CLSI M100-S20 2010. Secretaria distrital de salud. Bogot 2010 20. Stephen J. Cavalier, Manual de pruebas de susceptibilidad antimicrobiana, [et al.]; editora coordinadora, Marie B. Coyle.QR177.M37 2005 21. Instituto nacional de enfermedades infecciosas. Manual de procedimientos para la determinacin de la sensibilidad a los antimicrobianos en bacterias aisladas de humanos. Ministerio de Salud; Subsecretara de Investigacin y Tecnologa ANLIS Dr. Carlos G. Malbrn Departamento Bacteriologa Servicio Antimicrobianos Buenos Aires, Argentina 2001 22. Ministerio de Salud del Per. Manual de procedimientos para la prueba de sensibilidad antibacteriana por el mtodo de disco difusin. Serie de Normas Tcnicas N30; Lima-2002 23. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)- Wikipedia: http://en.wikipedia.org/wiki/Clinical_and_Laboratory_Standards_Institute 24. CLSI, OPS. Normas para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos con discos. M02-A10; Vol. 29 No. 1; Enero 2009 Dcima edicin.
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Universidad Nacional Autnoma de Nicaragua Facultad de Ciencias Mdicas Departamento de Microbiologa y Parasitologa Carrera de Bioanlisis Clnico

Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana

Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana

Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana

Palabras del Tutor

Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana

Diseo metodolgico........................................................................................................................ 19 Test de la Calidad ......................................................................................................................... 20

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Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana

El control de calidad es un pilar sumamente importante y de estricto cumplimiento en todo laboratorio.

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Control de Calidad en las Cepas de Referencia.

Satisfactorio: 85.7% (12) No Satisfactorio: 14.3% (2) Total: 100% (14)

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Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana

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Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana

. Los grmenes patgenos

desarrollan la resistencia a los antimicrobianos por un proceso denominado seleccin

.Las aplicaciones de estas tcnicas, son fundamentales para

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3. Planteamiento del problema

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Control de calidad en la fase analtica de las pruebas de resistencia antimicrobiana

. Las cuales son fundamentales para aumentar la fiabilidad y

la validez de los resultados

. Es necesario que el control realizado pueda identificar,

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. Por tal razn el laboratorio debe participar en

5.1. Control de calidad interno

. Las muestras de control utilizadas son muestras de suero o

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5.2. Aseguramiento de la calidad

. Cuando un procedimiento de control de

5.3. Control de la documentacin

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. Esta documentacin ha de conformar los registros de

5.4. Aseguramiento de la calidad (control externo)

5.5. Control de equipos.

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5.6.1. Control de calidad en las pruebas de susceptibilidad

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Control de calidad del medio

El pH del medio debe estar entre 7.2 y 7.4

a temperatura ambiente y debe

, produciendo as zonas ms pequeas, menos ntidas o sin halo lo

cual puede dar como resultado un informe de falsa resistencia.(21)

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. Se debe utilizar un inoculo con una turbidez al 0.5 de la

escala de McFarland. Esta escala debe conservarse a temperatura ambiente y en

La temperatura y tiempo de incubacin dependen del microorganismo a probar

En este proceso se debe tomar en cuenta lo siguiente

SI NO SI NO

SI NO SI NO

temperatura Mantenimientos Chequeo del equipo Observacin SI NO

desprenden vapores Matraces Recipiente de cristal Observacin SI NO