Exame de Laboratrios de Biofsica / Bioqumica

poca Normal

Licenciatura em Bioqumica
25 de Junho de 2010

Por favor utilize folhas separadas para responder 1 e 2 Parte do exame.

1 Parte

1. muito frequente determinar-se a concentrao proteica de uma determinada soluo

com base na absoro de luz UV. Diga a que comprimento de onda que se fazem essas determinaes. Refira vantagens e desvantagens desse mtodo. (2.0 val.)

2. Durante as aulas prticas teve a oportunidade de produzir transtirretina utlizando um

sistema bacteriano (E. coli). Qual o interesse de produzir protenas recombinantes neste sistema? Refira vantagens e desvantagens deste sistema. (2.0 val.)

3. Refira dois mtodos diferentes para determinar a massa molecular de uma protena. (1.5
val.)

4. Em que consiste a tcnica de ELISA. Refira as suas aplicaes. (1.5 val.) 5. Uma mistura proteica foi analisada por electroforese bidimensional tendo-se obtido o
resultado representado a seguir:

a. Diga se considera possvel separar estas 3 protenas num s passo. Justifique. (1.0 val.) b. Se respondeu afirmativamente questo anterior, descreva qual a tcnica a usar e refira os seus princpios bsicos. Se respondeu negativamente, proponha uma sequncia de 2 ou 3 passos que permita o isolamento de cada uma das protenas e justifique a sua proposta. (2.0 val.) c. Suponha que possui um anticorpo para a protena que pretende isolar e o resultado do immunoblot revela duas manchas (1 e 3). Como interpreta esse resultado? O que poderia fazer para confirmar a sua interpretao. (2.0 val.)

2 Parte

6. A cristalizao de protenas pode ser conseguida recorrendo a estratgias de difuso de

vapor como o caso do mtodo da gota suspensa. a. Indique em que se baseia este mtodo e justifique a importncia do recurso a um sistema fechado. (2.0 val.) b. Para uma mesma condio, como explica um menor tamanho dos cristais obtidos se o seu nmero elevado? (1.0 val.) c. Os resultados finais da cristalografia de raios-X so depositados na base de dados Protein Data Bank. Qual o tipo de informao que a se encontra e qual o interesse do repositrio? (1.0 val.)

7. O fraccionamento celular de um homogeneizado por centrifugao diferencial um

procedimento laboratorial bsico. a. Descreva o fundamento deste mtodo de separao e justifique por que se fala apenas do enriquecimento das fraces num dado componente sub-celular. (2.0 val.) b. Para avaliar a qualidade de um fraccionamento celular usual recorrer-se a enzimas marcadoras. Justifique. (1.0 val.) c. Um investigador segue um determinado protocolo e num dia efectua um fraccionamento usando tubos contendo um dado volume de homogeneizado; alguns dias depois repete o procedimento com sedimentaes s mesmas frequncias de rotao, mas agora partindo de uma quantidade superior de material biolgico e ficando os tubos com maior enchimento. Apenas a quantidade de material foi diferente, sendo que em ambos os casos o enchimento dos tubos foi correcto. Comente. (1.0 val.)