UNIVERSIDAD EARTH

EFECTO DE MICROORGANISMOS EFICACES (EM) SOBRE LA PRODUCCIN DEL HONGO OSTRA Pleurotus ostreatus (AGARICALES: TRICHOLOMATACEAE) A PARTIR DE REMANENTES AGRCOLAS

Por JUAN CARLOS FLORES CHINCHILLA NATALIA ARIAS GRILLO

Trabajo de graduacin presentado como requisito parcial para optar al ttulo de INGENIERO AGRNOMO Con el grado de LICENCIATURA

Gucimo, Costa Rica Diciembre, 2006

Trabajo de graduacin presentado como requisito parcial para optar al ttulo de Ingeniero Agrnomo con el grado de Licenciatura

Profesor Asesor

____________________ Fritz Elango, Ph. D.

Profesor Asesor

_____________________ Pnfilo Tabora, Ph. D.

Decano

_____________________ Marlon Breve, Ph. D.

Candidato

_____________________ Juan Carlos Flores Ch.

Candidato

____________________ Natalia Arias Gr.

Diciembre, 2006 iii

DEDICATORIA Con mucha alegra, humildad y gratitud quiero dedicar este trabajo a Dios por todas las bendiciones dadas y quien me regal la oportunidad de pertenecer a esta gran familia EARTH. A mis padres por regalarme el don de la vida. A todos mis hermanos, madres, tas y personal administrativo de Aldeas Infantiles SOS Bolivia, por su amor incondicional y por todo el apoyo que me han dado durante toda mi existencia. A mi becario la fundacin Simn I Patio, por darme la oportunidad de contuniar mis estudios superiores. Al Ing. Alberto Melgar Rada por todo su apoyo y sobre todo por creer en mi persona. Al Ing. Rodrigo Bettoni y su esposa Patricia Jimnez, por ser mis guas y amigos en estos aos de estudio.

Juan Carlos Flores Chinchilla.

Al Divino Nio, que desde un inicio puse este Proyecto de graduacin en sus manos y todo salio con mucho amor. A mis padres Mayra y Rudy por ser mis guas y por brindarme su apoyo infinito. A mis hermanos que siempre han credo en mi persona y han estado en este camino acompandome. Gracias por permitirme ser quien soy y por todas las enseanzas morales, intelectuales y fsicas que he recibido de ustedes a lo largo de mi vida Los amo.

Natalia Arias Grillo.

AGRADECIMIENTO Agradecemos primero que todo a Dios, por ese amor infinito e incondicional y su bondad por darnos fuerzas cada da. A nuestros padres por constituir el pilar fundamental de la vida en este gran logro. De manera especial queremos agradecer a nuestros asesores Fritz Elango y Pnfilo Tabora, quienes nos brindaron gratitud y apoyo en este proyecto. A cada una de nuestros profesores que aportaron en nuestra formacin. Al Lic. Roger Ruiz quien nos apoyo desinteresadamente para que este proyecto tenga el xito deseado. A las personas que trabajan en el Laboratorio de Ciencias Naturales, Joaqun, Josseth y Galvn quienes hicieron del laboratorio un hogar para nosotros, gracias por su paciencia, ayuda y sobretodo por su gran amistad. A nuestros compaeros y amigos quienes ayudaron a sembrar amor y compromiso.

Juan Carlos Flores. Natalia Arias.

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RESUMEN La produccin agropecuaria est generando un impacto negativo en el ambiente, debido a la alta acumulacin de desechos orgnicos. En muchos pases el uso de estos remanentes agrcolas es aprovechado para el cultivo de hongos comestibles que a su vez genera un ingreso econmico. En este estudio, se evalu la utilizacin de remanentes agrcolas como son el aserrn de balsa y el bokashi de banano tratados con y sin microorganismos eficaces (EM), para la produccin del hongo ostra (Pleurotus ostreatus) y se determino la relacin entre carbono y nitrgeno (C:N) de los sustratos y el ndice de colonizacin de los mismos. Como resultados, el aserrn de balsa, obtuvo una diferencia estadstica significativa (p<0.05) en cuanto a la colonizacin y fructificacin del sustrato en comparacin con el bokashi de banano, el cual presento una colonizacin menor al 20 % y no alcanz la etapa de fructificacin. La eficiencia biolgica para el aserrn de balsa tratado con EM fue de 30 % y para el aserrn de balsa sin EM fue de 29 %. En la prueba entre C:N y el ndice de colonizacin, se obtuvo un coeficiente de correlacin de r2=0,91. Pues sustratos con relaciones C:N entre los 100:1 a 200:1 fueron los que presentaron mejores resultados de colonizacin por el micelio. Se concluye que el uso de EM en el compostaje de los sustratos no tiene ningn efecto ni en la colonizacin ni en la fructificacin del hongo ostra.

Palabras Claves: Hongo ostra (Pleurotus ostreatus) (Agaricales: tricholomataceae), aserrn de balsa (Ochroma lagopus); Bokashi de banano, EM, remanentes agrcolas, Eficiencia biolgica (EB).

Arias N.; Flores J. 2006. Efecto de microorganismos eficaces (EM) sobre la produccin del hongo ostra Pleurotus ostreatus (Agaricales: tricholomataceae) a partir de remanentes agrcolas. Proyecto de Graduacin Lic. Ing. Agr.; Gucimo, Costa Rica, Universidad EARTH. 55 p. ix

ABSTRACT The agricultural industry generates large amounts of organic waste materials which are currently being given added value by utilizing them for mushroom production. This study evaluated the effect of treating two such substrates (Balsa sawdust and Banana bokashi) with and without effective microorganisms (EM) on colonization and yield of the oyster mushroom (Pleurotus ostreatus). The relationship between carbon and nitrogen (C:N) ratio of waste materials and their suitability for mycelial colonization was also studied. The results showed that EM treatment of substrates neither improved their colonization nor increased yields significantly. The Biological efficiency of EM-treated sawdust was 30 % compared with 29 % for the non treated one. However, statistically significant differences (p<0.05) were obtained between the Balsa sawdust and banana bokashi in terms of substrate colonization and mushroom yields. An analysis of the relationship between C:N ratio of substrates and their colonization by Pleurotus ostreatus resulted in a correlation coefficient (r2) of 0.91; The most suitable substrates for the oyster mushroom were those with a C:N ratio of 100 - 200.

Key words: Oyster mushroom (Pleurotus ostreatus) (Agaricales: tricholomataceae), Balsa sawdust (Ochroma lagopus), Banana bokashi, Efficient microorganisms (EM), Organic waste, Biological efficiency (EB).

Arias N.; Flores J. 2006. Efecto de microorganismos eficaces (EM) sobre la produccin del hongo ostra Pleurotus ostreatus (Agaricales: tricholomataceae) a partir de remanentes agrcolas. Proyecto de Graduacin Lic. Ing. Agr.; Gucimo, Costa Rica, Universidad EARTH. 55 p.

TABLA DE CONTENIDO Pgina DEDICATORIA ................................................................................................. V AGRADECIMIENTO ....................................................................................... VII RESUMEN ....................................................................................................... IX ABSTRACT....................................................................................................... X TABLA DE CONTENIDO ................................................................................. XI LISTA DE CUADROS .................................................................................... XIV LISTA DE FIGURAS ....................................................................................... XV LISTA DE ANEXOS ....................................................................................... XVI 1 2 INTRODUCCIN...............................................................................................1 OBJETIVOS ......................................................................................................3 2.1 GENERAL .................................................................................................3 2.2 ESPECIFICOS ..........................................................................................3 3 REVISIN DE LITERATURA............................................................................4 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 GENERALIDADES ....................................................................................4 DESCRIPCIN DEL HONGO ...................................................................4 VALOR NUTRICIONAL .............................................................................5 CONDICIONES NECESARIAS PARA EL CRECIMIENTO .......................6 CULTIVO DE GRANO O SPAWN...........................................................6 3.5.1 Preparacin de semilla madre. ....................................................6 3.5.2 Esterilizacin del Grano. ..............................................................7 3.5.3 Inoculacin e incubacin con cultivo micelial...............................7 SUSTRATOS PARA PRODUCIR HONGOS PLEUROTUS OSTREATUS 7 Criterios analticos para seleccionar el sustrato...........................7 3.6.1 3.6.2 Relacin entre carbono y nitrgeno C:N de los sustratos y la rapidez de la colonizacin del hongo. ......................................................9 EFECTOS DE MICROORGANISMO EFICACES (EM) EN LA PRODUCCIN DE HONGOS........................................................................................... 10 3.7.1 Descripcin ................................................................................ 10 3.7.2 Desarrollo del EM ...................................................................... 10 3.7.3 Bacterias cido lcticas ............................................................. 10 3.7.4 Levaduras .................................................................................. 11 3.7.5 Bacterias Fotosintticas............................................................. 11 3.7.6 Actinomicetos ............................................................................ 12 3.7.7 Hongos filamentazos ................................................................. 12 PASTEURIZACIN DEL SUSTRATO..................................................... 13 3.8.1 Pasteurizacin por vapor ........................................................... 13 PRODUCCIN EN BOLSAS...................................................................13 SIEMBRA DEL SUSTRATO .................................................................... 14

3.6

3.7

3.8 3.9 3.10

xi

3.11 INCUBACIN ......................................................................................... 14 3.12 FRUCTIFICACIN Y COSECHA............................................................ 15 3.12.1 La fructificacin en condiciones controladas ............................. 15 3.13 EL RIEGO ............................................................................................... 16 3.14 LA VENTILACIN................................................................................... 17 3.15 LA LUZ.................................................................................................... 17 3.16 COSECHA .............................................................................................. 17 3.17 CONSERVACIN ................................................................................... 18 3.17.1 MANEJO POST-COSECHA...................................................... 18 3.18 PLAGAS Y ENFERMEDADES ............................................................... 19 3.18.1 Plagas ....................................................................................... 19 3.18.2 Enfermedades ........................................................................... 19 3.18.3 Anomalas no parasitarias......................................................... 21 4 MATERIALES Y METODOS .......................................................................... 22 4.1 OBTENCIN Y PREPARACIN DEL CULTIVO PURO........................ 22 4.2 PREPARACIN DE SPAWN ............................................................... 22 4.3 ACONDICIONAMIENTO DEL SITIO DE TRABAJO (CUARTO DE PRODUCCIN). ..................................................................................... 23 4.4 OBTENCIN Y PREPARACIN DE LOS SUSTRATO.......................... 23 4.5 METODOLOGA UTILIZADA PARA LA ELABORACIN DE BOKASHI EN FINCA AGROCOMERCIAL DE LA UNIVERSIDAD EARTH................... 24 4.6 PASTEURIZACIN DE LOS SUSTRATOS............................................ 26 4.7 INOCULACIN DE LOS SUSTRATOS .................................................. 27 4.8 DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA PRODUCCIN DEL HONGO P. OSTREATUS. ......................................................................................... 28 4.9 CRITERIOS DE EVALUACIN .............................................................. 29 4.10 RELACIN C:N DE LOS SUSTRATOS Y RAPIDEZ DE COLONIZACIN DE LOS SUSTRATOS. ................................................................................. 31 5 RESULTADOS Y DISCUSIN ....................................................................... 33 5.1 COLONIZACIN DE LOS TRATAMIENTOS POR CICLO DE PRODUCCIN A LA SEMANA TRES.............................................................................. 33 5.2 FRUCTIFICACIN DE LOS TRATAMIENTOS EN LOS CICLOS PRODUCTIVOS...................................................................................... 35 5.3 RELACIN ENTRE CARBONO NITRGENO (C:N) Y PH EN LA COLONIZACIN DE P. OSTREATUS.................................................... 38 5.4 EFICIENCIA BIOLOGICA DE LOS SUSTRATOS. ................................. 40 5.5 ANLISIS ESTADISTICO. ...................................................................... 41 6 7 8 CONCLUSIONES ........................................................................................... 43 RECOMENDACIONES................................................................................... 44 BIBLIOGRAFA CITADA................................................................................ 45 xii

ANEXOS ......................................................................................................... 49

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LISTA DE CUADROS Cuadro Pgina

Cuadro 1. Clasificacin taxonmica de Pleurotus ostreatus ............................................ 4 Cuadro 2. Parmetros de crecimiento en los estadios de produccin de P. ostreatus. ... 6 Cuadro 3. Parmetros para la fructificacin de Pleurotus ostreatus. ............................. 15 Cuadro 4. Descripcin de los tratamientos evaluados, para la produccin de P. ostreatus. ....................................................................................................................... 30 Cuadro 5. Criterios de evaluacin de colonizacin y contaminacin de las bolsas. ...... 30 Cuadro 6. Porcentaje de humedad entre los ciclos de produccin por tratamientos. EARTH 2006.................................................................................................................. 34 Cuadro 7. Medidas del pilo en los tratamientos. EARTH. 2006. .................................. 37 Cuadro 8. Resultados prueba de colonizacin in vitro de diferentes sustratos. EARTH 2006............................................................................................................................... 38 Cuadro 9. Anlisis de varianza factorial de la variable colonizacin. EARTH 2006....... 41 Cuadro 10. Anlisis de varianza factorial del rendimiento (cosecha). EARTH. 2006..... 42

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LISTA DE FIGURAS Figura Pgina

Figura 1. Partes del hongo comestible P. ostreatus. Tomado de Mata (2003).................5 Figura 2. Pasos a seguir en la produccin tejido miceliar en PDA y la siembra de este inoculo sobre spawn. ...................................................................................................22 Figura 3. Suplementacin de sustratos y llenado de bolsas. .........................................24 Figura 4. Proceso utilizado para producir Bokashi, EARTH, C.R. ..................................26 Figura 5. Pasteurizacin de los sustratos.......................................................................27 Figura 6. Diagrama del flujo del proceso para evaluar los sustratos para producir P. ostreatus.........................................................................................................................29 Figura 7. Relacin del ndice de colonizacin entre los tratamientos por ciclo productivo. .......................................................................................................................................34 Figura 8. Mediciones de temperatura y humedad con termohigrgrafo en el cuarto de fructificacin de hongos comestibles P. ostreatus. EARTH 2006...................................35 Figura 9. Colonizacin y fructificacin del hongo P. ostreatus en el cuarto de fructificacin. EARTH 2006. ...........................................................................................36 Figura 10. Rendimiento de los tratamientos en los ciclos productivos. ..........................37 Figura 11. Relacin entre C:N y el dimetro de colonizacin por el hongo P. ostreatus. .......................................................................................................................................39

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LISTA DE ANEXOS Anexo Pgina

Anexo 1. Croquis y diseo del lugar de trabajo. ............................................................ 51 Anexo 2. Acondicionamiento de los cuartos para colonizacin y fructificacin del hongo Pleurotus ostreatus. ....................................................................................................... 51 Anexo 3. Caldera utilizada para la pasteurizacin de sustratos..................................... 51 Anexo 4. Composicin qumica de los sustratos evaluados, antes y despus de la inoculacin y fructificacin. ............................................................................................ 52 Anexo 5. Informacin para anlisis en SAS V8. ............................................................ 52

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INTRODUCCIN

La produccin agropecuaria est generando un impacto negativo en el ambiente, debido a la alta acumulacin de desechos orgnicos como son el pinzote de banano, aserrn de balsa, pulpa de caf, entre otros, los cuales afectan directamente al ser humano. Debido a esta problemtica, hay una necesidad de implementar alternativas sostenibles de manejo de remanentes que a su vez genere un ingreso econmico. En muchos pases, se aprovecha el uso de estos remanentes agrcolas para el cultivo de hongos comestibles. Esta actividad ha crecido como una agroindustria de gran desarrollo que no slo genera divisas considerables, sino que tambin absorben mano de obra durante todo el ao (Garca 2006). La produccin mundial de hongos representa en la actualidad cerca de tres millones de toneladas por ao: un milln corresponden a hongos de recoleccin silvestre y los dos millones restantes a hongos cultivados (Snchez y Royse 2001). El crecimiento del sector es cercano al 5 % por ao, el principal productor mundial de hongos comestibles es China (42 %), seguido por Estados Unidos (13 %) y Pases Bajos (9 %) (FAO 2001). Este producto no tradicional ha venido ganando popularidad debido a que los hongos poseen un alto valor nutricional, 1,5 % a 6 % de protena, lpidos entre 0,2 % a 0,3 %, hidratos de carbono menos del 60 % (ICIDCA 1998). Estudios realizados por Rosario (2005), en el rea de la medicina se ha encontrado que el gnero Pleurotus spp., lleva a cabo actividades antibacteriales, antivirales, antitumores, hematolgicas y que ayuda en la reduccin de los niveles de colesterol. En Amrica, el consumo de hongos forma parte del acervo cultural de la poblacin rural, su conocimiento y uso fue muy importante en las culturas prehispnicas, de tal manera que constituyeron parte de una estrategia de subsistencia basada en el uso mltiple de los recursos naturales. La familia Tricholomataceae donde se encuentra el hongo Pleurotus ostreatus son las de mayor produccin comercial (Rosario 2005). El Pleurotus ostreatus como los dems hongos comestibles es un hongo que carece de estructuras fisiolgicas para

producir su propio alimento, por ser un organismo hetertrofo y que adems se alimenta de materias vegetales muertas o degradadas, es necesario as prepararle condiciones y medios para que pueda tomar lo que necesite y crecer sin inconveniente (Fernndez 1994). Este cultivo se ha destacado por tener un rpido crecimiento, son fciles de cultivar y no requiere mano de obra especializada. Segn estudios realizados en varios pases, la especie comestible Pleurotus ostreatus, tiene la habilidad para crecer en una amplia variedad de materias primas agrcolas; como por ejemplo aserrn, salvado de arroz, elote de maz, bagazo de caa y hojas de caa, tallos y hojas de maz entre otros (Snchez y Royse 2001). Muchos otros sustratos pueden ser utilizados, dependiendo de su disponibilidad en cada regin. Segn Viteri (2003) en Costa Rica, especficamente en el trpico hmedo, la industria aserradera genera una alta cantidad de aserrn de balsa Ochroma lagopus Sw. (Malvale: Bombacaceae) solo en la provincia de Limn, se encontr que un aserradero especializado genera alrededor de 15,68 t de aserrn de balsa/ao, la cual tiene un 9 % a 11 % de humedad. Otra actividad, que esta generando grandes cantidades de desechos, producto del procesamiento y produccin son las plantaciones de banano Musa spp (Escitamneas: Musaceae) especficamente las plantas empacadoras (pinzote de banano, cscaras de banano). Utilizar esos remanentes como sustratos para la produccin de hongos comestibles es una alternativa viable que se la prctica en ms de 70 pases, por lo que ha acelerado el proceso de investigacin. La produccin de hongos comestibles son productos que gozan de un alto precio en el mercado, lo que determina esta actividad con un gran potencial econmico y de sostenibilidad (Snchez y Royse 2001).

2 2.1 GENERAL

OBJETIVOS

Evaluar remanentes agrcolas para la produccin de Pleurotus ostreatus (Agaricales: tricholomataceae) como son el aserrn de balsa y el bokashi de banano.

2.2

ESPECIFICOS Evaluar el aserrn de balsa (Ochroma lagopus Sw. Malvales: Bombacaceae) y el bokashi de banano Musa spp (Escitamneas: Musaceae) tratado con y sin EM para la produccin de Pleurotus ostreatus. Determinar la relacin entre C:N (carbono, nitrgeno) de cada remanente, utilizado como sustrato y la colonizacin de Pleurotus ostreatus.

3 3.1 GENERALIDADES

REVISIN DE LITERATURA

Los hongos son un grupo diferente de organismos ms emparentados con los animales que con las plantas (Universidad de Almera 2006). Segn Snchez y Royse (2001) la clasificacin taxonmica para Pleurotus ostreatus se muestra en el Cuadro 1. Cuadro 1. Clasificacin taxonmica de Pleurotus ostreatus
Reino Divisin Clase Subclase Orden Familia Gnero Especie Fuente. Snchez y Royse (2001) Fungi Basidiomycotina Homobacidiomicete Hymenomicete Agaricales Tricholomataceae Pleurotus ostreatus

3.2

DESCRIPCIN DEL HONGO P. ostreatus, presenta un sombrero o pleo convexo, raramente redondo, casi

siempre en forma de ostra o concha (Snchez y Royse 2001). Puede presentar escamas hacia el centro o en la base y los cuerpos fructferos son por lo general concrescentes (soldado en una pieza). El pleo puede medir entre 5 cm y 12 cm de dimetro. Su color es muy variable, negro violceo, pardo ceniciento, gris, amarillo, blanco, segn su especie (Mata 2003), margen enrollado a incursado a veces lobulado. Sus laminillas o himenforo, son muy decurrentes (laminillas extendidas a lo lago del tallo), anastomosadas (unido a otros elementos anatmicos) en la base, anchas blancas cuando joven a amarillentas cuando muy maduro, prximas, lisas, 0,3 cm a 0,6 cm de ancho (Figura 1) El estpite es corto, excntrico o lateral, engrosado gradualmente hacia el lado del sombrero o pleo, algunas veces no se presenta.

Generalmente mide alrededor de 2 cm de longitud, 1 cm a 2 cm de grosor, con forma de tapn, posicin lateral, superficie lisa a finamente aterciopelada principalmente hacia la base, y es blanquecino y de contexto blanco. Las esporas son de color lila o crema en masa, elipsoide con una talla promedio de 9.5 micras x 3.5 micras (Guzmn 1990). Segn Murillo y Ulloa (2004) la parte que se consume del hongo es el sombrero que a su vez es su rgano reproductor.

Figura 1. Partes del hongo comestible P. ostreatus. Tomado de Mata (2003). 3.3 VALOR NUTRICIONAL Los hongos poseen un alto valor nutricional, sus protenas, contienen todos los cidos aminados de valor nutritivo ms alto que el de las protenas de las plantas, con una calidad cercana a la protena animal (Lelley 1987). Segn Steineck (1987), los hongos poseen 1,5 % a 6 % de protena de los cuales un 70 % a 80 % son digeribles. Segn Snchez y Royse (2001), los hongos poseen carbohidratos polimricos como el glucgeno y la quitina, y varios compuestos carbonados de bajo peso molecular como la glucosa, fructosa, galactosa, y muchos otros. Ellos son ricos en minerales como el potasio, fsforo y el hierro. Contiene un amplio rango de vitaminas y particularmente ricos en tiamina (B1), acido pantotenico (B3), acido ascrbico (C).

3.4

CONDICIONES NECESARIAS PARA EL CRECIMIENTO Segn Stamets (2000), el hongo P. ostreatus requiere de ciertas condiciones que

se le debe dar para optimizar su crecimiento y mejorar su produccin (Cuadro 2). Cuadro 2. Parmetros de crecimiento en los estadios de produccin de P. ostreatus.
Condiciones Temperatura Humedad relativa. Humedad del sustrato pH sustrato Duracin Concentracin CO2 Requerimiento lumnico Fuente: Stamets (2000). Spawn 24-29 0C 90-100 % --------------------8-14 das 5000 ppm n/a Formacin de primordios 10-27 0C 95-100 % ------------------------------3-5 das 400-800 ppm 150-200 lux Desarrollo cuerpo fructfero 18-24 0C 85-90 % 50-60 % 5-6 3-5 das 400-800 ppm 150-200 lux

3.5

CULTIVO DE GRANO O SPAWN

3.5.1 Preparacin de semilla madre. El spawn es semilla esterilizada de trigo, sorgo o arroz, etc, debidamente colonizada por el micelio de P. ostreatus (Elango 2006)1. Para preparar la semilla madre, los granos (trigo, sorgo o arroz) son lavados abundantemente y dejados en remojo toda la noche. Las semillas muertas y aquellas que frotan sobre el agua son removidas cuidadosamente. Al siguiente da las semillas son lavadas y hervidas en agua de 10 a 15 minutos hasta que se expandan sin romperse, cuando los granos se han hinchado son removidos del calor y se debe de eliminar el exceso de humedad con un tratamiento de ventilacin entre 30 y 60 min (Snchez y Royse 2001). Esta parte es muy critica puesto que si se tiene granos muy secos el crecimiento del micelio ser muy lento y si esta muy hmedo igualmente el micelio no se desarrolla. La humedad ptima para los granos es alrededor del 50 %, despus que se obtiene la

Elango F. 2006. Produccin de hongos comestibles. Universidad EARTH, Gucimo, CR, Comunicacin personal.

humedad adecuada, se colocan en botellas de vidrio a de su capacidad y se tapa con algodn (Snchez y Royse 2001). 3.5.2 Esterilizacin del Grano. Las botellas de vidrio llenas a de su capacidad, estn lista para la esterilizacin en autoclave a 121 C y a 15 lbs/pulg 2. Segn Sanchez y Royse (2001), el tiempo de esterilizacin depende del tamao de la botella, para botellas de 0,5 a 1 L dos horas de esterilizacin a 15 libras/pulg2 es suficiente; recipientes mayores a estos se requieren cuatro horas. Las botellas se enfran a temperatura ambiente antes de inocular con el cultivo puro (trozo de agar micelio). 3.5.3 Inoculacin e incubacin con cultivo micelial Esta etapa se hace bajo completa asepsia (medio estril), dentro de una cmara de flujo laminar, la cual asegura la transferencia o el aislamiento del cultivo puro. El tcnico debe de tener ropa limpia, bata de laboratorio, lavarse las manos con alcohol del 70%, no hablar ya que la boca contiene bacterias o esporas que pueden contaminar el sustrato, es mejor si la persona que realiza esta labor tiene mascarilla. Segn Quimio et al. (1990), para inocular el micelio que proviene de una caja petri, se usa un bistur para cortar el agar en pequeos cuadros o trozos y trasferirlos a los granos estriles, la botella de vidrio se destapa y se inclina introduciendo el trozo del micelio dejndose caer sobre la superficie de los granos, tapar las botellas, para que el micelio incube a temperatura ambiente (20 C a 27 C) sin moverlo y poca oscuridad, dejarlo aproximadamente de 2 a 4 semanas despus de la inoculacin segn el tipo de recipiente hasta que el micelio blanco haya cubierto completamente todos los granos. 3.6 SUSTRATOS PARA PRODUCIR HONGOS Pleurotus ostreatus

3.6.1 Criterios analticos para seleccionar el sustrato. Puesto que las variedades del hongo Pleurotus spp son degradadores de madera, los sustratos deben de tener un alto contenido de lignocelulosa. Segn Snchez y Royse (2001) los materiales lignocelulsicos se encuentran en su mayora en desechos orgnicos de la industria aserradera, agricultura y jardines. Antes de hacer 7

uso de estos y otros subproductos similares, se debe determinar su compatibilidad con los requerimientos del hongo. Los materiales que se usaran para los sustratos deben poseer caractersticas como ser: Buena disponibilidad en cantidad y continuidad; buen conocimiento de sus caractersticas fsico-qumicas, localizacin fcil y cercana, facilidad de transporte y manejo, adems de un precio ventajoso de adquisicin. Segn Snchez y Royse 2001, existen tres grandes grupos de materias primas para ser utilizadas como sustratos en la produccin de P. ostreatus. El principal grupo lo forman las pajas de cereales (arroz, trigo, cebada, maz, tallo de sorgo, entre otros) recogidos en los rastrojos tras el cosechado de los granos, ya que son materias con alto predominio de lignocelulosa y nitrgeno por debajo del 1 %. Otro grupo de materiales corresponde a los tallos hojas o resto de cultivo de plantas destinadas a un uso o aprovechamiento industrial (algodn, girasol, tabaco, entre otros), estos materiales presentan tambin alto contenido en lignocelulosa y un contenido en nitrgeno ligeramente superior a las pajas de cereal. El tercer grupo de materiales lo constituyen varios subproductos derivados de algunas agroindustrias como las oleaginosas, destileras, azucareras, aserraderos, entre otros. Tales subproductos suelen ser cascarillas de semillas, harinas, pulpas, bagazo, aserrines. El bokashi de banano (materia orgnica fermentada) es un subproducto de la industria bananera. Su obtencin se da a partir de diferentes materiales; para el caso de este estudio el bokashi proviene de la Empresa Agrocomercial de la Universidad EARTH, las materias primas la componen el pinzote de banano, banano de rechazo triturado, aserrn de melina (25% a 35% del total) y EM activado. Este bokashi contiene mayor cantidad de microorganismos eficaces y energa a diferencia del compost. El proceso de produccin es relativamente corto ya que toma entre 14 a 24 das despus del tratamiento (fermentacin), e inclusive no hay problema al ser utilizado en la produccin de cultivos, an cuando la materia orgnica no se encuentra totalmente descompuesta como en el compost (Valle 2004).

3.6.2 Relacin entre carbono y nitrgeno C:N de los sustratos y la rapidez de la colonizacin del hongo. La relacin C:N se expresa en unidades de carbono por unidades de nitrgeno de un material. El carbono es una fuente de energa para los microorganismos y el nitrgeno es necesario para la sntesis proteica (Snchez y Royse 2001). Las cualidades de un buen sustrato para el cultivo de P. ostreatus a diferencia de Agaricus bisporus es que esta especie (P. ostreatus) no exige un sustrato con selectividad qumica puesto que puede crecer en medios nutritivos con una relacin C:N de un amplio rango de valores (30 - 300). Sin embargo, el mismo necesita una selectividad biolgica (contenido alto en microflora de bacterias, actinomicetos y hongos termofilos). Esta flora debe ser protectora y no competidora (Snchez y Royse 2001). Estudios realizados por Snchez y Royse (2001) lograron obtener eficiencias biolgicas (EB) del 125 % al preparar una mezcla de paja de arroz (70 %) y pulpa de caf (30 %), a la cual se le adicionaron un 2 % de cal y se ajusto a una humedad del 70 % al inicio del composteo durante 7das. Segn Viteri (2003), el aserrn de balsa (Ochroma lagopus), es una fuente rica en celulosa para la produccin de P. ostreatus, este autor encontr diferencias en la EB significativas con relacin al bagazo de caa. La madera de balsa tiene un contenido de lignina relativamente bajo (26.5 %) y un contenido de ceniza inusualmente alto (2.12 %), la madera de la balsa se pudre rpidamente en contacto con el suelo hmedo y se mancha si no se aserra y seca poco despus de la cosecha (Francis 1991). Segn Masaphy et al. (1996) una vez finalizada la fructificacin del hongo, los sustratos degradados por el hongo (SDH), pueden ser usados como mejoradores orgnicos en el suelo; como un componente primario para la reconstruccin de pantanos. El contenido orgnico de los SDH sirve como soporte para el desarrollo de flora y fauna en el pantano pero tambin absorbe metales pasados del agua contaminada. Estos mismos autores estudiaron la capacidad que tiene los sustratos lignocelulsicos para absorber los plaguicidas, por lo que los SDH pueden ser usados

para el desarrollo de biofiltros para el tratamiento del aire, el agua y el suelo contaminados. 3.7 EFECTOS DE MICROORGANISMO EFICACES (EM) EN LA PRODUCCIN DE HONGOS.

3.7.1 Descripcin Segn Sakurai et al. (1999) el EM (microorganismos eficaces) es un caldo de bacterias fotosintticas, bacterias acido lcticas y levaduras, las cuales se definen por ser facultativas y benficas. 3.7.2 Desarrollo del EM El producto EM, fue desarrollado por el Dr. Higa, profesor de agricultura de la Universidad de Ryukyus en Japn. Se puso en uso a partir de 1980 por el Centro internacional de Agricultura Natural (Sakurai et al. 1999). Segn Higa (1994) el EM inicialmente fue creado para servir de inoculante microbial para el acondicionamiento del suelo en el cultivo de arroz, vegetales y frutas. Despus de su aplicacin se obtuvieron resultados exitosos como el mejoramiento de la produccin y de la calidad del producto. Segn Sakurai et al. (1999), el EM ayuda en la produccin de P. ostreatus, facilitando la absorcin de nutrimentos, gracias a la degradacin de los sustratos lignocelulosos, por medio de un proceso de fermentacin. Cabe destacar, que antes de esta investigacin no se encontraron datos concretos que demuestren el efecto del EM, sobre la produccin de hongos comestibles. Los microorganismos que cohabitan en el producto EM, tales como bacterias productoras de cido lctico, levaduras, actinomicetos, hongos filamentazos y bacterias fotosintticas, realizan una serie de funciones de gran importancia y beneficio para otros microorganismos benficos, para las plantas y para el suelo (Sakurai et al. 1999). 3.7.3 Bacterias cido lcticas Segn Higa y Parr (1994), las bacterias cido lcticas producen cido lctico a partir de azcares y de otros carbohidratos producidos por bacterias fotosintticas y 10

levaduras. El cido lctico tiene fuertes componentes esterilizantes que suprimen microorganismos patgenos as como aumenta la descomposicin de la materia orgnica como la lignina y la celulosa, al mismo tiempo elimina efectos indeseados de la materia orgnica en putrefaccin. Algunos microorganismos de ste grupo son (Valle 2004): Lactobacillus plantarum (ATCC 98014) Lactobacillus casei (ATCC 7469) Streptococcus lactis (IFO 12007) 3.7.4 Levaduras Las levaduras sintetizan sustancias antimicrobianas y otras tiles para el crecimiento de las plantas a partir de aminocidos y azcares secretados por bacterias fotosintticas, materia orgnica y races de plantas. Las sustancias bioactivas como hormonas y enzimas producidas por levaduras promueven clulas activas y divisin radicular. Estas secreciones tambin sirven como sustratos para otros microorganismos eficientes como bacterias cido lcticas y actinomicetos (Higa y Parr 1994). Las levaduras presentes en este grupo de microorganismos eficaces son: Saccharomyces cerevisiae (IFO 0203) Candida utilis (IFO 0619) Hongos (fungi) Aspergillus oryzae (IFO 5770) Mucor hiemalis (IFO 8567) 3.7.5 Bacterias Fotosintticas Las bacterias fotosintticas o fototrpicas son un grupo independiente y autosuficiente. Estas bacterias sintetizan sustancias tiles a partir de secreciones de races, materia orgnica y/o de gases txicos (sulfuro de hidrgeno) usando como fuente de energa la luz del sol y el calor del suelo. Las sustancias tiles producidas por

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estos microorganismos incluyen aminocidos, cidos nucleicos, sustancias bioactivas y azcares que ayudan al crecimiento y desarrollo de las plantas (Valle 2004). Las bacterias fotosintticas presentes en este grupo son: Rhodospseudomonas palustris (ATCC 17001) Rodobacter lactis (IFO 12007) 3.7.6 Actinomicetos Microorganismos intermedios entre bacteria y hongos. Hacen uso de los aminocidos producidos Estas por bacterias fotosintticas y segregan los sustancias

antimicrobianas.

sustancias

segregadas

controlan

microorganismos

patgenos evitan la reproduccin anticipada de sustancias necesarias que se dan antes de la aparicin de hongos y bacterias nocivas, adems producen un ambiente favorable en el cual otros tipos de microorganismos tiles pueden desarrollarse. Cuando los actinomicetos cohabitan con bacterias fotosintticas, su accin purificadora se duplica si se compara a los actinomicetos actuando en forma aislada ya que los actinomicetos son importantes productores de sustancias antibiticas. Los actinomicetos tambin auxilian en la accin de azotobacterias y de micorrizas (Fundacin Mokichi Okada MOA 1998): Los actinomicetes presentes en ste grupo son: Streptomyces albus (ATCC 3004) Streptomyces greseus (IFO 3358) 3.7.7 Hongos filamentazos El hongo filamentazo usado en EM, es el que se encuentra presente en productos alimenticios fermentados. Este grupo tambin cohabita con otros

microorganismos y en especial es efectivo para el aumento de steres dentro del suelo. Por la fuerte capacidad de formacin de alcohol y cidos orgnicos, se previene la aparicin de larvas y otros insectos dainos as como la produccin de un gran efecto en la disipacin de malos olores (Fundacin Mokichi Okada MOA 1998).

12

3.8

PASTEURIZACIN DEL SUSTRATO La pasteurizacin, es un proceso de calentamiento, hasta una temperatura que

oscila entre 55 C y 70 C para destruir las bacterias, microorganismos competidores, larvas, acaros y otros hongos dainos y sus esporas2. La finalidad de la pasteurizacin en la produccin de hongos comestibles, segn Sanchz y Royse (2001) es destruir insectos y organismos competidores de Pleurotus ostreatus. Stolzel y Grabbe (1991), indicaron que temperaturas inferiores a los 55C eran insuficientes para destruir algunas microorganismos como por ejemplo las esporas del Agaricus bisporos y temperaturas mayores a 85C provocan la ruptura parcial de los puentes de hidrgeno del complejo lignina celulosa contribuyendo a la solubilizacin de azcares simples. Estas condiciones predisponen al sustrato a una colonizacin con hongos contaminantes. 3.8.1 Pasteurizacin por vapor Segn Snchez y Royse (2001), la pasteurizacin consiste en colocar el sustrato dentro de una caja o recipiente cerrado que tiene el fondo perforado. Se introduce una mezcla de vapor y aire a presin hasta el sustrato alcance 65C de temperatura y se mantiene durante una hora, al cabo de esta se suprime el vapor, dejndose enfriar el sustrato en un medio estril. 3.9 PRODUCCIN EN BOLSAS Debido al habito de crecimiento que presenta el gnero Pleurotus para su cultivo se utilizan recipientes que presentan una mayor superficie vertical que horizontal (Snchez y Royse 2001). Esta tcnica se desarrollo en Taiwn, y se utilizan en variedades de hongos como el Pleurotus spp; Lentinula spp, entre otros. Segn Staments (2000), estas bolsas deben de ser resistentes al calor de polipropileno transparente. Estudios llevado a cabo por Garcha y Dhanda (1985), dice que las bolsas con respiraderos superaron en 1.5

Enciclopedia Encarta. 2001. Pasteurizacin (correo electrnico). Microsoft Corporation.

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veces ms la produccin reportada en canastas, este mismo autor recomienda hacer perforaciones de las bolsas de manera que solo el 2 % de la superficie sea expuesta al aire. Esto se realiza para evitar la deshidratacin del sustrato y estimula la formacin de carpofros grandes. Al utilizar bolsas plsticas, se previene la contaminacin de sustratos por mohos que crecen en repisas y sustratos de maderas. Los mohos son Trichoderma y Botrytis (Viteri 2003). 3.10 SIEMBRA DEL SUSTRATO Se refiere a la mezcla homognea en condiciones de asepsia del inoculo o semilla con el sustrato. Cuando se inocula con grano se prefiere grano pequeo para contar con mayor cantidad de puntos de crecimiento por unidad de volumen. Snchez y Royse (2001) recomiendan utilizar tasas de inoculacin de 0.6 % a 0.8 %, es decir 600 gramos de semilla por cada 100 kilogramos de sustrato y distribuir perfectamente la semilla dentro del sustrato. Comercialmente es comn utilizar tasas de inoculacin del 2 % a 2.5 %, lo que es rentable pero se ha demostrado que la semilla no se distribuye de manera homognea en el sustrato y que el hongo no crece a su tasa ptima de crecimiento (Snchez y Royse 2001). El estado fisiolgico del hongo al momento de la siembra, debe ser un micelio fresco, activo, muy blanco y muy denso para que la fase de latencia sea mnima, puesto que esta alarga el proceso y eleva los costos de produccin, por lo que se recomienda usar semilla en buen estado y distribuirla muy bien en todo el volumen que se va a inocular (Staments 2000). 3.11 INCUBACIN Segn Stamets (2000), la incubacin es la etapa que permite la colonizacin del sustrato por el hongo de preferencia a temperatura y humedad ptimas y en la oscuridad. La temperatura ptima esta entre 25 C a 28 C, sin embargo esta puede variar segn las cepas. Kurtzmann y Zadrazil (1989) reportaron un ptimo de 30 C para una cepa de P. ostreatus.

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Snchez y Royse (2001) recomiendan que despus de cuatro a cinco das de inoculado se hagan de 20 a 40 perforaciones (con una aguja o navaja estril) en la parte superior de la bolsa, esto se hace debido a que no se requiere acumulacin de CO2 dentro de la bolsa ya que pudiese inhibir la colonizacin. 3.12 FRUCTIFICACIN Y COSECHA Despus de la incubacin, cuando el micelio ha colonizado el substrato de tal manera que ya no se distingue el aspecto ni la coloracin del sustrato inicial, si no que al contrario ste se ve como una masa compacta de superficie homognea blanco algodonosa, se deben de realizar ciertos ajustes ambientales para inducir al micelio a formar cuerpos fructferos. La fructificacin se puede llevar a cabo en un rea con condiciones controladas o cuando las condiciones lo permitan a la intemperie (Cuadro 3) (Snchez y Royse 2001). 3.12.1 La fructificacin en condiciones controladas El cuarto de fructificacin debe de ser un rea amplia que mantenga condiciones estables de humedad, ventilacin, temperatura e iluminacin. Para la fructificacin de las especies de Pleurotus se recomienda mantener los siguientes parmetros: Cuadro 3. Parmetros para la fructificacin de Pleurotus ostreatus.
Parmetro Temperatura Humedad Relativa Humedad del sustrato Luz Renovacin del aire Fuente: Chang y Miles 1989. Rango 20 - 26 C 85 90 % 50 - 60 % Suficiente para leer, por lo menos durante una hora diaria 6 veces el volumen de la sala /h

La fructificacin puede llevarse a cabo en la misma sala utilizada para el crecimiento vegetativo (incubacin), pero solo si es posible suministrarle la condiciones de humedad, temperatura, luz y ventilacin que requiere el hongo en esta etapa. La temperatura de fructificacin vara con las especies y an entre las cepas; las cepas tropicales de Pleurotus spp fructifican bien entre los 20 C a 28 C: Generalmente se observa que la temperatura ptima de fructificacin es ligeramente ms baja que la 15

optima de crecimiento micelial. Es de hacer notar que la observancia de una temperatura adecuada para el desarrollo del hongo incide directamente en el rendimiento obtenido (Snchez y Royse 2001). La humedad relativa es otro factor sumamente importante en el desarrollo de un hongo. La literatura reporta valores entre 60% a 95% para la mayora de las especies de Pleurotus (Chang y Hayes 1978) sin embargo, para el caso especfico de P. ostreatus se ha observado que una humedad de 85 % a 90 % es ms adecuada: Es siempre recomendable guiarse por un higrmetro o por un higrotermogrfo, para saber cuando es necesario humedecer el ambiente. Una humedad inferior al 80 % ser negativa para la formacin de los carpforos (Snchez y Royse 2001). 3.13 EL RIEGO Segn Wuest (1982), el riego es un arte en el cual el cultivador debe saber cuando y cunto y de qu manera aplicarlo. Esta actividad es dirigida en cierta forma por el conocimiento, la experiencia y la sensibilidad del operario que es tan importante y tan delicada. Generalmente es necesario aplicar riego en el cuarto de fructificacin en algunas horas del da para aumentar la humedad y evitar que el sustrato se reseque. Los riegos pueden hacerse, segn la necesidad como pulverizaciones hacia el

ambiente o directamente hacia el sustrato. En este ltimo caso el flujo de agua debe ser suave sin mucha presin y en forma de gotas muy pequeas para no daar los primordios o la superficie del sustrato. Se recomienda que el chorro se aplique hacia arriba en forma de arco, para que las gotas se depositen en forma suave al sustrato. Los hongos nunca deben estar enjutos, resecos, amarillentos; tampoco excesivamente hmedos. Segn Snchez y Royse (2001) cuando las condiciones de hmedad son

satisfactorias, el incipiente pleo de los primordios debern presentar una aspecto suave, terso, carnoso, limpio y brillante de lo contrario probablemente requiere riego. No se recomienda regar cuando os cuerpos fructferos ya estn formados porque se disminuye la calidad. En efecto cundo se mojan demasiado, los cuerpos fructferos presentan una aspecto blando, aguado y amarillento generalmente producido por la contaminacin de las bacterias.

16

3.14

LA VENTILACIN La renovacin del aire en la sala de fructificacin debe de ser constante porque

el incremento de CO2 afecta sensiblemente el desarrollo de las especies de Pleurotus. Dependiendo de la cepa, las concentraciones superiores a los 700 ppm, pueden producir un alargamiento del estpite, hasta la no formacin del pleo y niveles superiores a 1 000 ppm pueden inhibir la fructificacin (Kurtzman y Zadrazil 1989). Una ventilacin insuficiente propicia la acumulacin de CO2 y el exceso de ventilacin puede producir resequedad en el sustrato, por lo mismo es necesario encontrar un equilibro que permita un desarrollo adecuado a lo cuerpos fructferos. Se pueden disponer de sistemas de renovacin de aire que sea barato y econmico, como ventiladores, extractores, ductos, chimeneas. 3.15 LA LUZ Estudios realizados por Snchez y Royse (2001) mencionan que el suministro de luz, es necesario para promover la fructificacin de Pleurotus spp; sin embargo, las primeras recomendaciones sobre la cantidad de la luz requerida dieron lugar a confusiones porque la fructificacin depende de la naturaleza de la fuente luminosa. Se ha observado que la iluminacin produce variaciones en la pigmentacin de los

carpforos. Entre ciertos lmites, mientras ms luz incida sobre el pleo ms oscuro ser este. Asimismo la pigmentacin de una misma cepa vara si la luz que recibe el pleo es natural o artificial. Las especies de Pleurotus requieren luz de longitudes de onda corta (cargado hacia el color azul del espectro) y si sta se proporciona con lmparas

fluorescentes, se debe de adoptar una cantidad suficiente para leer material impreso (aproximadamente 150 a 200 lux). La luz del da suele ser suficiente para obtener buenas fructificaciones y no se ha demostrado que iluminar ms tiempo permite mejor rendimiento. 3.16 COSECHA En condiciones normales, dos o tres das despus de haber puesto los pasteles bajo las condiciones ambientales necesarias para inducir la fructificacin, empiezan aparecer los primordios. De cuatro a seis das despus, dichos primordios se han

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desarrollado normalmente, cubren la totalidad de la superficie del pastel y estn en madurez comercial, listos para ser cosechados. Segn Snchez y Royse (2001) para cosechar se debe observar que los carpforos alcancen el mayor tamao posible. No se debe permitir que el borde del pleo se ponga totalmente plano o comience a enrizarse hacia arriba porque se demerita la calidad y se propicia la diseminacin de esporas. La cosecha se hace cortando el estpite con un cuchillo justo a la base del tallo, en la unin con el sustrato; aunque en algunos lugares se prefiere tomar delicadamente los hongos con la mano sin daarlos y sin producir hoyos en el sustrato. Stamets (2000), reporto que la produccin promedio de P. ostreatus por metro cuadrado de materia seca de sustrato es de 1 kg de setas frescas. 3.17 CONSERVACIN

3.17.1 MANEJO POST-COSECHA Los hongos comestibles frescos son productos altamente perecederos. Flegg et al. (1987) recomienda que despus de cosechados los hongos, es importante que se trasladen rpidamente a una cmara frigorfica para frenar la oxidacin. Para ello se colocan las canastas de hongos en un cuarto fro en donde se baja la temperatura hasta 2 C, una vez logrado esto se traspasan a otro cuarto fro donde se mantendrn almacenados a 4 C. Esta operacin garantizara que la vida de anaquel se prolongue y que adems soporten ms el manipuleo durante el almacenamiento. Es importante observar constantemente la temperatura de las cmaras fras para evitar que el producto sufra algn deterioro. Una vez frenada la oxidacin del producto, la cual puede durar algunas horas, dependiendo de la capacidad de enfriamiento del equipo, logrando bajar la temperatura del champin hasta 2 C y mantenido posteriormente a 4 C, puede empacarse el producto. Es de bastante ayuda que al momento de cosecharse se seleccione correctamente el hongo ya que en el empaque el manipuleo ser mnimo y evitara que se daen. 18

3.18

PLAGAS Y ENFERMEDADES Snchez y Royse (2001) sealan que el cultivo de setas Pleurotus ostreatus y de

champin Agaricus bisporus y A. bitorquis, comparten la mayora de las plagas y enfermedades entre ellos estn los dpteros, caros, bacterias y gran parte de los hongos parsitos y competidores. 3.18.1 Plagas Segn Schwendener (1998) las principales plagas son insectiles y la que mayor problemas acarrea es una colembola llamada Hyporgastrura armata, que hace galeras dentro de la seta causando secamiento y muerte del hongo, estos colembolas entran en los cultivos generalmente en la materia orgnica, por lo que se debe hacer una buena pasteurizacin. Estudios realizados por Snchez y Royse (2001), recomiendan una pasteurizacin a 55 C por 5 horas, para matar colembolas y caros en los sustratos, se puede hacer limpiezas de las reas contaminadas, paredes, suelo y alrededores con piretrinas o malathin 0,05 %. Otras plagas son las moscas y mosquitos que colocan sus huevos en el sustrato y sus larvas forman galeras haciendo dao a la seta (Garca 1987). Las medidas que mejor pueden ayudar a reducir la contaminacin, son una adecuada pasteurizacin de los sustratos, la limpieza y desinfeccin tanto del local de produccin como del personal de trabajo. 3.18.2 Enfermedades Segn Garca (1987) las enfermedades ms comunes en la produccin de hongos son: los virus, bacterias y hongos parsitos y competidores. 3.18.2.1 Hongos

La ms comn es la tela de araa causada por Cladobotryum dendroides, esta crece sobre el sustrato causando la descomposicin de las setas ya brotadas. Otras especies de Cladobotryum que atacan Pleurotus spp. Son: C. mycophilum; C. asterophorum y C. varium. Las especies del genero Trichoderma spp invaden el sustrato y obstaculizan el crecimiento del micelio de Pleurotus spp ya que producen toxinas y antibiticos, y 19

provocan un descenso del nivel de pH hasta valores de 4-5 que es un medio favorable para su desarrollo, inicialmente se nota en el sustrato un moho de color blanco que puede confundirse con el de Pleurotus spp. Pero con el tiempo este se va poniendo verde y luego adquiere un color gris verde azulado debido a la alta produccin de conidios (Snchez y Royse 2001). 3.18.2.2 Bacterias

Las ms comunes son la mancha amarilla causada por Pseudomonas agarici y mancha parda causada por Pseudomonas tolaasii (Fermor 1987). Segn Fermor (1987) Pseudomonas agarici se encuentra cuando se tiene humedades relativas altas dentro del cuarto de produccin especialmente en el perodo de incubacin del hongo (colonizacin de los sustratos), cuando infectan al hongo en la etapa de primordio dan lugar a basidiocarpos con estpites que se curvan cerca de la base lo que ocasiona una longitud desigual. Snchez y Royse (2001) recomienda pasteurizar los sustratos a 50 0C durante 10 min, para matar a los hongos de la especie Pseudomonas spp. Pseudomonas tolaasii ocasiona pardeamiento de los primordios y manchas en los sombreros, puede causar perdidas significativas en la primera florada (fructificacin del hongo); estas bacterias aparecen generalmente cuando no se da una adecuada pasteurizacin del sustrato; una humedad elevada, temperaturas templadas y los vectores como moscas tambin pueden propiciar las condiciones favorables para su desarrollo (Gyorfi 1989). 3.18.2.3 Virus

El principal medio transmisin de virus es a travs de esporas o micelio infectado, su control se basa en buenas practicas de higiene, una adecuada manipulacin de la humedad relativa, buen control de insectos, y la seleccin de variedades comerciales. Para prevenir la dispersin de esporas o micelio infectado es aconsejable humedecer el sustrato que se va a eliminar con una solucin de hipoclorito de sodio o formol (Poppe et al. 1985).

20

3.18.3 Anomalas no parasitarias Segn Stamets (2000) la mucha luz puede retardar la formacin de primordios y la poca luz los basidiocarpos pueden ser deformes, arracimados de color blanco y sabor amargo. Segn Snchez y Royse (2001) el exceso de CO2 hasta valores 0.08% provoca un lento crecimiento de los cuerpos fructferos, y valores de CO2 de 0,15 % a 0.3 % producen mortandad de toda la produccin. Segn Poppe et al. (1985), entre otras anomalas no parasitarias a las que se debe tomar en cuenta a la hora de producir hongos comestibles estn: El exceso de plaguicidas que pueden causar el volcamiento del sombrero. El estrs trmico puesto que temperaturas entre 33 C a 40 0C pueden causar la muerte del micelio segn la variedad cultivada. pH mayores a 7 y menores a 5, muestran un crecimiento e incubacin defectuosa del micelio. Por ultimo si el contenido de agua, es superior a 70% y inferior a 55 % la flora bacteriana es ms activa, y se tiene una lenta colonizacin del por parte del micelio.

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MATERIALES Y METODOS

El siguiente proyecto se realiz en las intalaciones de la Universidad EARTH, Gucimo, Limn, Costa Rica. 4.1 OBTENCIN Y PREPARACIN DEL CULTIVO PURO El cultivo puro del hongo para la produccin de P. ostreatus, fue trado desde Sara Buri, Tailandia, el cual se transfiri y se reprodujo el tejido miceliar en medio de Agar papa, dextrosa (PDA). El Tiempo desde la transferencia del medio de cultivo hasta su utilizacin para la produccin del cultivo de grano fue de 7 das. 4.2 PREPARACIN DE SPAWN Se prepar semilla de grano a base de sorgo para inocular con el micelio del hongo y as obtener el Spawn. Para la elaboracin del spawn se cocin el sorgo por 30 minutos, se escurri el agua y se procedi a llenar botellas de la marca Gatorade de 300 ml, con 200 a 220 g de sorgo, posteriormente se procedi a autoclavarlo por 20 min, a 121 C y 15 Ib/pulg2. Al enfriarse se inoculo con el hongo que se multiplico en el PDA. Al cabo de 15 das el cultivo de grano estaba listo para ser utilizado en la inoculacin de los sustratos, (Figura 2).

Figura 2. Pasos a seguir en la produccin tejido miceliar en PDA y la siembra de este inoculo sobre spawn. 22

4.3

ACONDICIONAMIENTO DEL SITIO DE TRABAJO (CUARTO DE PRODUCCIN). El cuarto de produccin se ubic, en el jardn de paisajismo de la Universidad

EARTH en donde se acondicion un cuarto de produccin sencillo, dndole as las condiciones ptimas al hongo con el fin de encontrar temperaturas bajas y ambiente fresco requeridos para la fructificacin (Anexo 1). Se acondicion, con piso de piedra cuarta, cerrado con sarn (90 % de oscuridad) y techo de zinc. Se dividi en 3 secciones para as trabajar con la secuencia del ciclo de vida del hongo (Anexo 2). Se construy una caldera con base de concreto, ladrillos y estaones, para pasteurizar el sustrato, la misma trabaja con lea. (Anexo 3). Para la produccin de P. ostreatus, se introdujo la cepa y la tcnica Tailandesa, la cual es muy utilizada en los pases de Asia tropical y se esta expandiendo por Amrica (Sakurai et al. 1999). 4.4 OBTENCIN Y PREPARACIN DE LOS SUSTRATO La materia prima para la preparacin de sustratos fue el aserrn de Balsa y el bokashi de banano. El aserrn de balsa fue obtenido del aserradero Balsatica situado en Siquirres; el bokashi de banano se adquiri de la Empresa Agrocomercial de EARTH. Los tratamientos 1 y 3 se compostaron por 24 horas, permitiendo de esta manera una descomposicin parcial del sustrato por medio de los microorganismos eficientes (EM), haciendo disponibles una parte de los nutrimentos para el hongo (Higa 1994). Los sustratos se voltearon 2 veces cada 12 horas, para el control de temperatura, que a su vez es un mtodo para bajar la carga de microorganismos no benficos que se puedan encontrar en el sustrato. Para los tratamientos 1 y 3, se agreg EM 1% y se suplementaron con Carbonato de Calcio al 1% (CaCO3), Sulfato de Magnesio al 0.2 % (MgSO4), semolina al 6 %, yeso 1 % (CaSO4), los mismos pasos se hicieron en los tratamientos 2 y 4 con la nica excepcin que no se aplico EM.

23

Al

tener

las

mezclas

elaboradas

se

llevaron

una

humedad

de

aproximadamente 60 % a 80 %, para determinar la humedad de los sustratos se sigui la metodologa descrita por Spaans y Singh (2005), y se pesaron las muestras en un beaker previamente tarado, llevando las muestras al horno a una temperatura de 60
0

C hasta alcanzar un peso constante, durante 48 horas, se procedi a pesar las

muestras secas y se sac el porcentaje. Peso hmedo - Peso del sustrato seco= *100 Peso hmedo La diferencia de este nos da el peso seco. Con la humedad adecuada entre 70 % a 80%, se procedi a llenar las bolsas para luego pasteurizarlas en la caldera por un lapso de 4 horas entre 75 C a 80C (Figura 3).

Figura 3. Suplementacin de sustratos y llenado de bolsas. 4.5 METODOLOGA UTILIZADA PARA LA ELABORACIN DE BOKASHI EN FINCA AGROCOMERCIAL DE LA UNIVERSIDAD EARTH. Para la elaboracin de bokashi de la Empresa Agrocomercial, la metodologa que se sigui fue: el triturado de la materia prima, para este caso es el banano de rechazo y el pinzote de banano (conforman el 68 % de la mezcla), estos pasan por una banda sin fin hasta una trituradora que deposita el material en una carreta del volteo. Sobre el triturador hay un dispositivo instalado que inocula el material constantemente con EM a razn de 0,06 litros por minuto (Valle 2004).

24

Durante el tiempo que el material triturado permanece en la carreta de volteo, se encuentra eliminando lixiviados, este se transporta al sitio de trabajo en donde el tractor descarga el material de manera que facilite el trabajo a las personas que posteriormente lo acomodarn utilizando palas y tridentes para que quede en forma de montculo a una altura de 50 cm., al mismo tiempo el material es inoculado con EM al 1,3 % del total de la mezcla (EM 1,3 %; melaza 2 % y agua 96 %) con una regadera de cinco litros, se dejo reposar por cinco das y se incorpor aserrn de melina (Gmelina arborea) en un 25 % a 30 % del total de la mezcla con el fin de proveer una capa protectora y evitar la presencia de insectos, otras propiedades del aserrn es, para acelerar la temperatura de la mezcla registrndose una temperatura entre los 50 C a 60 C. Adems, se da la absorcin de humedad y provee mayor porosidad a la masa, para la evacuacin de lixiviados y para que su textura no se vuelva masoza. Se composte por tres das con la finalidad de controlar la temperatura, la cama se volteo pasado los tres das con el uso de palas y tridentes, ayudando as a que el aserrn se mezcle con el resto del material, lo que aumenta la porosidad y por lo tanto agiliza el proceso de produccin del abono, despus del volteo se vuelve a dar la forma de montculo a la cama y se deja reposar seis das ms, la humedad del bokashi en esta etapa fue de 91 % (Rafael 2006)3. Pasado los seis das de reposo, el bokashi esta listo para ser utilizado y es colocado en sacos con un peso entre 20 y 25 kilogramos y es transportado al sitio de trabajo, que para nuestro caso fue el jardn de paisajismo de la Universidad EARTH. Un bioindicador de la calidad y punto del bokashi es la aparicin de actinomicetes de color blanco. El tiempo que transcurri desde que se inicio el proceso hasta la cosecha fue de 14 a 15 das (Rafael 2006)3 (Figura 4). La relacin de C:N para este sustrato fue 50:1, la cual se encuentra dentro del rango para la produccin del hongo P. ostreatus. (Snchez y Royse 2001)

Ortega R. 2006. Produccin de Bokashi Universidad EARTH, Gucimo, CR, Comunicacin personal.

25

Figura 4. Proceso utilizado para producir Bokashi, EARTH, C.R. Para la preparacin de bokashi sin EM se sigui la misma metodologa utilizada en la elaboracin de bokashi con EM, pero no se aplico EM en ninguno de los pasos desde la planta empacadora hasta la bokashera de la Universidad EARTH. 4.6 PASTEURIZACIN DE LOS SUSTRATOS Se utilizaron bolsas de polietileno de alta densidad (6 cm. x 12 cm.), resistentes al calor, por el proceso de pasteurizacin que sufrirn (70 C a 85 C por cuatro horas). Posteriormente, se embolsaron los sustratos compostados, con

aproximadamente 500 g/bolsa, se compacto para facilitar la colonizacin del micelio. Se procedi a pasteurizarlos en una caldera rustica construida con una base de cemento y dos estaones metlicos, alimentado por madera (Anexo 3). Se acomodaron las bolsas dentro de la caldera la cual sigue el principio de pasteurizacin por medio del vapor del agua, despus de haber alcanzado el punto de ebullicin se dejaron las bolsas por un lapso de cuatro a seis horas, hasta alcanzar una temperatura interna de 70 C a 85C, esta se verifico por medio de un termmetro de mercurio a cada uno de los tratamientos (Figura 5). El objetivo de la pasteurizacin es eliminar la carga de microorganismos presentes en el sustrato para que no haya competencia para el hongo.

26

Figura 5. Pasteurizacin de los sustratos. 4.7 INOCULACIN DE LOS SUSTRATOS Posterior a la pasteurizacin, los sustratos se enfriaron a una temperatura ambiente de aproximadamente 25 C; todas las unidades experimentales se inocularon con spawn de 15 das de preparado, a razn de 2 % a 3% del peso del sustrato pasteurizado. Se procedieron abrir las bolsas y con una esptula esterilizada se depositaron las semillas de sorgo debidamente colonizadas por el micelio Spawn encima de la superficie del sustrato. Se colocaron en el cuarto de produccin acondicionado durante un lapso de tres a cuatro semanas. Se brindaron las condiciones apropiadas de luz, temperatura y humedad. La temperatura se mantuvo aproximadamente entre los 25 C a 30 C, con una humedad relativa del 60 % la cual se determino con un

termohigrgrafo (Model TH4-7F - The Dickson Company, Addison, Illinois, EU), esto para que el hongo tuviera las condiciones ptimas para la colonizacin de los sustratos. El termohigrgrafo es un medidor constante de temperatura y humedad del ambiente. Despus de la colonizacin del sustrato, la cual se evalu hasta la tercera semana, se acondicion la otra parte del cuarto de produccin dndole una humedad relativa del 90 %, la cual se logr con riego suave, tratando de simular una cortina de agua, para evitar que el goteo del agua rompiera las bolsas del sustrato. El riego dentro de este cuarto se hizo tres veces al da, en horarios de 6:00 a.m., 11:00 a.m. y 3:00 27

p.m., esto debido a que estas son las horas ms calientes del da y se necesit mantenerlos frescos y con una humedad relativa respectiva. Despus de la colonizacin total, se dio la iniciacin de los primordios, es decir la fructificacin, pasada esta etapa, las bolsas se abrieron, colocndoles un tubo de PVC de 3 cm de dimetro por 5 mm de grosor, creando un efecto de cuello de botella para permitir el crecimiento del hongo y cosechar. 4.8 DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA PRODUCCIN DEL HONGO P. ostreatus. Como primer paso, se dio la obtencin del cultivo puro, el cual sirvi para la inoculacin de la semilla de sorgo Spawn. Paralelo a esto, se realizo el composteo de los remanentes que se utilizaron como sustrato del P. ostreatus por 24 horas; se procedi al embolse y pasteurizacin que duro entre seis a ocho horas; se procedi al enfriado e inoculacin del sustrato con semilla de grano spawn, dejndose reposar para despus ser inoculados en un ambiente asptico, oscuro y a una temperatura de 20 C a 26 C para inducir al micelio a la colonizacin del sustrato. Una vez alcanzado el 100 % de colonizacin, se cambio a un cuarto con una humedad relativa del 90% y una temperatura entre 20 C a 24 C todo ello para que el micelio del hongo fructifique. En la Figura 6 se muestra el diagrama de flujo que se sigui para la evaluacin de sustratos tratados con y sin EM para la produccin del hongo P. ostreatus.

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Fructificacin 1 mes

Obtencin Cultivo puro (1 Semana)

Colonizacin del Sustrato 3-4 semanas

Produccin semilla de Grano Spawn (2 Semanas)

Inoculacin del sustrato con cultivo de Granospawn 1.5 horas

Pleurotus ostreatus

Elaboracin de sustrato C:N (2 semanas)

Enfriado del sustrato 5 horas Pasteurizacin 6 - 8 horas

Embolse de sustratos 2 horas

Figura 6. Diagrama del flujo del proceso para evaluar los sustratos para producir P. ostreatus. 4.9 CRITERIOS DE EVALUACIN El modelo estadstico que se utilizo para el anlisis y para medir la eficiencia del sustrato en la produccin del hongo P. ostreatus fu F-fisher, con un diseo factorial completamente al azar de dos sustratos y dos niveles de aplicacin de EM repetido en el tiempo. Estos resultados fueron analizados por el programa estadstico SAS V8. Se tuvo tres ciclos de produccin, cuatro tratamientos y cada tratamiento con 20 repeticiones (bolsas) como se lista a continuacin (Cuadro 4).

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Cuadro 4. Descripcin de los tratamientos evaluados, para la produccin de P. ostreatus.

Tratamiento T1 T2 T3 T4 Sustrato Aserrn de balsa con EM Aserrn de balsa sin EM Bokashi de banano con EM Bokashi de banano sin EM Nmero de bolsas por tratamiento y peso/bolsa 20 bolsas (500 g/bolsa de sustrato) 20 bolsas (500 g/bolsa de sustrato) 20 bolsas (500 g/bolsa de sustrato) 20 bolsas (500 g/bolsa de sustrato)

El proyecto tuvo varias etapas de ejecucin que van desde la construccin y acondicionamiento del sitio de trabajo (Croquis del experimento, Anexo 1) hasta la produccin del hongo P. ostreatus. En el proceso de produccin de hongos, se tomaron algunas variables de muestreo en cada etapa del ciclo, como la rapidez de colonizacin de cada sustrato por el hongo y la incidencia de contaminacin, el cual se midi detectando otro color en el sustrato que no fuera blanco, puesto que el P. ostreatus es de un color blanco. Ambas variables se midieron por porcentaje de colonizacin y contaminacin de los tratamientos. La escala de medicin fue de uno a cuatro, dividida la bolsa en cuatro cuartos porcentuales (Cuadro 5). Se obtuvieron los datos en base a la colonizacin de micelio y contaminacin dos veces por semana y estos datos se tomaron por bolsa y despus se saco una media por tratamiento. Cuadro 5. Criterios de evaluacin de colonizacin y contaminacin de las bolsas.
Escala de evaluacin 1 2 3 4 Porcentaje (%) 1 - 25 26 50 51 - 75 76 - 100

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Se monitoreo la temperatura en el cuarto de produccin da y noche, con un termohigrgrafo. Se cosecharon dos veces por semana (mircoles y sbados) durante cuatro semanas y se pesaron los hongos de cada uno de los tratamientos, sacndose un promedio para poder as evaluar el rendimiento de las cosechas. La eficiencia biolgica (EB) es un indicador de la eficiencia del sustrato para la produccin del hongo que se utiliza para calcular el rendimiento de un sistema de cultivos de hongos comestibles, el cual incluye, el peso fresco de los carpforos entre el peso seco del sustrato utilizado por 100. Para la eficiencia biolgica del sustrato, se utiliz el siguiente clculo: EB = Rendimiento total en gramos Peso seco del sustrato pasteurizado 4.10 RELACIN C:N DE LOS SUSTRATOS Y RAPIDEZ DE COLONIZACIN DE LOS SUSTRATOS. Debido a la cantidad de remanentes agrcolas disponible para la produccin de los hongos comestible, se hace necesaria identificar un indicador que pudiera servir como criterio bsico para la seleccin del mejor sustrato apto para la colonizacin del hongo ostra. A base del anterior, se decidi de evaluar el contenido C:N de los sustratos como tal indicador. El anlisis qumico de algunos sustratos fue realizado por el laboratorio de Suelos y Aguas de la Universidad EARTH. Todas las muestras fueron analizadas para macro nutrientes carbono (C), nitrgeno (N), fsforo (P), potasio (K), calcio (Ca), magnesio (Mg) y micro nutrientes hierro (Fe), cobre (Cu), manganeso (Mn). El C orgnico fue cuantificado por gravimetra y el N total fue cuantificado por el mtodo de Kjeldahl. (Spaans y Singh 2005). El Ca, Mg, K, fueron tomados de la dilucin uno (1 ml del filtrado y 24 ml de agua destilada) y determinados por el espectrofotmetro de absorcin atmica. El Cu, Fe, Zn, Mn, fueron determinados directamente del filtrado concentrado (no de la dilucin 1), zinc (Zn) y * 100

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utilizando el espectrofotmetro de absorcin atmica. Para determinar la relacin C:N, se dividi el porcentaje de C entre el porcentaje de N (Spaans y Singh 2005). Para determinar la rapidez de colonizacin de los sustratos por el micelio del hongo, versus la relacin C:N de los sustratos, se realizo la prueba de colonizacin in vitro de los mismos en cajas petri de cristal, el mismo se realiz en el laboratorio de ciencias naturales de la Universidad EARTH. Se realizaron tres tratamientos, uno sin suplemento (0 %), el segundo con suplementacin al 6% semolina y el tercero con 12% semolina. El segundo y tercer tratamiento tenia: Carbonato de Calcio al 1 % (CaCO3), Sulfato de Magnesio al 0.2 % (MgSO4) y yeso 1 % (CaSO4); despus de traspasaron los sustratos a cajas petri de cristal los cuales tenan un dimetro de 9 cm (4,5 cm de radio); se procedi a compactarlas en las mismas cajas y esterilizarlas en el autoclave por 35 min, a 121 C y 15 Ib/pulg2, al enfriarse, se inoculo con el spawn a razn de una semilla de sorgo colonizada por el micelio por caja de petri, colocando el grano en el centro de la caja y se pusieron los mismos en una cmara oscura a temperatura ambiente (24 C a 26 C). La evaluacin de esta prueba se realiz, midiendo con una regla milimetrica de 15 cm, para determinar el avance de colonizacin por el micelio del hongo, hasta llegar a la periferia de la caja petri (dimetro 9 cm). Esta medicin tuvo una duracin de siete das.

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5 5.1

RESULTADOS Y DISCUSIN

COLONIZACIN DE LOS TRATAMIENTOS POR CICLO DE PRODUCCIN A LA SEMANA TRES. Segn la Figura 7, se observa que se obtuvo una diferencia significativa a la

tercera semana despus de inoculado el sustrato con el micelio del hongo, en los ciclos de produccin entre los tratamientos 3 y 4 (Bokashi de banano con y sin EM), los cuales colonizaron solamente un 10% en el primer ciclo, y en menor porcentaje en los ciclos siguientes, vindose un decaimiento de la colonizacin. Segn Snchez y Royse (2001), el pH del medio de cultivo donde crece un hongo tiene una influencia directa sobre este, porque incide sobre el carcter inico del medio e influye directamente sobre las protenas de la membrana y sobre la actividad de las enzimas ligadas a la pared celular afectando el metabolismo. Aunque las condiciones de temperatura y nutrientes sean ptimos, el crecimiento del hongo se vera afectada si el pH no es el optimo. Se considera que la baja colonizacin en los tratamientos 3 y 4 se debi mayormente al factor pH del sustrato utilizado, el cual se encontraba en un rango entre 8 8.5, siendo un medio muy alcalino para la colonizacin del micelio del hongo P. ostreatus, puesto que ste requiere de un pH entre 5-6 para una adecuada colonizacin. Se realiz un pequeo experimento en el que se bajo el pH del sustrato con acido actico, a una relacin del 4 % (100 ml agua con 4 ml acido actico al 100 %, pH 2,48) para poder comprobar el efecto del pH en el sustrato. Se disminuyo de 8,5 a 5,5 a 6; obtenindose una colonizacin lenta por el micelio del hongo y una baja fructificacin.

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100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
o1 Cicl o2 Cicl o3 Cicl

T1 con EM

Indice de colonizacin (%)

T2 sin EM

T3 con EM

T4 sin EM

Figura 7. Relacin del ndice de colonizacin entre los tratamientos por ciclo productivo. Lo contrario sucedi con los tratamientos T1 y T2 que a la tercera semana en el primer ciclo presentaron una colonizacin del 50 % y 22 % respectivamente, mientras que en el ciclo 2 y 3 los mismos tratamientos presentaron entre un 95 % y 99 % de colonizacin. Esta marcada diferencia entre los ciclos de produccin, se debi a que en el primer ciclo la humedad de los tratamientos T1 y T2 no se controlo adecuadamente, estando en un 50 % y 45 %, lo cual dificulto el desarrollo del micelio correctamente en el sustrato por falta de una adecuada humedad (60%). Lo contrario sucedi en los ciclos dos y tres, en los cuales se le dio a los tratamientos la humedad correcta de 70 % a 80 %, reflejando una apropiada colonizacin (Cuadro 6). Cuadro 6. Porcentaje de humedad entre los ciclos de produccin por tratamientos. EARTH 2006. T1 con EM T2 sin EM T3 con EM T4 sin EM -----------------------% de Humedad -----------------------50 40 80 80 60 60 60 60 60 60 60 60

Ciclo 1 2 3

Para garantizar una adecuada temperatura y humedad dentro del cuarto de produccin, se midi con un termohigrgrafo los valores de temperatura los cuales oscilaban entre los 20 C a 30 0C y la humedad del ambiente que estaba entre 80 % a 34

100 % respectivamente (Figura 8); con esto se avalaron los parmetros ptimos para la colonizacin y fructificacin del hongo P. ostreatus. Segn Snchez (2001), los parmetros ptimos son de 20 C a 26 C para inducir al micelio a la colonizacin del sustrato y una humedad relativa entre el 80 % a 95 % en la fructificacin. Una vez alcanzado el 100% de colonizacin, se indujo a una humedad relativa del 90% y una temperatura entre 20 a 24 C todo ello para que el micelio del hongo fructifique. Snchez y Royse (2001) rectifican que la humedad del aire es de suma importancia para los cuerpos fructferos ya que estn formados por un alto contenido de agua, la humedad relativa del ambiente debe ser suficiente para evitar que tanto el sustrato como el cuerpo fructfero no se deshidraten.
100 90 80 Humedad % 70 60 50 40 Temperatura C 30 20 10 0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31

Mes agosto del 2006 Medio da Noche Medio da Noche

Figura 8. Mediciones de temperatura y humedad con termohigrgrafo en el cuarto de fructificacin de hongos comestibles P. ostreatus. EARTH 2006. 5.2 FRUCTIFICACIN DE LOS TRATAMIENTOS EN LOS CICLOS PRODUCTIVOS. La fructificacin del hongo en el primer ciclo de produccin se dio a las cinco semanas despus de haber sido colonizado al 100 % (Figura 9), en cambio en los ciclos 2 y 3 se dio a las tres semanas. Se encontr que dicha diferencia existi por el porcentaje de humedad presente en el sustrato que en el primer ciclo estaba por debajo del ptimo 70 % reportado por Snchez y Royse (2001). En los ciclos 2 y 3 este factor se corrigi y se llevo al sustrato a la humedad adecuada 70 %. 35

Otro factor que incide en la colonizacin es la temperatura tanto de la pasteurizacin de los sustratos como del ambiente en el cuarto de colonizacin. Para efectos del experimento, esta variable no fue problema puesto que la temperatura de pasteurizacin fue de 70 C a 85 C y del ambiente la mxima fue de 30 C y la mnima de 24 C, estando dentro de los rangos ptimos para la colonizacin del hongo que segn Stamets (2000) debe ser de 24 C a 29 C, por lo que la temperatura no fue una limitante en la colonizacin del micelio.

Figura 9. Colonizacin y fructificacin del hongo P. ostreatus en el cuarto de fructificacin. EARTH 2006. En la Figura 10, se observa los pesos en gramos de la fructificacin a las dos oleadas, lo que equivale a cinco semanas de produccin, como se puede ver el T1 con EM present mayor peso (976 gr.) en relacin al T2 sin EM (924 gr.). Cabe destacar que a los dos tratamientos, se les brind las mismas condiciones controladas de temperatura, humedad, luminosidad, e intercambio gaseoso (se hizo pequeas perforaciones en las bolsas para permitir este proceso). El tratamiento T1 tuvo en las primeras dos semanas mayor produccin de carpoforos, lo que pudo incrementar su peso. Estadsticamente no se encontr diferencias significativas entre el T1 con EM en

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relacin a T2 sin EM, con una probabilidad mayor a p>0,05, lo que significa que el EM no influyo en el incremento de los rendimientos en la produccin. Los tratamientos T3 -T4 no tuvieron rendimiento, esto debido a que no hubo una colonizacin del micelio del hongo en dicho sustrato, por tal razn no fructifico.

1050 900 Rendimiento (gr) 750 600 450 300 150 0 T1 con EM T2 sin EM T3 con EM T4 sin EM Tratamientos

Figura 10. Rendimiento de los tratamientos en los ciclos productivos. Otro factor que pudo determinar una mayor produccin en peso, es el tamao del pilo, puesto que uno de 7 cm de largo por 7 cm de ancho, pesa ms gramos que uno de 5 cm de largo por 5 cm de ancho. Estudios realizados por Snchez y Royse (2001) encontraron pilos desde los 5 cm hasta los 12 cm, que determinaron diferencias entre los pesos finales, siendo los de mayor tamao los que presentaron mayor rendimiento. En esta investigacin, el tamao del pilo en los dos tratamientos no fue un factor determinante del peso en relacin a la produccin, ya que se obtuvo una relacin similar en largo y ancho respectivamente como se muestra en el Cuadro 7. Cuadro 7. Medidas del pilo en los tratamientos. EARTH. 2006.
Pilo Largo Ancho 6,1 6,4 6,3 6,3

Tratamiento T1 T2

37

5.3

RELACIN ENTRE CARBONO NITRGENO (C:N) Y pH EN LA COLONIZACIN DE P. ostreatus Se suplementaron los sustratos con semolina en diferentes cantidades, para

aumentar el contenido de N, puesto que este es una fuente proteica (Snchez y Royse 2001). La prueba de colonizacin de los diferentes sustratos realizados en cajas petri de cristal y suplementados al 0 % sin semolina, 6 % semolina y 12 % semolina, indican que al 6 % de suplementacin con semolina, se obtuvo una mejor colonizacin por parte del micelio del hongo P. ostreatus (Cuadro 8) en comparacin a 0 % y 12 %, esto se debi a que el mismo en la etapa de colonizacin no requiere de cantidades altas en Nitrgeno en relacin al Carbono. Cabe destacar que todos los tratamientos se evaluaron en un mismo ambiente, la nica diferencia fue en la suplementacin. Cuadro 8. Resultados prueba de colonizacin in vitro de diferentes sustratos. EARTH 2006. Sustrato pH Relacin entre C:N 0 % Suplementacin 6 % Suplementacin 12 % Suplementacin Bagazo de caa 6.3 191.8 6 9 9 Aserrn de Bagazo de Bokashi de balsa palmito banano 7.3 4.39 7.5 116.7 28.6 49.5 Dimetro de colonizacin (cm) 5 0 0 9 5 7 8 5 4

En la Figura 11, se puede apreciar que entre mayor sea la relacin C:N de los sustratos se tendr una mejor colonizacin. Segn Staments (1993), el P. Ostreatus, requiere de ciertas condiciones que se le deben dar para optimizar su crecimiento y encontr valores de C:N entre 30 a 300 en los sustratos que son aceptables para la colonizacin del micelio. Anlisis qumicos de los sustratos y pruebas de colonizacin in vitro (en cajas petri de cristal) de los mismos, indicaron que las relaciones C:N entre los 100 a 200 fueron los que presentaron mejores resultados de colonizacin por el micelio en

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comparacin a aquellos sustratos de baja relacin C:N como el bokashi de banano 49,5:1, y el bagazo de palmito 28,6:1; esto confirma los estudios de Snchez y Royse (2001), que dicen que el C es necesario para los hongos en la formacin de diferentes partes y estructuras y que es el elemento que requiere en mayor cantidad. El bokashi de banano con una relacin C:N de 49,5:1 a los 7 das presento una colonizacin deficiente, a pesar de bajarse el pH del sustrato a un ambiente ms favorable entre 5 a 6. Cabe destacar que al realizarse un anlisis qumico del bokashi, se encontraron valores altos en la bases (Ca, Mg, Mn) (Anexo 4) lo que pudo haber influido en la alcalinidad al sustrato (pH). El aserrn de balsa con una relacin C:N de 116,7:1 y el bagazo de caa, a los 7 das presentaron una colonizacin acelerada y uniforme. Graficando los resultados de la relacin C:N versus la colonizacin de los sustratos (Figura 11), se encuentra un coeficiente de correlacin (r2=0,91), lo que nos indica que la relacin C:N es uno de los factores influyentes en la colonizacin del micelio sobre el sustrato.
200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 1 2 3 4 5

Relacin C:N

y = 3,0661e 0,4263x r2 = 0,9174

10

Dimetro de crecimiento (cm)

Figura 11. Relacin entre C:N y el dimetro de colonizacin por el hongo P. ostreatus. Los anlisis qumicos antes de la inoculacin del sustrato indican los nutrimentos disponibles que tiene el mismo para el desarrollo del hongo (Anexo 4), anlisis qumicos). En este, se observa en mayor cantidad el elemento carbono (C) el cual es

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esencial para la colonizacin y fructificacin, debido a que es la fuente energtica, del hongo P. ostreatus para el desarrollo de todas sus funciones metablicas (Snchez y Royse 2001). El sustrato aserrn de balsa, despus de finalizado su ciclo productivo y realizado un anlisis qumico general presento valores de C, bajos en comparacin al mismo sustrato antes de inoculado con el micelio del hongo (Anexo 4), esto concuerda con los estudios realizados por Rosario (2005), quien demostr que P. ostreatus, produce una enzima extracelular que cataliza una reaccin que degrada la celulosa sustancialmente, para luego atacar la lignina. Para catalizar estas reacciones poderosas la enzima requiere perxido de hidrgeno, el cual es producido por el hongo, y esta degradacin del sustrato por el micelio favoreci al aumento de otros elementos como el N; Ca; Fe; en mayor cantidad, por lo que P. ostreatus, nutricionalmente es rico en protenas, fibra, hidratos de carbono, vitaminas y minerales, adems de tener un sabor y olor nicos (Rosario 2005). 5.4 EFICIENCIA BIOLOGICA DE LOS SUSTRATOS. La eficiencia biolgica (EB) es un indicador de la eficiencia del sustrato para convertir los nutrientes encontrados en dicho sustrato a championes. Esta formula es una medicin porcentual del rendimiento fresco de carpoforos a partir del peso seco del sustrato pasteurizado (Stamets 2000). El aserrn de balsa con EM presento una EB de 30 % y el aserrn de balsa sin EM presento una EB de 29 %. No se encontr diferencias significativas entre ambos tratamientos, estos resultados son buenos comparados con los encontrados por Obodai et al. (2002) quienes realizaron estudios similares en Ghana con aserrn y reportaron EB para varias especies de Pleurotus, los cuales estn dentro del rango de 6 hasta 57%. Los sustratos estudiados en este proyecto se suplementaron con semolina de arroz al 6 %, del peso total del sustrato con esto se increment la ventaja nutricional que segn Kutzman y Zadrazil (1989) es aprovechada por el hongo. La semolina posee protena, aminocidos libres como lisina, metionina y cistina que incrementan la productividad del Pleurotus spp. Es por eso, que se obtuvo una eficiencia biolgica 40

aceptable, la cual se refleja claramente en el anlisis estadstico mostrando diferencia significativa en cuanto a la colonizacin y produccin de dicho sustrato. Las EB del aserrin de balsa con EM fue de 30 % y aserrn de balsa sin EM fue de 29 %, son altas comparadas al obtenido por Viteri (2003), l cual encontr una EB de 7.5 % utilizando el mismo sustrato con una suplementacin mayor de semolina de arroz al 20 % sobre el peso del sustrato. El bokashi de banano al no presentar una adecuada colonizacin no llego a la fase de fructificacin, por lo que no se pudo determinar su EB. 5.5 ANLISIS ESTADISTICO. Para los anlisis estadsticos se tom en cuenta la colonizacin y peso en los diferentes tratamientos. Cuadro 9. Anlisis de varianza factorial de la variable colonizacin. EARTH 2006.
Fuente de variacin Sustrato Nivel Sustrato*Nivel Modelo Error Corrected Total Grados de libertad 1 1 1 3 8 11 Suma de cuadrados 23144.08 38.52 54.18 23236.79 906.50 24143.29 Cuadrado medio 23144.08 38.52 54.18 7745.59 113.31 F p

204.25 0.34 0.48 68.36

0.0001 0.5759 0.5088 0.0001

En el Cuadro 9, se determin una probabilidad p<0,05, para los sustratos, lo cual indica que existen diferencias estadsticamente significativas entre el aserrn de balsa y el bokashi de banano. Esto pudo deberse a varios factores determinantes como lo son el pH y la relacin C:N. No se encontr una diferencia significativa entre los niveles y los sustratos x nivel p>0,05, lo que significa que la aplicacin del EM no influy en la colonizacin del micelio sobre el sustrato; al igual en el Cuadro 10, indica que el EM no es un factor determinante en la produccin de P. ostreatus.

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Cuadro 10. Anlisis de varianza factorial del rendimiento (cosecha). EARTH. 2006.
Fuente de variacin Sustrato Nivel Sustrato*Nivel Modelo Error Corrected Total Grados de libertad 1 1 1 3 8 11 Suma de cuadrados 7009.39 13.71 13.71 7036.83 1591.18 8628.01 Cuadrado medio 7009.39 13.71 13.71 2345.61 198.89 F 35.24 0.07 0.07 11.79 p 0.0003 0.7995 0.7995 0.0026

En el Cuadro 10, de la varianza factorial, variable rendimiento, se determin que existe una diferencia significativa en los sustratos, ya que el bokashi de banano no llego a la etapa de fructificacin.

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CONCLUSIONES

De los sustratos evaluados el aserrn de balsa, obtuvo una diferencia estadsticamente significativa (p<0.05) en cuanto a la colonizacin y fructificacin del sustrato en comparacin con el bokashi de banano, el cual presento una colonizacin menor al 20 % y no alcanz la etapa de fructificacin. La eficiencia biolgica (EB) reportada en esta investigacin para el aserrn de balsa con EM fue de 30 % y para el aserrn de balsa sin EM fue de 29 %, estadsticamente son similares, por lo que el aserrn de balsa es un buen sustrato para la produccin de hongos comestibles. La construccin del cuarto de produccin de bajo costo permiti que las variables tanto externas como internas (temperatura y humedad) fueran controladas

adecuadamente, existiendo una mayor produccin y siendo una opcin viable para los pequeos productores. Los cuatro tratamientos presentaron una relacin C:N entre los rangos aceptables para la produccin de P. ostreatus, y al tener una r2=0,91, nos indican que este factor puede ser determinante en la produccin del hongo. El uso de EM en el compostaje de los sustratos no tuvo ningn efecto, ni en la colonizacin ni en la fructificacin del mismo.

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RECOMENDACIONES

Se recomienda utilizar la metodologa seguida tanto para el material del laboratorio como para la construccin del cuarto de produccin. Si se quisiera utilizar el bokashi de banano en un futuro para la produccin de P. ostreatus se necesitar bajar el pH. Pruebas realizadas en el laboratorio mostraron que utilizando cido actico al 0.4% se reduce el pH de 8.8 a 6, siendo este un medio aceptable para la colonizacin. Se recomienda utilizar otros tipos de cidos ms econmicos por ejemplo cido ctrico, vinagres, entre otros. Esta produccin genera desechos orgnicos, especialmente al finalizar su ciclo de produccin. Estos sustratos al estar degradados por el micelio del hongo, presentan los nutrimentos ms disponibles para los cultivos, por lo que se recomienda utilizarlos como abonos orgnicos (Anexo 4).

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BIBLIOGRAFA CITADA

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ANEXOS

Anexo 1. Croquis y diseo del lugar de trabajo.

Anexo 2. Acondicionamiento de los cuartos para colonizacin y fructificacin del hongo Pleurotus ostreatus.

Anexo 3. Caldera utilizada para la pasteurizacin de sustratos.

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Anexo 4. Composicin qumica de los sustratos evaluados, antes y despus de la inoculacin y fructificacin.
IDENTIFICACIN Bokashi Aserrn Balsa antes de inoculado Aserrn de Balsa despus de la cosecha C 40,57 46,69 37.17 N 0,82 0,4 0.58 C:N 49,5 116,7 64.09 P % 0,26 0,13 0.03 K 2,3 0,7 0.73 Ca 2,2 2,3 4.56 Mg 0,2 0,2 0.28 Fe 1200 441 1650 Cu Zn ppm 5 33 3 7 10 23 Mn 114 28 84 pH 8,8 5,6 5.8

Anexo 5. Informacin para anlisis en SAS V8. The SAS System 14:18 Monday, October 9, 2006 Obs 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ciclo 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3 sustrato 0 0 1 1 0 0 1 1 0 0 1 1 nivel 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 coloniza peso 83.75 61.75 0.00 0.00 97.50 92.50 0.50 2.50 95.50 99.00 0.00 0.00 altura ancho 5.9 5.7 0.0 0.0 5.7 6.2 0.0 0.0 7.5 7.0 0.0 0.0 2 57.354 6.30 70.313 6.20 0.000 0.000 38.072 18.533 0.000 0.000 56.000 49.750 0.000 0.000 0.00 0.00 5.90 6.40 0.00 0.00 6.25 6.50 0.00 0.00 1

The SAS System 14:18 Monday, October 9, 2006 The ANOVA Procedure Class Level Information Class sustrato nivel 2 Levels 2 Values 01 01

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Number of observations

12 The SAS System 14:18 Monday, October 9, 2006 3

The ANOVA Procedure Dependent Variable: coloniza Sum of Source Model Error Corrected Total R-Square 0.962453 Source sustrato nivel sustrato*nivel DF 8 Squares Mean Square F Value Pr > F 7745.59722 113.31250 68.36 0.0001 906.50000 3 23236.79167 11 24143.29167 Root MSE 10.64483 coloniza Mean 44.41667

Coeff Var 23.96586 DF 1 1

Anova SS Mean Square F Value Pr > F 0.0001 0.5759 0.5088 4 38.52083 54.18750 38.52083 54.18750 0.34 0.48

1 23144.08333 23144.08333 204.25

The SAS System 14:18 Monday, October 9, 2006 The ANOVA Procedure Dependent Variable: peso Sum of Source Model Error Corrected Total R-Square 0.815579 DF

Squares Mean Square F Value Pr > F 11.79 0.0026 198.897853

3 7036.831524 2345.610508 8 1591.182827 11 8628.014351 Root MSE 14.10312 peso Mean 24.16850

Coeff Var 58.35329

53

Source sustrato nivel sustrato*nivel

DF 1 1

Anova SS Mean Square F Value Pr > F 35.24 0.07 0.07 0.0003 0.7995 0.7995 5 13.717408 13.717408 13.717408 13.717408

1 7009.396707 7009.396707

The SAS System 14:18 Monday, October 9, 2006 The ANOVA Procedure Dependent Variable: altura Sum of Source Model Error Corrected Total R-Square 0.998797 Source sustrato nivel sustrato*nivel DF 8 Squares Mean Square 0.1416667 0.0177083 F Value

Pr > F

3 117.5706250 11 117.7122917 Root MSE 0.133073

39.1902083 2213.09 0.0001

Coeff Var 4.252655 DF 1 1

altura Mean 3.129167 Pr > F

Anova SS Mean Square F Value 0.0352083 0.0352083 0.0352083 0.0352083

1 117.5002083 117.5002083 6635.31 0.0001 1.99 0.1962 1.99 6 0.1962

The SAS System 14:18 Monday, October 9, 2006 The ANOVA Procedure Dependent Variable: ancho Sum of Source Model Error Corrected Total DF 8 Squares Mean Square F Value 40.1133333 114.34 0.3508333 2.8066667

Pr > F 0.0001

3 120.3400000 11 123.1466667

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R-Square 0.977209 Source sustrato nivel

Coeff Var 18.70458 DF 1 1

Root MSE 0.592312

ancho Mean 3.166667 F Value 342.99 0.01 0.01 Pr > F 0.0001 0.9247 0.9247

Anova SS Mean Square 0.0033333 0.0033333 0.0033333 0.0033333

1 120.3333333 120.3333333

sustrato*nivel

55